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VacuSIP, एक बेहतर INEX विधि के लिए Published: August 3, 2016 doi: 10.3791/54221
Automatic Translation
1,2, 3, 2, 1
1Department of Marine Ecology, Centre d’Estudis Avançats de Blanes (CEAB-CSIC), 2Department of Marine Biology and Oceanography, Institut de Ciències del Mar (ICM-CSIC), 3The School of Marine Science, Ruppin Academic Center

Introduction

Benthic निलंबन फीडरों समुद्री पारिस्थितिकी प्रणालियों 1 के कामकाज में आवश्यक भूमिका निभाते हैं। पानी 2,3 की बड़ी मात्रा में छान कर, वे हटाने और उगलना कण (प्लवक और कतरे) और भंग यौगिकों 1 (और संदर्भ उसमें) और benthic-pelagic युग्मन 4,5 और पोषक तत्व सायकलिंग 6.7 का एक महत्वपूर्ण एजेंट हैं। सही कण और भंग यौगिकों हटा दिया है और benthic निलंबन भक्षण (जैसे स्पंज, ascidians, polychaetes, और bivalves के रूप में) द्वारा उत्सर्जित मापने उनके शरीर क्रिया विज्ञान, चयापचय, और पारिस्थितिकी खिला समझने के लिए मौलिक है। साथ में दर माप पंप के साथ, यह भी इन जीवों और पानी की गुणवत्ता पर और साथ ही पारिस्थितिकी तंत्र पैमाने प्रक्रियाओं पर उनके पारिस्थितिक प्रभाव द्वारा मध्यस्थता पोषक तत्व अपशिष्टों की मात्रा का ठहराव सक्षम बनाता है।

कण को ​​हटाने और उत्पादन दर और भंग कॉम को मापने के लिए उपयुक्त विधि का चयनपौंड निलंबन फिल्टर भक्षण द्वारा विश्वसनीय उनके खिला गतिविधि 8 के विषय में डेटा प्राप्त करने के लिए महत्वपूर्ण है। जैसा कि Riisgård और दूसरों को, अनुचित तरीके पूर्वाग्रह परिणामों से बाहर बताया है, प्रयोगात्मक शर्तों बिगाड़ना, घूस और कुछ पदार्थों के उत्सर्जन के गलत अनुमानों उपज है, और इन जीवों द्वारा संसाधित पोषक तत्व अपशिष्टों की गलत मात्रा का ठहराव के लिए नेतृत्व कर सकते हैं।

दो सबसे अक्सर नियोजित तरीके फिल्टर भक्षण में कण और भंग पोषक तत्व अपशिष्टों को मापने के लिए या तो ऊष्मायन (अप्रत्यक्ष तकनीक) या परिवेश के एक साथ संग्रह और exhaled पानी (प्रत्यक्ष तकनीक) शामिल है। ऊष्मायन तकनीक कण की एकाग्रता और incubated पानी में भंग पोषक तत्वों में परिवर्तन की दर को मापने, और आकलन के उत्पादन या हटाने की दर पर्याप्त नियंत्रण 8 की तुलना के आधार पर कर रहे हैं। हालांकि, एक ऊष्मायन कक्ष में एक जीव संलग्न अपनी Feedin बदल सकते हैंजी और प्राकृतिक प्रवाह शासन में परिवर्तन के कारण व्यवहार पंप, और / या भोजन एकाग्रता में, या ऊष्मायन पानी 7,9 में उत्सर्जन यौगिकों (और संदर्भ उसमें) के संचय के कारण ऑक्सीजन में गिरावट की वजह से। प्रसूति और संशोधित पानी की आपूर्ति के प्रभाव के अलावा, ऊष्मायन तकनीक का एक प्रमुख पूर्वाग्रह फिर से छानने का प्रभाव (उदाहरण के लिए 10 देखें) से उपजा है। हालांकि इन methodological समस्याओं में से कुछ सही मात्रा और ऊष्मायन पोत 11 के आकार का या सीटू 12 में एक recirculating बेल-जार प्रणाली की शुरूआत के साथ दूर किया गया है, इस तकनीक को अक्सर हटाने और उत्पादन दर underestimates। इस तरह भंग कार्बनिक नाइट्रोजन (डॉन) और कार्बन (डॉक्टर) या अकार्बनिक पोषक तत्वों के रूप में भंग यौगिकों के चयापचय को बढ़ाता है, खासकर ऊष्मायन तकनीक की वजह से 13 पूर्वाग्रहों से ग्रस्त हो सिद्ध किया है।

देर से 60 है और जल्दी 70, हेनरी Reiswig में9,14,15, विशाल कैरेबियन स्पंज से कण को हटाने यों के लिए अलग से पानी साँस और बगल में जीवों द्वारा exhaled नमूने द्वारा प्रत्यक्ष तकनीक के इस्तेमाल का बीड़ा उठाया है। कठिनाई छोटे निलंबन फीडरों पर और अधिक चुनौतीपूर्ण पानी के नीचे की स्थिति में Reiswig की तकनीक को लागू करने के लिए कारण, इस क्षेत्र में अनुसंधान के थोक प्रयोगशाला (इन विट्रो में) के लिए प्रतिबंधित किया गया था ज्यादातर अप्रत्यक्ष ऊष्मायन तकनीकों 16 काम करते हैं। Yahel और उनके सहयोगियों Reiswig के प्रत्यक्ष तब्दील सीटू तकनीक में छोटे पैमाने की स्थिति में काम करने के लिए। उनकी पद्धति, करार दिया INEX 16, पानी साँस (में) और exhaled (पूर्व) अबाधित जीवों द्वारा की एक साथ पानी के नीचे नमूने पर आधारित है। (INEX) नमूने की एक जोड़ी के बीच एक पदार्थ (जैसे, बैक्टीरिया) के विभिन्न एकाग्रता जानवर द्वारा कि पदार्थ की अवधारण (या उत्पादन) का एक उपाय है। INEX तकनीक ओपन एंडेड नलियों को रोजगार औरexcurrent जेट का अध्ययन जीव के पंप गतिविधि के द्वारा उत्पादित निष्क्रिय ट्यूब का संग्रह में परिवेश पानी की जगह पर निर्भर करता है। Yahel और उनके सहयोगियों को सफलतापूर्वक 15 से अधिक विभिन्न निलंबन के अध्ययन में इस तकनीक को लागू किया है, वहीं taxa भक्षण (जैसे, 17), विधि, अभ्यास और अनुभव के उच्च स्तर की आवश्यकता से विवश है कुछ excurrent orifices के मामूली आकार के द्वारा, और समुद्र की स्थिति।

इन बाधाओं को दूर करने के लिए, हम मिनट ट्यूब के माध्यम से जांचा पानी की नियंत्रित सक्शन (बाहरी व्यास <1.6 मिमी) पर आधारित एक वैकल्पिक तकनीक विकसित की है। हमारा लक्ष्य एक सरल, विश्वसनीय, और सस्ता उपकरण है कि इस तरह के benthic निलंबन फीडरों की excurrent छिद्र के रूप में साफ और एक बहुत ही विशिष्ट बिंदु से सीटू के पानी के नमूने में नियंत्रित की अनुमति होगी बना रहा था। प्रभावी हो, विधि के रूप में तो परिवेश के प्रवाह शासन को प्रभावित या बी को संशोधित करने के लिए नहीं दखलंदाजी हो गया हैअध्ययन जीवों की ehavior। यहाँ प्रस्तुत डिवाइस VacuSIP करार दिया है। यह Yahel एट अल द्वारा विकसित एसआईपी प्रणाली का सरलीकरण है। (2007) गहरे समुद्र में आरओवी आधारित बिंदु नमूना लेने के लिए 18। VacuSIP काफी मूल एसआईपी की तुलना में सस्ता है और इसके लिए स्कूबा आधारित काम अनुकूलित किया गया है। प्रणाली प्रयोगशाला सेटिंग्स के लिए प्रस्तुत किया और राइट और स्टीफंस (1978) 19 और Møhlenberg और Riisgård (1978) 20 से परीक्षण सिद्धांतों के अनुसार डिजाइन किया गया था।

हालांकि VacuSIP प्रणाली benthic निलंबन फीडरों के चयापचय के सीटू के अध्ययन में के लिए डिजाइन किया गया था, यह भी प्रयोगशाला अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और जहाँ भी एक नियंत्रित और स्वच्छ, बिंदु स्रोत पानी के नमूने की आवश्यकता है। प्रणाली विशेष रूप से उपयोगी है जब लंबी अवधि (न्यूनतम घंटे) या सीटू filtrations में खत्म हो एकीकरण आवश्यक हैं। VacuSIP 2011 के बाद से Yahel प्रयोगशाला में सफलतापूर्वक इस्तेमाल किया गया है, और भी हैकैरेबियन और भूमध्य स्पंज प्रजातियों 21 द्वारा मध्यस्थता पोषक तत्व अपशिष्टों के दो हाल के अध्ययनों में नियोजित किया गया (MORGANTI एट अल। प्रस्तुत)।

