דגם Murine Orthotopic פרה-קליני של סרטן ערמונית האדם

Introduction

סרטן הערמונית הוא הגורם השני הנפוץ ביותר של מקרי מוות מסרטן (9%) בקרב גברים בארצות הברית, לצד סרטן הריאות הסמפונות (28%) ^1. על פי נתונים אחרונים, ההערכה היא כי 220, 800 אבחנה חדשה מקרי סרטן ערמונית ו -27, 540 מקרים מוות יתרחשו בשנת 2015 ^1. שיעור ההישרדות היחסי לחמש השנים של סרטן הערמונית בשלב מוקדם הוא> 99% ואילו זה של מחלה גרורתית מתקדם רק 28% ^1. אחד אתגרים גדולים לטיפול במחלה גרורתית מתקדמת הוא חוסר הבנה של מנגנונים מולקולריים שבבסיס הנטייה של מחלה זו כדי לשלוח גרורות לאיברים אחרים, במיוחד עד העצם, שהוא אתר תכוף לסרטן הערמונית. לפיכך, קיים צורך ברור ללמוד את האיפור המולקולרי של גידולי הערמונית הללו על מנת לפתח משטר טיפולי יעיל נגד התקדמות ^2,3 מחלה גרורתית מתקדמת.

ערמונית גידולי תערוכה גדולהההטרוגניות הביולוגית h ללא מסלול מוגדר היטב להתקדמות. גרורות מתרחשות לעתים קרובות ללא הוריה לפני הפולשנות גידול ^4. ההטרוגניות קליניים זו מיוחס המגוון המולקולרי של סרטן הערמונית. הבנת האיפור המולקולרי של גידולים הקטלניים אלה היא המפתח לעצב אסטרטגיות אבחון וטיפול טובים יותר למחלה זו. כתוצאה מכך, מחקר סרטן הערמונית כרגע מתמקד על הבנה ומניעת גרורות.

במודלים של עכברים פרה-קליניים in vivo מציעים מגוון רחב של אפשרויות להבין את המנגנונים המולקולריים של התקדמות סרטן ערמונית מחלה גרורתית מתקדמת. בנוסף, מודלים אלו חשובים ערכות פרה-קליניות של אסטרטגיות טיפוליות חדשות נגד מחלה זו. המודלים החיים הנפוצים ביותר כוללים מודלי עכבר מהונדסים, הזרקה לוריד זנב, השתלת פן-לב מודלי עכבר orthotopic אדם. מחקרים מהונדסים הם הזמן consuming וקורלציה של התפתחות סרטן הערמונית בעכברים עם לזו של בני האדם הראו השתנות ^11. במודלים של עכברים ספונטניים גרורתי, תאים מוזרקים ישירות לתוך מחזור הדם ואף על פי, יש להם זמן אספקה ​​מהיר, הם לא יכולים לשמש כדי לחקור גידול הראשוני או את השלבים הראשוניים במפל גרורתי ^5. מודלים xenograft Orthotopic יש הגבלה של פיתוח גרורות בעצמות, האתר המשותף של גרורות סרטן הערמונית. עם זאת, במודל עכבר xenograft אדם orthotopic סרטן הערמונית הוא גם מאופיין בשימוש נרחב כדי ללמוד את האירועים המולקולריים של התפתחות גידולים ראשונית, צולב לדבר בין גידול microenvironment איבר, בשלב ראשוני של המחלה הגרורתית ושימוש של תרופות ניסיוניות להתערבות טיפולית ^{6 , 7,8-11.}

Protocol

הפרוטוקולים עבור כל הנהלים הקשורים לבעלי חיים חייב להיות נבדקה ואושרה על ידי ועדת טיפול בבעלי חיים מוסדיים השתמש (IACUC). בצע את ההליכים אישרה באופן רשמי לטיפול ולשימוש בחיות מעבדה. הזרקה תוך-הערמונית דורשת ניתוח פתוח-בטני ובעלי חיים צריכים להיות כל הזמן בסביבה חופשית לפתוגן עם חדר ניתוח המיועד שבו טכניקות ספטית כירורגית נאותה משמשים במהלך ההליך כולו.

