Abstract
Stroke är en av de främsta orsakerna till sjuklighet och dödlighet i världen. Stroke kompliceras av hjärnödem och andra patofysiologiska händelser. Bland de viktigaste aktörerna i utvecklingen och utvecklingen av stroke-framkallade hjärnödem är hormonet arginin-vasopressin och dess receptorer, V1a och V2. På senare tid har V1a och V2 receptorblockeraren conivaptan dragit till sig uppmärksamhet som ett potentiellt läkemedel för att minska hjärnödem efter stroke. Men djurmodeller som innebär conivaptan applikationer i stroke behöver ändras baserat på möjliga administreringssätt. Här resultaten av 48 timmar kontinuerlig intravenös (IV) jämförs med intraperitoneal (IP) conivaptan behandlingar efter experimentell stroke hos möss. Vi utvecklat ett protokoll där arteria cerebri media ocklusion kombinerades med kateterinstallation i jugularvenen för IV behandling av conivaptan (0,2 mg) eller vehikel. Olika grupper av djur behandlades med 0,2mg bolusdos av conivaptan eller fordon IP dagligen. Experimentell stroke-framkallade hjärnödem utvärderades i möss efter kontinuerlig IV och IP-behandlingar. Jämförelse av resultaten visade att den kontinuerliga iv administrering av conivaptan lindrar post-ischemisk hjärnödem hos möss, till skillnad från IP-administrering av conivaptan. Vi drar slutsatsen att vår modell kan användas för framtida studier av conivaptan tillämpningar i samband med stroke och hjärnödem.
Protocol
Experiment utfördes i enlighet med riktlinjerna i National Institutes of Health för skötsel och användning av djur i forskning och godkändes av Svenska Medical Center Animal Care och användning kommittén. Alla förfaranden genomfördes med lämpliga aseptiska tekniker. Försöksdjur som används för studien var män, 3 månader gammal, vild typ C57 möss med kroppsvikt 25-27 g.
1. In vivo Stroke Induktion
- Pre-belägga Filament med Dental Resin före det kirurgiska ingreppet.
- Skär en 12 mm lång bit av filament från en 7-0 nylon sutur. Blanda 2 delar av hartset med en del av härdaren, och sedan omedelbart doppa spetsen av glödtråden i blandningen för att täcka ungefär 1/3 av hela längden. Ta bort det snabbt och kontrollera att den är täckt med en slät yta päls av tand harts.
- Lufttorka filamentet under 2 h före användning.
- Placera musen i enn anestesi induktionskammare (2 L volym), och ställ in flödet av 1,5% isofluran i 25% syreanrikad rumsluft vid 2 L / min gå in i kammaren.
- Tillåt musen för att stanna kvar i induktionskammaren tills helt bedövad, 8 som bestäms av bristande respons på svansen nypa.
- Placera musen på operationsbordet med en uppvärmd dyna och ställ in Isoflurankoncentration på 1% för underhåll av anestesi levereras spontant genom noskonen.
- Klippa håret på framsidan och baksidan av nacken, och spraya halsen med tvättsprit. Applicera veterinär oftalmologiska salva på båda ögonen.
- Att kontinuerligt övervaka kroppstemperatur, använd en rektal temperatursond ansluten till digital display under operationen.
- Placera musen i ryggläge, applicera povidonjod 10% skrubba lösning för desinfektion, täck med en steril duk och sedan göra en mittlinje snitt längs halsen med en storlek 10 kirurgisk skalpellblad. <li> Tillfälligt ligera den vänstra gemensamma halspulsådern (CCA) med 6,0 silke sutur.
- Placera en annan slips på den vänstra yttre halspulsådern (ECA).
- Placera en mikrovaskulär klämma på den inre halspulsådern (ICA).
- Skär ett litet hål på den yttre halspulsådern med mikrovaskulära sax. Sätt en glödtråd gjord 7-0 nylon sutur belagd med tand harts i öppningen i ECA, och avancera det cephalically och samtidigt undanröja klippet tills ett motstånd känns (ca 5-7 mm från gaffelpunkten i CCA).