विशिष्ट samplers, लंबे समय तक नमूना अवधि, और क्षेत्र की स्थिति है, जिसमें VacuSIP लागू किया जाता है, का उपयोग करते हैं, इकट्ठा करने को छानने, और संवेदनशील analytes के लिए नमूने के भंडारण के लिए मानक समुद्र विज्ञान प्रोटोकॉल से कुछ विचलन करना पड़ेगा। VacuSIP प्रणाली या संग्रह के बाद बैक्टीरियल गतिविधि के द्वारा जांचा पानी के संशोधन के जोखिम से संक्रमण के जोखिम को कम करने के लिए, हम सीटू निस्पंदन और भंडारण की प्रक्रिया में विभिन्न परीक्षण किया। विभिन्न छानने उपकरणों, संग्रह वाहिकाओं, और भंडारण प्रक्रियाओं आदेश भंग अकार्बनिक (पीओ 4 3, सं एक्स -, एनएच 4 +, Sio 4) के विश्लेषण के लिए सबसे उपयुक्त तकनीक हासिल करने के लिए जांच की गई और कार्बनिक (डॉक्टर + डॉन) यौगिकों, और अल्ट्रा प्लवक (<1081, एम) और कण जैविक (पीओसी + PON) नमूना। इसके अलावा, संक्रमण के जोखिम को कम करने के लिए विशेष रूप से क्षेत्र की स्थिति के तहत, हैंडलिंग कदम की संख्या नंगे न्यूनतम करने के लिए कम हो गया था। जिसमें विधि प्रस्तुत किया है दृश्य प्रारूप reproducibility की सुविधा के लिए और समय कुशलता तकनीक को लागू करने के लिए आवश्यक समय को कम करने के लिए उन्मुख है।

सिस्टम सारांश

2 मिमी के रूप में छोटे exhalant orifices के साथ निलंबन फीडरों से सीटू पंप पानी में नमूने के लिए, प्रत्येक नमूना के पंप गतिविधि पहले inhalant छिद्र (एस) और excurrent एपर्चर 16 से उसके प्रवाह को देख करने के लिए अगले फ़िल्टर fluorescein रंगे समुद्री जल को रिहा द्वारा कल्पना है (देखें भी 18 में 2 बी आंकड़ा)। पानी साँस और अध्ययन नमूना (incurrent और excurrent) द्वारा exhaled फिर एक साथ मिनट नलियों कस्टम निर्मित जोड़तोड़ पर स्थापित की एक जोड़ी के उपयोग के साथ या "एआर में से दो पर जांचा जाता हैएक ऊपर से नीचे लचीला पोर्टेबल तिपाई के एमएस "(चित्रा 1 और पूरक वीडियो 1)। पानी अध्ययन जीव द्वारा साँस ध्यान से एक ट्यूब के समीपस्थ अंत स्थिति के अंदर या अध्ययन जीव की inhalant एपर्चर के पास से एकत्र किया जाता है। एक समान ट्यूब तो excurrent छिद्र के अंदर तैनात है। इस आपरेशन के संपर्क या जानवर की अशांति, जैसे, तलछट मेजबान से बचने के लिए अच्छी तरह से देखभाल की आवश्यकता है। नमूने शुरू करने के लिए, एक गोताखोर एक सिरिंज से जुड़ी सुई के साथ इकट्ठा करने के बर्तन में एक पट pierces प्रत्येक ट्यूब के बाहर का अंत, नमूना ट्यूब के माध्यम से बर्तन में पानी जांचा मजबूर करने के लिए बाहरी पानी के दबाव की इजाजत दी। सक्शन पहले शीशियों में बनाया वैक्यूम द्वारा और बाहरी पानी और खाली करा लिया नमूना कंटेनर के बीच अंतर दबाव द्वारा शुरू की है ।

exhaled पानी की एक साफ संग्रह सुनिश्चित करने के लिए और महत्वाकांक्षी का आकस्मिक सक्शन से बचने के लिएईएनटी पानी 16, पानी नमूना दर काफी कम दर (<10%) excurrent प्रवाह की दर की तुलना में रखा जाना चाहिए। सक्शन दर ट्यूब की लंबाई और इसकी आंतरिक व्यास (आईडी) द्वारा नियंत्रित किया जाता है। छोटे आंतरिक व्यास भी एक नगण्य मृत मात्रा (<ट्यूबिंग का मीटर प्रति 200 μl) सुनिश्चित करता है। लंबी अवधि (घंटे मिनट) पर नमूना यह संभव ब्याज की सबसे पदार्थों के निहित patchiness एकीकृत करने के लिए बनाता है। यह सुनिश्चित करें कि नमूने लिए पर्याप्त रूप से लंबे समय तक पानी के नीचे नमूना सत्र में और साथ ही परिवहन के लिए प्रयोगशाला में, संरक्षित कर रहे हैं सीटू छानने में एक संवेदनशील analytes के लिए सिफारिश की है। नमूना वाहिकाओं, निस्पंदन विधानसभा, और ट्यूबिंग के चयन के अध्ययन जीवों और विशिष्ट अनुसंधान सवाल से निर्धारित होते हैं। प्रोटोकॉल नीचे वर्णित मान लिया गया है कि एक पूर्ण चयापचय प्रोफ़ाइल (एक सिंहावलोकन के लिए देखें चित्र 2) ब्याज की है। हालांकि, प्रोटोकॉल की मॉड्यूलर प्रकृति च की अनुमति देता हैया आसान संशोधन सरल या यहां तक ​​कि बहुत अलग नमूना योजनाओं को समायोजित करने के लिए। एक पूर्ण चयापचय प्रोफाइल के लिए, नमूने प्रोटोकॉल के बाद के चरणों को शामिल करना चाहिए: (1) फ्लो दृश्य; (2) सैम्पलिंग अल्ट्रा प्लवक खिला (प्लवक <10 माइक्रोन); (3) अकार्बनिक पोषक तत्वों तेज और उत्सर्जन नमूना (में लाइन फिल्टर का उपयोग); (4) सैम्पलिंग जैविक तेज और उत्सर्जन भंग (में लाइन फिल्टर का उपयोग); (5) पार्टिकुलेट खिला और उत्सर्जन (में लाइन फिल्टर का उपयोग); (6) दोहराएँ चरण 2 (गुणवत्ता की जांच के रूप में अति प्लवक खिला); (7) दृश्य प्रवाह।

जब logistically संभव है, यह सिफारिश की है कि चयापचय प्रोफ़ाइल माप दर पंप के साथ संयुक्त कर रहे हैं (जैसे, डाई सामने गति विधि, 16 में) और साथ ही श्वसन माप के साथ। इन मापों अच्छी शुरुआत है और नमूना सत्र के अंत में लिया जाता है। श्वसन माप के लिए, पानी के नीचे optodes या सूक्ष्म इलेक्ट्रोड बेहतर कर रहे हैं।

