Abstract
El accidente cerebrovascular es una de las principales causas de morbilidad y mortalidad en el mundo. El accidente cerebrovascular es complicada por el edema cerebral y otros eventos fisiopatológicos. Entre los jugadores más importantes en el desarrollo y evolución del edema cerebral derrame cerebral evocada es la hormona arginina-vasopresina y sus receptores V1a, y V2. Recientemente, el antagonista de los receptores V1a conivaptán y V2 ha estado atrayendo la atención como un posible fármaco para reducir el edema cerebral tras un accidente cerebrovascular. Sin embargo, los modelos animales que impliquen aplicaciones conivaptán en investigación del accidente cerebrovascular deben ser modificados con base en las rutas posibles de administración. Aquí los resultados de 48 hr intravenosa continua (IV) se comparan con los tratamientos intraperitoneal (IP) conivaptán después del accidente cerebrovascular experimental en ratones. Hemos desarrollado un protocolo en el que la oclusión de la arteria cerebral media se combinó con la instalación del catéter en la vena yugular para el tratamiento IV de conivaptán (0,2 mg) o vehículo. Diferentes cohortes de animales se trataron con 0,2mg bolo de conivaptán o vehículo IP diaria. Experimental edema cerebral derrame cerebral evocada se evaluó en ratones después de IV continua y tratamientos IP. Comparación de los resultados reveló que la administración IV continua de conivaptán alivia edema cerebral post-isquémico en ratones, a diferencia de la administración IP de conivaptán. Llegamos a la conclusión de que nuestro modelo puede ser utilizado para futuros estudios de aplicaciones conivaptán en el contexto de accidente cerebrovascular y edema cerebral.
Protocol
Los experimentos se llevaron a cabo de acuerdo con las directrices de los Institutos Nacionales de la Salud para el cuidado y uso de animales en la investigación y fueron aprobados por el Comité de Cuidado de Animales y el empleo Swedish Medical Center. Todos los procedimientos se realizaron con técnicas asépticas adecuadas. Los animales experimentales utilizados para el estudio eran de sexo masculino, 3 meses de edad, los ratones C57 de tipo salvaje con el peso corporal del 25 al 27 g.
1. En Vivo inducción Stroke
- Pre-capa con el filamento de resina dental antes de la cirugía.
- Corte un 12 mm de largo trozo de filamento de una sutura de nylon 7-0. Mezclar 2 partes de la resina con 1 parte de endurecedor y, a continuación sumergir inmediatamente la punta del filamento en la mezcla para cubrir alrededor de un tercio de toda la longitud. Quitarlo de forma rápida y compruebe que está cubierto con una capa de resina dental de superficie lisa.
- Deje secar al aire el filamento durante 2 horas antes de su uso.
- Coloque el ratón en unan cámara de inducción de la anestesia (2 L de volumen), y establecer el flujo de 1,5% de isoflurano en aire ambiente enriquecido con oxígeno de 25% a 2 l / min de entrar en la cámara.
- Deje que el ratón para permanecer en la cámara de inducción hasta que esté completamente anestesiado, 8 según lo determinado por la falta de respuesta a pellizcar la cola.
- Coloque el ratón sobre la mesa de operaciones con una almohadilla caliente, y establecer la concentración de isoflurano, el 1% para mantenimiento de la anestesia entregado espontáneamente a través del cono de la nariz.
- Pinza de pelo en el frente y la parte posterior del cuello, y rociar el cuello con alcohol. Aplique un ungüento oftálmico veterinario en ambos ojos.
- Para controlar continuamente la temperatura del cuerpo, utilizar una sonda de temperatura rectal conectado a la pantalla digital durante la cirugía.
- Coloque el ratón en la posición supina, aplicar solución de lavado 10% de povidona yodada para la desinfección, cubrir con un paño estéril, y luego hacer una incisión en la línea media a lo largo del cuello con una cuchilla de bisturí quirúrgico talla 10. <li> Temporalmente ligar la arteria carótida izquierda común (CCA) con sutura de seda 6.0.
- Coloque otro lazo en la arteria carótida externa izquierda (CEPA).
- Colocar un clip microvascular en la arteria carótida interna (ACI).
- Corte un pequeño agujero en la arteria carótida externa con tijeras microvasculares. Inserte un filamento hecho de 7-0 sutura de nylon recubierto con resina dental en la abertura de la ECA, y avanzarlo cefálica, mientras se quita la pinza, hasta que se sienta resistencia (alrededor de 5-7 mm del punto de la bifurcación CCA).
