Summary
चूहे अल्ट्रासोनिक vocalizations (यूएसवी) के एक जटिल multisyllabic प्रदर्शनों की सूची का उत्पादन। इन यूएसवी का इस्तेमाल व्यापक रूप से न्यूरोसाइकोर्टिक विकारों के लिए पढ़ने वाले के रूप में किया जाता है। यह प्रोटोकॉल कुछ सीखाओं का वर्णन करता है जिन्हें हमने सीखा और विकसित किया है ताकि माउस गाने के ध्वनिक सुविधाओं और सिंटैक्स को लगातार प्रेरित, इकट्ठा और विश्लेषण किया जा सके।
Abstract
चूहे विकास और वयस्कता में विभिन्न प्रकार के सामाजिक संदर्भों में अल्ट्रासोनिक vocalizations (यूएसवी) का उत्पादन करते हैं। इन यूएसवी का उपयोग माता-पिप पुनर्प्राप्ति 1 , किशोर बातचीत 2 , विपरीत और समान लिंग बातचीत 3 , 4 , 5 , और क्षेत्रीय बातचीत 6 के लिए किया जाता है । दशकों तक, यू.एस.वि. का उपयोग जांचकर्ताओं द्वारा न्यूरोसाइकैरिक और विकास या व्यवहार संबंधी विकार 7 , 8 , 9 , और हाल ही में अध्ययन करने के लिए प्रॉक्सी के रूप में किया गया है, और तंत्रिकाएं और रीढ़ 10 के बीच मुखर संचार के विकास के लिए। यौन बातचीत के भीतर, प्रौढ़ पुरुष चूहों ने यू.एस.वि। गीतों का उत्पादन किया, जिनमें कुछ विशेषताएं हैं जो गानेबर्ड 11 के प्रणयशिप गाने के समान हैं। इस तरह के multisyllabic रीपर का उपयोगटोयर्स संभावित लचीलेपन और जानकारी लेते हैं, जिससे वे अलग-अलग हो सकते हैं कि कैसे तत्वों को व्यवस्थित और पुन: संयोजित किया जाता है, अर्थात् वाक्यविन्यास इस प्रोटोकॉल में विभिन्न सामाजिक संदर्भों में पुरुष चूहों से यूएसवी गीतों को प्राप्त करने के लिए एक विश्वसनीय तरीका है, जैसे कि ताजी महिला मूत्र, संवेदनाहारी जानवरों, और समूची महिलाओं के संपर्क में वर्णित है। इसमें चूहों से बड़ी मात्रा में सिलेबल्स को प्रेरित करने की स्थिति शामिल है। हम सस्ती ध्वनि कक्षों के साथ परिवेश के आवाज़ों की रिकॉर्डिंग को कम करते हैं, और यूएसवी का स्वतः पता लगाते, वर्गीकृत और विश्लेषण करने के लिए एक मात्रा का ठहराव पद्धति प्रस्तुत करते हैं। बाद में कॉल की दर, मुखर प्रदर्शनों की सूची, ध्वनिक पैरामीटर, और वाक्यविन्यास का मूल्यांकन शामिल है। विशिष्ट गीत प्रकारों के लिए जानवरों की पसंद का अध्ययन करने के लिए प्लेबैक का उपयोग करने के विभिन्न तरीकों और अंतर्दृष्टि हैं। इन तरीकों का उपयोग पुरुष चूहों में अलग-अलग संदर्भों में ध्वनिक और सिंटेक्स परिवर्तनों और मादा चूहों में गीत वरीयताओं के वर्णन के लिए किया गया था।
Introduction
मनुष्यों के लिए रिश्तेदार, चूहों दोनों कम और उच्च आवृत्ति vocalizations उत्पादन, बाद में अल्ट्रासोनिक vocalizations (यूएसवी) के रूप में हमारे सुनवाई सीमा से ऊपर के रूप में जाना जाता है यूएसवी विभिन्न मायनों में उत्पादित होते हैं, जिसमें माँ-पिट पुनर्प्राप्ति, किशोर इंटरैक्शन से लेकर विपरीत या समान यौन वयस्क बातचीत 4 , 12 शामिल हैं । ये यूएसवी विभिन्न मल्टीसिलेबिक प्रदर्शनों से बनाये जाते हैं जिन्हें मैन्युअल रूप से 9 या स्वतः 10 , 11 में वर्गीकृत किया जा सकता है। संचार में इन यूएसवी की भूमिका हाल के वर्षों में बढ़ती जांच के तहत हुई है। इन में यूएसवी का उपयोग न्यूरोसाइकैरिक, माउस, या विकास संबंधी विकार 7 , 8 , और आंतरिक प्रेरक / भावनात्मक राज्यों के माउस मॉडल के पढ़ने के रूप में शामिल हैं। यूएसवी को ई पर विश्वसनीय जानकारी देना माना जाता हैमिटर की स्थिति जो रिसीवर 14 , 15 के लिए उपयोगी है।
2005 में, पवित्र और गुओ 11 ने इस विचार को उन्नत किया कि प्रौढ़ पुरुष चूहों USVs को multisyllabic कॉल तत्वों के उत्तराधिकार या गानाबर्ड्स के समान सिलेबल्स के रूप में व्यवस्थित किया गया था। कई प्रजातियों में, एक बहुसांस्कृतिक प्रदर्शनों की सूची में गिटार और क्रमबद्ध सिमुलेशन को अलग-अलग तरीके से गठित करने की अनुमति देता है जो गाना द्वारा की जाने वाली संभावित जानकारी को बढ़ाती है। माना जाता है कि इस वाक्य रचना में बदलाव यौन व्यवहार और दोस्त की पसंद के लिए एक नैतिक प्रासंगिकता 16 , 17 है । बाद के अध्ययनों से पता चला है कि पुरुष चूहों ने उनके पहले, दौरान, और एक महिला 5 , 18 की उपस्थिति के बाद उप-स्वरुपों के सापेक्ष ढांचे को बदलने में सक्षम बना दिया। यही है, प्रौढ़ पुरुष चूहों प्रलोभन व्यवहार के लिए अपने यूएसवी का उपयोग करते हैं, या तो आकर्षित करने के लिएया एक महिला के साथ घनिष्ठ संपर्क बनाए रखें, या संभोग की सुविधा के लिए 1 9 , 20 , 21 ये पुरुष-पुरुष इंटरैक्शन में उत्सर्जित होते हैं, शायद बातचीत के दौरान सामाजिक जानकारी देने के लिए 4 । रेपोरेयर्स में इन परिवर्तनों पर कब्जा करने के लिए, वैज्ञानिक आमतौर पर वर्णक्रमीय विशेषताएं (ध्वनिक पैरामीटर, जैसे आयाम, आवृत्तियों, आदि ), यूएसवी के सिलेबल्स या कॉल की संख्या, और पहले यूएसवी के लिए विलंबता को मापते हैं। हालांकि, कुछ वास्तव में इन यूएसवी के अनुक्रम गतिशीलता 22 को विस्तार से देखते हैं। हाल ही में हमारे समूह ने यू.एस.वी। शब्दों के अनुक्रम 23 में गतिशील परिवर्तनों को मापने के लिए एक उपन्यास पद्धति का विकास किया। हमने दिखाया है कि एक गीत के भीतर (अर्थात् सिंटैक्स) एक शब्दसंगत क्रम यादृच्छिक नहीं है, यह सामाजिक संदर्भ के आधार पर बदलता है, और यह कि सुनने वाले जानवरों को इन परिवर्तनों को नैतिक रूप से प्रासंगिक रूप से पता चलता है
हम वें नोट करेंपशु संचार का अध्ययन करने वाले कई जांचकर्ताओं में शब्द 'वाक्यविन्यास' के साथ एक ही सटीक अर्थ नहीं है, क्योंकि मानव भाषण में प्रयुक्त सिंटैक्स। पशु संचार अध्ययन के लिए, हम केवल कुछ नियमों के साथ एक आदेश, बिना यादृच्छिक, ध्वनियों का क्रम मानते हैं। मनुष्य के लिए, इसके अतिरिक्त, विशिष्ट अनुक्रम विशिष्ट अर्थों के लिए जाना जाता है। हमें नहीं पता कि यह चूहों के लिए मामला है या नहीं।
इस पत्र और संबंधित वीडियो में, हम विभिन्न संदर्भों में पुरुष चूहों की प्रेमिका यूएसवी रिकॉर्ड करने और प्लेबैक करने के लिए विश्वसनीय प्रोटोकॉल प्रदान करना चाहते हैं। तीन क्रमिक रूप से उपयोग किए गए सॉफ़्टवेयर का उपयोग: 1) स्वचालित रिकॉर्डिंग; 2) अक्षर का पता लगाने और कोडिंग; और 3) अक्षांश विशेषताओं और वाक्यविन्यास के गहराई से विश्लेषण का प्रदर्शन किया गया है ( चित्रा 1 )। यह हमें पुरुष चूहों यूएसवी संरचना और कार्य के बारे में और जानने के लिए अनुमति देता है हम मानते हैं कि इस तरह के तरीकों से डेटा का विश्लेषण कम होता है और मौन में सामान्य और असामान्य मुखर संचार को प्रदर्शित करने में नए क्षितिज खोल सकते हैंसे संचार और neuropsychiatric विकार के मॉडल, क्रमशः।
Protocol
