Introduction
Рак предстательной железы является второй наиболее распространенной причиной смерти от рака (9%) среди мужчин в Соединенных Штатах, рядом с раком легких и бронхов (28%) 1. По последним данным, по оценкам, 220, 800 вновь диагностированных случаев рака простаты и 27 540 смертельных случаев будет происходить в 2015 году 1. Пятилетняя относительная выживаемость ранней стадии рака простаты> 99% в то время как передовые метастатического заболевания только 28% 1. Главной проблемой для лечения распространенного метастатического заболевания является отсутствие понимания молекулярных механизмов, лежащих в основе склонности этого заболевания метастазировать в другие органы, в частности, к кости, которая является частым местом для рака простаты. Следовательно, существует явная необходимость в изучении молекулярной состав этих опухолей предстательной железы с целью разработки эффективных терапевтических схем против прогрессии к расширенному метастатическим 2,3 заболевания.
Простаты опухолей выставляется HIGч биологическая гетерогенность без четко определенного пути к прогрессированию. Метастазы часто происходят без предварительного указания инвазии опухоли 4. Эта клиническая гетерогенность приписывается молекулярное разнообразие рака простаты. Понимание молекулярной состав этих смертельных опухолей является ключевым для разработки более диагностических и терапевтических стратегий для этого заболевания. Следовательно, исследование рака простаты в настоящее время сосредоточена на понимании и предотвращении метастазирования.
Доклинические в естественных условиях мышиные модели предлагают различные варианты , чтобы понять молекулярные механизмы прогрессии рака простаты к расширенному метастазами. Кроме того, эти модели имеют важное значение для доклинических оценки новых терапевтических стратегий против этого заболевания. Наиболее часто используемые животные модели включают в себя трансгенные модели мыши, в хвостовую вену, внутрисуставной сердца и имплантации Ортотопическая модели мыши человека. Трансгенные исследования времени Консуминг и корреляция развития рака простаты у мышей с у людей показали изменчивость 11. В спонтанных метастатических моделях мышей, клетки вводятся непосредственно в кровоток и тем не менее, они имеют быстрое время обработки данных , они не могут быть использованы для изучения первичной опухоли или начальные шаги в метастатического каскада 5. Ортотопической ксенотрансплантата модели имеют ограничение развития костей метастатических поражений, общий сайт метастазов рака простаты. Тем не менее, ортотопическая рак простаты ксенотрансплантата модель мыши человека является хорошо изученным и широко используется для изучения молекулярных событий развития первичной опухоли, перекрестных помех между опухолью и органов микросреды, начальной стадии метастазирования и использования экспериментальных лекарственных средств для терапевтического вмешательства 6 , 7,8-11.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Протоколы для всех процедур, связанных с животными, должны быть рассмотрены и одобрены к уходу и использованию комитета (Institutional Animal IACUC) путем. Следуйте официально утвержденных процедур по уходу и использованию лабораторных животных. Intra-простатической инъекции требует открытого абдоминальной хирургии и животные должны храниться в патогена среде с обозначенным хирургии комнате, где используются соответствующие хирургические асептических методов во время всей процедуры.
1. Получение клеток для вживления
Примечание: На основании исследований необходимости, любая линия клеток рака простаты может быть использован. Клеточные линии культивируют в соответствии с инструкциями поставщика.
- Для клеточной линии PC3M-Luc-C6, который стабильно экспрессирует ген люциферазы светлячка, культуры клеток в минимальной основной среде (MEM), дополненной 10% фетальной бычьей сыворотки (ФБС), 1x несущественные аминокислотах, 1x флеомицин D1 и 1 мМ пирувата натрия , Поддерживать клетки в инкубаторе шIth увлажненной атмосфере 95% воздуха и 5% СО 2 при 37 ° С. Клетки PC3M-Luc-С6 были закуплены от основного объекта UCSF.
- Урожай клеток путем обработки трипсином. Мытье культуральные планшеты один раз фосфатным буферным раствором (PBS). Добавить 2 мл 0,05% трипсина на 10 см чашку и инкубировать в течение 3-5 мин в инкубаторе с увлажненной атмосфере 95% воздуха и 5% СО 2 при 37 ° С до клетки отделяют.