1. הכנת תאים להשתלה

הערה: בהתבסס על צורך במחקר, כל סוג של סרטן ערמונית קו סלולארי יכול לשמש. שורות תאים בתרבית בהתאם להוראות של הספק.

1. עבור הקו הסלולרי PC3M-לוק-C6 המבטא את הגן בלוציפראז גחלילית ביציבות, התרבות תאים ב המינימום ההכרחי בינוני (MEM) השלימו עם 10% עוברית שור סרום (FBS), aminoacids 1x שאינם חיוניים, 1x Phleomycin D1 ו- 1 מ"מ נתרן פירובט . שמור על תאים באינקובטור wה- i באווירה humidified של% אוויר 95% ו -5 CO ₂ על 37 מעלות צלזיוס. תאי PC3M-לוק-C6 נרכשו ממתקן ליבת UCSF.
2. קציר תאים על ידי trypsinization. לשטוף צלחות תרבות פעם עם בופר פוספט (PBS). הוסף 2 מ"ל 0.05% טריפסין לצלחת 10 ס"מ דגירה של 3-5 דקות באינקובטור עם אווירה humidified של% אוויר 95% ו -5 CO ₂ על 37 מעלות צלזיוס עד תאים מנותקים.
   1. כדי למנוע גושים, לא להתסיס את התאים על ידי הכאה או טלטול צלחת בזמן ההמתנה תאים לנתק. אוספים את התאים ב 5 מ"ל של מדיה מלאה ומסובב במשך 5 דקות ב 200 x ז. שטוף את התא גלול עם PBS להסיר טריפסין.
3. ספירת תאים חיים באמצעות assay הרחקה כחול trypan. מערבבים 10 μl של ההשעיה תא PBS עם 10 μl של 0.4% (wt / v) trypan פתרון כחול. טען את התערובת לתוך שקופית hemocytometer או תא הספירה לספור תאים מייד תחת מיקרוסקופ או לקרוא את השקף הקאמרי cou תאnter.
   1. כן השעית תא המכיל 2.5 x 10 ⁵ תאים 10 מדיה μl. מערבבים את ההשעיה תא עם 10 במרתף μl קרום דמוי תמצית תאי מטריקס והמקום התאים על הקרח. להוסיף luciferin על השעיית התא (1: 200 μl; המניה 30 ריכוז מ"ג / מ"ל) לפני הזרקת לעכברים.
      הערה: פעולה זו מאפשרת ביו-הדמיה מיידית של חיות כדי לבדוק את העקביות של זריקות תא בין קבוצות ניסוי שונות. להזריק תאים מהר ככל האפשר, רצוי בתוך 30 דקות לאחר trypsinization מאז כדאיות התא יורדת במהירות לאחר ניתוק.

2. הכנת השטח כירורגי

1. בצע ניתוח באזור מסודר, לחטא שמקדם asepsis.
2. לטהר ספסל הדלפק / מעבדה עם פתרון אקונומיקה לפני הניתוח.
   הערה: השימוש באלכוהול הוא מיואש בשל זמן מגע ארוך נדרש כדי שייכנס לתוקפו (15 דק ').
3. השתמשו בסדינים מעוקרים,לנקות רפידות או מגבות נספגות, ולהחליף את החומרים הללו לאחר כל פגישה כירורגית. לעקר את כל המכשירים לפני השימוש. שיטות מועדפות הן חיטוי קיטור, מעקר חרוז זכוכית, גז אתילן אוקסיד, או עיקור אדים מי חמצן.
4. שימוש במיקרוסקופ לנתח לנקות בסביבה נקייה מחיידקים לבצע הליך כירורגי או חוקרים מנוסים יכולים לבצעה ללא מיקרוסקופ.