एथिक्स स्टेटमेंट: प्रोटोकॉल # ए095-14-04 के तहत ड्यूक यूनिवर्सिटी इंस्टीट्यूशनल एनीम केयर और यूज कमेटी (आईएसीयूसी) द्वारा सभी प्रायोगिक प्रोटोकॉल को मंजूरी दी गई थी। नोट: उपयोग किए गए सॉफ़्टवेयर के विवरण के लिए " सामग्री और उपकरण " खंड में तालिका 1 देखें
1. उत्तेजक और रिकॉर्डिंग माउस USVs
- रिकॉर्डिंग सत्रों से पहले पुरुषों की तैयारी
नोट: प्रतिनिधि परिणाम बी 6 डी 2 एफ 1 / जे युवा वयस्क पुरुष चूहों (7-8 सप्ताह पुराने) के द्वारा प्राप्त किए गए थे। इस प्रोटोकॉल को किसी भी तनाव के लिए अनुकूलित किया जा सकता है।- एक 12-एच प्रकाश / अंधेरे चक्र पर जानवर के कमरे का हल्का चक्र सेट करें, जब तक कि अन्यथा आवश्यक न हो। प्रत्येक पिंजरे तक 4 से 5 पुरुष के मानक आवास नियमों का पालन करें जब तक कि अन्यथा आवश्यक या आवश्यक न हो। रिकॉर्डिंग से तीन दिन पहले, पुरुषों को व्यक्तिगत रूप से एक समान परिपक्व और ग्रहणशील महिला (एक पिंजरे प्रति एक महिला के साथ 3 पुरुष) रातोंरात समान तनाव का पर्दाफाश करें।
- अगले दिन निकालेंपुरूष के पिंजरे से महिला और पुरुषों के बिना पुरुष बिना पुरुषों के पुरुषों के घर के पहले रिकॉर्डिंग सत्र से कम से कम दो दिनों के लिए सामाजिक प्रेरणा को गाते हैं (हमारे परीक्षण और त्रुटि का वास्तविक विश्लेषण के आधार पर) बढ़ाने के लिए।
- रिकॉर्डिंग बक्से की तैयारी
- एक ध्वनि कसबी बॉक्स स्टूडियो ( चित्रा 2 ए ) के रूप में कार्य करने के लिए समुद्र तट कूलर (आंतरिक आयाम एल 27 x डब्ल्यू 23 x एच 47 सेमी) का उपयोग करें। माइक्रोफ़ोन के तार में चलने के लिए बॉक्स के शीर्ष पर एक छोटा छेद ड्रिल करें
नोट: जानवरों को ध्वनि से तब्दील और नेत्रहीन पृथक वातावरण में रिकॉर्ड करना बेहतर होता है, ताकि उन्हें एक-दूसरे के सुनने या एक-दूसरे को देखने के बिना दर्जनों चूहों को रिकॉर्ड करने के लिए, परिवेश के कमरे के उपकरण शोर और कमरे में रहने वाले लोगों को रिकॉर्ड करने से रोकना और स्वच्छ होने के लिए चूहों की ध्वनि रिकॉर्डिंग ( चित्रा 2 बी ) हम ध्वनि के बिना किसी ध्वनि के विकृतिकरण या विकृतियों को ध्वनि की तरफ नहीं बनाते हैं, जबकि इसके अंदर एक ही माउस के vocalizations के बाहर बनाम बनामवह ध्वनि क्षीणन कक्ष ( चित्रा 2 सी ); बल्कि, वहाँ आवाज़ अधिक हो सकता है और कम harmonics कक्ष के अंदर है - ध्वनि रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर ( चित्रा 1 और तालिका 1 में सॉफ़्टवेयर ए ) के साथ काम करने के लिए माइक्रोफोन को तार, ध्वनि कार्ड के तार और कंप्यूटर पर साउंड कार्ड से कनेक्ट करें। एक पर्याप्त ध्वनि रिकॉर्डिंग सॉफ़्टवेयर आवश्यक है, जैसे कि सॉफ़्टवेयर ए जो। Wav ध्वनि फ़ाइलें उत्पन्न करती है।
- ध्वनिरोधी बॉक्स के अंदर एक खाली पिंजरे (58 x 33 x 40 सेमी) रखें और माइक्रोफ़ोन की ऊंचाई समायोजित करें ताकि माइक्रोफोन का झिल्ली 35 - पिंजरे के नीचे से 40 सेमी ऊपर हो, और यह कि पिंजरे के ऊपर स्थित माइक्रोफोन ( चित्र 2 ए देखें )।
- एक ध्वनि कसबी बॉक्स स्टूडियो ( चित्रा 2 ए ) के रूप में कार्य करने के लिए समुद्र तट कूलर (आंतरिक आयाम एल 27 x डब्ल्यू 23 x एच 47 सेमी) का उपयोग करें। माइक्रोफ़ोन के तार में चलने के लिए बॉक्स के शीर्ष पर एक छोटा छेद ड्रिल करें
- निरंतर रिकॉर्डिंग के लिए रिकॉर्डिंग सॉफ्टवेयर ए ( टेबल 1 ) का विन्यास
- डबल क्लिक करें और खुले सॉफ्टवेयर ए क्लिक करें और "कॉन्फ़िगरेशन" मेनू खोलें और नामित डिवाइस का चयन करें, नमूना दर (250,000 हर्ट्ज), प्रारूप (16 बिट)।
- कुंजी "ट्रिगर" विकल्प का चयन करें और "टॉगल" चेक करें
नोट: यह सेटिंग माउस के पिंजरे में उत्तेजना डालते समय एक कुंजी (एफ 1, एफ 2, आदि ) दबाकर रिकॉर्डिंग शुरू करने की अनुमति देती है। - "नाम" पैरामीटर के तहत माउस का आईडी दर्ज करें
- रिकॉर्डिंग के वांछित मिनटों तक अधिकतम फ़ाइल आकार सेट करें (हम आमतौर पर 5 मिनट पर सेट होते हैं)।
नोट: लंबे समय तक कंप्यूटर भंडारण स्मृति की अधिक मात्रा में आवश्यक है यदि निरंतर मोड सेट नहीं है, तो सॉफ़्टवेयर सेट मापदंडों के आधार पर अनुक्रम के शुरुआती या अंत में गाना बोट्स को कट जाता है, और इसलिए कोई भी दृढ़ता से दृश्यों की मात्रा निर्धारित नहीं कर सकता है।
- विभिन्न उत्तेजनाओं का उपयोग करके यूएसवी का रिकॉर्ड करें नोट: उपयोगकर्ता के प्रायोगिक आवश्यकताओं के आधार पर प्रत्येक उत्तेजना स्वतंत्र रूप से इस्तेमाल किया जा सकता है
- पूंछ द्वारा दर्ज किए जाने वाले जानवर को धीरे से उठाएं, और इसे पिंजरे में बिना बिस्तर (इसे रोकनाबिस्तर पर एमेंट शोर) ध्वनिरोधी बॉक्स के अंदर, और ढक्कन का सामना करना पड़ रहा है, इसके ऊपर पिंजरे खुली वायर्ड धातु ढक्कन डाल दिया।
- ध्वनि एटेन्यूएटेड बॉक्स को बंद करें और जानवर को इसे 15 मिनट के लिए आलिंगन दें। उत्तेजनाओं की तैयारी करो (1.4) इस समय पर।
- उत्तेजना की तैयारी
- उत्तेजना के रूप में ताजा मूत्र (यूआर) नमूनों की तैयारी
- रिकॉर्डिंग सत्र से अधिकतम 5 मिनट पहले मूत्र के नमूनों को पुरुषों से गायन करने के लिए अधिकतम प्रभाव सुनिश्चित करने के लिए प्राप्त करें। नोट: मूत्र जो लंबे समय तक बैठा हुआ है, और विशेष रूप से घंटों या रात भर के लिए, प्रभावी 24 , 25 के रूप में प्रभावी नहीं है, जिसे हमने अनुभवपूर्वक सत्यापित किया है 23 ।
- एक पिंजरे में एक महिला या पुरुष (उत्तेजना के लिंग के आधार पर) का उपयोग करें, गर्दन के पीछे की त्वचा को पकड़ो और एक हाथ में दवा को रोकें, पेट के साथ एक दवा इंजेक्शन प्रक्रिया के लिए।
- फिर, एक और पिंजरे का चयन करें और दूसरी महिला या पुरुष के साथ उसी प्रक्रिया को दोहराएं, लेकिन एक ही कपास की टिप से पहले इस्तेमाल किया गया था।
नोट: यह प्रक्रिया कम से कम दो मादाओं के मूत्र या एक ही कपास की टिप पर दो स्वतंत्र पिंजरों से पुरुषों के मिश्रण को सुनिश्चित करने के लिए सुनिश्चित करता है कि किसी भी प्रकार का ऐश या अन्य व्यक्तिगत प्रभावों के विरुद्ध यह सुनिश्चित किया जाता है कि एस्ट्रस का चक्र गायन व्यवहार 18 , 26 को प्रभावित कर सकता है। - एक साफ गिलास या प्लास्टिक पेट्री डिश में कपास की टिप का उपयोग करें।
नोट: क्योंकि मूत्र के साथ कपास की टिप को अगले 5 मिनट में इस्तेमाल करने की आवश्यकता होगी, इसलिए वाष्पीकरण को रोकने के लिए इसे कवर करने की कोई जरूरत नहीं है।
- Preparatiउत्तेजना के रूप में लाइव मादा (एफई) प्रोत्साहन पर
- यौन परिपक्व महिलाओं के एक या दो नए पिंजरों का चयन करें। दृश्य निरीक्षण (विस्तृत योनि खोलने और गुलाबी चारों ओर, जैसा कि 27 , 28 में दिखाया गया है) द्वारा प्रो-एस्ट्रस या एस्ट्रास चरण में महिलाओं को पहचानें इस्तेमाल होने तक उन्हें एक अलग पिंजरे में अलग करें।