- Для того, чтобы избежать образования комков, не агитирую клетки, поражая или встряхивания блюдо во время ожидания клетки отделяться. Собирают клетки в 5 мл полной среды и со спином вниз в течение 5 минут при 200 х г. Промыть осадок клеток с PBS, чтобы удалить трипсина.
- Перечислять живые клетки с помощью теста с трипановым голубым. Смешайте 10 мкл суспензии клеток в PBS с 10 мкл 0,4% (вес / объем) раствора трипанового синего. Загрузите смесь в гемоцитометра или счетнокамерное горкой и подсчет клеток непосредственно под микроскопом или читать камеры слайд в ячейке CouГюнтер.
- Приготовить клеточную суспензию , содержащую 2,5 х 10 5 клеток в 10 мкл среды. Смешайте клеточной суспензии с 10 мкл базальной мембраны, как внеклеточного матрикса экстракта и поместить клетки на льду. Добавить люциферин к клеточной суспензии (1: 200 мкл, что запас 30 мг / мл) концентрации перед инъекцией в организм мышей.
Примечание: Это позволяет сразу же био-изображений животных, чтобы проверить согласованность клеточных инъекций среди различных экспериментальных групп. Вводят клетки как можно быстрее, желательно в течение 30 минут после того, как трипсином, так как жизнеспособность клеток быстро уменьшается после отрыва.
- Приготовить клеточную суспензию , содержащую 2,5 х 10 5 клеток в 10 мкл среды. Смешайте клеточной суспензии с 10 мкл базальной мембраны, как внеклеточного матрикса экстракта и поместить клетки на льду. Добавить люциферин к клеточной суспензии (1: 200 мкл, что запас 30 мг / мл) концентрации перед инъекцией в организм мышей.
2. Подготовка хирургической области
- Выполните операцию в лаконичную, дезинфицируют области, что способствует асептики.
- Санируйте счетчик / лабораторном столе с отбеливателя раствором перед операцией.
Примечание: Употребление алкоголя не рекомендуется из-за длительного времени контакта, необходимого для вступили в силу (15 мин). - Используйте стерильными пеленками,очистить рассасывающиеся колодки или полотенца, и заменить эти материалы после каждой хирургической сессии. Стерилизовать все инструменты перед использованием. Предпочтительные способы паровой автоклав, стеклянная бусина стерилизатора, окись этилена газ, или перекись водорода стерилизации паром.
- Используйте асептических очищенную рассекает микроскоп для проведения хирургической процедуры или опытные исследователи могут выполнить его без микроскопа.
3. Имплантация опухолевых клеток
- Используйте мужской 6-8 неделя старый иммунокомпрометированных BALB / C или NOD / SCID мышей.
Примечание: Гораздо труднее работать на более мелких животных и крупных животных, как правило, имеют более медленной кинетикой роста опухоли и метастазов. - Вводят предоперационного обезболивающее в соответствии с инструкциями животного объекта. Например, могут быть использованы внутрибрюшинном бупренорфин в дозе 0,1 мг / кг массы тела.
- Обезболить животных, помещая их в изофлурановым камеру с 1-3% изофлуран в кислороде и промэто пока животные не будут полностью под наркозом. Убедитесь в том, что нет никакого пальца ноги рефлекс мышечного тонуса в этой точке. Использование надлежащего ветеринарного глазная мазь смазки, чтобы предотвратить слепоту из-за ксерофтальмии во время общей анестезии.
Примечание: Обезболить животных предпочтительным методом исследователя , например, для пентобарбиталнатрием, 0,05 мг на грамм веса тела вводят внутрибрюшинно или кетамин раствор / Ксилазина (концентрация: 17,16 мг / мл) в дозе 65 мг / кг массы тела используется подкожно. Изофлюран ингаляция является предпочтительным методом обезболиванием. Глазная мазь следует осторожно применять без трутся роговицы. - Удалить животное с изофлуран камеры и помещают в аппарат для носовой конус с непрерывным потоком 1-2% изофлуран в кислороде, чтобы гарантировать, что животное находится под полным обезболиванием, прежде чем продолжить.
- Удалить волосы от мышей бритья или использовать для удаления волос крем перед началом процедуры.
Примечание: Было бы желательно, чтобы поместить курсор мыши над стерильным грелку во время операции.
- Удалить волосы от мышей бритья или использовать для удаления волос крем перед началом процедуры.