3. השרשה של תאים סרטניים

1. השתמש זכר 6-8 בן שבוע החיסון בעכברים Balb / c או NOD / SCID.
   הערה: זה קשה יותר לפעול על בעלי חיים קטנים ובעלי חיים גדולים יותר נוטים להיות בעלי קינטיקה איטי של גידול וגרור.
2. להזריק תרופות כאב שלפני ניתוח בהתאם להוראות של בית הגידול. לדוגמה, עצירות תוך הצפק במינון של 0.1 מ"ג / ק"ג משקל גוף יכול לשמש.
3. להרדים חיות ידי הצבת לתוך תא isoflurane עם isoflurane 1-3% חמצן ווהזה עד חיות בהרדמה מלאה. ודא שאין רפלקס הבוהן של טונוס שרירים בשלב זה. השתמש סיכת משחת עיני וטרינרים נאה כדי למנוע עיוורון בשל xerophthalmia במהלך הרדמה כללית.
   הערה: להרדים את החיות על ידי למשל השיטה המועדפת של החוקר, עבור Pentobarbital נתרן, 0.05 מ"ג לכל גרם משקל גוף מנוהל תוך הצפק או קטמין / Xylazine פתרון (ריכוז: 17.16 מ"ג / מ"ל) במינון של 65 מ"ג / ק"ג משקל גוף משמש תת עורי. שאיפת Isoflurane היא שיטה מועדפת של הרדמה. משחת העין יש להחיל בעדינות מבלי להתחכך הקרנית.
4. הסר את החיה מן החדר isoflurane ומקום לתוך מנגנון חרטומו עם זרימה רציפה של isoflurane 1-2% חמצן על מנת להבטיח כי בעל החיים הוא בהרדמה מלאה לפני שתמשיך.
   1. הסרת שיער מעכברים ידי גילוח או להשתמש בקרם להסרת שיער לפני תחילת ההליך.
      הערה: זה יהיה עדיף למקם את העכבר על כרית חימום סטרילי במהלך ניתוח.
5. העבר את העכבר במצב שכיבה. נקו את הבטן התחתונה עם 10% w / w ואחריו פתרון יוד povidone ב -70% מטליות אתנול.
6. עם זוג מלקחיים בסדר, להרים על שטח של העור 2 מ"מ מעל בלוטת preputial, כ 1-2 ס"מ מעל נדן הפין, וכ 2-3 ס"מ מתחת לחלק התחתון של כלוב הצלעות.
7. ערוך 1cm חתך קו אמצע אורך, ראשון דרך העור עם אזמל ולאחר מכן דרך שכבת השריר עם מספריים (איור 1).
8. אתר את שלפוחית ​​השתן בתוך חלל הגוף. זהו איבר כדורי חום צהוב-אור, הממוקם ישירות מתחת החתך (איור 1).
9. עם זוג אחיזת מלקחיים בסדר השלפוחית ​​ולהרים כלפי מעלה ואז מטה מתוך חלל הגוף לקראת נדן הפין. זה יחשוף את שני שלפוחית ​​הזרע שהן זוג איברי saclike הלבנים ומובחן בבירור.
10. עםמקלון צמר גפן בכל יד, מחצין את שלפוחית ​​הזרע, האחד אחרי השני, ומשוך אותם מתוך חלל הגוף ולהניח אותם עם פנים כלפי מטה על פני השטח החיצוניים של הבטן עם שלפוחית ​​השתן באמצע (איור 2).
11. באמצעות צמר גפן, בעדינות להטות בחזרה שלפוחית ​​הזרע בנקודת הכניסה ליד צוואר שלפוחית ​​השתן, לקראת נדן הפין, כך ששתי אונות הערמונית מגבות גלויות לעין. השתמש צמר גפן רטוב כדי למנוע נזק לרקמות (איור 3).
12. להתסיס את השעית התא עם micropipette לפני הטעינה בתוך המזרק.
13. תוך שימת שלפוחית ​​הזרע בתנוחה עם מקלון צמר גפן, הכנס את מחט המזרק לתוך האונה הגב הערמונית תחת מיקרוסקופ (איור 4). לאט לאט להזריק 20 μl של ההשעיה תא עד מזוהה במערך בולה. בולה בולטת עולה כי ההזרקה נכונה.
14. בעוד חוזר בה המחט, לחץ קלה על הזריקה עםמקלון צמר גפן וחזק במשך כמה שניות כדי למנוע דליפה.
15. רם בזהירות את שלפוחית ​​הזרע עם צמר גפן ולהכניס אותם בחזרה אל חלל גוף אחד אחד ואחריו השלפוחית. הימנע 'מסובב' האיברים הפנימיים בעת ביצוע הליך זה.
16. לאחר צבת האיברים בחזרה לתוך חלל הגוף, תפר את שכבת השריר הראשונה בדפוס שהופסק עם תפרים מייתרים כרומים נספגים 4-0 ואחריו סגירת העור עם תפר כירורגי 4-0 ניילון שאינו נספג. העור יכול גם להיות משך יחד וסגר עם מהדק כירורגים כדי לסגור את החתך לחלוטין.
    יש עכברי רגל של מגרד ונושך את הפצע שלהם, דבר שעלול להוביל מחדש פתיחת הפצע, ומכאן שימוש דבק רקמות גם מומלץ יחד עם תפרים: הערה. חיות תמונה מיד כדי להבטיח שיש עוצמת bioluminescent שווה בין כל קבוצות הניסוי.
17. להחזיר את החיות בכלובים לנקות ולשמור אותם מתחת לפנס התחממות או חוםing כרית. לפקח על בעלי חיים כל הזמן עד שהם לחלוטין להתאושש מההרדמה ולתחזק שכיבה sternal.