- संवेदनाहारी जानवरों की महिलाओं (एएफ) या उत्तेजना के रूप में पुरुषों (एएम) की तैयारी
- वायुसेना के लिए, ऊपर पूल से (या तो प्रो-एस्ट्रस या एस्ट्रस में) एक महिला का चयन करें। एएम के लिए, वयस्क पुरुष चूहों के पिंजरे से एक नर का चयन करें।
- Ketamine / Xylazine (100 और 10 मिलीग्राम / किग्रा के क्रमशः) के समाधान के इंट्राटेरिटोनियल इंजेक्शन के साथ महिला या पुरुष को संवेदनाहारी करें।
- आंखों के निर्जलीकरण को रोकने के लिए आंखों का मस्तिष्क का प्रयोग करें, जबकि पशु संवेदनाहृत है। पॉव रिट्रैक्शन रिफ्लेक्स का परीक्षण करके सही संज्ञाहरण की जांच करें। एक कागज के तौलिया पर एक साफ पिंजरे में anesthetized जानवर रखें, बुद्धिगर्मी पैड पर पिंजरे जम्मू "न्यूनतम गर्मी" पर सेट करने के लिए शरीर के तापमान पर नियंत्रण सुनिश्चित करने के लिए।
- अलग-अलग रिकॉर्डिंग सत्रों के लिए एक ही जानवरों को दो से तीन बार फिर से उपयोग करें यदि वे जागते समय पहले (आमतौर पर लगभग 45 मिनट) प्रत्येक रिकॉर्डिंग सत्र के बाद उन्हें गर्मी पैड पर वापस डाल दें।
- दृश्य निरीक्षण (~ 60 से 80 साँस प्रति मिनट) और शरीर का तापमान हर पांच मिनट (स्पर्श करने के लिए गर्म होना चाहिए) को छूकर श्वसन दर को नियंत्रित करें।
- रिकॉर्ड करने के लिए तैयार होने पर, सॉफ्टवेयर ए के "रिकॉर्ड" बटन पर क्लिक करें।
नोट: रिकॉर्डिंग तब तक शुरू नहीं होगी जब तक उपयोगकर्ता प्रत्येक चैनल से जुड़े कुंजी बटन पर क्लिक न करें; कंप्यूटर स्क्रीन पर पिंजरों से लाइव ऑडियो फीड की निगरानी करें ताकि जानवरों को गाएं और रिकॉर्डिंग ठीक से प्राप्त हो सकें। - इसके साथ ही दर्ज किए जाने वाले वांछित बॉक्स (एसएएस) के जुड़े कुंजी बटन को मारा ( यानी बॉक्स 1 के लिए एफ 1), और वांछित उत्तेजनाएं पेश करें
- उत्तेजनाओं में से एक के रूप में निम्न प्रकार है। पिंजरे के अंदर ताजे मूत्र नमूनों के साथ कपास की टिप रखें, या पिंजरे के अंदर रहने वाली महिला को रखें, या पिंजरे के धातु के ढक्कन के ऊपर anesthetized-animals (AF या AM) में से एक को रखें।
- रिकॉर्डिंग बॉक्स को चुपचाप बंद करें, और रिकॉर्डिंग को पूर्व निर्धारित संख्या के लिए जाने दें ( जैसे कि अनुभाग 5 में वर्णित 5 मिनट)।
- रिकॉर्डिंग के बाद, रिकॉर्डिंग को रोकने के लिए स्टॉप स्क्वायर लाल बटन पर क्लिक करें।
- अगर किसी संवेदनाहारी जानवर को उत्तेजना के रूप में प्रयोग किया जाता था, ध्वनिप्रूफ रिकॉर्डिंग बॉक्स खुलता है, पिंजरे की धातु के ढक्कन से संवेदनाहारी जानवर ले और उसे अगले रिकॉर्डिंग सत्र से पहले हीटिंग पैड पर रख दिया गया है या यदि अब जानवरों का उत्तेजना जांच के रूप में प्रयोग नहीं किया गया है यह हर 15 मिनट जब तक यह पर्याप्त चेतना वापस नहीं आती है ताकि सिकुड़ा हुआ रैंबेंबल बनाए रखा जा सके।
- पिंजरे को खोलें और जागरूक परीक्षण जानवर को हटा दें, और इसे अपने घर के पिंजरे में वापस रखें। 70% शराब के साथ परीक्षण पिंजरे को साफ करेंएन डी आसुत जल
- उत्तेजना के रूप में ताजा मूत्र (यूआर) नमूनों की तैयारी
2. प्रोसेसिंग। वाव फ़ाइलें और सिलेबल कोडिंग का उपयोग करना माउस सॉन्ग एनालाइज़र v1.3
- ओपन कोडिंग सॉफ्टवेयर बी ( चित्रा 1 , तालिका 1 ) और "सेट पथ" पर क्लिक करके सॉफ़्टवेयर बी के पथ में सॉफ़्टवेयर स्क्रिप्ट सी के "माउस सॉन्ग एनालाइज़र" ( चित्रा 1 , तालिका 1 ) युक्त फ़ोल्डर को खोलें और सॉफ़्टवेयर पर फ़ोल्डर जोड़ें बी को सहेजने के लिए करीब सॉफ्टवेयर बी।
- संयुक्त सॉफ़्टवेयर बी + सी की वर्णानुक्रमिक पहचान सेटिंग कॉन्फ़िगर करें नोट: सॉफ़्टवेयर स्क्रिप्ट सी कोड स्वचालित रूप से "sonograms" नामक एक नया फ़ोल्डर बनाता है, जिसमें एक ही फ़ोल्डर में .sng प्रारूप में फ़ाइलें थीं .wav फ़ाइलें स्थित हैं। आमतौर पर एक ही फ़ोल्डर में सॉफ़्टवेयर ए का उपयोग करते हुए एक ही रिकॉर्डिंग सत्र से सभी .wav फ़ाइलों को डाल देना बेहतर होता है।
- ओपन सॉफ्टवेयर बी सी के साथ कॉन्फ़िगर किया गया
नोट: सॉफ्टवेयर बी का यह संस्करण पूरी तरह सी हैसॉफ्टवेयर स्क्रिप्ट सी के साथ असंगत। यह गारंटी नहीं दी जा सकती कि किसी भी बाद के संस्करण वर्तमान कोड में शामिल सभी कार्यों को स्वीकार करेंगे। - रिकॉर्डिंग युक्त ब्याज के फ़ोल्डर पर नेविगेट करें। "वर्तमान फ़ोल्डर" विंडो का उपयोग करके वेव फ़ाइलों का विश्लेषण करें।
- "कमांड विंडो" में, "whis_gui" कमांड दर्ज करें।
- नई व्हाईस-ग्वि खिड़की में, "सोनोग्राफिक पैरामीटर", "सिस्टल ऑप्शंस", और अन्य सभी सहित विभिन्न पैरामीटर ( चित्रा 3 ) के साथ कई उप-विंडो अनुभागों का पालन करें। USV का पता लगाने के लिए पैरामीटर समायोजित करें प्रयोगशाला चूहों ( जैसे बी 6 डी 2 एफ 1 / जे और सी 57 बीएल / 6 जे माउस उपभेदों को हमारे अध्ययन में उपयोग किए जाने से यूएसवी के सिलेबल्स का पता लगाने के लिए निम्न पैरामीटर सेटिंग्स का उपयोग करें):
- सोनोग्राम पैरामीटर्स अनुभाग में, न्यूनतम आवृत्ति को 15,000 हर्ट्ज़ तक समायोजित करें, अधिकतम आवृत्ति 125,000 हर्ट्ज़ तक, नमूना आवृत्ति (आवृत्ति की संख्या )ओ 256 किलोहर्ट्ज़ , और थ्रेसहोल्ड से 0.3।
- सीटीई विकल्प अनुभाग में, शुद्धता थ्रेशोल्ड को 0.075 में समायोजित करें, 3 एम एस तक की न्यूनतम अवधि , न्यूनतम आवृत्ति 20,000 हर्ट्ज़ तक पहुंचें , और फ़िल्टर की अवधि 3 एमएस तक।
- दूसरे अनुभागों में, न्यूनतम नोट अवधि 3 एमएस तक समायोजित करें, और न्यूनतम नोट 1 को गिनाएं
- सिलेबल वर्गीकरण प्रोटोकॉल के लिए, whis_gui विंडो के मध्य खंड में स्थित बॉक्स चुनें:
डिफ़ॉल्ट वर्गीकरण पवित्र और गुओ 11 और अररियागा एट अल पर आधारित है 10 , पिच कूदता की संख्या और कूद की दिशा से जो कोड लिखे गए हैं: सरल निरंतर सिलेबल के लिए एस ; एक नीचे पिच कूद के लिए डी ; एक अप पिच कूद के लिए यू; दो अनुक्रमिक कूदने के लिए डीडी ; एक डॉव के लिए डीयूएन और एक अप कूद; आदि। यह डिफ़ॉल्ट होगा यदि उपयोगकर्ता कुछ भी चयन नहीं करता है। प्रत्येक प्रतिनिधि बक्से का चयन करके उपयोगकर्ता के पास कुछ विशेष प्रकार के शब्दों पर विश्लेषण चलाने का विकल्प होता है।
Scattoni, एट अल द्वारा वर्णित के रूप में वर्णित वर्गीकरण के लिए चुनने के लिए 9 , इसके अतिरिक्त स्प्लिट की श्रेणी का चयन करें, जो इस प्रकार को अलग-अलग आकार के आधार पर अधिक उप-श्रेणियों में अलग करता है।
हार्मोनिक्स चुनें यदि उपयोगकर्ता उन शब्दों में बिना हार्मोनिक्स के सिलेबल्स को सॉर्ट करना चाहता है
- ओपन सॉफ्टवेयर बी सी के साथ कॉन्फ़िगर किया गया
- ब्याज की .wav फ़ाइलों में सिलेबल्स को वर्गीकृत करें
- Whis_gui विंडो के ऊपरी बाएं अनुभाग में एक रिकॉर्डिंग सत्र से सभी .wav फ़ाइलों का चयन करें।