- Поместите мышь в положении лежа на спине. Очистите нижнюю часть живота с добавлением 10% вес / вес повидон-йода с последующим 70% смывов этанол.
- С парой тонких щипцов, поднимите участок кожи 2 мм над препуциальной железы, около 1-2 см выше пениса оболочки и около 2-3 см ниже нижней части грудной клетки.
- Сделайте срединный разрез 1 см в длину, сначала через кожу с помощью скальпеля , а затем через мышечный слой с ножницами (Рисунок 1).
- Расположить мочевого пузыря в полости тела. Это желто-светло - коричневый сферический орган, расположенный непосредственно под разрез (рисунок 1).
- С парой тонких щипцов сцепление мочевого пузыря и поднимите вверх, затем вниз из полости корпуса в направлении пениса оболочки. Это выставит две семенные пузырьки, которые являются пара белых saclike органов и четко различны.
- Сватный тампон в каждой руке, экстернализовать семенные пузырьки, один за другим, и вытащить их из полости тела и положите их лицевой стороной вниз на внешней поверхности живота с мочевого пузыря в середине (рисунок 2).
- С помощью ватного тампона, слегка наклонить назад семенные пузырьки в точке вставки вблизи шейки мочевого пузыря, в направлении пениса оболочки, таким образом, что два спинных лепестка простаты четко видны. Используйте влажные ватные тампоны , чтобы избежать повреждения ткани (рисунок 3).
- Перемешайте суспензии клеток с микропипетки перед загрузкой в шприц.
- При размещении семенных пузырьков в положении с помощью ватного тампона, вставить иглу шприца в спинной простатической доли под микроскопом (рис 4). Медленно вводят 20 мкл клеточной суспензии до тех пор, пока образование булла идентифицируется. Выпуклым булла указывает на то, что инъекция является правильным.
- В то время как втягивания иглы, слегка нажмите на месте инъекции сватным тампоном и удерживайте в течение нескольких секунд, чтобы предотвратить утечку.
- Осторожно поднимите семенные пузырьки с ватные тампоны и вставить их обратно в полость тела один за другим, а затем в мочевой пузырь. Избегайте 'вертела' внутренние органы при выполнении этой процедуры.
- После размещения органов обратно в полость тела, шовный мышечный слой сначала в прерванного узор с рассасывающиеся 4-0 хромированный кетгут швами с последующим закрытием кожи с нерассасывающегося 4-0 нейлоновой хирургического шва. Кожа также может быть стянуты и закрытые хирургические зажимы, чтобы полностью закрыть разрез.
ПРИМЕЧАНИЕ: Мыши имеют привычку царапать и кусать их раны, что может привести к повторному открытию раны, следовательно, использование клея ткани рекомендуется также наряду с швами. Изображение животных сразу, чтобы гарантировать, что есть равной интенсивности биолюминесценции среди всех экспериментальных групп. - Возврат животных, чтобы очистить клетки и держать их под лампой или согревающего теплаING площадку. Монитор животных постоянно, пока они полностью не восстановятся от наркоза и поддержания грудины лежачее.
4. Мониторинг животных
- не Монитор животных регулярно до конца эксперимента, в соответствии с институциональными протоколов. При использовании хирургических металлические зажимы, после того, как удалить одну-две недели. Продолжительность эксперимента зависит от конкретных исследований потребности.
Примечание: Этот эксперимент был проведен в течение 21 дней, чтобы изучить успешное установление имплантированных раковых клеток в предстательной железе мыши. - Администрирование обезболивающее на основе команд животного объекта. Например, внутрибрюшинном бупренорфин в дозе 0,1 мг / кг массы тела может быть использовано во время процедуры со второй дозы через 6 ч, и дополнительные дозы каждые 8-12 ч по мере необходимости.
- Монитор веса животного, потребление продуктов питания, цвет и текстуру кожи, активность и частоту мочеиспускания и дефекации. Эвтаназии животным IMMEDiately если существует значительная потеря массы тела более чем на 15%.
- Для эвтаназии, доставить СО 2 из резервуара высокого давления в маркированного переполненной клетки со скоростью потока , чтобы сместить 10-30% от камеры или клетке объем / мин, что позволяет СО 2 , чтобы медленно входить в камеру таким образом , чтобы потери сознания и полной наркотизации происходят до смерти.
