Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Developmental Biology

Isolering av perivaskulær multipotente forløpercelle populasjoner fra humane kardiale Tissue

doi: 10.3791/54252 Published: October 8, 2016

Summary

Menneskelig hjertevev havner multipotente perivaskulær forløper cellepopulasjoner som kan være egnet for hjerteinfarkt regenerering. Teknikken som er beskrevet her gjør det mulig for samtidig isolering og rensing av to multipotente stromale cellepopulasjoner forbundet med native blodkar, dvs. CD146 + CD34 - pericytes og CD34 + CD146 - adventitia-celler fra den humane myokardium.

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Hjertet har lenge vært betraktet som en post-mitotisk organ. Imidlertid har nyere studier vist tilstedeværelse av begrenset kardiomyocytt omsetningen hos voksne menneskers hjerter 1. Native stilk / stamceller med kardiomyocytt differensiering potensial har også blitt identifisert innen hjertemuskelen i voksen gnager og menneskelige hjerter, inkludert Sca-1 +, c-kit +, cardiosphere dannende, og sist, perivaskulær forloperceller 2,3. Disse cellene representerer attraktive kandidater for behandling med sikte på å styrke hjerte reparasjon / regenerering gjennom celletransplantasjon eller stimulering av in-situ spredning.

Mesenchymale stilk / stromaceller (MSC) har blitt isolert fra nesten alle humant vev 4,5 Kliniske studier av de terapeutiske anvendelser av MSC har blitt utført for flere patologiske tilstander slik som kardiovaskulær reparasjon 6, graft-versus-host-sykdom 7 8. Gunstige effekter har blitt tilskrevet evnen til MSC til: hjem til områder av betennelse 9; differensiere til forskjellige celletyper 10; utsondre pro-reparerende molekyler 11; og modulere vert immunresponser 12. Isolasjon av MSC har tradisjonelt støttet seg på sin fortrinnsrett tilslutning til plast underlag. Men den resulterende populasjon av celler er typisk markert heterogen 13. Ved å bruke fluorescerende aktivert celle sortering (FACS) med en kombinasjon av sentrale perivaskulær celle markører, har vi vært i stand til å isolere og rense et multipotent MSC-lignende forløper befolkningen (CD146 + / CD31 - / CD34 - / CD45 - / CD56 -) fra flere menneskelig vev, inkludert voksen skjelettmuskulatur og hvitt fett til 14.

Perivaskulær celle populasjoner i ulike ikke-kardiale vev har vist seg å ha stilk / stamcelleegenskaper ennd blir undersøkt for klinisk bruk i hjerte-innstillingen. Pericytes, en av de mest kjente perivaskulær celle undergrupper, er en heterogen befolkning som spiller flere patofysiologiske roller inkludert i utviklingen av nye skip 15, regulering av blodtrykk 16, og vedlikehold av vaskulær integritet 17,18. Som vist i flere vev, bestemte undergrupper av pericytes opprinnelig uttrykke MSC antigener og opprettholde sine MSC-lignende fenotyper i primærkultur etter FACS rensing 14. Videre disse cellene stabilt opprettholde sine langsiktige fenotyper innen kultur og vise multi-avstamning differensiering potensial, i likhet med MSC 19,20. Disse resultatene tyder på at pericytes er en av opprinnelsen til den unnvikende MSC 14. Det terapeutiske potensialet for pericytes er vist med en reduksjon i myokardialt arrdannelse og forbedret hjertefunksjon etter transplantasjon inn i ischemisk skadehjerter 21. Nylig har vi lykkes renset pericytes fra menneskehjertemuskelen og demonstrerte sin MSC-lignende fenotyper og multipotency (adipogenesen, chondrogenesis og Osteogensesis) med fravær av skjelett myogenesen tre. I tillegg hjerteinfarkt pericytes utstilt differensial cardiomyogenic potensielle og angiogene kapasitet sammenlignet med kolleger renset fra andre organer.

En andre populasjon av multipotente perivaskulære stilk / stamceller, den adventitia-cellen, har blitt isolert fra humane saphenous vener på grunnlag av positiv CD34 ekspresjon 22. Venøs adventitia-celler har vist seg å ha klonogene potensial, mesodermal differensiering kapasitet og proangiogenic potensial in vitro. Transplantasjon av disse cellene inn i ischemisk skadede hjerter mus resulterte i en reduksjon i interstitiell fibrose, en økning i angiogenese og myokardial blodstrøm, redusert ventrikulær dilasjon, og økt hjerte ejeksjonsfraksjon 23. Interessant, har adipose adventitia celler er vist å miste CD34 uttrykk og oppregulere CD146 uttrykk i kulturen som svar på Angiopoietin II behandling, noe som tyder på at innføringen av en pericyte fenotype med stimulering 24. I hjertet, men de adventitia cellepopulasjon har enda ikke blitt prospektivt renset ved FACS og / eller godt karakterisert. Utnytte celleisolasjonsprosedyrer som er beskrevet i de neste avsnittene, er vi for tiden karakter hjerteinfarkt adventitia celler og undersøke deres potensial for fornybare applikasjoner.