.4 ניטור של בעלי חיים

1. צג החיות באופן סדיר עד סוף הניסוי, על פי פרוטוקולים מוסדיים. אם באמצעות קטעי מתכת כירורגי, להסיר לאחר שבוע עד שבועיים. משך הניסוי תלוי בצורך המחקר הספציפי.
   הערה: הניסוי הזה נערך במשך 21 ימים כדי לבחון את ההקמה המוצלחת של התאים הסרטניים מושתלים ערמונית העכבר.
2. נהל משככי כאבים על פי ההוראות של בית הגידול. לדוגמה, עצירות תוך הצפק במינון של 0.1 מ"ג / ק"ג משקל גוף יכול לשמש בעת ההליך עם המנה השנייה לאחר 6 מנות hr ונוספות כל 8-12 שעות לפי הצורך.
3. צג משקל חי, צריכת מזון, צבע עור ומרקם, פעילות ותדירות הטלת השתן והפרשת הצואה. להרדים חיות immediately אם יש אובדן משמעותי של משקל גוף יותר מ -15%.
   1. המתת חסד, לספק CO ₂ מטנק בלחץ לתוך כלוב בלתי צפוף בקצב זרימה לעקור 10-30% מנפח / דקה קאמרית או כלוב, המאפשר CO ₂ להיכנס לחדר לאט כך הַרדָמָה חוסר הכרה מוחלט להתרחש לפני מותו.
   2. לשמור על זרימת CO ₂ למשך זמן של לפחות דקה אחת לאחר דום נשימה ולהשאיר חיות בתא במשך זמן מספיק כך שהמוות מתרחש לפני ביצוע שיטה גופנית.
   3. עריפת ראש בצע, נקע בצוואר הרחם או כל IACUC אחרים שאושרו שיטה גופנית לאחר והרדמת חסד בבעלי חיים כימית.
      הערה: משקל גוף באופן משמעותי בדרך כלל מצביע על מצב רדום. חי נושאות גידולים צריכות להיות במצב בריאותי טוב למעט הנוכחות של גידולים עד תום הניסוי. המתת חסד צריכה להיות עקבית עם הנחיות AVMA על המתת חסד חייב להיות Listeד בפרוטוקול IACUC אושר.

5. לא פולשני ביו-הדמיה של בעלי חיים

1. צג החיות שבועי באמצעות טכניקת דימות בלתי פולשנית לעקוב קולוניזציה של תאים סרטניים, גידולים סרטניים וכל גרורות מרוחקות.
   הערה: שיטות הדמיה כגון הדמיה GFP, הדמיה בלוציפראז, צילומי רנטגן או טומוגרפיה מיקרו שחושב 3D (UCT) וכו 'ניתן להשתמש מבוסס על מחקר ספציפי צריך ^12-15.