- Поддержание потока СО 2 в течение по крайней мере , через одну минуту после остановки дыхания и оставить животных в камере в течение достаточного времени , таким образом , что смерть наступает перед выполнением физического метода.
- Выполните обезглавливание, цервикальной дислокации или любой другой IACUC утвержден физический метод после эвтаназии животных химически.
Примечание: Значительное снижение массы тела часто указывает на летаргический состояние. Животных с опухолью, должны быть в хорошем состоянии для наличия опухолей и до конца эксперимента, за исключением. Эвтаназия должна быть в соответствии с Руководством по АВМА эвтаназии и должны быть Listed в утвержденном протоколе IACUC.
5. Неинвазивная Био-изображений животных
- Наблюдение за животными в неделю с использованием неинвазивной метод визуализации для отслеживания колонизацию раковых клеток, рост опухоли и любой отдаленными метастазами.
Примечание: методы визуализации , такие как GFP-визуализации, визуализации люциферазы, рентгеновские лучи или 3D микро-компьютерной томографии (ЕТТ) и т.д. , могут быть использованы на основе конкретных исследований нужны 12-15.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
После ортотопической имплантации клеток PC3M-Luc-С6 в заднюю простатической доли мышей еженедельно изображается с использованием животной системы живого биолюминесценции изображений для наблюдения за колонизацию клеток и рост опухоли в течение ходе эксперимента (рис 5А - B). Количественное биолюминесцентного сигнала показал, что PC3M-Luc-C6 клетки успешно колонизировали лепестка простаты. Увеличение биолюминесценции свидетельствует о повышенной первичной опухоли за ходом эксперимента (Фиг.5В). На основе цели исследования, мышей можно контролировать еженедельно неинвазивным путем радиографии, флуоресценции или люминесценции визуализации для контроля роста опухоли и любые отдаленные метастатические поражения. Другие параметры, которые могут быть достигнуты при этой модели являются: изменение массы тела и потребление пищи на протяжении эксперимента; Эффект лекарственного лечения от размера и веса опухоли; квантификацияразмера опухоли и массы при окончании эксперимента; Выделение ДНК / РНК / белок, чтобы определить молекулярные изменения, происходящие внутри первичной опухоли после окончания эксперимента.
Рисунок 1:. Брюшной срединный разрез внутрираздельный простаты имплантации опухолевых клеток брюшной полости срединный разрез длиной около 1-2 см. Мочевой пузырь находится непосредственно под разрезом. Нежный отжимать на обеих сторонах разреза помогает торчат мочевого пузыря. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 2: Устройство для семенных пузырьках вTRA-простатический имплантации опухолевых клеток. семенных пузырьках белые SAC-как органы и расположены непосредственно рядом с мочевым пузырем. Семенные пузырьки выводили с ватным тампоном и расположены слева и справа с мочевым пузырем в центре. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 3:. Спинка простаты В точке вставки, осторожно наклонить назад семенные пузырьки в сторону пениса оболочки таким образом , что два спинных лепестка простаты четко видны. Используйте влажные ватные тампоны , чтобы избежать повреждения ткани. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Рисунок 5:. В естественных условиях биолюминесценции визуализации внутрибрюшного простатический модели имплантации (А) В естественных условиях биолюминесценции изображения мышей в течение экспериментального времени курс после люциферазы меченых клеток PC3M-Luc-С6 были имплантированы в дорсальную простатической доли голых мышей. (B) Количественная сигнала биолюминесценции показывает , что PC3M-Luc-C6 клетки успешно колонизировали железы с повыэд ортотопическая рост опухоли по ходу эксперимента. Пожалуйста , нажмите здесь , чтобы посмотреть увеличенную версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Эта рукопись описывает детальный порядок создания человеческого ортотопической рака простаты модели ксенотрансплантата мыши. Эта модель была создана путем непосредственной имплантации человеческой клеточной линии рака простаты PC3M-Luc-С6 в спинных простатическими долях иммунодефицитом мышей. Опухоли позволили разработать в течение эксперимента. Рост опухоли контролировали еженедельно неинвазивной системы биолюминесценции визуализации во время эксперимента.