- Coloque un lazo temporal en la arteria carótida interna para asegurar el filamento en posición. Consulte el diagrama de la Figura 1A. Cierre la piel con sutura de seda, y de infiltrarse en la herida en la parte frontal del cuello con 0,2 ml de 0,5% de bupivacaína, como en el paso 2.6.
- Deje que el ratón para despertar de la anestesia y recupera el conocimiento en una cámara de recuperación durante 60 minutos. No dejar al animal sin vigilancia hasta que se haya recuperadoconciencia suficiente para mantener la posición decúbito esternal.
- Pruebe el mouse para neurológica déficit de puntuación (NDS) de la siguiente manera: 0 = función motora normal, 1 = flexión del torso y de la extremidad anterior contralateral en la plataforma de carga, 2 = dando vueltas con el lado contralateral, pero la postura normal en reposo, 3 = inclinarse hacia contralateral lado en reposo, 4 = sin actividad motora espontánea. 4,9
- Para la prueba de NDS, levantar el ratón por la cola y colocarlo en una superficie plana para la observación (2-3 min). Alternativamente, los ratones observar en la cámara de recuperación. Excluir los ratones que exhiben NDS inferior a 2 a partir del experimento debido a la insuficiente oclusión de la ACM.
Nota: técnica Laser Doppler flujometría se puede utilizar para confirmar la oclusión MCA 9-11.
- Para la prueba de NDS, levantar el ratón por la cola y colocarlo en una superficie plana para la observación (2-3 min). Alternativamente, los ratones observar en la cámara de recuperación. Excluir los ratones que exhiben NDS inferior a 2 a partir del experimento debido a la insuficiente oclusión de la ACM.
- Re-anestesiar al animal después de 60 minutos de recuperación en la cámara de inducción como se describe anteriormente, volver a esterilizar la incisión de la piel anterior con solución de lavado de povidona yodada al 10%, y volver a abrir la herida quirúrgica en ladelante de cuello por el corte y la eliminación de la sutura de seda.
- Para quitar el filamento de la CEPA lleve a cabo los siguientes pasos:
- Colocar un clip microvascular en el ICA. Desatar el hilo de sutura en el ICA y tirar del filamento mientras mantiene abierto el clip.
- Cerrar la pinza y poner un lazo en el CEPA de manera proximal al corte.
- Retire el clip y retire la ligadura de la CCA para restaurar el flujo de sangre al cerebro. Consulte el diagrama de la Figura 1B.
2. Instalación de catéter IV en la vena yugular para el tratamiento continuo de 48 horas
Nota: Proceder a la instalación del catéter inmediatamente después del paso 1.16.3 sin despertar del ratón.
- Usar dos tamaños diferentes de tubos flexibles: insertar el tubo interior (0,94 mm de diámetro exterior; para contener el fármaco que se está infundido) en el tubo exterior (3,18 mm de diámetro exterior; para la protección de la tubería interior).
- PAGata el ratón en la posición prona, aplicar solución de lavado con povidona yodada al 10% para la desinfección, y hacer una incisión de 1 cm en la parte posterior del cuello con una cuchilla de bisturí quirúrgico talla 10. Ponga el ratón en la posición supina, volver a esterilizar la parte frontal del cuello con solución de lavado de povidona yodada al 10%, y volver a abrir la herida quirúrgica en la parte frontal del cuello. Túnel de la tubería bajo la piel de la incisión hecha en la parte posterior a la parte frontal del cuello, y exteriorizar que de la herida abierta 1 cm.
- Quitar el tejido adiposo subcutáneo de la parte izquierda de la parte frontal del cuello alrededor de 1 cm lateralmente desde la línea media. Localizar la vena yugular izquierda, colocar dos lazos a lo largo de la vena 5 mm, y estirar un poco la vena. Hacer un pequeño agujero en la vena yugular entre los dos lazos con tijeras microvasculares; inserte la punta del tubo de 5 mm en sentido caudal profundo interior (hacia el corazón).
- Asegurar el tubo con dos lazos con la vena yugular. Cerrar la piel en la parte frontal del cuello conuna sutura de seda 3-0. Consulte el diagrama, la figura 1C.