- Placera en temporär slips på den inre halsartären för att säkra tråden på plats. Se diagrammet, figur 1A. Stänga huden med silkessutur och infiltrera såret på framsidan av halsen med 0,2 ml av 0,5% bupivakain, som i steg 2,6.
- Låt musen för att vakna upp ur narkos och återfår medvetandet i en återvinningskammare för 60 minuter. Lämna inte djuret utan uppsikt tills den har återfåtttillräcklig medvetenhet för att upprätthålla sternala bakåtlutad kroppsställning.
- Testa musen för neurologiskt bortfall poäng (NDS) enligt följande: 0 = normal motorik, 1 = böjning av bålen och kontra framben på bakgavellyft, 2 = cirklar till den kontralaterala sidan men normal hållning vid vila, 3 = lutande kontra sida vid vila, 4 = ingen spontan motorisk aktivitet. 4,9
- För NDS testning lyfter musen i svansen och placera på en plan yta för observation (2-3 min). Alternativt, observera möss i återvinningskammaren. Uteslut möss som uppvisar NDS lägre än 2 från försöket på grund av otillräcklig ocklusion av MCA.
Obs: Laser Doppler flowmetry teknik kan användas för att bekräfta MCA ocklusion 9-11.
- För NDS testning lyfter musen i svansen och placera på en plan yta för observation (2-3 min). Alternativt, observera möss i återvinningskammaren. Uteslut möss som uppvisar NDS lägre än 2 från försöket på grund av otillräcklig ocklusion av MCA.
- Re-söva djuret efter 60 min av återhämtning i induktionskammaren såsom beskrivits ovan, re-sterilisera den tidigare hud snitt med 10% povidon-jod skurlösning och återuppta det kirurgiska såret påframför halsen genom att skära och avlägsna siden sutur.
- För att ta bort tråden från ECA utföra följande steg:
- Placera en mikrovaskulär klämma på ICA. Knyt suturen på ICA och dra tråden ut medan du håller klippet är öppet.
- Stäng klämman och placera en slips på ECA proximalt till snittet.
- Ta bort klämman och ta bort ligaturen från CCA för att återställa blodflödet till hjärnan. Se diagrammet, figur 1B.
2. Installation av IV-kateter i jugularvenen för kontinuerlig 48 h Behandling
Obs: Fortsätt till installationen av katetern omedelbart efter steget 1.16.3 utan uppvaknande av musen.
- Använda två olika storlekar av flexibla slangen: sätt in den inre slangen (0,94 mm i ytterdiameter, för att innehålla det läkemedel som infunderas) in i den yttre slangen (3,18 mm i ytterdiameter, för att skydda den inre slangen).
- Pspets musen i liggande ställning, tillämpa 10% povidon-jod skrubba lösning för desinfektion, och göra en 1 cm snitt på baksidan av halsen med en storlek 10 kirurgisk skalpellblad. Vänd musen in i ryggläge, åter sterilisera sidan av halsen med 10% povidon-jod skurlösning och återuppta det kirurgiska såret på framsidan av halsen. Tunnel slangen under huden från snittet görs på baksidan till framsidan av halsen, och exteriorize det från det öppna såret 1 cm.
- Avlägsna subkutan fettvävnad från den vänstra sidan av den främre delen av halsen omkring 1 cm lateralt från mittlinjen. Leta reda på vänster halsvenen, placera två band längs venen 5 mm från varandra, och något sträcka venen. Gör ett litet hål på halsvenen mellan de två banden med mikrovaskulära sax; in spetsen på den inre slangen 5 mm djup kaudalt (mot hjärtat).
- Fäst slangen med både band till halsvenen. Stänga huden på framsidan av halsen meden 3-0 silkessutur. Se diagrammet, figur 1C.
- Fäst slangen till huden på baksidan av halsen med en sutur och anslut slangen till en mikroinfusion IV-pumpen genom ett vridbart. Sväng tillåter fri rörlighet för möss inne i buren med full tillgång till mat och vatten.
- Infiltrera huden snitt på framsidan och baksidan av nacken med 0,2 ml 0,5% bupivakain för att förhindra postoperativ smärta.