Наиболее важным фактором в создании моделей опухолей ксенотрансплантата является достижение согласованности по всей имплантации опухолевых клеток. Для получения статистически значимых результатов, каждая экспериментальная группа должна содержать 5-10 мышей и изменение размера опухоли не должна превышать более чем на 10% от среднего размера опухоли. Для достижения этой цели, некоторые важные шаги в рамках протокола имеют важное значение, таких, как: я) проведение операции в области, что способствует асептики во время хирургического вмешательства; б) клетки должны быть transplanted как можно скорее после отрыва от культуры; III) объем впрыска должен быть последовательным; IV) осторожно снятие внутренних органов в и из полости тела во время имплантации клеток; v) все животные должны быть введены с использованием той же методики и одним исследователем; VI) животные должны быть рандомизированы на экспериментальные группы после имплантации опухолевых клеток.
Некоторые проблемы, которые могут возникнуть, являются: я) опухоль не развивается вообще или опухолевые узелки развиваются в брыжейки или полости тела; б) неравномерный размер опухоли наблюдается среди той же экспериментальной группы; III) может быть высокой хирургии смертности, связанной с. Эти проблемы могут быть преодолены путем принятия простых мер , таких как: I) тестирование культуры клеток на наличие любого загрязнения с микоплазмами и др; б) предотвращение утечки суспензии клеток опухоли в брыжейки и брюшной полости во время инъекции; III) перемешивание суспензии клеток перед каждым шприца нагрузки; IV) правильной дозировке анестезии должна быть Folмычали и грелки должны использоваться для поддержания температуры тела во время процедуры.
Широкое разнообразие данные могут быть собраны с использованием этой модели , в зависимости от конкретной цели исследования , включая вес мыши, потребление пищи, размера и веса опухоли, генетические и молекулярные изменения в опухолевых клетках , которые способствуют росту опухоли, а также узел метастаз в регионарных лимфатических 10 , 16. Хоффман и его группа разработали методику хирургического ортотопической имплантации (SOI) и широко использовали эту технику для пересадки Гистологически-неповрежденными фрагменты основных типов злокачественных опухолей человека , включая простаты, мочевого пузыря и рака почки в грызунах 17. Эти ортотопической модели имеют преимущество по сравнению с трансгенными или подкожные мышиные модели , поскольку они точно отражают клиническую рак 18,19. Эти модели также были использованы для пересадки опухоли, взятые непосредственно от пациентов к соответствующему органу иммунодефицитных РодеNTS. Ортотопической модели также хорошо подходят для изучения эффектов лекарственной терапии на рост опухоли и метастазов в лимфатических узлах 10. Они также полезны для изучения влияния измененном экспрессии генов экс виво, и определения его влияния на вероятность возникновения опухолей, а также внутри роста опухоли предстательной железы и метастазирование 20. Однако ограничение ортотопической модели рака предстательной железы является то , что нет таких моделей не сообщалось , чтобы привести к спонтанному метастаза в кости , которая является наиболее частым местом для рака простаты метастаза 12.
Неспособность достичь метастазы в кости может быть из - за мышей , умирающих от непроходимость мочевых путей , прежде чем любой кости метастатических образований может развиться, или потому , что микроокружение мыши не в состоянии резюмировать человеческий микросреду, таким образом , не в состоянии развить метастазами в кости 12. Тем не менее, эта модель делает перепросматривать ранние события в метастатического каскада до эмболии и вступления опухолевых клетокв обращении и , следовательно , является ценным инструментом для изучения первичной опухоли, раннее процесс метастазирования трансформации и для доклинических оценки новых терапевтических стратегий 10,12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы заявляют, что у них нет конкурирующих финансовых интересов.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| PC3 prostate cancer cell line | ATCC | CRL-1435 | |
| Minimum Essential Medium (MEM) | GIBCO,Life Technology | 11095-080 | |
| PBS | GIBCO,Life Technology | 10010-023 | |
| FBS | GIBCO,Life Technology | 10437-028 | |
| Zeocin | Invitrogen,Life Technology | R250-01 | |
| Trypsin | GIBCO,Life Technology | 25300-54 | |
| IVIS | Xenogen-Caliper | ||
| Insulin Syringes (300 µl, 28.5 g) | Becton Dickinson | 309300 | |
| Mice | Charles River Laboratories, Inc | ||
| Alcohol Swabs | MEDEquip Depot | 326895 BD | |
| PVP Iodine Prep Pad | MEDEquip Depot | C12400PDI | |
| Surgical CatGut Chromic Suture | Demetech | CC224017F0P | |
| Matrigel | Corning | 354248 |
References
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Jemal, A. Cancer statistics, 2015. CA Cancer J Clin. 65 (1), 5-29 (2015).