- Whis_gui विंडो ( चित्रा 3 ) के मध्य में "सोनोग्राफी प्राप्त करें" पर क्लिक करें। Sonogram युक्त एक नया फ़ोल्डर .sng फ़ाइल स्वरूप के साथ बनाया जाएगा। ऊपरी में सभी sonograms (.sng फ़ाइलें) चुनें।Whis-gui विंडो के बाएं कोने। सोनोग्राम फ़ाइल विंडो के नीचे स्थित बॉक्स में "पशु आईडी" और "सत्र आईडी" दर्ज करें। फिर प्रोसेस सोनोग्राम पर क्लिक करें
- सोनोग्राफ़ फ़ोल्डर में तीन फ़ाइल प्रकार देखें: "पशु आईडी-सत्र आईडी-नोट्स सीएसवी" (सिलेबल्स से निकाले गए नोटों की जानकारी शामिल है), "पशु आईडी-सत्र आईडी-सिलेबल्स.कैसे", (सभी के मान शामिल हैं वर्गीकृत सिलेबल्स, जिसमें उनके वर्णक्रमीय विशेषताएं और सोनाट्रोग्स में पाए जाने वाले सिलेबल्स की कुल संख्या), "पशु आईडी-सत्र आईडी -ट्र्रेस.मैट" (सभी सिलेबल्स के ग्राफ़िकल प्रतिनिधित्व शामिल हैं)।
नोट: "पशु आईडी-सत्र आईडी-सिलेबल्स" फ़ाइल में कभी-कभी उन अवर्गीकृत यूएसवी सिलेबल्स की एक छोटी सी प्रतिशत (2 - 16%) होती है जो चयनित की तुलना में अधिक जटिल होती हैं, या जिनके पास दो जानवरों के सिलेबल्स हैं जो एक-दूसरे को ओवरलैप करते हैं 23 यदि आवश्यक हो तो ये ट्रेस फ़ाइल से अलग से जांच की जा सकती है
- सोनोग्राफ़ फ़ोल्डर में तीन फ़ाइल प्रकार देखें: "पशु आईडी-सत्र आईडी-नोट्स सीएसवी" (सिलेबल्स से निकाले गए नोटों की जानकारी शामिल है), "पशु आईडी-सत्र आईडी-सिलेबल्स.कैसे", (सभी के मान शामिल हैं वर्गीकृत सिलेबल्स, जिसमें उनके वर्णक्रमीय विशेषताएं और सोनाट्रोग्स में पाए जाने वाले सिलेबल्स की कुल संख्या), "पशु आईडी-सत्र आईडी -ट्र्रेस.मैट" (सभी सिलेबल्स के ग्राफ़िकल प्रतिनिधित्व शामिल हैं)।
3. समानार्थक ध्वनिक संरचना और सिंटेक्स की मात्रा
नोट: प्रारंभिक सिंटैक्स विश्लेषण के लिए कदम उठाने के लिए निर्देश "मुझे पढ़ें!" में शामिल किए गए हैं "गाना विश्लेषण गाइड v1.1.xlsx" फ़ाइल की स्प्रेडशीट, हमारे कस्टम डिज़ाइन किए गए स्प्रैडशीट कैलक्यूलेटर ई ( चित्रा 1 , तालिका 1 )।
- स्प्रैडशीट सॉफ्टवेयर डी ( चित्रा 1 , तालिका 1 ) के साथ ऊपर दिए गए अनुभाग में प्राप्त सॉफ्टवेयर स्क्रिप्ट सी फ़ाइल आउटपुट "पशु आईडी-सत्र आईडी-सिलेबल्स। सीएसवी" खोलें। इसमें सभी सोनाट्रोगों में पाए गए सिलेबल्स की कुल संख्या और उनके सभी वर्णक्रमीय विशेषताएं शामिल हैं।
- यदि अभी तक परिवर्तित नहीं किया गया है, तो स्प्रैडशीट सॉफ्टवेयर डी के भीतर, प्रत्येक मान को अलग-अलग कॉलम में डालने के लिए सॉफ़्टवेयर डी में कॉलम अलग करने के लिए .csv फ़ाइल को परिवर्तित करें।
- सॉफ़्टवेयर डी में "सॉंग विश्लेषण गाइड v1.1.xlsx" फ़ाइल भी खोलें। फिर वें पर क्लिक करेंई टेम्पलेट स्प्रैडशीट, और टेम्पलेट शीट निर्देशों में अनुशंसित इस पत्र में "Animal ID-Session ID -Syllables.csv" फ़ाइल डेटा कॉपी और पेस्ट करें। वर्णों की 'अवर्गीकृत' श्रेणी के साथ पंक्तियां निकालें
- 'बिना अवर्गीकृत' पंक्तियों को हटाने के बाद, कॉलम ई में कॉलम ई में पहली प्रतिलिपि और आईएसआई (अंतर शब्श्याप्त अंतराल) डेटा का पुनर्गणना करें। दूसरा, कॉलम ए से एन में से सभी आंकड़ों को 'डाटा' स्प्रेडशीट में कॉपी करें।
- डेटा स्प्रेडशीट में पशु आईडी (कॉलम एएफ) और रिकॉर्डिंग लंबाई (मिनटों में; कॉलम एसी) दर्ज करें।
नोट: पशु आईडी को रिकॉर्डिंग सेट अप में दर्ज किए गए मैच के साथ मैच करना होगा। फाइल में वर्णित वर्णों का पता लगाया जाएगा और इसे .wav फ़ाइलों के नाम से तुलना करें। - "घनत्व आईएसआई" नामक स्प्रैडशीट का प्रयोग करके 'आईएसआई प्लॉट' परिणाम का अनुक्रम निर्धारित करने के लिए आईएसआई के कटऑफ को निर्धारित करें।
नोट: हमारे पिछले अध्ययन में 23 , हमने दो स्टैंडो में कटऑफ सेट कर दियाअंतिम शिखर के केंद्र से आरडी विचलन। इसमें 250 एमएस से अधिक लंबा अंतराल (एलआई) शामिल था, जो गायन के एक सत्र के भीतर अलग गीतों को अलग करता था। - 'फीचर्स' स्प्रेडशीट में मुख्य परिणाम देखें (प्रत्येक जानवर से मापा गया सभी वर्णक्रमीय गुणों को समूहित करना)
नोट: यदि उपयोगकर्ता ने सॉफ्टवेयर स्क्रिप्ट सी में डिफ़ॉल्ट सिलेबल श्रेणी की सेटिंग का इस्तेमाल किया है जिसे खंड 2.8.9 में वर्णित किया गया है, तो सिलेबल्स को इसके बाद में वर्णित 4 श्रेणियों में वर्गीकृत किया गया है, जैसे कि चीबाउट, एट अल 23 : 1) किसी भी पिच कूदता के बिना सरल शब्दावली, «एस»; 2) दो नोट सिलेबल्स एक एकल ऊपर की तरफ से अलग («यू») कूद; 3) दो नोट सिलेबल्स को एक डाउनवर्ड कूद («डी») से विभाजित किया गया; और 4) नोट्स («एम») के बीच दो या अधिक पिच कूदता के साथ अधिक जटिल सिलेबल्स। - वाक्यविन्यास मूल्यों के लिए, "ग्लोबल प्रॉब्सबिलिटीज़" स्प्रैडशीट पर क्लिक करें जो कि प्रत्येक जोड़ी की संभावनाओं की गणना करता हैनिम्नलिखित समीकरण 23 का उपयोग करते हुए, शुरूआती सिलेबल्स की परवाह किए बिना yllable संक्रमण प्रकार
पी (एक संक्रमण प्रकार की घटना) = संक्रमण प्रकार की कुल संख्या की संख्या / सभी प्रकार के संक्रमण की कुल संख्या - आरंभिक सिलेबल्स के सापेक्ष प्रत्येक संक्रमण प्रकार के लिए सशर्त संभावनाओं की गणना करने के लिए 'सशर्त संभावनाओं' स्प्रेडशीट पर क्लिक करें, जो निम्नलिखित समीकरण का उपयोग करता है:
पी (प्रारंभिक शब्दांश दिया गया एक संक्रमण प्रकार की घटना) = एक संक्रमण प्रकार की घटनाओं की कुल संख्या / सभी संक्रमण प्रकार की घटनाओं की कुल संख्या समान प्रारंभिक अक्षर के साथ - यह सत्यापित करने के लिए कि उपरोक्त संक्रमण संभावनाओं में से कौन-कौन से विकल्प गैर-यादृच्छिक से अलग हैं, 23 के दृष्टिकोण के अनुसार, पहले ऑर्डर मार्कव मॉडल का उपयोग करके, कस्टम सॉफ्टवेयर एफ ( उदाहरण के लिए आर स्टूडियो में सिंटैक्स decorder, चित्रा 1 ,मजबूत> तालिका 1) निम्नलिखित आर स्क्रिप्ट के साथ: अलग-अलग परिस्थितियों में समूहों के लिए टेस्ट_फ़ोर्ड डिफ्रेंस_इन_Dynamics_Between_Contexts.R; या टेस्ट_फोर डिफेंचर_इन_डिसमिक्स_बटन_जिनोटाइप्स.आर एक ही परिस्थितियों में समूहों के बीच।
- 23 में दृष्टिकोण के बाद, विभिन्न संदर्भ (जोड़ी-वार) में एक ही जानवर की संक्रमण संभावनाओं में सांख्यिकीय अंतर के लिए परीक्षण करने के लिए एक ची-स्क्वायर परीक्षण या अपनी पसंद का अन्य परीक्षण करें।
नोट: समूहों के बीच सिंटैक्स की तुलना करने के लिए उपयोग किए जाने वाले सांख्यिकीय मॉडल के बारे में अधिक विवरण 23 में मिले हैं वैश्विक या सशर्त संक्रमण संभावनाओं का विश्लेषण करने के लिए शोधकर्ता अन्य तरीकों का उपयोग कर सकते हैं, जो कि वे या दूसरों ने विकसित किया था। - दृश्यों को सिंटैक्स आरेख के रूप में प्रदर्शित करने के लिए एक नेटवर्क ग्राफ़िंग सॉफ़्टवेयर जी ( चित्रा 1 , तालिका 1 देखें ) में मूल्य दर्ज करें, विभिन्न नक्षत्रों को नामित नोड्स के साथगोरों, और तीर का रंग और / या मोटाई पिक्सेल सिलेबल्स के बीच संभावित मानों की श्रेणी का प्रतिनिधित्व करते हैं