- Asegurar el tubo a la piel en la parte posterior del cuello con un hilo de sutura, y conectar la tubería a una bomba de microinfusión IV a través de un eslabón giratorio. El giro permite la libre circulación de los ratones dentro de la jaula con pleno acceso a la comida y el agua.
- Infiltrarse en las incisiones en la piel en el frente y la parte posterior del cuello con 0,2 ml de bupivacaína al 0,5% para prevenir el dolor post-operatorio.
Nota: Dependiendo de los animales protocolos específicos institucionales, los animales pueden ser tratados con opiáceos, AINE, o antibióticos pre y post-operatorio. Sin embargo, los tratamientos mencionados pueden alterar los resultados de pronósticos del accidente cerebrovascular isquémico (véase la sección Discusión) 11-14. - Que el animal pueda despertar en la cámara de recuperación, y luego albergar al animal en una jaula separada hasta el punto final del experimento. No dejar al animal sin vigilancia hasta que se haya recuperado el conocimiento suficiente para mantener esternalposición de yacer.
- Establecer la velocidad de infusión para el tratamiento continuo 48 hr IV de conivaptán (0,14 mg / ml en 5% de dextrosa) o vehículo a 1,5 ml / kg / hr, 4 y comenzar la infusión.
Nota: La cantidad total de IV conivaptán infusión debe ser de aproximadamente 0,2 mg / ratón / día en un volumen total de 1,44 ml.
Nota: Realizar la inyección intraperitoneal (IP) de conivaptán dos veces al día con la cantidad total de 0,2 mg en 1,44 ml de 5% de dextrosa. Implementar la inyección IP se describió previamente. 15 Restringir a los ratones sujetando la piel de la superficie posterior del cuerpo y la cola. Inyectar conivaptán o vehículo en el cuadrante inferior izquierdo del abdomen utilizando un / 1/2 pulgada aguja 26 G 15. - Observar los animales dos veces al día durante toda la duración del experimento (48 h). Que los animales puedan tener pleno acceso a comida y agua. Si el animal muestra signos de angustia o disnea consultar a un veterinario. Si la eutanasia es necesario que el animal en dist severaO prima se refiere a la etapa 3.1 a continuación, y excluye el animal del estudio.
3. Evaluación de Stroke-evocó edema cerebral en el punto final
- Sacrificar el ratón por un exceso de anestesiar con un 5% de isoflurano.
- Utilice un bisturí para realizar una incisión en la piel sobre el hueso del cráneo a lo largo de la línea media, y retraer la piel para exponer todo el cráneo sobre el cerebro. Comenzando en el foramen magnum, cortar el hueso del cráneo lateralmente a lo largo del perímetro del cerebro en cada lado, y levante con cuidado sin tocar el cerebro debajo de ella. Cortar el cerebro de la columna vertebral y los nervios unidos en la base del cráneo.
- Retire el cerebro, separarlo del bulbo olfatorio y el cerebelo, y diseccionar el cerebro a lo largo de la fisura interhemisférica en los hemisferios cerebrales isquémicos y no isquémicos, tal como se describe anteriormente. 9
- Evaluar el edema cerebral mediante la comparación de húmedo a seco-ratios (WDR) como se ha descrito previamente 4,9. Pesar tejidosantes y después de secar durante 3 días a 100 ° C en un horno. Calcular el contenido de agua del cerebro (BWC) como% H 2 O = (peso de 1-seco. / Peso húmedo.) X 100%.
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Representative Results
La temperatura corporal de los animales estaba dentro del rango fisiológico y estable durante todo el procedimiento quirúrgico de la inducción del accidente cerebrovascular. Dos ratones que mostraron NDS inferior a 2 inmediatamente después de la MCAO fueron excluidos del estudio.