- Andrieu, C., et al. Heat shock protein 27 confers resistance to androgen ablation and chemotherapy in prostate cancer cells through eIF4E. Oncogene. 29 (13), 1883-1896 (2010).
- Fusi, A., et al. Treatment options in hormone-refractory metastatic prostate carcinoma. Tumori. 90 (6), 535-546 (2004).
- Hughes, C., Murphy, A., Martin, C., Sheils, O., O'Leary, J. Molecular pathology of prostate cancer. J Clin Pathol. 58 (7), 673-684 (2005).
- Pavese, J., Ogden, I. M., Bergan, R. C. An orthotopic murine model of human prostate cancer metastasis. J Vis Exp. (79), e50873 (2013).
- Pettaway, C. A., et al. Selection of highly metastatic variants of different human prostatic carcinomas using orthotopic implantation in nude mice. Clin Cancer Res. 2 (9), 1627-1636 (1996).
- Rembrink, K., Romijn, J. C., van der Kwast, T. H., Rubben, H., Schroder, F. H. Orthotopic implantation of human prostate cancer cell lines: a clinically relevant animal model for metastatic prostate cancer. Prostate. 31 (3), 168-174 (1997).
- Kim, S. J., et al. Blockade of epidermal growth factor receptor signaling in tumor cells and tumor-associated endothelial cells for therapy of androgen-independent human prostate cancer growing in the bone of nude mice. Clin Cancer Res. 9 (3), 1200-1210 (2003).
- Kim, S. J., et al. Targeting platelet-derived growth factor receptor on endothelial cells of multidrug-resistant prostate cancer. J Natl Cancer Inst. 98 (11), 783-793 (2006).
- Park, S. I., et al. Targeting SRC family kinases inhibits growth and lymph node metastases of prostate cancer in an orthotopic nude mouse model. Cancer Res. 68 (9), 3323-3333 (2008).
- Zhang, J., et al. AFAP-110 is overexpressed in prostate cancer and contributes to tumorigenic growth by regulating focal contacts. J Clin Invest. 117 (10), 2962-2973 (2007).
- Park, S. I., Kim, S. J., McCauley, L. K., Gallick, G. E. Pre-clinical mouse models of human prostate cancer and their utility in drug discovery. Curr Protoc Pharmacol. Chapter 14, Unit 14.15 (2010).
- Johnson, L. C., et al. Longitudinal live animal micro-CT allows for quantitative analysis of tumor-induced bone destruction. Bone. 48 (1), 141-151 (2011).
- Steinbauer, M., et al. GFP-transfected tumor cells are useful in examining early metastasis in vivo, but immune reaction precludes long-term tumor development studies in immunocompetent mice. Clin Exp Metastasis. 20 (2), 135-141 (2003).
- Yang, M., et al. A fluorescent orthotopic bone metastasis model of human prostate cancer. Cancer Res. 59 (4), 781-786 (1999).
- Stephenson, R. A., et al. Metastatic model for human prostate cancer using orthotopic implantation in nude mice. J Natl Cancer Inst. 84 (12), 951-957 (1992).
- Hoffman, R. M. Orthotopic metastatic mouse models for anticancer drug discovery and evaluation: a bridge to the clinic. Invest New Drugs. 17 (4), 343-359 (1999).
- Wang, X., An, Z., Geller, J., Hoffman, R. M. High-malignancy orthotopic nude mouse model of human prostate cancer LNCaP. Prostate. 39 (3), 182-186 (1999).
- An, Z., Wang, X., Geller, J., Moossa, A. R., Hoffman, R. M. Surgical orthotopic implantation allows high lung and lymph node metastatic expression of human prostate carcinoma cell line PC-3 in nude mice. Prostate. 34 (3), 169-174 (1998).
- Kim, S. J., et al. Reduced c-Met expression by an adenovirus expressing a c-Met ribozyme inhibits tumorigenic growth and lymph node metastases of PC3-LN4 prostate tumor cells in an orthotopic nude mouse model. Clin Cancer Res. 9 (14), 5161-5170 (2003).