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Protocol

1. तैयारी के चरण और सफाई प्रक्रियाओं

  1. साफ़ करने वाला घोल
    1. सभी समय पर सुरक्षात्मक गियर, एक प्रयोगशाला कोट, और दस्ताने पहनें। एक साफ धूल और धुएं से मुक्त अंतरिक्ष में इन प्रारंभिक कदम बाहर ले।
    2. ताजा, उच्च गुणवत्ता, डबल आसुत जल के साथ एक 5-10% हाइड्रोक्लोरिक एसिड (एचसीएल) समाधान तैयार है।
    3. एक 5% ऋणात्मक और गैर ईओण surfactant समाधान की अत्यधिक घुलनशील बुनियादी मिश्रण तैयार करें (सामग्री सूची देखें) ताजा, उच्च गुणवत्ता, डबल आसुत जल के साथ।
    4. स्वच्छ में सभी समाधान की दुकान, एसिड कंटेनर धोया।
  2. तैयारी के चरण और सफाई प्रक्रियाओं (प्रयोगशाला में)
    नोट: फास्फोरस यौगिकों के हित के लिए नहीं कर रहे हैं, एचसीएल धोने उच्च गुणवत्ता फॉस्फोरिक एसिड (एच 3 पीओ 4) धोने (8% एच 3 4 पीओ अंतिम एकाग्रता) द्वारा बदला जा सकता है।
    1. सभी समय पर सुरक्षात्मक गियर, एक प्रयोगशाला कोट, और दस्ताने पहनें।
    2. धुलाईनमूने तंत्र उच्च शुद्धता पानी की पर्याप्त राशि के साथ (में लाइन स्टेनलेस स्टील Swinney फिल्टर धारक को छोड़कर)। तंत्र रात भर 5-10% एचसीएल समाधान में भिगोने छोड़ दें। उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल की पर्याप्त राशि के साथ फिर से तंत्र कुल्ला।
    3. उच्च शुद्धता पानी की पर्याप्त राशि के साथ लाइन में स्टेनलेस स्टील Swinney फिल्टर धारकों को धो लें। फिल्टर 5% में ऋणात्मक और nonionic surfactants समाधान के अत्यधिक घुलनशील बुनियादी मिश्रण रात भर भिगोने धारकों छोड़ दें। पर्याप्त उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल के साथ उन्हें फिर से कुल्ला।
    4. सभी नमूने तंत्र सूखी, उन्हें एल्यूमीनियम पन्नी में लपेट और उपयोग करें जब तक एक साफ बॉक्स में रहते हैं।
  3. सक्शन दर नियंत्रण
    1. लंबाई और योजना बनाई काम गहराई और पानी के तापमान के अनुसार सेवन ट्यूबिंग का आंतरिक व्यास का समायोजन करके नमूना दर को नियंत्रित। निम्नलिखित समीकरण (पूरी तरह से गतिविधियों के लिए इस्तेमाल किया हेगन-Poiseuille समीकरण से निकाली गई प्रयोग करेंएक गाइड के रूप में लेखक की राय लामिना पाइप प्रवाह): 1 समीकरण जहां एफ = प्रवाह की दर (सेमी 3 मिनट -1), ΔP = अंतर दबाव (पट्टी), आर = इनलेट आंतरिक त्रिज्या ट्यूबिंग (सेमी), कश्मीर = 2.417 x 10 -9 (सेक -2), एल = ट्यूब लंबाई (सेमी ), वी = पानी चिपचिपापन (छ सेमी -1 सेकंड -1)। अधिक जानकारी के लिए 1 टेबल देखें।
    2. अध्ययन जानवर के पंप दर का 1% से नीचे नमूना दर रखें।
      नोट: अज्ञात वैक्यूम के साथ, खाली कंटेनरों का उपयोग कभी कभी अतिरिक्त जटिलताओं बन गया है। इसलिए, एक क्षेत्र परीक्षण अत्यधिक की सिफारिश की है। 10 मीटर की गहराई और ~ 22 डिग्री सेल्सियस समुद्री जल (40 पीएसयू) में 254 माइक्रोन की एक आंतरिक व्यास के साथ एक 50 सेमी इनलेट ट्यूबिंग ~ 26 μl सेकंड -1 (1.56 मिलीलीटर -1 मिनट) औसत दर सक्शन बचाता है।
  4. सैम्पलिंग वाहिकाओं
    1. छोटी मात्रा के नमूने (3-20 मिलीग्राम, जैसे, प्रवाह CYT के लिए अल्ट्रा प्लवक के लिएometry) पूर्व vacuumed बाँझ प्लास्टिक की ट्यूब का उपयोग करें।
      नोट: पूर्व vacuumed बाँझ प्लास्टिक ट्यूब नियमित रूप से मानव में मानक रक्त परीक्षण के लिए नियोजित कर रहे हैं; कोई additives के साथ बाँझ ट्यूबों का उपयोग करने के लिए सुनिश्चित करें। ये vacuumed बाँझ प्लास्टिक ट्यूब सबसे अच्छा बंद केंद्र Luer साथ बाँझ, एकल उपयोग ट्यूब धारक के उपयोग के साथ जांचा जाता है। हालांकि यह सबसे सुरक्षित और सबसे कुशल नमूने तंत्र है, यह एक थोड़ा बड़ा मृत मात्रा एक साधारण सुई की तुलना में है।
    2. इस तरह के पोषक तत्वों और भंग ऑर्गेनिक्स के रूप में बड़ा पानी के नमूने लिए, 40 या 60 मिलीलीटर कांच की शीशियों कि वाष्पशील कार्बनिक विश्लेषण के लिए पर्यावरण संरक्षण एजेंसी (ईपीए) के मानदंडों को पूरा उपयोग करें। इन शीशियों एक PTFE का सामना करना पड़ा सिलिकॉन पट साथ एक polypropylene टोपी शामिल हैं।
    3. यहां तक ​​कि बड़ी मात्रा के लिए, रबड़ stoppers या वैक्यूम बोतल के साथ एक प्रकार की दवा की बोतलों का उपयोग करें।
    4. सिलिका के नमूने के लिए उच्च घनत्व पॉलीथीन शीशियों (एचडीपीई शीशियों) का प्रयोग करें।
    5. नमूना मात्रा बढ़ाने के लिए और डाट dislodging का खतरा कम करने के लिएचढ़ाई के दौरान, (वैक्यूम) आइटम 1.4.2-1.4.4 खाली एक वैक्यूम पंप के साथ गोता पहले। वैक्यूम स्वयं एक हाथ वैक्यूम पंप या यहां तक ​​कि एक सिरिंज के साथ हवा चूसने से उपयोग करके। हालांकि, अच्छे परिणाम के लिए, एक अच्छा वैक्यूम पंप की सिफारिश की है। स्टैंडर्ड lyophilizers उच्च वैक्यूम प्रदान करता है।
      नोट: विशेष ध्यान देना जब बड़े Vacuumed बोतल का उपयोग सुनिश्चित करने के लिए है कि तेजी से प्रारंभिक सक्शन दर exhaled पानी के नमूने को दूषित नहीं होगा।
  5. पोत सफाई प्रक्रियाओं
    1. भंग ऑर्गेनिक्स और एनएच 4 + विश्लेषण के लिए, नया पूर्व साफ EPA शीशियों का उपयोग करें।
    2. इस प्रकार के रूप में अन्य पोषक तत्वों के विश्लेषण के लिए शीशियों (कांच और एचडीपीई) कुल्ला:
      1. शीशियों (ग्लास और एचडीपीई) और उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल के साथ polypropylene टोपियां कुल्ला। एक नए सिलिकॉन पट स्थापित करें।
      2. कम से कम 3 दिनों के लिए एचसीएल के 10% में शीशियों (कांच और एचडीपीई) लेना और पर्याप्त उच्च गुणवत्ता डबल आसुत पानी से कुल्ला।
      3. 4 घंटे के लिए 450 डिग्री सेल्सियस पर कांच की शीशियों अस्त और भट्ठी में शांत करने के लिए अनुमति देते हैं। टोपी स्थापित करें, और उपयोग करें जब तक एल्यूमीनियम पन्नी में लपेट।
  6. फिल्टर
    1. (जैसे, डॉक्टर, डॉन) सभी भंग कार्बनिक नमूनों की निस्पंदन के लिए और (जैसे, पीओसी, PON) कण ऑर्गेनिक्स के संग्रह के लिए बांधने की मशीन मुक्त ग्लास फाइबर फिल्टर का प्रयोग करें। एक अलग एल्यूमीनियम पन्नी लिफाफे में एक गिलास फिल्टर पैक। 2 घंटे के लिए 400 डिग्री सेल्सियस पर अस्त उपयोग करें जब तक एक साफ और शुष्क पोत में जैविक अवशेषों और दुकान भाप बनकर उड़ करने के लिए।
    2. अकार्बनिक पोषक तत्वों के नमूने के लिए ऊपर के रूप में एक बांधने की मशीन मुक्त ग्लास फाइबर फिल्टर, या 0.2 माइक्रोन पॉली कार्बोनेट झिल्ली भी उपयोग (जैसे, पीओ 4 3, सं एक्स -, एनएच 4 +)। नीचे के रूप में (1.7.3) की व्याख्या की एक बार फिल्टर धारक में स्थापित उत्तरार्द्ध साफ करें।
    3. का प्रयोग करें सिलिका नमूना लेने के लिए 0.2 माइक्रोन पॉली कार्बोनेट झिल्ली फिल्टर। उन्हें एक बार installe साफफिल्टर धारक में डी के रूप में नीचे (1.7.3) की व्याख्या की।
  7. निस्पंदन विधानसभा की तैयारी
    1. उन का उपयोग निस्पंदन विधानसभा साफ करने से पहले एक 0.2 माइक्रोन फिल्टर के माध्यम से ऋणात्मक और गैर ईओण surfactant समाधान और उच्च गुणवत्ता दोहरा आसुत जल के अत्यधिक घुलनशील बुनियादी मिश्रण फ़िल्टर।
    2. पोषक तत्वों और सिलिका के अलावा अन्य भंग ऑर्गेनिक्स के लिए निस्पंदन विधानसभा:
      1. साफ-लाइन में स्टेनलेस स्टील Swinney फिल्टर धारक के अंदर एक combusted बांधने की मशीन मुक्त ग्लास फाइबर फिल्टर रखें।
      2. पूरे विधानसभा के माध्यम से 5% ऋणात्मक और गैर ईओण surfactant समाधान की अत्यधिक घुलनशील बुनियादी मिश्रण की 100 मिलीलीटर और उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल की तो 100 मिलीलीटर को चलाने के लिए एक अम्ल-साफ सिरिंज का प्रयोग करें।
    3. SiO 4 के लिए निस्पंदन विधानसभा:
      1. साफ पॉली कार्बोनेट फिल्टर धारक (पीसी फिल्टर धारक) के अंदर पॉली कार्बोनेट फिल्टर रखें।
      2. अनुसंधान करने के लिए एक अम्ल-साफ सिरिंज का प्रयोग करेंसंयुक्त राष्ट्र 5% एचसीएल के 30 मिलीग्राम और पूरे विधानसभा के माध्यम से उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल का 30 मिलीलीटर।
  8. प्रणाली विधानसभा
    1. पानी के भीतर काम 1.6 मिमी बाहरी व्यास (ओवर ड्राफ्ट) और 254 माइक्रोन या 177 माइक्रोन की एक आंतरिक व्यास (आईडी) के साथ तिरछी (polyether ईथर कीटोन) ट्यूबिंग प्रयोग करने के लिए प्रणाली को इकट्ठा।
    2. एक तेज चाकू या तिरछी कटर का उपयोग करने के लिए आवश्यक लंबाई नलियों में कटौती करने के लिए।
    3. उसके बाहर का अंत (नमूना कंटेनर पक्ष) में, एक पुरुष Luer कनेक्टर एक सिरिंज सुई से जुड़ी प्रत्येक ट्यूब फिट बैठते हैं। सुनिश्चित करें कि आप निर्माता के अनुदेश का पालन करें और हरे अखरोट कस पहले ट्यूब के अंत के साथ नीले रंग flangeless सामी के फ्लैट की ओर संरेखित करें।
    4. एक इन्सुलेट टेप का उपयोग करके तिपाई "हथियार" या कस्टम निर्मित करने के लिए जोड़तोड़ तिरछी ट्यूबिंग संलग्न।
    5. पुरुष Luer कनेक्टर के लिए एक डिस्पोजेबल सिरिंज सुई संलग्न। चोटों को रोकने के लिए अपने सुरक्षात्मक टोपी के साथ सुई रखें। जाहिर नमूना गियर और रंग कोड लेबल सभी साँस और exhaled घटक (जैसे, हरी = में, लाल = पूर्व)।
    6. इसी तरह रंग कोड बनती नमूना वाहिकाओं के सेट के साथ नमूना वाहिकाओं क्रमिक रूप से गिने।