MCAO en ratones produce el volumen del infarto en el hemisferio ipsilateral a las 48 horas. Evaluación de las rodajas de TTC-manchado muestra que alrededor del 50% del hemisferio se ve afectada por infarto después de MCAO (Figura 1D), según lo publicado por Zeynalov, E. y Dore, S., 2009. 10 El inicio del accidente cerebrovascular isquémico cerebral causa grave privación de tejido cerebral en oxígeno y nutrientes. Como resultado de esta hipoxia tisular cerebral local, neuronas y células gliales mueren, que forman la parte infartada del cerebro. La Figura 1D muestra las secciones de cerebro de ratón representante afectados por infarto inducida por MCAO, y da una estimación del tamaño de una lesión. Evaluación del contenido de agua del cerebro (BWC) a 48 horas después de 60 min de inducción MCAO reveló que conivaptán IV administrada (0,2 mg / día) reduce significativamente el edema cerebral en ambos hemisferios ipsilateral y contralateral, (Figura 2A). Por el contrario, IP-tratamiento de conivaptán 0,2 mg en bolo diarios fracasó en producir efectos positivos similares sobre el edema cerebral derrame cerebral evocada (Figura 2B). Confirmación del efecto conivaptán en plasma y orina osmolalidad se logró en todos los animales experimentales en el punto final del experimento. Conivaptan tratada IV o IP aumentó plasma y la disminución de la osmolalidad de orina en todos los ratones 4 valores de osmolalidad del plasma en ratones fueron los siguientes:. 313 ± 4,4 mOsm / kg (vehículo, IV) vs. 355 ± 7,5 * mOsm / kg (conivaptán, IV) , tal como se publicó anteriormente, 4 y 340 ± 7,7 mOsm / kg (vehículo, IP) vs.383 ± 8,8 * mOsm / kg (conivaptán, IP). Valores de osmolalidad de la orina en ratones fueron los siguientes: 1210,6 ± 13,4 mOsm / kg (vehículo, IV) vs. 595,0 ± 57,4 * mOsm / kg (conivaptán, IV), tal como se publicó anteriormente, 4 y 1535,0 ± 80,9 mOsm / kg (vehículo, IP) vs. 242,0 ± 23,2 * mOsm / kg (conivaptán, IP). Todos los datos se presentan como media ± SEM, * p ≤0.05 frente al control correspondiente. 
Figura 1:. Diagrama del modelo experimental accidente cerebrovascular, la instalación de catéter IV, y el volumen de infarto representante a las 48 horas después del accidente cerebrovascular Posición del filamento (en azul) pre-recubierto con resina (verde) en la arteria carótida interna izquierda (ACI) durante la oclusión (A) y el tiempo de reperfusión (B). La posición correcta de la punta del tubo flexible en la vena yugular izquierda (C). Experimental derrame cerebral en ratones produce el volumen del infarto en el hemisferio ipsilateral a las 48 horas. Los ratones fueron sacrificados a las 48 horas después de la MCAO, y se retiraron los cerebros, como se describe en el protocolo (pasos 3.1 a 3.3). Los cerebros se cortaron en secciones de 2 mm de espesor, y teñidas con TTC (D). La figura 1D se ha modificado desde el artículo original de Zeynalov, E. y Dore, S., 2009. 10 Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura. 
Figura 2: Efectos de la continua intravenosa (IV) e intraperitoneal (IP) conivaptán (0,2 mg / día) en tratamientos edema cerebral derrame cerebral evocada Conivaptan tratamiento IV se administró durante 48 horas.. Conivaptan tratamiento administrado IV reduce el edema cerebral post-isquémica en el h ipsilateral y contralateralEmisphere (A). Figura 2A se ha modificado desde el artículo original de Zeynalov et al., 2015. 4 Conivaptan tratamiento IP durante 48 horas no logró reducir el edema cerebral causado por el accidente cerebrovascular experimental, n = 10 en cada grupo. Los ratones se sometieron a MCAO con reperfusión como se describe en el protocolo anterior (pasos 1.1.1-1.15.3). Entonces inyecciones IP de conivaptán (0,2 mg) se administraron inmediatamente, a las 22 h y 46 h de reperfusión. Se sacrificaron los ratones; los cerebros se retiraron y se secaron en el horno, como se describe en el protocolo (pasos 3.1 a 3.4). (B) Todos los datos se presentan como media ± SEM, * p <0,05 frente al control correspondiente. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
Este estudio tiene un valor importante para la investigación preclínica accidente cerebrovascular. Este estudio revela que la infusión IV continua de conivaptán (0,2 mg / día) después del accidente cerebrovascular experimental en ratones reduce eficazmente el edema cerebral después de 48 h de tratamiento. También se investigó el efecto de la inyección IP de la misma dosis de conivaptán en edema cerebral. tratamiento Conivaptan por ambas IV e IP rutas produce acuaresis en ratones, como se indica por: 1) aumento de la osmolalidad plasmática ligeramente por encima de los niveles fisiológicos; y 2) disminución de la osmolalidad de la orina debido al bloqueo de la reabsorción de agua en el riñón. Por lo tanto, en base a los resultados del tratamiento, nos informan de que el método de entrega IV tiene importantes efectos beneficiosos adicionales sobre la formación de edema derrame cerebral evocada.