Obs! Beroende på institutionella särskilda djurprotokoll, kan djuren behandlas med opioider, NSAID, eller antibiotika före och efter operationen. Emellertid kan nämnda behandlingar ändra resultat av ischemisk stroke resultatet (se diskussion avsnitt). 11-14 - Göra det möjligt för djuret att väcka i återvinningskammaren, och sedan hysa djuret i en separat bur tills ändpunkten av försöket. Lämna inte djuret obevakad tills den har återfått tillräcklig medvetenhet för att upprätthålla sternalabakåtlutad kroppsställning.
- Ställ in infusionshastighet för kontinuerlig 48 h IV behandling av conivaptan (0,14 mg / ml i 5% dextros) eller vehikel vid 1,5 ml / kg / h, 4 och starta infusionen.
Obs: Den totala mängden IV infunderas conivaptan bör vara ungefär 0,2 mg / mus / dag i en total volym av 1,44 ml.
Obs: Utför Intraperitoneal (IP) injektion av conivaptan två gånger dagligen med en total mängd av 0,2 mg i 1,44 ml 5% dextros. Genomföra IP-injektion var såsom tidigare beskrivits. 15 Hindra möss genom att gripa tag i huden på den bakre ytan av kroppen och svansen. Injicera conivaptan eller vehikel i den vänstra nedre kvadranten av buken med hjälp av en 26 G / 1/2 tums nål. 15 - Observera djuren två gånger om dagen för hela den tid av experimentet (48 h). Låt djuren att få full tillgång till mat och vatten. Om djuret uppvisar tecken på ångest eller andnöd konsultera en veterinär. Om dödshjälp är nödvändigt för djuret i svår distress finns vid steg 3.1 nedan, och omfattar alla djuret från studien.
3. Utvärdering av Stroke-framkallade hjärnödem vid slutpunkten
- Offra musen genom över anesthetizing med 5% isofluran.
- Använda en skalpell för att göra ett hudsnitt över skallbenet längs mittlinjen, och dra tillbaka huden för att exponera hela skallen över hjärnan. Med början vid foramen magnum, skär skallbenet lateralt längs omkretsen av hjärnan på varje sida, och lyft den försiktigt utan att vidröra hjärnan under den. Sever hjärnan från ryggraden och nerverna fästa på basen av skallen.
- Ta bort hjärnan, separera den från luktloben och cerebellum, och dissekera storhjärnan längs interhemispheric fissure in i de ischemiska och icke-ischemiska hjärnhalvorna, såsom tidigare beskrivits. 9
- Bedöm hjärnödem genom att jämföra våt-till-torra förhållanden (WDR) som beskrivits tidigare 4,9. Väg vävnaderföre och efter torkning i 3 dagar vid 100 ° C i en ugn. Beräkna innehåll hjärnan vatten (BWC) som% H2O = (1-torrvikt. / Våtvikt.) X 100%.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Kroppstemperaturen hos djuren var inom det fysiologiska området och stabil under hela det kirurgiska förfarandet för stroke induktion. Två möss som uppvisade NDS lägre än 2 omedelbart efter MCAO uteslöts från studien.