2. काम पानी के नीचे

  1. कार्य स्थल तैयारी
    1. प्रारंभिक सर्वेक्षण और नमूनों का चयन
      ध्यान दें: पानी के नीचे नमूना प्रोटोकॉल के जटिल प्रकृति के कारण, तैयारी के लिए आवश्यक समय के लिए एक कुशल नमूना गोता सुनिश्चित करेगा devoting।
      1. कार्य स्थल सर्वेक्षण और आवश्यक तैयारी समय से आगे है।
      2. का चयन करें और उपयुक्त लक्ष्य जीवों कि अपेक्षाकृत आसानी से पहुँचा जा सकता है निशान। के बाद से नहीं सभी जीवों जरूरी नमूने गोता के समय में सक्रिय हो सकता है, और अधिक कार्यस्थानों तैयार की तुलना में आप नमूना की उम्मीद है।
    2. आधार समर्थन की स्थापना
      1. when लगाया सब्सट्रेट पर काम कर रहे:
        1. 1 किलो वजन डाइविंग पर लचीला तिपाई के मूल जल्दी रिलीज क्लिप माउंट और बस लक्ष्य जानवर के बगल में यह स्थिति।
      2. जब खड़ी दीवारों पर काम कर रहे:
        1. VacuSIP प्रणाली के लिए माउंट आधार समर्थन प्लेटें, गौण गियर के लिए हुक, और हैंगर कार्य स्थल तैयारी चरण (2.1.1) के दौरान ट्रे ले जा एकत्रित पोत के लिए।
        2. जब लचीला पोर्टेबल tripods उपयोग किया जाता है, बोल्ट या दो घटक epoxy राल का उपयोग प्रत्येक लक्ष्य जानवर के बगल में 10x10 सेमी पीवीसी प्लेटों को ठीक करने के लिए। प्रत्येक प्लेट लचीला पोर्टेबल तिपाई की जल्दी रिहाई की क्लिप संलग्न करने के लिए एक छेद की जरूरत है।
        3. एक बार जब राल ठीक हो गया है और बेस प्लेट मजबूत दीवार से जुड़े होते हैं, जल्दी रिलीज क्लिप में पेंच, VacuSIP प्रणाली के लिए लचीला पोर्टेबल तिपाई के लिए एक फर्म लगाव बिंदु के रूप में कार्यरत हैं।
  2. Va का अधिष्ठापनCUSIP
    1. चेक नमूना फ़िल्टर fluorescein डाई inhalant छिद्र करने के लिए अगले रिहा द्वारा पंप है कि क्या और पुष्टि करते हैं कि डाई exhalent छिद्र के माध्यम से Yahel एट अल में वर्णित के रूप में उभर रहा है। (2005) 16।
    2. VacuSIP डिवाइस स्थापित करें और इसे (~ 5 भीतर मिमी) को inhalant छिद्र भीतर inhalant (IN) नमूना ट्यूब जगह या बस अगले। सुनिश्चित करें कि inhalant ट्यूब एक और exhalant छिद्र की निकटता में नहीं है।
    3. ध्यान से osculum / exhalant साइफन की ओर exhalant (पूर्व) नमूना ट्यूब प्रत्यक्ष और बहुत धीरे यह, में सम्मिलित जब तक यह osculum / exhalant अपनाना (चित्रा 1 और पूरक वीडियो 1 देखें) के अंदर 1-5 मिमी तैनात है। महान देखभाल के साथ संपर्क बनाने के लिए या अन्यथा जांचा जीव को परेशान नहीं ले लो।
    4. पहले और नमूने के दौरान दोनों ट्यूबों के स्थान दोहरी जांच।
    5. नमूना जांच के बाद कि क्या नमूना अभी भी देस के रूप में पम्पिंग हैऊपर cribed (2.2.1)।
      नोट: क्योंकि तिपाई के एक हाथ की आवाजाही जब अन्य जोड़ तोड़ उत्पन्न हो सकती है, सबसे पहले inhalant नमूना ट्यूब और दूसरी exhalant ट्यूब, जो अधिक सटीक हेरफेर की आवश्यकता के लिए जगह सुनिश्चित कर लें। इस आदेश के बाद भी अगर exhalant नमूना ट्यूब के हेरफेर inhalant ट्यूब के आंदोलन का कारण बन सकता है, यह नमूने को प्रभावित नहीं करेगा।
  3. मॉड्यूलर पानी के नीचे नमूना प्रक्रिया
    नोट: अनुसंधान के सवाल पर अभी भी बाकी है, नीचे प्रयोगात्मक चरणों में से प्रत्येक एक खड़े अकेले प्रयोग के रूप में किया जा सकता है। पूर्ण चयापचय प्रोफ़ाइल नमूना नीचे वर्णित प्रोटोकॉल, एक लंबी प्रक्रिया है नमूना प्रति 8 घंटे तक की आवश्यकता होती है (एक सिंहावलोकन के लिए चित्रा 2 और 2 टेबल देखें)। डाइविंग शर्तों और नियमों नमूना साइटों, क्षेत्रों और संस्थाओं के बीच अलग रूप में, डाइविंग योजनाओं इस प्रोटोकॉल में शामिल नहीं हैं। फिर भी, चरम देखभाल और एमईटीआई समर्पितडाइविंग योजना के लिए योजना बना culous। विशेष देखभाल भुगतान संतृप्ति और Yoyo गोता प्रोफाइल से बचने के लिए। जब संभव हो, यह इन प्रयोगों के उथले गहराई पर (<10 मीटर) का संचालन करने की सलाह दी जाती है। क्लोज सर्किट rebreathers इस तरह लंबे समय तक नमूना योजनाओं के लिए बहुत काम किया जा सकता है।
    1. पहले वास्तविक नमूना शुरू होता है, यकीन है कि fluorescein अवशेषों का कोई स्पष्ट निशान बने हुए हैं और कहा कि निलंबित अवसादों बस गया है या दूर wafted किया गया है।
    2. अल्ट्रा प्लवक, (कोई फिल्टर इस चरण में स्थापित किया गया है!)
      1. में (साँस) और EX (exhaled) vacuumed बाँझ प्लास्टिक ट्यूब सेप्टा पियर्स सुई का प्रयोग करें। सत्यापित करें कि पानी की योजना बनाई दर पर टपकता है और 2-6 मिलीलीटर पानी के नमूने इकट्ठा।
      2. पुनः प्राप्ति पर, बर्फ पर एक ठंडा बॉक्स में नमूने रखें। प्रयोगशाला में, 1% paraformaldehyde + 0.05% ईएम ग्रेड glutaraldehyde (अंतिम एकाग्रता), या 0.2% ईएम ग्रेड glutaraldehyde के साथ रक्षा करता है। -80 और तरल नाइट्रोजन और दुकान में cryovials रुक# 176; विश्लेषण जब तक सी।
    3. सिलिकेट नमूना और भंडारण
      1. पूर्व साफ-लाइन में स्टेनलेस पीसी फिल्टर सुई और ट्यूब के बाहर अंत में Luer पुरुष कनेक्टर के बीच एक 0.2 माइक्रोन पॉली कार्बोनेट झिल्ली युक्त धारक को स्थापित करें।
      2. पियर्स पूर्व साफ उच्च घनत्व पॉलीथीन शीशियों (एचडीपीई शीशियों) के पट टोपी नमूना शुरू करने के लिए। सत्यापित करें कि दोनों samplers टपकता रहे हैं और प्रत्येक शीशी में पानी की 15 मिलीलीटर इकट्ठा।
      3. विश्लेषण जब तक नमूने प्रशीतित (4 डिग्री सेल्सियस) रखें। विश्लेषण -20 डिग्री सेल्सियस पर दो सप्ताह, दुकान के भीतर शुरू नहीं कर सकते हैं। विश्लेषण के लिए, सुनिश्चित करें कि नमूने सिलिका जैल भंग करने के लिए कम से कम 50 मिनट के लिए 50 डिग्री सेल्सियस पर thawed कर रहे हैं।
        ध्यान दें: जरूरत के रूप में झिल्ली माइक्रोस्कोपी या डीएनए विश्लेषण के लिए संरक्षित किया जा सकता है।
    4. भंग Inorganics (पीओ 4 3, सं एक्स -, एनएच 4 +)
      1. टी बदलेंवह पीसी फिल्टर एक पूर्व साफ-लाइन में स्टेनलेस स्टील फिल्टर धारक है कि एक पूर्व combusted गिलास फिल्टर होता है के साथ विधानसभा।
      2. नमूना लेने से पहले, यह सुनिश्चित करें कि समुद्री पानी के नमूनों की कम से कम 20 मिलीलीटर EPA, एचडीपीई शीशियों या अन्य वैक्यूम सक्शन पोत का उपयोग शुरू करने के द्वारा पूरे छानने का काम प्रणाली के माध्यम से पारित किए गए। एकत्र पानी की मात्रा को मापने से पहले वे खारिज कर रहे हैं।
      3. पियर्स उचित EPA कांच की शीशियों के पट टोपी, नमूना शुरू सत्यापित करें कि दोनों samplers टपकता रहे हैं, और नाइट्रेट और फॉस्फेट के विश्लेषण के लिए 25-30 मिलीलीटर इकट्ठा करने के लिए।
      4. अमोनिया के विश्लेषण के लिए नए EPA कांच की शीशियों में जाएँ, तो सत्यापित करें कि दोनों samplers टपकता रहे हैं, और प्रत्येक शीशी में 20 मिलीलीटर इकट्ठा।
      5. -20 डिग्री सेल्सियस तक विश्लेषण पर बर्फ और दुकान पर एक ठंडा बॉक्स में नमूने रखें।
        नोट: यदि केवल छानना ब्याज की है, डिस्पोजेबल सिरिंज फिल्टर कदम 2.3.3 और 2.3.4 के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है।
    5. भंग ऑर्गेनिक्स (डॉक्टर + डॉन) नमूना और सेंटoring
      नोट: नमूने के रूप में संभव के रूप में ईमानदार से निपटने के लिए इतना है कि नमूना पानी सिलिकॉन सेप्टा के साथ संपर्क में नहीं आता है भर में रखें।
      1. स्टेनलेस स्टील फिल्टर विधानसभा का प्रयोग जारी रखें और ऊपर के रूप में वर्णित है, नए EPA कांच की शीशियों में समुद्री जल के नमूनों की 20 मिलीलीटर इकट्ठा।
      2. पुनः प्राप्ति पर, बर्फ पर एक ठंडा बॉक्स में नमूने रखें। प्रयोगशाला में, एक पूर्व combusted गिलास पाश्चर विंदुक का उपयोग orthophosphoric एसिड के साथ नमूनों को ठीक करने के लिए या हाइड्रोक्लोरिक एसिड (एक 20 मिलीलीटर नमूना, अंतिम एकाग्रता 0.04% में 25% धातु का पता लगाने ग्रेड एसिड की 5-6 बूँदें जोड़ने) (2 बूँदें जोड़ने धातु का पता लगाने के ग्रेड एक 20 मिलीलीटर नमूना, अंतिम एकाग्रता 0.1%) में एसिड केंद्रित है और फ्रिज में रखें।
      3. विश्लेषण जब तक नमूने प्रशीतित (4 डिग्री सेल्सियस) रखें। नमूने -20 डिग्री सेल्सियस तक विश्लेषण पर संग्रह, दुकान के एक सप्ताह के भीतर विश्लेषण नहीं कर रहे हैं।
    6. पार्टिकुलेट कार्बनिक पदार्थ (पीओसी, पॉन, पीओपी)
      1. सेंट का उपयोग जारी रखेंainless स्टील फिल्टर विधानसभा और फिल्टर एक खाली 250 मिलीलीटर वैक्यूम फ्लास्क में समुद्री जल के कम से कम 500 मिलीलीटर। यदि आवश्यक हो तो बोतल बदलें।
      2. पुनः प्राप्ति पर, फिल्टर धारक से सभी शेष समुद्री जल को निकालने एल्यूमीनियम पन्नी में लपेट, और बर्फ पर एक ठंडा बॉक्स में स्टोर करने के लिए एक हवा से भरे सिरिंज का उपयोग करें। प्रयोगशाला में, फिल्टर धारकों से फिल्टर को हटाने और -20 डिग्री सेल्सियस तक विश्लेषण पर स्टोर।