नोट: स्पष्टता के लिए, वैश्विक संभावना के ग्राफ के लिए, हम केवल 0.005 (मौके की घटना के 0.5% से अधिक) से अधिक बदलाव दिखाते हैं। सशर्त संभावनाओं के लिए, हम 0.05 की दहलीज का उपयोग करते हैं क्योंकि "वैश्विक मॉडल" में प्रत्येक संभाव्यता कम है, इस पर विचार करते हुए कि हम सिलेबल्स की कुल संख्या से विभाजित करते हैं और न केवल एक विशिष्ट प्रकार के शब्द के अनुसार
4. गाने के प्रकार के लिए गाने का संपादन और परीक्षण प्राथमिकता
नोट: यूएसवी के प्लेबैक का उपयोग किसी जानवर के व्यवहारिक प्रतिक्रिया का प्रयोग करने के लिए प्रयोग किया जा सकता है, जिसमें विशिष्ट गीत प्रकार की प्राथमिकता भी शामिल है। क्योंकि महिला वरीयताओं को ऐटस राज्य के आधार पर बदल सकता है, क्योंकि महिलाओं को यह सुनिश्चित करने के लिए कि वे परीक्षण के पहले एक ही राज्य में हैं, निम्न प्रकार हैं:
- पार्श्व अनुभव से कई दिनों पहले लैंगिक अनुभव के साथ महिलाओं को तैयार करें
- एस्ट्रॉस चक्र की निगरानी करें, और जब प्रो-ऐस्ट्रस या एस्ट्रस स्पष्ट (योनि खोलने और गुलाबी चारों ओर 27 में दिखाया गया है), महिलाओं को अपने स्वयं के पिंजरे में एक साथ वापस डाल दिया। वे अगले दिन परीक्षण करने के लिए तैयार हैं।
- उत्तेजनाओं के लिए इस्तेमाल होने वाली वांछित परिस्थितियों के साथ दो संपादित। वाव फ़ाइलों को बनाने के लिए ध्वनि प्रसंस्करण सॉफ़्टवेयर एच ( जैसे एसएएसएलएप प्रो; चित्रा 1 , तालिका 1 ) में कॉपी और पेस्ट कार्यों का उपयोग करें। एक चर के रूप में vocalizations की मात्रा के खिलाफ की रक्षा के लिए, सुनिश्चित करें कि दो ध्वनि फ़ाइलों में एस के समान संख्या हैवांछित संदर्भों ( जैसे यूआर) से एक ही या अलग-अलग पुरुषों / महिलाओं से येलबल्स और अनुक्रम की लंबाई (गाना बोट्स)।
- सॉफ़्टवेयर एच में शर्त 1 से गीत वाली पहली फ़ाइल खोलें। फिर फ़ाइल> विशेष> फ़ाइल से चैनल जोड़ें और स्थिति 2 से परीक्षण करने के लिए दूसरी ध्वनि फ़ाइल चुनें। यह प्रत्येक चैनल के लिए 2 चैनल बनाता है।
- मात्रा को समायोजित करें यदि यह सुनिश्चित करने की आवश्यकता है कि दो फ़ाइलों की मात्रा एक दूसरे से मेल खाती है, संपादित करें> वॉल्यूम पर जाकर।
- फिर संपादन> प्रारूप> नमूनाकरण आवृत्ति रूपांतरण पर जाएं और 256 kHz से 1 MHz की नमूना आवृत्ति की .vav फ़ाइलों को बदलने के लिए 250,000 हर्ट्ज से 1,000,000 हर्ट्ज में कनवर्ट करें का चयन करें। प्लेवैक डिवाइस के लिए .wav फ़ाइलों को पढ़ने के लिए यह चरण आवश्यक है।
- इन नई फाइलों को वापस चलाए जाने के लिए परीक्षण फाइलों के रूप में सहेजें यह पहचानने के लिए सुनिश्चित करें कि कौन सा चैनल है (1 या 2) स्पष्टता प्रयोजनों के लिए इसे "file name.wav" नाम दें।
- ई पर जाएंXit> प्रारूप> स्वैप चैनल और दो चैनलों को स्वैप करें एक अलग नाम का उपयोग करके स्वैप किए गए संस्करणों को सहेजें। नोट: यह उल्टे चैनलों के साथ विपरीत प्रति होगा, जिसे बाद में 'file name_swapped.wav' नाम दिया गया है।
- प्लेबैक उपकरण "वाई-भूलभुलैया" को 70% शराब के साथ साफ़ करें, जो आसुत पानी के बाद होता है। कागज तौलिये के साथ सूखी हमारे वाई-भूलभुलैया एक घर का अपारदर्शी ठोस काले प्लास्टिक उपकरण है, जो 30 सेमी लंबे हथियारों के साथ, और भूलभुलैया के चरम सिरों पर दो ड्रिल किए गए छेद हैं, ताकि अल्ट्रासाउंड स्पीकर को हथियारों के तल स्तर ( चित्रा 4 ए ) में फिट होने की अनुमति मिल सके।
- सुनिश्चित करें कि स्पीकर अपनी उचित स्थिति में हैं और साउंड कार्ड से जुड़े हैं, और कार्ड कंप्यूटर से जुड़ा है
- ओपन सॉफ्टवेयर ए, प्ले> डिवाइस चुनें और प्लेबैक ध्वनि कार्ड डिवाइस चुनें। "फ़ाइल शीर्षक दर का उपयोग करें" चुनें Play> Playlist पर जाएं और दो चा युक्त रुचि की फ़ाइल लोड करेंNnels ( यानी "file.wav") "लूप मोड" चुनें पूरी भूलभुलैया को कवर करने के लिए भूलभुलैया के ऊपर वीडियो रिकॉर्डर सेट करें
- 10 मिनट की आदत अवधि के लिए भूलभुलैया में परीक्षा महिला रखें। 10 मिनट के बाद, यदि मादा प्रारंभिक हाथ में नहीं है तो धीरे से मादा वापस प्रारंभिक हाथ में धक्का दे और प्लास्टिक की जुदाई खिड़की बंद करें।
- प्लेबैक करने के लिए तैयार फाइल ("फाइल। वाव") का चयन करें और इसे चलाएं। वीडियो रिकॉर्डिंग प्रारंभ करें, और यह सुनिश्चित करने के लिए सुनिश्चित करें कि किस चैनल पर स्थित है Y-Maze के हाथ ( यानी : बाईं ओर यूआर, या दाहिनी बांह में एफई) को देखने के वीडियो रिकॉर्डिंग फ़ील्ड में एक पेपर नोट के साथ।
- मादा को लूप मोड में गाने सुनने और वांछित मिनट ( यानी 5 मिनट) के दौरान भूलभुलैया का पता लगाने की अनुमति दें: यह एक सत्र है। महिला वापस प्रारंभिक हाथ में वापस लौटें अगले सत्र की तैयारी करते समय उसे 1 मिनट तक आराम करने की अनुमति दें रेमडिस्टिल्ड वॉटर के साथ किसी भी मूत्र के निशान और मल
- "File_swapped.wav" फ़ाइल लोड करें। वीडियो रिकॉर्डिंग के लिए कागज नोट्स के स्थान पर स्विच करें। बाएं एक को दाहिनी ओर ले जाएं और वाइस-विराम.एक मिनट के बाद, फ़ाइल चलाएं। दूसरे सत्र के लिए महिला नि: शुल्क ।
- परीक्षण के दौरान संभावित पक्ष पूर्वाग्रह का पता लगाने के लिए कुल 4 सत्रों x 5 मिनट के लिए 4.4.3 से 4.4.4 चरण दोहराएं। लाल स्टॉप बटन पर क्लिक करके सभी सत्रों के अंत में वीडियो रिकॉर्डिंग रोकें। मादाओं के बीच 70% शराब और आसुत जल के साथ भूलभुलैया को साफ करें।
- एक हफ्ते बाद में अलग-अलग गीतों के उदाहरणों के साथ सभी चरणों को दोहराएं, एक ही महिला के साथ निष्कर्षों की विश्वसनीयता का परीक्षण करने के लिए पर्याप्त परिणाम प्राप्त करें।
- बाद में वीडियो का निरीक्षण करें, और वीडियो पर टाइमर का उपयोग करें और प्रत्येक सत्र में प्रत्येक हाथ में महिलाओं द्वारा बिताए गए समय को मापने के लिए स्टॉपवॉच का उपयोग करें। संभव गाना वरीयताओं के लिए परिणामी डेटा का आंकड़ा विश्लेषण करें
Representative Results