MCAO i möss producerar infarktvolymen i den ipsilaterala halvklotet på 48 timmar. Utvärdering av TTC-färgade skivor visar att omkring 50% av halvklotet påverkas av infarkt efter kortex (figur 1D), som offentliggörs av Zeynalov, E. och Dore, S. 2009. 10 Uppkomsten av hjärnan ischemisk stroke orsakar allvarlig berövande av hjärnvävnad i syre och näringsämnen. Som ett resultat av denna lokala hjärnvävnad hypoxi, neuroner och gliala celler dör, vilket bildar infarkt del av hjärnan. Figur 1D visar representativ mus hjärnan skivor som påverkas av MCAO-inducerad infarkt, och ger en uppskattning av storleken på en skada. Utvärdering av innehåll hjärn vatten (BWC) vid 48 h efter 60 min MCAO induktion visade att conivaptan administrerat IV (0,2 mg / dag) minskar signifikant hjärnödem i både ipsilaterala och kontralaterala halvklot, (figur 2A). I motsats, IP-behandling av conivaptan med 0,2 mg bolus dagligen misslyckats med att ge liknande positiva effekter på stroke-framkallade hjärnödem (Figur 2B). Bekräftelse av conivaptan effekt på plasma och urin osmolalitet uppnåddes i samtliga försöksdjur i ändpunkten av försöket. Conivaptan behandlade IV eller IP ökade plasma och minskad urin osmolalitet i alla möss 4 plasmaosmolalitet värden i möss var såsom följer:. 313 ± 4,4 mOsm / kg (vehikel, IV) vs. 355 ± 7,5 * mOsm / kg (conivaptan, IV) , som tidigare publicerats, 4 och 340 ± 7,7 mOsm / kg (fordon, IP) vs.383 ± 8,8 * mOsm / kg (conivaptan, IP). Urinosmolalitet värden i möss var följande: 1210,6 ± 13,4 mOsm / kg (vehikel, IV) vs 595,0 ± 57,4 * mOsm / kg (conivaptan, IV), som tidigare publicerats, 4 och 1535,0 ± 80,9 mOsm / kg (vehikel, IP) vs. 242,0 ± 23,2 * mOsm / kg (conivaptan, IP). Alla data presenteras som medelvärde ± SEM, * p ≤0.05 kontra motsvarande kontroll. 
Figur 1:. Diagram över den experimentella slag modell, IV kateter installation och representativ infarktvolymen på 48 timmar efter stroke glödtrådens position (visas i blått) förbelagda med harts (grön) i den vänstra inre halspulsådern (ICA) under ocklusion (A) och reperfusion tid (B). Korrekt placering av den flexibla slangen spetsen i den vänstra halsvenen (C). Experimental stroke hos möss producerar infarktvolymen i den ipsilaterala halvklotet på 48 timmar. Möss offrades vid 48 timmar efter MCAO, och hjärnorna togs bort, som beskrivs i protokollet (steg från 3,1 till 3,3). Hjärnor skars i 2 mm tjocka sektioner och färgades med TTC (D). Figur 1D har ändrats från den ursprungliga artikeln av Zeynalov, E. och Dore, S. 2009. 10 Klicka här för att se en större version av denna siffra. 
Figur 2: Effekter av kontinuerlig intravenös (IV) och intraperitoneal (IP) conivaptan (0,2 mg / dag) behandlingar på stroke-framkallade hjärnödem Conivaptan IV behandling gavs under 48 timmar.. Conivaptan behandling administrerad IV minskade post-ischemisk hjärnödem i den ipsilaterala och kontralate hemisphere (A). Figur 2A har modifierats från den ursprungliga artikeln av Zeynalov et al., 2015. 4 Conivaptan IP behandling under 48 h misslyckats med att minska hjärnödem orsakat av experimentell stroke, n = 10 i varje grupp. Möss gick MCAO med reperfusion som beskrivs i protokollet ovan (steg 1.1.1-1.15.3). Då IP injektioner av conivaptan (0,2 mg) administrerades omedelbart vid 22 h och 46 h av reperfusion. Möss avlivades; hjärnorna avlägsnades och torkas i ugn, som beskrivs i protokollet (steg 3,1-3,4). (B) Alla data presenteras som medelvärde ± SEM, * p <0,05 jämfört med motsvarande kontroll. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Denna studie har viktiga värde för preklinisk strokeforskning. Denna studie visar att kontinuerlig intravenös infusion av conivaptan (0,2 mg / dag) efter experimentell stroke hos möss minskar effektivt hjärnödem efter 48 timmar av behandling. Effekten av IP-injektion av samma dos av conivaptan på hjärnödem undersöktes också. Conivaptan behandling av både IV och IP-vägar ger aquares hos möss som indikeras av: 1) ökning av plasmaosmolalitet något över fysiologiska nivåer; och 2) minskning i urin osmolalitet på grund av blockering av vatten reabsorption i njuren. Därför, baserat på behandlingsresultat, rapporterar vi att IV leveransmetod har ytterligare viktiga positiva effekter på stroke-framkallade ödembildning.