आकृति 1
चित्रा 1. VacuSIP का सही प्रतिष्ठानों का एक उदाहरण है: साँस और exhaled पानी के नमूने लिए पीला (तस्वीर के लिए हरी इस्तेमाल किया ascidian Polycarpa mytiligera (अकाबा की खाड़ी, लाल सागर) रंग कोड के साथ एक कस्टम निर्मित जोड़तोड़ का उपयोग नमूने (ए) टॉम Shelizenger और Yuval Yacobi द्वारा); (बी) नमूने स्पंज Agelas oroides (एनडब्ल्यू भूमध्यसागर) 3 मिमी चौड़ाई osculum, VacuSIP डिवाइस का उपयोग के साथ। रंग का इस्तेमाल किया कोड साँस और exhaled पानी के नमूने के लिए लाल रंग के लिए पीले रंग की है। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2 VacuSIP तकनीक प्रोटोकॉल खंड में वर्णित का अवलोकन। प्रयोगशाला काम पीले बक्से में प्रतिनिधित्व किया है, नीले रंग के बक्से में म। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका एक
तालिका 1. समग्र औसत नमूना दरों (एमएल मिनट -1) अलग कंटेनरों के साथ प्राप्तपानी संग्रह और विभिन्न वैक्यूम स्तर के लिए इस्तेमाल किया: बोतल (कोई नहीं) vacuumed नहीं थे; EPA कांच की शीशियों और एचडीपीई शीशियों उनकी मात्रा (½ मात्रा) के आधे vacuumed रहे थे; बाँझ प्लास्टिक ट्यूब पहले से ही निर्माता द्वारा vacuumed रहे थे। , 5-8 मीटर की गहराई, 18-22 डिग्री सेल्सियस के पानी का तापमान पर काम कर रहे 79 सेमी लंबाई की और 25 माइक्रोन आंतरिक व्यास की तिरछी ट्यूब का उपयोग।

सारणी 2
तालिका 2 और नमूना पोत, लगानेवाला, में लाइन फिल्टर विधानसभा, भंडारण का अवलोकन प्रोटोकॉल खंड में वर्णित विश्लेषणात्मक तरीकों। विश्लेषण किया यौगिकों हैं: अल्ट्रा प्लवक बहुतायत (प्लवक <10 माइक्रोन), सिलिकेट (SiO 4), फॉस्फेट (पीओ 4 3), नाइट्राइट + नाइट्रेट (सं 2 - + कोई 3 -), भंग कार्बनिक पदार्थ (डोम), अमोनियम (एनएच 4 +) और कण कार्बनिक पदार्थ(पोम)। सभी नमूने वाहिकाओं सिलिकॉन पट टोपी है और नमूना पहले vacuumed रहे हैं। Fixatives हैं: paraformaldehyde + glutaraldehyde (भरमार + Parafor), orthophosphoric एसिड (एच 3 पीओ 4) और हाइड्रोक्लोरिक एसिड (एचसीएल)। में लाइन फिल्टर इस्तेमाल विधानसभाओं हैं: पाली कार्बोनेट फिल्टर धारकों और पॉली कार्बोनेट झिल्ली 0.2 माइक्रोन फिल्टर (पीसी फिल्टर धारक + पीसी झिल्ली) और स्टेनलेस स्टील फिल्टर धारकों और बांधने की मशीन मुक्त ग्लास फाइबर GFF फिल्टर।

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Representative Results

समुद्री जल संग्रह तरीकों का अनुकूलन

कलेक्टर शीशियों और सफाई प्रक्रिया का चयन

VacuSIP-संगत एकत्रित वाहिकाओं एक पट नमूना एक सिरिंज सुई के साथ भेदी द्वारा शुरू किया जा करने के लिए अनुमति देता है कि होना चाहिए था। वे ऊंचा पानी के नीचे दबाव (ठेठ काम कर गहराई स्कूबा में 2-3 बार) का सामना करना चाहिए, और एक निर्वात धारण करना चाहिए। कई (लेकिन सभी ब्रांडों) अस्थिर ऑर्गेनिक्स के विश्लेषण के लिए EPA द्वारा अनुमोदित शीशियों के इन मानदंडों को पूरा। डॉक्टर और डॉन के विश्लेषण के लिए मंजूरी दे दी पूर्व साफ शीशियों भी उपलब्ध हैं। संग्रह और पोषक तत्वों की और सफाई प्रक्रियाओं का अनुकूलन करने के विश्लेषण के लिए इन शीशियों की उपयुक्तता का परीक्षण करने के लिए, उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल एसिड-साफ polypropylene ट्यूब (पीपी ट्यूब) में एकत्र किया गया था, नए खरीदे, एक मेंसीआईडी-साफ उच्च घनत्व पॉलीथीन शीशियों (एचडीपीई शीशियों), और EPA कांच की शीशियों में, सभी एक polytetrafluoroethylene (PFTE) पट टोपी के साथ सुसज्जित है। ऊपर खंड 1.5.2 में वर्णित के रूप में एचडीपीई शीशियों और polypropylene नलियों साफ कर रहे थे, और EPA कांच की शीशियों निर्माता द्वारा साफ कर रहे थे।

EPA कांच की शीशियों में पाया एनएच 4 + की राशि अपेक्षाकृत कम से कम था (≤ 0.1 μmol एल -1) और उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल मानक गुणवत्ता पर निर्भर करता है। इसके विपरीत, एनएच 4 + सांद्रता काफी (3 और 7 गुना, क्रमशः तक) में वृद्धि हुई और एनोवा एफ एसिड-साफ polypropylene ट्यूबों में और उच्च घनत्व पॉलीथीन शीशियों में (एक उच्च परिवर्तनशीलता (5,53) = 7.183, पी प्रदर्शन किया < 0.001, चित्रा 3)। वहाँ अमोनियम विश्लेषण पर सिलिकॉन पट के साथ उच्च गुणवत्ता दोहरा आसुत जल से संपर्क का कोई प्रभाव नहीं था।

तुलना बनाम साफ / पुनर्नवीनीकरण कांच की शीशियों नया कांच की शीशियों की

परीक्षण है कि क्या EPA कांच की शीशियों एक बार से अधिक पोषक तत्व विश्लेषण के लिए उपयोग किया जा सकता है, कोई एक्स -, पीओ 4 3, और राष्ट्रीय राजमार्ग नए EPA कांच की शीशियों में एकत्र समुद्री पानी के नमूनों में 4 + सांद्रता का इस्तेमाल EPA कांच की शीशियों में एकत्र उन लोगों की तुलना कर रहे थे। नए EPA कांच की शीशियों निर्माता द्वारा पूर्व साफ कर रहे थे, जबकि पुनर्नवीनीकरण कांच की शीशियों के रूप में ऊपर (1.5.2) में वर्णित साफ कर रहे थे। पुनर्नवीनीकरण शीशियों काफी अधिक एनएच 4 + एकाग्रता था, 1.5 अप करने के लिए स्तर के नए कांच की शीशियों में पाया गुना (टी परीक्षण, पी <0.001, एन = 5)। कोई महत्वपूर्ण मतभेद सं एक्स में पाया गया है - और नमूने पुनर्नवीनीकरण शीशियों में एकत्र की है और नमूने नई गिलास में एकत्र बीच पीओ 4 3 सामग्रीशीशियों (चित्रा 4)।