वर्तमान प्रोटोकॉल में, पुरुष बी 6 डी 2 एफ 1 / जे चूहों की मुखर व्यवहार और वाक्य रचना में परिवर्तन की विशेषता थी। आम तौर पर, इस प्रोटोकॉल का उपयोग करते हुए हम 5 मीटर सत्र प्रति पुरुष प्रति पुरुष औसत, 675 ± 98.5 वर्गीकृत सिलेबल, महिला यूआर के जवाब में, 615.6 ± 72 एफई में, 450 ± 134 वायुसेना में, 75.6 ± 38.9 AM और 0.2 में रिकॉर्ड करने में सक्षम थे। पुरुष यूआर (एन = 12 पुरुष) में ± 0.1 दर, महिला यूआर के लिए ~ 130 सिलेबल्स / मिनट, एफई के लिए ~ 120 सिलेबल्स / मिनट या वायुसेना संदर्भों ( चित्रा 5 ए ) के लिए ~ 100 सिलेबल्स / मिनट थे। नरम एकत्रित मूत्र 10 , 23 के मुकाबले ताजा संग्रहित मूत्र के जवाब में पुरुषों ने बहुत अधिक मात्रा में सिलेबल्स का उत्पादन किया है। पुरुष भी एक संवेदनाहृत पुरुष या ताजा पुरुष मूत्र चित्रा 5 ए ) की उपस्थिति में काफी कम गाते हैं। माले ने अपने संदर्भों को संदर्भ 23 में बदल दिया। उदाहरण के लिए, बी 6 डी 2 एफ 1 / जे पुरुष काफी वृद्धि करते हैं मादा मूत्र हालत ( चित्रा 5 बी) में कई पिच कूद "एम" श्रेणी के सिलेबल्स का उत्पादन। वे संदर्भ में व्यक्तिगत सिलेबल्स की ध्वनिक विशेषताएं भी बदलते हैं। उदाहरण के लिए, बी 6 डी 2 एफ 1 / जे पुरुष, महिला मूत्र के संदर्भ में एक उच्च आयाम और बैंडविड्थ पर सिलेबल्स, और अन्य महिलाओं ( चित्रा 6 ) 23 की तुलना में जाग महिला संदर्भ में उच्च वर्णक्रमीय शुद्धता गाते हैं।
यह प्रोटोकॉल अनुक्रम की गतिशील विशेषताओं को मापने और इस तरह वाक्यविन्यास परिवर्तनों को मापने के लिए एक साधन प्रदान करता है। आइ, एट अल से एक अनुकूलित विधि का उपयोग करना 22 , हम अनुक्रमों ( चित्रा 7 ए ) 23 के बीच अंतराल को परिभाषित करने के लिए आईएसआई का उपयोग करते हैं, और उसके बाद अक्षांशों के अस्थायी पैटर्न को भेद करने और विश्लेषण करने के लिए अंतराल का उपयोग करते हैं। हमने दिखाया है कि लैंगिक अनुक्रम लंबाई जागृत महिला संदर्भ ( चित्रा 7 बी ) में उत्पन्न होती है23. यह तकनीक हमें जटिल अनुक्रमों ("मी" शब्दरेखा प्रकार की कम से कम 2 घटनाओं से बना है) बनाम सरल अनुक्रमों (एक या कोई "मी" प्रकार से बना है, और इस प्रकार ज्यादातर " एस "प्रकार)। हमने पाया है कि बी 6 डी 2 एफ 1 / जे पुरुषों के साथ महिला मूत्र के संदर्भ में दूसरों के मुकाबले एक उच्च अनुपात ( चित्रा 7 सी ) 23 की ओर बढ़ रहा है, यह दर्शाता है कि वे महिला मूत्र की स्थिति में अधिक जटिल सिलेबल्स का उत्पादन करते हैं, लेकिन यह भी कि ये सिलेबल्स वितरित किए जाते हैं अधिक दृश्यों पर
हम सशर्त संक्रमण संभावनाओं को एक सिलेबल प्रकार से दूसरे में (24 संक्रमण प्रकार कुल, जिसमें से संक्रमण और "मौन" राज्य सहित कुल मिलाकर) की गणना करने में सक्षम हैं 23 हमने पाया कि अलग-अलग संदर्भों में, चरों की शुरूआत वाले सिलेबल्स के लिए संक्रमण प्रकार की पसंद अलग है, और यह कि अधिक वाक्यविन्यास डिवीजन हैमहिला मूत्र हालत ( चित्रा 8 ) 23 में गंभीरता ये अवलोकन पिछली रिपोर्ट के अनुरूप हैं जो दिखाते हैं कि पुरुष विभिन्न उत्तेजनाओं और 4 , 5 , 24 अनुभवों के जवाब में उनके मुखर की ध्वनिक सुविधाओं या प्रदर्शनों की सूची को बदल सकते हैं।
अंत में, वर्तमान प्रोटोकॉल प्लेबैक के साथ महिला वरीयताओं का परीक्षण करने के लिए मार्गदर्शन प्रदान करता है। हमने पाया है कि बी 6 डी 2 एफ 1 / जे महिलाओं सरल गीत 23 के मुकाबले अधिक जटिल गीत (2 या अधिक "मी" सिलेबल्स युक्त) पसंद करते हैं ज्यादातर महिलाओं ने वाई-भूलभुलैया के किनारे पर अधिक बार रहने का फैसला किया जो जटिल गीतों ( चित्रा 4 बी ) की भूमिका निभाई।
चित्रा 1: सोफ के फ्लो चार्टउपयोग और विश्लेषण tware प्रत्येक कार्यक्रम और संबद्ध कोड को उनकी पहचान और मुख्य पाठ में उपयोग करने में मदद करने के लिए एक अक्षर का नाम दिया गया है। में () विशिष्ट प्रोटोकॉल हैं जो हम अपने प्रोटोकॉल में उपयोग करते हैं। इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
चित्रा 2: रिकॉर्डिंग नर चूहे गाने के लिए सेट करें। (ए) एक ध्वनि क्षीणन रिकॉर्डिंग बॉक्स की तस्वीर और यूएसवी vocalizations रिकॉर्ड करने के लिए स्थापित। (बी) सॉफ़्टवेयर ए ( टेबल 1 ) के साथ बनाई गई रिकॉर्डिंग का उदाहरण सोनोग्राफ़, जिसमें "माउस सॉन्ग एनलाइज़र v1.3" की गणना की गई है, अवधि, अंतर-स्तरीय अंतराल (आईएसआई), पीक आवृत्ति मिनट (पीएफ मिनट), वर्णित वर्णक्रमीय विशेषताओं सहित पीक आवृत्ति अधिकतम (पीएफ अधिकतम), पीक आवृत्ति शुरू (पीएफ शुरू), पीक आवृत्ति अंत (पीएफ अंत), और बैंडविड्थ (सी) एक अन्य पुरुष गायन के सोनोग्राफ, एक लाइव महिला को ध्वनि क्षीणन बॉक्स के अंदर और एक ही कमरे में प्रयोगशाला की बेंच पर बॉक्स के बाहर। हमारी वास्तविक निष्कर्ष बताते हैं कि एक ही जानवर के बॉक्स में रिकॉर्डिंग बड़ी मात्रा (मजबूत तीव्रता) और कम हार्मोनिक्स दिखाती है, लेकिन बिना ध्वनि फोम के बॉक्स में गूँज का कोई प्रमाण नहीं है। इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
चित्रा 3: "माउस सॉन्ग एनालाइज़र v1.3" का स्क्रीनशॉट whis_gui विंडो विश्लेषकों के लिए उपलब्ध विभिन्न विकल्प दिखा रहा है। दिखाए गए मापदंडों को आंकड़े और आंकड़ों के विश्लेषण में पुरुष यूएसवी दर्ज करने के लिए उपयोग किया जाता है (मिनी नोट अवधि को छोड़कर 3 एमएस)। .com / files / ftp_upload / 54137 / 54137fig3large.jpg "target =" _ blank "> कृपया इस आंकड़े का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 4: कॉम्प्लेक्स और सरल गाने के प्लेबैक के बीच महिला विकल्प। (ए) वाई-भूलभुलैया तंत्र का प्रयोग और आयाम माप। (बी) प्रत्येक बांह में मादाओं द्वारा व्यतीत किया गया समय, एक ही पुरुष से या तो एक जटिल (मूत्र मूत्र से सम्मिलित) या अधिक सरल (जागृत महिलाएं) गाया जाता है। आंकड़े n = 10 B6D2F1J मादा चूहों के लिए अर्थात् ± एसई के रूप में दिखाए जाते हैं, साथ ही व्यक्तिगत मूल्यों को भी दिखाया गया है; 10 में से 9 महिलाओं ने अधिक जटिल शब्दांश / अनुक्रम गान के लिए एक प्राथमिकता दिखायी * पी <0.05 युनाइटेड छात्र टी-टेस्ट चिबाउट, एट अल से संशोधित चित्रा अनुमति के साथ 23रिक्त "> कृपया इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 5: सिलेबल्स की संख्या और उत्सर्जित गुणों की संख्या । (ए) विभिन्न संदर्भों में पुरुषों की शब्दावली का उत्पादन दर। (बी) मादा मूत्र (यूआर), संवेदनाहारी महिला (एएफ), जाग महिला (एफई), और संवेदनाहारी नर (एएम) संदर्भों की उपस्थिति में पुरुषों की प्रदर्शनों की सूची के समय। डेटा को ± एसईएम मतलब के रूप में प्रस्तुत किया जाता है * पी <0.03; ** p <0.005; ********************************************************************************************************************* चितबूट, एट अल से चित्रा अनुमति के साथ 23 इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
together.within-पेज = "1"> 