Vår stora fynd är att IV behandling produceras bättre effekt på hjärnödem lindring än rutten IP för conivaptan. Conivaptan är en kombinerad V1a och V2-receptorantagonist, tillgängliga för klinisk användning för correkt hyponatremi, blodvolym och osmolalitet. 16 Conivaptan har visat att korrigera hyponatremi hos patienter med olika villkor. 17 Klinisk tillgången på conivaptan tyder på att dess prospektering i samband med hjärnödem kan resultera i snabb bänk till bedside översättning. Användningen av försöksdjur selektiva V1A receptorblockerare levereras intracerebroventrikulärt har visat sig minska post-ischemisk hjärnödem bildning beskrivs av andra forskare. 3,18 Varken läkemedel som används vid dessa studier eller behandlingsvägen för drogerna antyder möjlig klinisk tillämpning i Nära framtid.
Mekanismer genom vilka hjärnischemi och AVP orsak hjärnödem är komplexa. Men några viktiga molekylära spelare är natrium- och klorid co-transportörer 19,20 och V1A receptorer som är lokaliserade i kärlväggen vid BBB-gränssnittet. V2 blockerande effekten av conivaptan är ansvarig för utsöndring av excess vatten genom njurarna och förhöjning av blod osmolalitet, vilket också kan bidra till att förhindra utvecklingen av hjärnödem. 21 Dessa mekanismer kan fortfarande vara i spel när conivaptan levereras direkt in i cirkulationen för att undvika vävnadsbarriärer som kan minska conivaptan tillgänglighet. Emellertid var motiverat av dosen och behandlingstiden baserad på tidigare publicerade observationer. 4 Det återstår att pröva huruvida conivaptan når den ischemiska platsen av hjärnan efter skada-inducerad minskningar av regionalt blodflöde. Det måste också undersökas om hjärnan får tillräckligt med conivaptan att producera de önskvärda lokala effekter, såsom förhindrande av kärlsammandragning genom att blockera V1A receptorer i hjärnans kärl.
Experimentprotokollet har utformats för att ta itu med frågan om valet för behandling vägen conivaptan. Baserat på resultaten, ger studien starkt stöd för IV vägen conivaptan annonsämbete. Men det behövs mest kritiska stegen i protokollet som skall upprättas och finjusteras för att upptäcka signifikanta skillnader i behandlingsresultat efter stroke hos möss. Bland dessa åtgärder är: 1) den tid som MCAO (60 min); 2) den dagliga dosen (0,2 mg), och infusionshastigheten (1,5 ml / kg / h); och 3) längden av behandlingen (48 h). Varaktigheten av kortex bestämmer graden av ischemisk skada som är extremt viktigt för det protokoll eftersom det irreversibelt skadar hjärnvävnad. Alltför svår för en skada skulle göra det svårt för djuret att överleva under 48 h, eller djuren kan bli mindre känsliga för conivaptan behandling mot hjärnödem. Å andra sidan, duration av MCAO mindre än 60 minuter kan vara otillräcklig för att inducera en ischemisk skada i mus, och därför skulle inte producera hjärnödem. Dosen och behandlingens längd valdes utifrån FDA rekommendationer för conivaptan användning. 16 Emellertid har det rapporterats attden humana dosen för conivaptan var inte effektiva i möss för att minska hjärnödem efter stroke. Därför hade den dos som skall ökas 10 gånger för möss, vilka inducerade signifikant skydd mot post-ischemisk hjärnödem. 4 Betydelsen av att välja det korrekta infusionshastigheten är att det kan påverka den totala blodvolymen, blodtryck och interstitiell vätskeansamling om hastigheten kraftigt överstiger den föreslagna hastigheten. Emellertid skulle mätningar av totala blodvolymen och blodtrycket vara mycket informativt.
Kirurgisk induktion av kortex är en invasiv förfarande, och kräver noggrann uppmärksamhet åt alla steg i protokollet, och det är viktigt att känna till felsökningstips för tekniken. Vissa oväntade kirurgiska komplikationer, såsom överdriven arteriell blödning till följd av en oavsiktligt rivas artär minska andelen framgångsrika för experimentet och öka dödligheten. Däremot kan venös blödning stoppas genom att trycka lätt wed en steril svamp.