सिलिकेट संग्रह और भंडारण प्रक्रियाओं

सिलिकेट के विश्लेषण के लिए सबसे अच्छा नमूना पोत का निर्धारण करने के लिए, उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल गैर-साफ और अम्ल-साफ polypropylene ट्यूब (पीपी ट्यूब) में, एसिड साफ उच्च घनत्व पॉलीथीन शीशियों में (एचडीपीई शीशियों) में एकत्र किया गया था, और EPA कांच की शीशियों में। इसलिए मूल्यों है कि उम्मीद की एकाग्रता से भटक दूषित माना जाता था की उम्मीद सिलिकेट एकाग्रता, शून्य के करीब था। सिलिकेट एकाग्रता काफी अलग शीशियों (एनोवा, एफ (3,19) = 210.047, पी <0.001) में एकत्र नमूनों के बीच मतभेद एसिड-साफ एचडीपीई शीशियों में सबसे कम SiO 4 एकाग्रता दिखा। Borosilicate कांच की शीशियों के नमूने दूषित, अंतिम SiO 4 एकाग्रता 7 μmol तक की वृद्धि के साथएल -1 (चित्रा 5)।

भंग कार्बनिक पदार्थ (डोम) और पोषक तत्वों के विश्लेषण के लिए निस्पंदन उपकरण का चयन

निर्धारित करने के लिए जो फिल्टर तंत्र भंग कार्बनिक (डॉक्टर और डॉन) और अकार्बनिक पोषक तत्वों के विश्लेषण में सबसे कम खाली पैदा करता है (सं एक्स -, एनएच 4 +, पीओ 4 3), स्टेनलेस स्टील फिल्टर धारकों पॉली कार्बोनेट की तुलना में थे Swinney लाइन में फिल्टर धारकों। प्रत्येक फिल्टर धारक प्रकार से हम दोनों पॉली कार्बोनेट झिल्ली और पूर्व combusted ग्लास फाइबर फिल्टर का परीक्षण किया। जबकि पॉली कार्बोनेट Swinney फिल्टर पॉली कार्बोनेट झिल्ली के साथ सुसज्जित धारक स्पष्ट रूप से 9 गुना तक नमूने दूषित स्टेनलेस स्टील फिल्टर धारक और combusted ग्लास फाइबर फिल्टर का संयोजन, सबसे कम कारतूस प्रदान की है। धोने की मात्रा बढ़ाने से किया था इस समस्या (चित्रा 6) का समाधान नहीं।

चित्र तीन
चित्रा 3. अमोनियम एकाग्रता (μmol एल -1, औसत ± एसडी) अलग शीशियों के साथ एकत्र: (1) uncleaned एचडीपीई शीशी; (2) साफ एचडीपीई शीशी; (3) साफ एचडीपीई शीशी + Parafilm; (4) EPA कांच की शीशी; (5) EPA कांच की शीशी + Parafilm; (6) पीपी ट्यूब साफ। Parafilm सिलिकॉन पट पानी के नमूने दूषित हो सकता है कि क्या परीक्षण करने के लिए रखा गया था। प्रत्येक उपचार के लिए उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल के 9 नमूनों का विश्लेषण किया गया। नमूने ताजा विश्लेषण किया गया। महत्वपूर्ण मतभेद चार नमूने वाहिकाओं (एनोवा, एफ (5,53) = 7.183, पी <0.001, शक्ति परीक्षण = 0.992) के बीच पाया गया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

ve_content "fo: रख-together.within-पेज =" 1 "> चित्रा 4
चित्रा 4. अमोनियम (एनएच 4 +), नाइट्राइट + नाइट्रेट (NOx -), और नए (अंधेरे) में एकत्र की है और पुनर्नवीनीकरण समुद्री जल के नमूनों की फॉस्फेट (पीओ 4 3) सांद्रता (μmol एल -1, औसत ± एसडी) / साफ (सफेद) EPA कांच की शीशियों। समुद्र के पानी से समुद्री विज्ञान संस्थान के प्रायोगिक एक्वेरियम क्षेत्र में एकत्र किया गया था और स्टेनलेस स्टील फिल्टर धारक और कांच फिल्टर के साथ फ़िल्टर किया गया था। पानी के नमूने ताजा विश्लेषण किया गया। तारांकित (*) इंगित करता है कि अंतर महत्वपूर्ण है (टी परीक्षण, पी <0.001, एन = 5, शक्ति परीक्षण = 1)। कृपया यहाँ यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए क्लिक करें।

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चित्रा 5. सिलिकेट एकाग्रता (μmol एल -1, औसत ± एसडी) एसिड-साफ पीपी ट्यूब, पीपी ट्यूब, एसिड-साफ एचडीपीई शीशियों, नए EPA कांच की शीशियों: उच्च गुणवत्ता में दोहरा आसुत जल अलग शीशियों में एकत्र की। महत्वपूर्ण मतभेद चार नमूना सामग्री के बीच पाए गए (एनोवा, एफ (3,19) = 210.047, पी <0.001, शक्ति परीक्षण = 1)। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 6
चित्रा 6 अलग अलग निस्पंदन विधानसभाओं के प्रभाव की जांच और नाइट्राइट + नाइट्रेट की मात्रा पर धो (सं एक्स - μmol एल -1)। सं एक्स के लिए नमूने - स्टेनलेस स्टील के साथ समुद्री जल के नमूनों को छानने (एस एस एफ द्वारा प्राप्त किया गयाİlter धारक) या पॉली कार्बोनेट में लाइन Swinney फिल्टर धारकों (पीसी फिल्टर धारक) या तो एक पॉली कार्बोनेट झिल्ली (पीसी फिल्टर) या एक पूर्व combusted ग्लास फाइबर फिल्टर के साथ सुसज्जित है। पीसी फिल्टर के लिए, 5% एचसीएल और उच्च गुणवत्ता दोहरा आसुत जल के विभिन्न संस्करणों (10, 30, 60, 90 और 120 मिलीलीटर) फिल्टर विधानसभा धोने के लिए इस्तेमाल किया गया, कपड़े धोने की मात्रा आंकड़ा कथा में कोष्ठक में दी गई है। मूल्यों के रूप में मतलब ± मानक विचलन व्यक्त कर रहे हैं (एन = 5)। समुद्र के पानी से समुद्री विज्ञान संस्थान के प्रायोगिक एक्वेरियम क्षेत्र में एकत्र किया गया था और नमूने छानने के बाद नए सिरे से विश्लेषण किया गया। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 7
चित्रा 7. प्रयोगात्मक परिणामों का उदाहरण: साँस (IN, कालास्पंज Chondrosia भूमध्य सागर में reniformis द्वारा कार्रवाई की अलग-अलग पदार्थों के वृत्त) और exhaled (पूर्व, लाल त्रिकोण) बनती पानी का नमूना सांद्रता (μmol एल -1): (ए) अमोनियम (एनएच 4 +); (बी) नाइट्राइट + नाइट्रेट (NOx -); (सी) फॉस्फेट (पीओ 4 3); (डी) सिलिकेट (SiO 4); (ई) भंग कार्बनिक कार्बन (डॉक्टर); (एफ) को भंग कर जैविक नाइट्रोजन (डॉन); (G) planktonic कार्बनिक कार्बन (LPOC); (एच) planktonic जैविक नाइट्रोजन (LPON)। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

आंकड़ा 8
8 चित्रा एक प्रवाह cytom का एक उदाहरणपानी साँस से तैयार बनती पानी के नमूनों की etry विश्लेषण (ए, सी, ई, जी) और exhaled (बी, डी, एफ, एच) स्पंज द्वारा Chondrosia reniformis: (ए, बी, सी, डी) पादप प्लवक आबादी; (ई, एफ, जी, एच) परपोषी बैक्टीरिया। अटल बिहारी और एफई में सैंपलिंग साफ और सटीक था (सभी समूहों planktonic कुशलता से बनाए रखा गया है)। सीडी और जीएच सभी planktonic समूहों में से कम से हटाने दिखा exhaled पानी के प्रदूषण के उदाहरण हैं। Syn:। Synechococcus सपा, पिको: स्वपोषी picoeukariotes, नैनो: स्वपोषी nanoeukaryotes, उच्च: उच्च डीएनए सामग्री के साथ परपोषी बैक्टीरिया, कम:। कम डीएनए सामग्री के साथ परपोषी बैक्टीरिया यहां यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए क्लिक करें।

अनुपूरक Figurक्लैम चामा Pacifica द्वारा विभिन्न planktonic शिकार के ई 1. सेल प्रतिधारण दक्षता: Prochlorococcus सपा। (प्रो), Synechococcus सपा। (SYN), पिको-eukaryotes (पिको Euk), नैनो-eukaryotes (नैनो Euk)। त्रुटि सलाखों = 95% सीआई। इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