Nuestro hallazgo importante es que el tratamiento IV produce un mejor efecto en la reducción de edema cerebral que la ruta IP para conivaptán. Conivaptan es un antagonista del receptor combinado V1a y V2, disponible para uso clínico a CORhiponatremia rect, el volumen sanguíneo y la osmolalidad. 16 Conivaptan se ha demostrado para corregir la hiponatremia en pacientes con diversas condiciones. 17 disponibilidad clínica de conivaptán sugiere que su exploración en el contexto de edema cerebral puede resultar en la traducción rápida de banco a la cabecera. El uso de experimentación selectivos bloqueadores de los receptores V1a entregados intracerebroventricular se ha demostrado que reduce la formación de edema cerebral post-isquémica descrito por otros investigadores. 3,18 Sin embargo, ni la droga utilizada en esos estudios ni la vía de tratamiento para las drogas sugiere una posible aplicación clínica en el futuro cercano.
Mecanismos por los que la isquemia cerebral y edema cerebral causa AVP son complejas. Sin embargo, algunos jugadores moleculares importantes son sodio y cloruro compañeros de transportadores de 19,20 y los receptores V1a que se localizan en las paredes vasculares en la interfaz BBB. El V2 efecto de bloqueo conivaptán es responsable de la excreción de exces de agua por el riñón y la elevación de la osmolaridad de la sangre, que también puede ayudar a prevenir el desarrollo de edema cerebral. 21 Estos mecanismos aún puede estar en juego cuando conivaptán se entrega directamente a la circulación para evitar las barreras de tejidos que pueden reducir la disponibilidad conivaptán. Sin embargo, la justificación de la dosis y la duración del tratamiento se basó en observaciones publicadas con anterioridad. 4 Queda por determinar si conivaptán llega a la zona isquémica del cerebro después de la disminución de lesiones inducidas por el flujo sanguíneo regional. También hay que investigar si el cerebro no recibe suficiente cantidad de conivaptán para producir los efectos locales deseables, tales como la prevención de la vasoconstricción mediante el bloqueo de los receptores V1a en las arterias cerebrales.
El protocolo experimental fue diseñado para abordar la cuestión de elección para el tratamiento de la ruta conivaptán. Con base en los resultados, el estudio proporciona un fuerte apoyo para la ruta IV del anuncio conivaptánagencia. Sin embargo, los pasos más críticos del protocolo necesitaban ser establecido y puesto a punto con el fin de detectar diferencias significativas en los resultados del tratamiento después del accidente cerebrovascular en ratones. Entre esos pasos son: 1) la duración de la MCAO (60 min); 2) la dosis diaria (0,2 mg), y la velocidad de infusión (1,5 ml / kg / h); y 3) la duración del tratamiento (48 hr). Duración de la MCAO determina el grado de la lesión isquémica, que es extremadamente importante para el protocolo porque irreversiblemente daña el tejido cerebral. Demasiado grave lesión que haría difícil para el animal para sobrevivir durante 48 horas, o de los animales podría ser menos sensible al tratamiento conivaptán contra el edema cerebral. Por otra parte, la duración de MCAO menos de 60 min puede ser insuficiente para inducir una lesión isquémica en el ratón, y, por lo tanto, no produciría edema cerebral. La dosis y la duración del tratamiento se eligieron con base en las recomendaciones de la FDA para su uso conivaptán. 16 Sin embargo, se ha informado de quela dosis humana de conivaptán no era eficaz en ratones para reducir el edema cerebral después del accidente cerebrovascular. Por lo tanto, la dosis tuvo que ser aumentado 10 veces para los ratones, que indujeron una protección significativa contra el edema cerebral post-isquémica. 4 La importancia de la elección de la velocidad de infusión correcta es que puede afectar al volumen total de la sangre, presión arterial y la acumulación de líquido intersticial si la tasa es muy superior a la tasa sugerida. Sin embargo, las mediciones del volumen total de sangre y la presión arterial serían muy informativo.