Detta protokoll beskriver en ensidig induktion av hjärnischemi, vilket innebär att MCA ocklusion produceras antingen till höger eller vänster MCA. Däremot kan protokollet modifieras beroende på kirurgens önskad sida av MCA ocklusion och intravenös kateter installationen. Figur 1 diagram visar en ritning av de mest kritiska delarna av kortex förfarande, Figur 1A och B, IV kateter installationsprotokoll, figur 1C, och de representativa hjärnan skivor av MCAO-inducerad hjärninfarkt vid slutpunkten av experimentet (48 h), såsom tidigare publicerats, 10 Figur 1D. Även diagrammet och representativa hjärnan skivor innebär att MCAO framkallades på vänster sida av hjärnan, räknar vi inte dramatiska skillnader i resultat om kortex inducerades på den högra sidan av hjärnan så länge enhetlig svdäck studie upprätthålls.
Under återhämtningsperioden efter operationen och anestesi, kan djuren upplever stress på grund av postoperativ smärta och allvarliga neurologiska underskott. I många fall kan den postoperativa smärthantering begränsas till användning av endast lokalbedövningsmedel, såsom 0,5% bupivakain. Stroke på grund av cerebrovaskulär olycka i människor såväl som experimentell stroke hos möss involverar patofysiologiska faktorer såsom inflammation, hjärninfarkt, och hjärnödem. 9 Dessa patofysiologiska händelser ingrepp med nyckel molekylära aktörer såsom cyklooxygenaser (COX) 13 och G-protein relaterad receptorer. 22 Störningar med de molekylära vägar som involverar COX kan orsakas av NSAID-preparat, 13 om de användes i dessa inställningar. Opioider agera på deras receptorer som är kopplade till G-protein och andra-budbärare 12 och kan förändra patofysiologiska resultaten av stroke, 11 och resultatets av denna studie. Dessa faktorer begränsar användningen av smärtstillande i möss efter operationen.
Sammanfattningsvis undersöker vår studie möjligheten att återanvända conivaptan som långtgående mål. Vår djurmodell av experimentell stroke induktion följt av kontinuerlig intravenös infusion av conivaptan har visat sig ge konsekventa resultat som tyder på dess potentiella användning hos strokepatienter. Mer specifikt, har vi visat att modellen med kontinuerlig IV behandling av conivaptan efter stroke för att förhindra sekundär hjärnskada kan användas för preklinisk studie på möss. Denna studie syftade till att erbjuda ett alternativ tillämpning av conivaptan behandling som ytterligare ett verktyg för att studera hjärnödem hos möss efter stroke, eftersom snabb översättning till kliniska miljöer kan vara livräddande för intensivvårdspatienter.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut.
Acknowledgments
Vi tackar svenska Medical Center för att tillhandahålla finansiering och faciliteter. Vi tackar även Craig Hospital för den generösa användningen av laboratorielokaler.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Heated Pad | K&H Manufacturing Inc | 1060 | |
| Temperature Monitor with Rectal Probe | Physitemp | 7029 | |
| Silk Suture Spool, 6-0 | Surgical Specialties Corporation | SP114 | |
| Silk Suture on a Needle, 3-0 | Ethicon | 1684G | |
| Nylon Suture, 7-0 | Ethicon | 1696G | |
| Dental Resin Polysiloxane with Hardener | Heraeus Kulzer | 65817930 | |
| Microinfusion IV Pump | Kent Scietific | GT0897 | |
| Swivel 22GA | Instech | 375/22PS | |
| Laboratory Tubing, 0.94 mm x 0.51 mm | Dow Corning | 508-002 | |
| Laboratory Tubing, 3.18 mm x 1.98 mm | Dow Corning | 508-009 |
References
- Gueniau, C., Oberlander, C. The kappa opioid agonist niravoline decreases brain edema in the mouse middle cerebral artery occlusion model of stroke. J Pharmacol Exp Ther. 282, 1-6 (1997).
- Krafft, P. R., et al. Etiology of stroke and choice of models. Int J Stroke. 7, 398-406 (2012).
- Vakili, A., Kataoka, H., Plesnila, N. Role of arginine vasopressin V1 and V2 receptors for brain damage after transient focal cerebral ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 25, 1012-1019 (2005).