पूरक वीडियो 1. नमूना ascidian Polycarpa mytiligera साँस के लिए हरी और exhaled पानी के नमूने लिए पीले रंग का इस्तेमाल किया रंग कोड के साथ एक कस्टम निर्मित जोड़तोड़ का उपयोग। नमूना ट्यूब (तिरछी, आईडी 54 माइक्रोन, 75 सेमी लंबे) ध्यान से ascidian की exhalant और inhalant siphons में रखा जाता है। पानी की तुलना की दर से खाली ट्यूब में तैयार की है ~ 1 मिलीलीटर मिनट -1। इस प्रदर्शन में fluorescein डाई exhalant जेट कल्पना करने के लिए प्रयोग किया जाता है। ध्यान दें कि exhalant नमूना नलकूप वाई रखा गया हैपतली exhalant जेट। इस फाइल को डाउनलोड करने के लिए यहां क्लिक करें।

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Discussion

तैयारी के चरण

डोम और पोषक तत्वों के विश्लेषण के लिए कलेक्टर शीशियों

कलेक्टर वाहिकाओं भंग सूक्ष्म घटकों के साथ बातचीत कर सकते हैं और पारखी दीवारों बैक्टीरिया विकास 30-34, डोम और पोषक तत्वों की वसूली के लिए अलग-अलग शीशियों परीक्षण किया गया के लिए एक सब्सट्रेट हो सकता है के बाद से। Borosilicate सिलिका मात्रा का ठहराव 33,35 के लिए सिफारिश नहीं है, के बाद से कांच की बोतलों से अप करने के लिए दो गुना सिलिका की प्रारंभिक एकाग्रता में वृद्धि कर सकते हैं अगर नमूने जल्दी से 30 जम नहीं कर रहे हैं। हमारे परिणाम है कि पूर्व साफ EPA शीशियों का उपयोग कर डॉक्टर, डॉन, और अकार्बनिक पोषक तत्वों के लिए कम एकाग्रता कारतूस में यह परिणाम है, सबसे विशेष रूप से अमोनियम के लिए प्रदर्शित करता है।

डॉक्टर निस्पंदन और भंडारण

छानने का काम एक आवश्यकता है और कई मामलों में, समुद्री रसायन शास्त्र में पहला कदम है और विश्लेषणात्मकमाइक्रोबायोलॉजी। हालांकि यह प्रयोगशाला में संग्रह के बाद नमूनों को फिल्टर करने के लिए संभव है, इस प्रक्रिया के बगल में काम करते हैं, जहां नमूने उचित प्रयोगशाला सुविधाओं से दूर पानी के नीचे एकत्र कर रहे हैं, अक्सर दूरदराज के स्थानों, घंटों या दिनों में लिए अनुशंसित नहीं है। में लाइन का उपयोग करते हैं, सीटू निस्पंदन में नमूना हैंडलिंग को कम करता है और इस प्रकार के संक्रमण के जोखिम को कम करता है। सीटू छानने का काम में भी बैक्टीरिया का सबसे निकालता है और जोखिम है कि नमूना रचना लंबे समय तक नमूना और परिवहन के दौरान बैक्टीरियल चयापचय से बदल दिया जाएगा कम कर देता है पहर। निस्पंदन विधानसभा नमूना तंत्र के मृत मात्रा बढ़ जाती है और यह भी प्रदूषण का एक स्रोत हो सकता है। छोटी संभव फिल्टर धारकों का (जैसे, में लाइन Swinney फिल्टर धारक 13 मिमी) और मिनट तिरछी ट्यूबिंग (जैसे, 254 माइक्रोन आईडी) मृत मात्रा और परिवेश के पानी से संक्रमण के जोखिम को कम करता है।

उचित फिल्टर नहीं है, तोइस्तेमाल किया है या अगर यह ध्यान से धोया नहीं है, कलाकृतियों और पानी के नमूने के प्रदूषण 32,36-39 होने की संभावना है। डॉक्टर विश्लेषण के अध्ययन है कि फिल्टर और कार्बनिक यौगिकों (पॉली कार्बोनेट और पीएफए-PTFE) से बना फिल्टर धारकों गंभीर डॉक्टर संदूषण 32,37 में हो सकता है, खासकर जब अच्छी तरह से उच्च गुणवत्ता डबल आसुत जल 38 के साथ प्लावित नहीं दिखाया। वर्तमान प्रोटोकॉल और परिणाम इन दिशा-निर्देशों का पालन करें और यह भी संकेत मिलता है कि पॉली कार्बोनेट फिल्टर धारकों से बचा जाना चाहिए।

सीटू के काम और interoperation में

VacuSIP प्रणाली एक प्रत्यक्ष नमूना तकनीक है कि उनके प्राकृतिक वातावरण में अबाधित निलंबन फीडरों के चयापचय और व्यवस्था में उनके पारिस्थितिक भूमिका की मात्रा का ठहराव के अध्ययन की सुविधा है। अनुभव और सुसज्जित गोताखोरों के लिए, VacuSIP विधि के आवेदन सरल है और केवल लघु टीआर की आवश्यकता हैaining। INEX VacuSIP प्रयोगों एक 'within' डिजाइन सांख्यिकीय विश्लेषण (यानी, बनती या दोहराया उपाय के विश्लेषण) के लिए तैयार कर रहे हैं, इसलिए उच्च कारतूस सहित ज्यादातर विश्लेषणात्मक कलाकृतियों के लिए नियंत्रित। नियंत्रित सक्शन का उपयोग धीमी गति से और समायोज्य नमूना दरों सुनिश्चित करता है, इस प्रकार के परिवेश पानी के साथ exhaled पानी की आकस्मिक संक्रमण को रोकने। जहां संभव हो, कम मौजूदा और कम मैलापन के साथ काम साइटों के चयन की सिफारिश की है और क्लीनर और अधिक सटीक परिणाम सुनिश्चित करेगा। लंबे समय तक नमूने समय (घंटे मिनट) उच्च patchiness कि benthic सीमा परत की विशेषता के एकीकरण की अनुमति देता है। इन सभी सुविधाओं को सुनिश्चित करना है कि जब ठीक से लागू VacuSIP विधि, बेहद मजबूत है विश्वसनीय और दोहराया परिणाम भी प्रदान कर रहा है, जब प्रतिकृति की एक छोटी संख्या के साथ काम कर रहे हैं। एक भूमध्य स्पंज और भारत-प्रशांत क्लैम प्रजातियों से प्राप्त ठेठ परिणामों का एक उदाहरण चित्रा 7 और supplemen में दिखाया गया हैसैन्य चित्रा 1।

किसी भी तकनीक के साथ के रूप में, VacuSIP संभावित नुकसान से मुक्त नहीं है। सबसे आम समस्या परिवेश पानी के साथ exhaled पानी के नमूने का संक्रमण है। इन कलाकृतियों के लिए कारण उच्च सक्शन दर, ट्यूब dislodgments, और पशुओं के व्यवहार शामिल हैं। सही नमूना दर का उचित चयन excurrent प्रवाह की दर की पूर्व अनुमानों पर निर्भर है। इस तरह के अनुमान डाई सामने गति विधि 16 का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है। आदर्श रूप में, सक्शन पंप दर दर (जैसे, 1 मिलीलीटर मिनट -1 एक 6 एल -1 घंटे के लिए पम्पिंग दर) के 1% से नीचे रखा जाना चाहिए। परिवेश के पानी के साथ संक्रमण से बचने के लिए, नमूना दर पंप दर के 10% से अधिक नहीं होना चाहिए।

नमूना दर को नियंत्रित करने के लिए, लंबाई और सेवन ट्यूबिंग का आंतरिक व्यास योजना बनाई काम गहराई और पानी के तापमान के अनुसार समायोजित किया जाना चाहिए। हेगन-Poiseuille समीकरण (खंड 1 देखें।3.1 से ऊपर) के लिए एक गाइड के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। हालांकि, इस समीकरण नमूने समय के साथ ΔP के बाद से एक पहले के आदेश सन्निकटन और नमूना दर में कमी के रूप में माना जाना चाहिए और लाइन निस्पंदन अनिश्चितताओं कहते हैं। खाली करा लिया कंटेनरों का उपयोग करते हैं, कभी कभी अज्ञात वैक्यूम दबाव के साथ, आगे की जटिलताओं का परिचय। कैसे नमूना दरों विभिन्न वैक्यूम के साथ अलग-अलग सुरक्षित स्थानों पर पहुंचाया कंटेनरों के एक समारोह के रूप में बदलता का एक उदाहरण है, तालिका 1 में दिखाया गया है।

नमूना दर को कम करने के लिए आसानी से इस कमी के लिए ट्यूब लंबाई और आईडी, कोई तकनीकी सीमाओं के साथ समायोजन करके हासिल की है (प्रति घंटे कुछ microliters के नमूना दरों संभव है)। फिर भी, प्रयोगकर्ताओं धीमी गति से पम्पिंग दर के साथ जानवरों के लिए इस सीमा से और छोटे जीवों या नमूनों के लिए निर्धारित धीमी नमूना दर के बारे में पता होना चाहिए। धीमी गति से नमूना दर के तत्काल निहितार्थ पानी की सीमित मात्रा एक भी नमूना sessi के दौरान एकत्र किया जा सकता हैपर। यह कम मात्रा का विश्लेषण करती है और प्रतिकृति है कि इन नमूनों के साथ चलाया जा सकता है की संख्या सीमित कर देगा, और इस प्रकार भी जानकारी है कि इन आबादियों से प्राप्त किया जा सकता सीमित कर देगा।