चित्रा 6: अलग संदर्भ में स्पेक्ट्रल सुविधाओं के उदाहरण। (ए) आयात्व सुधार के बाद पोस्ट-हॉक युग्मित छात्र टी-टेस्ट के लिए * पी <0.025 (बी) फ़्रिक्वेंसी रेंज या बैंडविड्थ *: पी <0.041; **: पी <0.005; ***: पी <0.0001 सुधार के बाद (सी) वर्णों की वर्णनात्मक शुद्धता * P: <0.025; **: पी <0.005; ***: पी <0.0001 सुधार के बाद संकेताक्षर: महिला मूत्र (यूआर), संवेदनाहारी महिला (एएफ), जाग महिला (एफई), और संवेदनाहारी पुरुष (एएम)। आंकड़े चबाउट, एट अल से संशोधित अनुमति के साथ 23 इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
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चित्रा 7: अनुक्रम मापन (ए) अनुक्रम को अलग करने के लिए आईएसआई का उपयोग लघु आईएसआई (एसआई) और मध्यम आईएसआई (एमआई) का प्रयोग एक अनुक्रम में सिलेबल्स को अलग करने के लिए किया जाता है, और 250 एमएस (एलई) से लंबे आईएसआई दो अलग-अलग अनुक्रम (बी) विभिन्न अनुक्रमों में पुरुषों द्वारा उत्पादित अनुक्रमों की लंबाई, अनुक्रम प्रति संख्या की संख्या के रूप में मापा जाता है। *: पी <0.025; ** p <0.005; *** p <0.0001 सुधार के बाद (सी) अलग अलग संदर्भों में पुरुषों द्वारा उत्पादित सरल गीतों पर जटिल गीतों का अनुपात। * पी <0.041; ** p <0.005; *** p <0.0001 सुधार के बाद डेटा को ± एसईएम (एन = 12 पुरुष) के रूप में प्रस्तुत किया गया है चितबूट, एट अल से चित्रा अनुमति के साथ 23 इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
चित्रा 8: प्रत्येक संदर्भों के लिए सशर्त संभावनाओं के आधार पर वर्णनात्मक वाक्य-चिह्नों का आरेख। एरो मोटाई प्रत्येक संदर्भ में n = 12 पुरुष: पी (प्रारंभिक अक्षर दिए जाने वाले संक्रमण की घटना) से संक्रमण के प्रकार की सशर्त संभाव्यता की आनुपातिक है। स्पष्टता के लिए, 0.05 की संभावना से कम दुर्लभ संक्रमण नहीं दिखाए जाते हैं। चितबूट, एट अल से चित्रा अनुमति के साथ 23 इस आंकड़े के एक बड़े संस्करण को देखने के लिए कृपया यहां क्लिक करें
Discussion
यह प्रोटोकॉल प्रयोगशाला में अधिकतर मादा-संबंधी उत्तेजनाओं में पुरुष चूहों प्रलयता vocalizations को इकट्ठा करने, मापने और अध्ययन करने के दृष्टिकोण प्रदान करता है। जैसा कि पहले चाबुउट में प्रस्तुत किया गया था, एट अल 23 और प्रतिनिधि परिणामों में, इस पद्धति का उपयोग हमें प्रसंग-आश्रित vocalizations और सिंटैक्स को प्राप्त करने की अनुमति देता है जो कि प्राप्त माताओं के लिए महत्वपूर्ण है। इन उत्तेजनाओं का मानकीकरण यूएसवी के एक विश्वसनीय संख्या का संग्रह प्रदान करेगा और पुरुष के प्रताप गीतों और प्रदर्शनों के विस्तृत विश्लेषण की अनुमति देगा।
जब पुरुष के साथ एक लाइव महिला मौजूद है, तो प्रोटोकॉल हमें स्पष्ट रूप से vocalizations के emitter की पहचान करने की अनुमति नहीं है हालांकि, पिछले अध्ययनों से पता चला है कि ऐसे संदर्भ में उत्सर्जित अधिकांश vocalizations पुरुष 26 , 29 के द्वारा किया गया था। एक अनुष्ठान (पुरुष या महिला) का उपयोग करते हुए अधिकांश अध्ययनपुरुषों के लिए प्रोत्साहन के रूप में ये मानते हैं कि इन संदर्भों में महिला के vocalizations की मात्रा नगण्य 4 , 5 , 22 , 30 है । हालांकि हाल ही के एक पत्र में त्रिकोणीय का इस्तेमाल किया गया था जो समूह में स्थित emitter के vocalization को स्थानीय स्थितियों में 31 के रूप में प्रयोग किया जाता है, और यह दर्शाता है कि एक रंग के भीतर, महिला USVs का ~ 10% योगदान देता है वर्तमान प्रोटोकॉल में संवेदनाहारी महिला का उपयोग करने से उपयोगकर्ता को मुखर बनने के बिना एक पुरुष की उपस्थिति में पुरुष स्वराज्य का अध्ययन करने की अनुमति मिलती है। इस हाल के अध्ययन 31 की अपेक्षाओं के विपरीत हमें एफई और एएफ शर्तों 23 के बीच उत्सर्जित सिलेबल्स की संख्या में कोई अंतर नहीं मिला। यह संभव है कि लाइव माली ने रिकॉर्डिंग में काफी योगदान नहीं दिया या न ही पुरुषों ने एनासेटाइज्ड फिगर बनाम लाइव माईल्स की उपस्थिति में कम गाया।एल्स। फिर भी, हम मानते हैं कि भविष्य के प्रयोगों को महिला योगदान के संभावित प्रभाव का आकलन करने के लिए इस त्रिकोणीय विधि का उपयोग करने पर विचार करना चाहिए।
ऐसे अन्य सॉफ्टवेयर उपलब्ध हैं जो कुछ पहलुओं के बारे में बताते हैं जो हम रेखांकित कर सकते हैं, हालांकि हम तीन प्रोग्रामों के संयोजन से पूछे गए प्रश्नों के लिए पर्याप्त तरीके से विश्वास नहीं करते हैं: सॉफ़्टवेयर ए, माउस सॉन्ग एनालिज़र सॉफ्टवेयर स्क्रिप्ट सी सॉफ्टवेयर बी का उपयोग करते हुए उदाहरण के लिए, हाल ही के एक पत्र में वीओआईएस नामक एक सॉफ़्टवेयर का प्रस्ताव किया गया है जो उपयोगकर्ता को एनोस्टिक वैरिएबल्स को स्वचालित रूप से सोनोग्राम से निकालने की अनुमति देता है या मैन्युअल रूप से इकाइयों पर सीधे इनका उपयोग करने की अनुमति देता है। उपयोगकर्ता द्वारा चयनित 32 लेकिन, स्वचालित या अर्ध-स्वचालित अनुक्रम विश्लेषण हमारे दृष्टिकोण के अनुसार विस्तृत नहीं हैं कुछ वाणिज्यिक सॉफ्टवेयर स्वचालित रूप से ध्वनिक सुविधाओं का विश्लेषण कर सकते हैं, लेकिन एक स्वचालितसिलेबल्स के एटीक वर्गीकरण; उपयोगकर्ता को बाद में विभिन्न सिलेबल्स सॉर्ट करना पड़ता है ग्रिम्सले, गदज़िओला, एट अल 33 ने एक टेबल-आधारित वर्चुअल माउस मुखर अंग प्रोग्राम विकसित किया है जो साझा ध्वनिक सुविधाओं पर आधारित क्लस्टर्स सिलेबल्स, लेकिन सिलेबल्स का स्वत: पता लगाने प्रदान नहीं करता है। उनका कार्यक्रम 34 अद्वितीय है क्योंकि इसमें मार्कोव मॉडल के रिकॉर्ड गीतों से उपन्यास दृश्यों की रचना है, और इस प्रकार सरल संपादन की तुलना में अधिक उन्नत विशेषताएं हैं।
चूहों पर सबसे पहले संचार अध्ययन ने एमिटर की तरफ 35 , 36 पर ध्यान केंद्रित किया है। कुछ अध्ययनों ने रिसीवर की ओर 30 , 37 , 38 का पता लगाया है। प्लेबैक और भेदभाव प्रोटोकॉल रिसीवर के पक्ष का अध्ययन करने के लिए एक साधारण परीक्षण प्रदान करते हैं, जैसे हाल ही में आसबा, काटो, ए द्वारा वर्णित एकअल। 39 उस अध्ययन में, लेखकों ने यहां वर्णित Y- भूलभुलैया बॉक्स के बजाय ध्वनिक फोम के साथ अलग-अलग दो-विकल्प वाला परीक्षण बॉक्स का इस्तेमाल किया। दोनों विकल्प सेटअपों के फायदे और नुकसान हैं सबसे पहले, वाई-भूलभुलैया ध्वनि को एक हाथ से दूसरे तक अलग नहीं करता, लेकिन दो-विकल्प वाला बॉक्स करता है हालांकि, Y- भूलभुलैया डिजाइन का उपयोग करके, पशु दो गीतों का त्वरित मूल्यांकन कर सकते हैं जो एक साथ खेले जाते हैं, और पसंदीदा एक की ओर बढ़ते हैं फिर भी, सामान्य सहायता प्रयोगकर्ताओं में प्लेबैक प्रयोगों का अर्थ निर्धारित किया जाता है और इस प्रकार कंसैप्टीक जानवरों के लिए उत्पन्न मुखर के कार्य। अंत में, इस प्रोटोकॉल और विश्लेषण की तकनीकों को माहिर रखने के बाद, पाठकों को कई प्रश्नों को संबोधित करने में सक्षम होना चाहिए जो संदर्भ, आनुवंशिकी, और माउस यूएसवी के न्यूरोब्योलॉजी को प्रभावित करते हैं।