Representative Results

בעקבות השתלת orthotopic של תאי PC3M-לוק-C6 לתוך אונת הערמונית האחורית, עכברים הם צלמו שבועיים באמצעות מערכת הדמית פליטת אור חי לפקח על קולוניזציה של תאים והתפתחות גידול במהלך הניסוי (איור 5 א '- ב'). כימות של אות bioluminescent ציינה כי PC3M-לוק-C6 תאים יישבו את אונות הערמונית בהצלחה. פליטת אור מוגבר מעידה על צמיחת גידול ראשוני וגברה במהלך הניסוי (איור 5). בהתבסס על יעדי המחקר, עכברים יכולים להיות במעקב שבועי הלא פולשני ידי רדיוגרפיה, קרינה או הדמית הארה לפקח צמיחת גידול וכל גרורות מרוחקות. פרמטרים נוספים שניתן להשיג עם מודל זה הם: שינויים במשקל הגוף וצריכת מזון במהלך הניסוי; ההשפעה של טיפול תרופתי על גודל הגידול ומשקל; קְבִיעַת כָּמוּתשל גודל ומשקל גידול על סיום הניסוי; הפקת DNA / RNA / חלבון כדי לקבוע שינויים מולקולריים המתרחשים בתוך הגידול הראשוני לאחר תום הניסוי.

איור 1:. חתך קו אמצע בטן להשתלת תוך ערמונית של תאים סרטניים חתך קו אמצע בטן הוא כ 1-2 סנטימטר. שלפוחית ​​השתן היא ישירות תחת החתך. לחיצה עדינה משני צידי החתך עוזרת כדי לבלוט שלפוחית ​​השתן. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2: סידור שלפוחית ​​הזרע מחפשtra-ערמונית השתלה של תאים סרטניים. שלפוחית ​​הזרע הן איברים לבנים דמוי צק והממוקמים סמוך ישירות אל שלפוחית ​​השתן. שלפוחית ​​הזרע הם exteriorized עם צמר גפן וסידר ימינה ושמאלה עם שלפוחית ​​השתן במרכז. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3:. Dorsum של ערמונית בנקודת הכניסה, בעדינות להטות בחזרה שלפוחית ​​הזרע כלפי נדן הפין כך ששתי אונות הערמונית מגבות גלויות לעין. השתמש צמר גפן רטוב כדי למנוע נזק לרקמות. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 4:.. Intra-ערמונית השתלה של תאים סרטניים תאים סרטניים מוזרקים לתוך האונה הגבי של ערמונית אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 5:. ב הדמית פליטת אור vivo של מודל השתלת תוך ערמונית (א) בשינה vivo תמונות פליטת אור של עכברים במשך זמן הניסוי לאחר שכותרתו בלוציפראז תאי PC3M-לוק-C6 הושתלו לתוך אונת הערמונית הגבי של עכברים בעירום. (ב) כימות של אות פליטת האור מראה כי תאי PC3M-לוק-C6 בהצלחה יישבו את בלוטת הערמונית עם ועלייהאד צמיחת גידולים orthotopic במהלך הניסוי. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Discussion

כתב יד זה מתאר הליך מפורט להקמת מודל עכבר xenograft אדם orthotopic סרטן הערמונית. מודל זה הוקם על ידי השתלה ישירה של קו תאים אנושיים סרטן הערמונית PC3M-לוק-C6 לתוך אונות הערמונית הגבי של עכברים immunocompromised. גידולים הורשו לפתח במהלך הניסוי. צמיחת הגידול היה פיקוח שבועי על ידי מערכת הדמיה פליטת אור פולשני במהלך הניסוי.

הגורם החשוב ביותר בקביעת מודלי גידול xenograft הוא להשיג עקביות לאורך ההשתלה של תאים סרטניים. כדי להשיג תוצאות מובהקות סטטיסטית, כל קבוצת הניסוי אמור להכיל עכברים 5-10 וריאציה גודל הגידול לא יעלה יותר מ -10% של גודל הגידול הממוצע. כדי להשיג מטרה זו, כמה צעדים קריטיים בתוך הפרוטוקול חשובים, כגון: א) ביצוע ניתוח באזור שמקדם asepsis במהלך ניתוח; ii) תאים צריכים להיות transplanteד בהקדם האפשרי לאחר ניתוק מתרבות; iii) נפח הזרקה צריך להיות בקנה אחד; iv) הרמה זהירה של איברים פנימיים בתוך ומחוץ חלל גוף במהלך ההשתלה של תאים; v) כל בעלי החיים צריכים להיות מוזרקים תוך שימוש באותה הטכניקה ועל ידי חוקר אחד; vi) חיים צריכים להיות אקראיים לקבוצות ניסוי לאחר השתלת תאים סרטניים.