Inducción quirúrgica de la MCAO es un procedimiento invasivo y requiere una atención precisa a todas las etapas del protocolo, y es importante conocer las sugerencias para solucionar problemas de la técnica. Algunas de las complicaciones quirúrgicas inesperadas, tales como hemorragia arterial excesiva debido a una arteria rota accidentalmente reducir la tasa de éxito para el experimento y aumentan la tasa de mortalidad. Sin embargo, la hemorragia venosa se puede detener mediante la aplicación de una ligera presión wITH una esponja estéril.
Este protocolo describe una inducción unilateral de isquemia cerebral, lo que implica que la oclusión MCA se produce ya sea a la derecha o la izquierda MCA. Sin embargo, el protocolo puede ser modificado en función de lado preferido del cirujano de la oclusión de la ACM y la instalación de catéter IV. Figura 1 diagrama muestra un dibujo de las partes más críticas del procedimiento MCAO, la Figura 1A y B, el protocolo de instalación de catéter IV, figura 1C, y las rodajas representativos cerebrales de infarto cerebral inducida por MCAO en el punto final del experimento (48 horas), según lo publicado previamente, 10 Figura 1D. Aunque el diagrama y las rodajas de cerebro representativos implican que la MCAO se indujo en el lado izquierdo del cerebro, no anticipamos diferencias dramáticas en resultados si MCAO se indujo en el lado derecho del cerebro, siempre y cuando la coherencia en toda la lineaestudio de los neumáticos se mantiene.
Durante el período de recuperación después de la cirugía y la anestesia, los animales pueden experimentar malestar debido al dolor post-operatorio y déficits neurológicos graves. En muchos casos, el tratamiento del dolor postoperatorio puede ser limitado a usar sólo anestésicos locales tales como 0,5% de bupivacaína. Derrame cerebral debido a un accidente cerebrovascular en los seres humanos, así como el accidente cerebrovascular experimental en ratones implica factores fisiopatológicos tales como la inflamación, infarto cerebral y edema cerebral. 9 Estos acontecimientos fisiopatológicos están comprometidos por los jugadores moleculares clave, tales como las ciclooxigenasas (COX) 13 y en relación a la proteína G receptores. 22 la interferencia con las vías moleculares que implican la COX puede ser causado por los medicamentos AINE, 13 si se utilizan en estos ajustes. Los opioides actúan sobre sus receptores que están vinculados a los mensajeros a proteínas G y segunda 12 y pueden alterar los resultados fisiopatológicos de accidente cerebrovascular, el 11 y el resultados de este estudio. Estos factores limitan el uso de medicamentos para el dolor en ratones después de la operación.
En resumen, nuestro estudio explora la posibilidad de reutilización de conivaptán como un objetivo de largo alcance. Nuestro modelo animal de inducción accidente cerebrovascular experimental seguido de una infusión IV continua de conivaptán se ha demostrado que produce resultados consistentes que sugieren su uso potencial en pacientes con accidente cerebrovascular. Más específicamente, hemos demostrado que el modelo de tratamiento IV continua de conivaptán después del accidente cerebrovascular para evitar la lesión cerebral secundaria se puede utilizar para el estudio preclínico en ratones. Este estudio se pretende ofrecer una aplicación alternativa de tratamiento conivaptán como una herramienta adicional para estudiar el edema cerebral en ratones después del accidente cerebrovascular debido a una traducción rápida en el ámbito clínico puede salvar la vida de pacientes de la UCI.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Agradecemos a Swedish Medical Center para proporcionar los fondos e instalaciones. También agradecemos a Craig Hospital para el uso generoso de espacio de laboratorio.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Heated Pad | K&H Manufacturing Inc | 1060 | |
| Temperature Monitor with Rectal Probe | Physitemp | 7029 | |
| Silk Suture Spool, 6-0 | Surgical Specialties Corporation | SP114 | |
| Silk Suture on a Needle, 3-0 | Ethicon | 1684G | |
| Nylon Suture, 7-0 | Ethicon | 1696G | |
| Dental Resin Polysiloxane with Hardener | Heraeus Kulzer | 65817930 | |
| Microinfusion IV Pump | Kent Scietific | GT0897 | |
| Swivel 22GA | Instech | 375/22PS | |
| Laboratory Tubing, 0.94 mm x 0.51 mm | Dow Corning | 508-002 | |
| Laboratory Tubing, 3.18 mm x 1.98 mm | Dow Corning | 508-009 |
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