बी 6 डी 2 एफ 1 / जे चूहों का प्रयोग करते हुए, महिला से संबंधित उत्तेजनाएं लगभग हमेशा हमारे प्रयोगशाला में परीक्षण किए गए पुरुषों से यूएसवी को ट्रिगर करते हैं। कोलेल के लिए यह महत्वपूर्ण हैमजबूत सांख्यिकीय विश्लेषण प्राप्त करने में सक्षम होने के लिए सीटी पर्याप्त सिलेबल्स (> 5 मिनट में 100)। समस्या निवारण के लिए, यदि कोई यूएसवी रिकॉर्ड नहीं हैं (या पर्याप्त नहीं है), सुनिश्चित करने के लिए कॉन्फ़िगरेशन जांचें कि आवाज़ रिकॉर्ड की गई है उत्तेजनाओं की शुरूआत के बाद कंप्यूटर स्क्रीन पर वास्तविक समय के सोनोग्राम को देखकर रिकॉर्डिंग के दौरान पिंजरे में क्या हो रहा है, इसका एक लाइव निरीक्षण करें। अन्यथा पुरुष को यौन परिपक्व / ग्रहणशील महिला को रात भर फिर से उजागर करने की कोशिश करें और फिर उन्हें फिर से रिकॉर्ड करने से पहले कई दिनों तक या एक हफ्ते तक घर पर अकेला रखें। वास्तविक निष्कर्षों के आधार पर, हम पाते हैं कि कुछ पुरुष एक दिन (लगभग पूर्ण 5 मिनट के लिए) पर गाते हैं, और अगले दिन ज्यादा नहीं, और फिर एक और दिन। हमें इसका कारण पता नहीं है कि विषय परिवर्तनशीलता के भीतर ऐसा क्यों होता है, लेकिन हम अनुमान लगाते हैं कि यह पुरुष के लिए एक प्रेरक या मौसमी है, और मूत्र मूत्र के लिए ऐटस राज्य है। यदि कोई यूएसवी दर्ज नहीं किया जाता है, तो इन चर प्रभावों को लेने के लिए जानवरों को कई दिनों में रिकॉर्ड करने का प्रयास करें। यूएनएलगीतकारों में आईक, हमने दिन के समय पर आधारित गायन की मात्रा में अंतर नहीं किया है। हम पाते हैं कि पुरुषों 7 सप्ताह की उम्र से पहले (5 मिनट में <100 सिलेबल्स) ज्यादा नहीं गाते हैं
यहां प्रस्तुत किए गए पता लगाने के तरीके कुछ ही मिनटों में हजारों सिलेबल्स और सभी ध्वनिक पैरामीटर निकाल सकते हैं। लेकिन किसी भी स्वचालित पहचान विधि के रूप में, यह पृष्ठभूमि शोर के प्रति बहुत संवेदनशील है। शोर रिकॉर्डिंग के साथ माउस सॉन्ग एनालाइज़र डिटेक्शन सॉफ़्टवेयर का उपयोग करना (उदाहरण के लिए बिस्तर पर दर्ज पशुओं से) अधिक लचीलेपन की अनुमति के लिए "थ्रेसहोल्ड" का पता लगाने के समायोजन की आवश्यकता हो सकती है। हालांकि, यह झूठी सकारात्मक सिलेबल्स की संख्या में भी वृद्धि करेगा और स्वचालित पहचान विफल हो सकती है। ऐसी परिस्थितियों में, मैनुअल कोडिंग का उपयोग किया जा सकता है
जैसा कि पहले कहा गया है, तनाव के आधार पर संख्या, रैपरेटरी, और vocalizations के विलंबता व्यापक रूप से चर रहे हैं, इस प्रकार एक को मापदंडों को बदलना पड़ सकता है (रिकॉर्डिंग लंबाई,उत्तेजना, स्वचालित शब्दावली का पता लगाने, आदि ) कुछ उपभेदों के लिए सांख्यिकीय विश्लेषण के लिए इष्टतम रिकॉर्डिंग सुनिश्चित करने के लिए।
Disclosures
लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।
Acknowledgments
इस काम को हॉवर्ड हॉज मेडिकल इंस्टीट्यूट के फंड्स को एडजे द्वारा समर्थित किया गया था। हम पीआर धन्यवाद स्पीकर हार्डवेयर हमें देने के लिए Sylvie Granon (NeuroPSI - यूनिवर्सिटी पेरिस दक्षिण XI - फ्रांस) हम जार्विस लैब के सदस्यों को उनके समर्थन, चर्चा, सुधार और इस काम पर टिप्पणियों, विशेष रूप से यहोशू जोन्स मोकोप्सन के आंकड़ों और परीक्षणों के साथ मदद के लिए धन्यवाद करते हैं। हम माउस गाना एनालिज़र सॉफ्टवेयर के साथ मदद के लिए डॉ। गुस्तावो एरियागा का धन्यवाद करते हैं, जो हमारे लिए V1.3 को अपग्रेड करते हैं, और इस प्रोटोकॉल के अन्य पहलुओं के लिए। सॉफ्टवेयर का v1.0 पवित्र और गुओ द्वारा विकसित किया गया था, और v1.1 और v1.3 द्वारा अररियागा।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Sound proof beach cooler | See Gus paper has more info on specific kind | Inside dimensions (L 27 x W 23 x H 47 cm): | |
| Condenser ultrasound microphone CM16/CMPA | Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany | #40011 | Includes extension cable |
| Ultrasound Gate 1216H sound card | Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany | #34175 | 12 channel sound card |
| Ultrasound Gate Player 216H | Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany | #70117 | 2 channels playback player |
| Ultrasonic Electrostatic Speaker ESS polaroid | Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany | #60103 | 2 playback speakers |
| Test cage | Ace | #PC75J | 30 x 8 x 13 cm height; plexiglas |
| plexiglas separation | home made | - | 4 x 13 cm plexiglas with 1 cm holes |
| Video camera | Logitech | C920 | logitech HD Pro webcam C920 |
| Heat pad | Sunbeam | 722-810-000 | |
| Y-maze | Home made | - | Inside dimensions (L 30 x W 11 x H 29 cm): |
| Tweezers | |||
| Software | |||
| Avisoft Recorder (Software A) | Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany | #10101, #10111, #10102, #10112 | http://www.avisoft.com |
| MATLAB R2013a (Software B) | MathWorks | - | MATLAB R2013a (8.1.0.604) |
| Mouse Song Analyzer v1.3 (Software C) | Custom designed by Holy, Guo, Arriaga, & Jarvis; Runs with software B | http://jarvislab.net/wp-content/uploads/2014/12/Mouse_Song_Analyzer_ v1.3-2015-03-23.zip |
|
| Microsoft Office Excel 2013 (Software D) | Microsoft | - | Microsoft Office Excel |
| Song Analysis Guide v1.1 (Software E) | Custom designed by Chabout & Jarvis. Excel calculator sheets, runs with software D | http://jarvislab.net/wp-content/uploads/2014/12/Song-analysis_Guided.xlsx | |
| Syntax decorder v1.1 (Software F) | Custom designed by Sakar, Chabout, Dunson, Jarvis - in R studio | https://www.rstudio.com/products/rstudio/download/ | |
| Graphiz (Software G) | AT&T Research and others | http://www.graphviz.org | |
| Avisoft SASLab (Software H) | Avisoft Bioacoustics, Berlin, Germany | #10101, #10111, #10102, #10112 | http://www.avisoft.com |
| Reagents | |||
| Xylazine (20 mg/mL) | Anased | - | |
| Ketamine HCl (100 mg/mL) | Henry Schein | #045822 | |
| distilled water | |||
| Eye ointment | Puralube Vet Ointment | NDC 17033-211-38 | |
| Cotton tips | |||
| Petri dish |
References
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