חלק מהבעיות שעלולות להתרחש הם: i) גידול אינו מתפתח בכלל או גושים סרטניים להתפתח החלל לפדר או גוף; ii) גודל גידול אחיד הוא ציין בין אותה קבוצת הניסוי; iii) ייתכנו תמותת ניתוח הקשורות גבוהה. בעיות אלה ניתן להתגבר על ידי נקיטת צעדים פשוטים כגון: i) בדיקת תרבית תאים עבור כל זיהום עם mycoplasma וכו '; ii) מניעת דליפה של השעיה תאים סרטניים לתוך לפדר ואת חלל הבטן במהלך ההזרקה; iii) להסעיר את ההשעיה תא לפני כל טעינה מזרק; iv) מינון הרדמה תקין צריך להיות folרפידות געו וחימום צריכות לשמש כדי לשמור על טמפרטורת גוף במהלך ההליך.

מגוון רחב של נתונים ניתן לאסוף ניצול מודל זה תלוי מטרת מחקר מסוימת כוללים משקל עכבר, צריכת מזון, גודל גידול במשקל, שינויים גנטיים ומולקולריים של התאים הסרטניים אשר תורמים את צמיחת גידול וכן גרורות צומת הלימפה אזורית ^{10 , 16.} הופמן וקבוצתו פתחו את הטכניקה של השתלת orthotopic כירורגית (SOI) יש שימוש נרחב בטכניקה זו כדי להשתיל שברים-שלמת היסטולוגית של סוגים עיקריים של סרטן בבני אדם כוללים ערמונית, שלפוחית ​​שתן וסרטן הכליה המכרסמת ^17. יש מודלי orthotopic אלה יתרון על פני דגמי העכבר המהונדסים או תת עורית כפי שהם מייצגים את הסרטן הקליני במדויק ^18,19. מודלים אלה שימשו גם השתלת גידולים נלקח ישירות מן החולים לאיבר המתאים של רכבו immunodeficientnts. מודלי Orthotopic גם מתאימים גם לבחון את ההשפעות של טיפול תרופתי על גרורות צומת צמיחת גידול והלימפה ^10. כמו כן הם יעילים לבדיקת ההשפעות של ביטוי גנים שינה vivo לשעבר, והקביעה והשפעתו על היארעות גידול כמו גם צמיחת תוך ערמונית וגרור ^20. עם זאת, מגבלה של מודל סרטן ערמונית orthotopic היא שאף דגמים כאלה דווחו להוביל גרורות ספונטניות עד העצם אשר הוא האתר השכיח ביותר עבור גרורות סרטן הערמונית ^12.

כישלון להשיג גרורות בעצמות יכול להיות בגלל עכברים מתים חסימה בדרכי שתן לפני כל עצם גרורות יכולות לפתח, או בגלל במייקרו-הסביבה של העכבר לא מצליח לשחזר את המיקרו-הסביבה האנושית, ובכך שלא הצליח לפתח את העצם גרור ^12. עם זאת, מודל זה עושה לשחזר את האירועים הראשונים במפל גרורתי לפני תסחיף וכניסה של תאים סרטנייםלמחזור הדם ולכן הוא כלי רב ערך כדי ללמוד הגידול הראשוני, התהליך מוקדם של טרנספורמציה גרורתי ועל הערכות פרה-קליניות של אסטרטגיות טיפוליות חדשות ^10,12.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
PC3 prostate cancer cell line	ATCC	CRL-1435
Minimum Essential Medium (MEM)	GIBCO,Life Technology	11095-080
PBS	GIBCO,Life Technology	10010-023
FBS	GIBCO,Life Technology	10437-028
Zeocin	Invitrogen,Life Technology	R250-01
Trypsin	GIBCO,Life Technology	25300-54
IVIS	Xenogen-Caliper
Insulin Syringes (300 µl, 28.5 g)	Becton Dickinson	309300
Mice	Charles River Laboratories, Inc
Alcohol Swabs	MEDEquip Depot	326895 BD
PVP Iodine Prep Pad	MEDEquip Depot	C12400PDI
Surgical CatGut Chromic Suture	Demetech	CC224017F0P
Matrigel	Corning	354248