ट्यूब dislodgement आसानी से देखा जा सकता है और नमूना, गर्भपात या आरंभ किया जा सकता है कि एक गोताखोर लगातार नजर रखे हुए है प्रदान की है। इसके विपरीत, नमूने के दौरान पंप की समाप्ति हमेशा पता लगाने के लिए आसान नहीं है। यह सच है न केवल स्पंज के लिए, लेकिन यह भी tunicates, bivalves, और polychaetes के लिए। वास्तव में, आम धारणा के विपरीत, जो घटनाओं में एक ascidian या एक दोपटा पंप बंद कर दिया अपनाना ज्यामिति (Yahel, अप्रकाशित डेटा) में नहीं दिखाई परिवर्तन के साथ दर्ज किया गया। इसके अलावा, कुछ मामलों में, tunicates कोई जाल स्राव के साथ सक्रिय पंप (जो है, कोई छानने का काम हो रहा है) बनाए रख सकते हैं।

नमूना दर को नियंत्रित करने के लिए महत्वपूर्ण है। इस संबंध में VacuSIP अन्य तरीकों की तुलना में बेहतर है, खासकर जब अध्ययन जानवरों relativ हैंइली छोटे या जब वे धीरे-धीरे पंप। सीरिंज 2 नियंत्रित करने के लिए विशेष रूप से कठिन हैं। उदाहरण के लिए, पेरिया-Blazquéz और उनके सहयोगियों (2012a) 40 पानी कई शीतोष्ण स्पंज प्रजातियों द्वारा exhaled नमूने के लिए एक सिरिंज का इस्तेमाल किया और आश्चर्यजनक रूप से विशेष रूप से पोषक तत्वों की घूस / उत्सर्जन के एक सामान्य परिपाटी नहीं मिल रहा था (सं 2 -, सं 3 -, राष्ट्रीय राजमार्ग 4 +, पीओ 4 3, Sio 4)। एक स्पष्ट पैटर्न की कमी होने की संभावना सिरिंज का उपयोग करने के कारण परिवेश पानी के साथ exhaled नमूने के प्रदूषण का एक परिणाम है। परपोषी बैक्टीरिया की 40 ± 14% और Synechococcus सपा के 54 ± 18%: संदूषण पिको प्लवक उनकी स्पंज के लिए पेरिया-Blázquez और उनके सहयोगियों (2012b) 41 द्वारा रिपोर्ट की बेहद कम प्रतिधारण दक्षता से स्पष्ट है। तुलना के लिए, VacuSIP, मुलर एट अल का उपयोग कर। (2014) 21 वर्ष की परपोषी जीवाणुओं की एक हटाने दक्षता सूचना दीSiphonodictyon सपा में 72 ± 15%। और Cliona delitrix में 87 ± 10%।

नमूना गुणवत्ता को सत्यापित करने और यह सुनिश्चित करें कि परिवेश के पानी का कोई संदूषण होता है, हम दृढ़ता से पहले प्रवाह cytometry का उपयोग पिको और नैनो प्लवक के नमूनों का विश्लेषण करने की सलाह देते हैं। इस तेज, विश्वसनीय, और सस्ते विश्लेषण नमूना गुणवत्ता की तत्काल जानकारी प्रदान करेगा। यह इस तरह के Synechococcus सपा के रूप में कुछ शिकार taxa के लिए बहुत आम है। स्पंज और ascidian से 90% दक्षता 14,42 के करीब पर हटाया जा सके। इस बेंचमार्क से महत्वपूर्ण विचलन का सुझाव है कि संदूषण (चित्रा 8) हुआ हो सकता है।

विश्वसनीय और साफ नमूना लेने के लिए, यकीन है कि प्रयोग के डिजाइन को संतुष्ट सात सरल नियम बनाने: (1) (दर के अनुमान से पंप सहित) एक प्रारंभिक सर्वेक्षण प्रदर्शन और कार्यस्थल में अच्छी तरह से तैयार; (2) का अध्ययन किया जानवरों को पता है; (3) सत्यापित करें कि अध्ययन नमूना एक अच्छी तरह से परिभाषित excurrent एपर्चर एक हैएन डी सुलभ स्थान; (4) सत्यापित करें कि अध्ययन नमूना पहले और प्रत्येक नमूना संग्रह के बाद पंप है; (5) से थोड़ा excurrent एपर्चर (चित्रा 1) के अंदर exhaled पानी के संग्रह के लिए ट्यूब जगह; (6) का उपयोग नमूना दर <excurrent प्रवाह की दर के 10%, 1% अत्यधिक की सिफारिश की है; (7) एक गुणवत्ता कसौटी को परिभाषित करने और संदिग्ध INEX जोड़े न आना।

इन सरल नियमों का पालन, VacuSIP प्रणाली को मापने कैसे सक्रिय निलंबन फीडरों प्रक्रिया कण का एक व्यावहारिक और विश्वसनीय पद्धति और प्राकृतिक परिस्थितियों, सटीक और तुलनीय अनुमान की इजाजत दी है कि चारों ओर विभिन्न पारिस्थितिक तंत्र में फिल्टर भक्षण के कार्यात्मक भूमिका का आकलन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता में भंग यौगिकों प्रदान करता है दुनिया।

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Acknowledgments

हम म में उसकी सहायता के लिए Manel बोलिवार धन्यवाद। हम अपने अनुसंधान और नमूना अनुमति के लिए उनके समर्थन के लिए "Parc प्राकृतिक डेल Montgri, लेस Illes मेदी मैं अल बैक्स टेर" करने के लिए आभारी हैं। पानी के नीचे जोड़तोड़ Ayelet Dadon-Pilosof द्वारा डिजाइन और श्री Pilosof द्वारा निर्मित किया गया था। इस काम स्पेनिश सरकार परियोजना सीएसआई-कोरल [अनुदान संख्या CGL2013-43106-आर आर सी और एमआर करने के लिए] द्वारा और "Ministerio de Educación, Cultura y DEPORTE (MECD)" टीएम करने से एक FPU फैलोशिप द्वारा समर्थित किया गया। इस समुद्री biogeochemistry से एक योगदान और वैश्विक अनुसंधान बदलें समूह कैटलन सरकार [अनुदान संख्या 2014SGR1029] और ISF अनुदान 1280-1213 और बीएसएफ अनुदान 2012089 जी Yahel द्वारा वित्त पोषित है।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
GorillaPod, Original Joby GP000001 flexible portable tripod 
Flangeless Ferrule IDEX Health & Science  P-200X 1/16" in Blue/pk
Male Nut IDEX Health & Science P-205X  1/16" in Green/10 pk
Female to Female Luer IDEX Health & Science  P-658
Female-Male Luer IDEX Health & Science  P-655
Peek Tubing (254 µm ID) IDEX Health & Science  1531 1/16" OD x 0.01 in ID x 5 ft length. Alternative ID can be used.
Two component resin epoxy IVEGOR 9257 Mix well the two component resin before use
(TOC) EPA Vials Cole -Parmer 03756-20 40 ml glass vials. Manufactured also by Thomas Scientific (ref. number 9711F09).
HDPE Vials Wheaton 986701 (E78620) 20 ml high-density polyethylene vials
Vacuette Z no additive Greiner bio-one 455001 pre-vacuum by the manufacturer 
Septum Sample Bottles Thomas Scientific 1755C01 250 ml glass bottles 
Septum Cap 1 Wheaton W240844SP (E7865R) 22-400 for HDPE vials 
Septum Cap 2 Wheaton W240846 (1078-5553) 24-400 for glass vials and bottles. Also manufactured by Thermo Scientific National (ref. 03-377-42).
In-line stainless steel Swinney Filter holders Pall 516-9067 13 mm of diameter
PTFE Seal Washer Pall  516-8064 ring for stainless steel filter holders
TCLP Glass Filters Pall  516-9126 binder-free glass fiber filters, 13 mm of diameter, pore size 0.7 µm
Polycarbonate Filter Holders Cole -Parmer 17295 13 mm of diameter
Isopore Membrane Filters Millipore GTTP01300 13 mm of diameter, pore size 0.2 µm
Contrad 70 Solution  Decon Labs 1002 highly soluble basic mix of anionic and non-ionic surfactant solution 
Sterile Syringe Filters VWR International Eurolab S.L. 514-0061P 25 mm of diameter , pore size 0.2 µm
Fluorescein Sigma-Aldrich (old ref.28802) 46955-100G 100 g
Holdex, disposable,sterile Greiner bio-one 450263 sterile, single-use tube holder with off-center luer for Vacuette
Sterile Needles IcoGammaPlus 5160 0.7 mm x 30 mm
Cryovials Nalgene Nalgene V5007(Cat. No.5000-0020) 2 ml
Cryobox carton  Rubilabor M-600 145x145x55 mm p/microtube 1.5 ml
Orthophosphoric Acid Sigma 79617 or Alternatively use Ultra-Pure Hydrochloric acid, final concertation 0.1%
Paraformaldehyde Sigma P6148 500 g
Glutaraldehyde Merck 8,206,031,000 25%, 1 L
Hand Vacuum Pump  Bürkle  5620-2181 or Alternatively use standard laboratory vacuum pump

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VacuSIP, एक बेहतर INEX विधि के लिए<em&gt; बगल में</em&gt; पार्टिकुलेट के मापन और भंग यौगिकों सक्रिय सस्पेंशन भक्षण द्वारा प्रसंस्कृत
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Morganti, T., Yahel, G., Ribes, M., Coma, R. VacuSIP, an Improved InEx Method for In Situ Measurement of Particulate and Dissolved Compounds Processed by Active Suspension Feeders. J. Vis. Exp. (114), e54221, doi:10.3791/54221 (2016).

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