- Zeynalov, E., Jones, S. M., Seo, J. W., Snell, L. D., Elliott, J. P. Arginine-Vasopressin Receptor Blocker Conivaptan Reduces Brain Edema and Blood-Brain Barrier Disruption after Experimental Stroke in Mice. PloS one. 10, e0136121 (2015).
- Med Lett Drugs Ther.. Conivaptan (Vaprisol) for hyponatremia. The Medical letter on drugs and therapeutics. 48, 51-52 (2006).
- Zhao, X. Y., et al. Effect of arginine vasopressin on the cortex edema in the ischemic stroke of Mongolian gerbils. Neuropeptides. 51, 55-62 (2015).
- Manaenko, A., Chen, H., Kammer, J., Zhang, J. H., Tang, J. Comparison Evans Blue injection routes: Intravenous versus intraperitoneal, for measurement of blood-brain barrier in a mice hemorrhage model. J Neurosci Methods. 195, 206-210 (2011).
- Adams, S., Pacharinsak, C. Mouse anesthesia and analgesia. Curr Protoc Mouse Biol. 5, 51-63 (2015).
- Zeynalov, E., et al. The perivascular pool of aquaporin-4 mediates the effect of osmotherapy in postischemic cerebral edema. Crit Care Med. 36, 2634-2640 (2008).
- Zeynalov, E., Dore, S. Low doses of carbon monoxide protect against experimental focal brain ischemia. Neurotox Res. 15, 133-137 (2009).
- Zeynalov, E., Nemoto, M., Hurn, P. D., Koehler, R. C., Bhardwaj, A. Neuroprotective effect of selective kappa opioid receptor agonist is gender specific and linked to reduced neuronal nitric oxide. J Cereb Blood Flow Metab. 26, 414-420 (2006).
- Ma, M. C., Qian, H., Ghassemi, F., Zhao, P., Xia, Y. Oxygen-sensitive {delta}-opioid receptor-regulated survival and death signals: novel insights into neuronal preconditioning and protection. J Biol Chem. 280, 16208-16218 (2005).
- Ahmad, M., Zhang, Y., Liu, H., Rose, M. E., Graham, S. H. Prolonged opportunity for neuroprotection in experimental stroke with selective blockade of cyclooxygenase-2 activity. Brain Res. 1279, 168-173 (2009).
- Meisel, C., et al. Preventive antibacterial treatment improves the general medical and neurological outcome in a mouse model of stroke. Stroke. 35, 2-6 (2004).
- Miner, N. A., Koehler, J., Greenaway, L. Intraperitoneal injection of mice. Appl Microbiol. 17, 250-251 (1969).
- Adis International Limited. Conivaptan: YM 087. Drugs in R&D. 5, 94-97 (2004).
- Murphy, T., Dhar, R., Diringer, M. Conivaptan bolus dosing for the correction of hyponatremia in the neurointensive care unit. Neurocrit Care. 11, 14-19 (2009).
- Liu, X., Nakayama, S., Amiry-Moghaddam, M., Ottersen, O. P., Bhardwaj, A. Arginine-vasopressin V1 but not V2 receptor antagonism modulates infarct volume, brain water content, and aquaporin-4 expression following experimental stroke. Neurocrit Care. 12, 124-131 (2010).
- Wallace, B. K., Jelks, K. A., O'Donnell, M. E. Ischemia-induced stimulation of cerebral microvascular endothelial cell Na-K-Cl cotransport involves p38 and JNK MAP kinases. Am J Physiol Cell Physiol. 302, C505-C517 (2012).
- O'Donnell, M. E., et al. Intravenous HOE-642 reduces brain edema and Na uptake in the rat permanent middle cerebral artery occlusion model of stroke: evidence for participation of the blood-brain barrier Na/H exchanger. J Cereb Blood Flow Metab. 33, 225-234 (2013).
- Walcott, B. P., Kahle, K. T., Simard, J. M. Novel treatment targets for cerebral edema. Neurotherapeutics. 9, 65-72 (2012).
- Shen, Z., et al. Inhibition of G protein-coupled receptor 81 (GPR81) protects against ischemic brain injury. CNS Neurosci Ther. 21, 271-279 (2015).