Heri vi beskriver en metode for å isolere og rense to subpopulasjoner av perivaskulære stammen / stamceller fra human fetal eller voksen myokard. Denne prospektive celle isolasjonsmetoden gjør at forskerne å få isogene perivaskulær stilk / stamcelle undergrupper fra menneskelige hjerte biopsier for komparative studier og further utforske deres terapeutiske potensiale i forskjellige hjerte patologiske tilstander.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Processing of Human Cardiac Sample

  1. Påse at alle væsker, containere, instrumenter, og den dedikerte operasjonsområdet er sterile.
  2. Plasser hjertevevet prøven (innhentes av vev bank eller kirurgisk lag) i lagringsmediet består av kjølt Dulbeccos modifiserte Eagle medium (DMEM) inneholdende 20% føtalt bovint serum (FBS) og 1% penicillin-streptomycin (P / S) på is for transport 3.
  3. Fjern det kardiale prøven fra lagringsmediet og vaskes med et vaskemedium bestående av fosfat-bufret saltvann (PBS) supplert med 2% FBS og 1% P / S. Når du håndterer prøven, bruker fin tippet tang til å gripe store fartøy eller hjerteposen og minimere knusing av hjertemuskelen.
  4. Senk prøven i vask medium i en petriskål og fjerne hjerteposen, endocardium og store blodårer med steriliserte iris saks og fine-tipped tang som beskrevet tre.
  5. Skjær de rester myocardium i små biter på omtrent 1 mm 3 ved hjelp av en enkelt side barberblad eller et par skarpe iris saks. Merk: Høyeste celleutbytte vil oppnås dersom prøvene behandles umiddelbart. Hvis en forsinkelse er uunngåelig, lagring av det bearbeidede hjertevevet i ferske lagringsmediet (> 5 ml per 1 cm3 vev) ved 4 ° C i opp til 72 timer er mulig, men antagelig med en tilhørende reduksjon i cellen utbytte.

2. Fordøyelse av vevet og Isolering av celler

  1. Ferskt utgjør fordøyelsen løsning omfattende 1,5 ml hver av kollagenase I, kollagenase II, og kollagenase IV (alle ved 0,5 mg / ml i DMEM) og varm til 37 ° C i et vannbad.
    Merk: volum og konsentrasjon av kollagenaser er egnet for prøver av omtrent 1 cm 3.
  2. Filtrer de suspenderte vev bitene gjennom en 100 um sil og vask to ganger med PBS. Overfør vevet stykker til et sterilt 30 ml beholder meden tett tillukket lokk.
    Merk: Korte brede potter enn høye smale rør gir bedre resultater. Alternativt sette vev brikker i et sterilt 50 ml tube og plassere horisontalt hvis en 30 ml beholder er ikke tilgjengelig.
  3. Legg alle fordøyelsen løsninger (4,5 ml totalt) og plassere beholderen i en forseglet plastpose i en 37 ° C rister vannbad satt til 120 rpm. Alternativt forsegle beholderen med parafin film og plasser i en oppvarmet orbital shaker satt til 120 rpm.
  4. Etter 15 minutter, ta ut og snu potten tre ganger før du bytter til en ytterligere 15 min. Fjern og slukke kollagenaser med 5 ml DMEM supplert med 20% FBS og 1% P / S.
  5. Triturer fordøye ved forsiktig pipettering ti til tjue ganger med en 10 ml serologisk pipette for å bryte opp noen vev klumper. Filtrer suspensjonen sekvensielt gjennom 100 um, 70 um og til slutt 40 um celle siler for å fjerne ufordøyd materiale og oppnå en enkel cellesuspensjon.
    notat:Ikke skyll mellom celle siler for å unngå celle debrisgenerated av enzymet fordøyelsen.
  6. Sentrifuger cellesuspensjonen ved 200 x g i 4 minutter, forsiktig dekanter supernatanten og re-suspendere pelleten i 1 ml av rød cellelysebuffer i 2 min ved romtemperatur før fortynning med 4 ml vaskemedium.
  7. Gjenta sentrifugeringstrinn og re-suspendere pelleten i 1 ml vaskemedium. Bland godt og ta 10 ul av cellesuspensjonen for celletelling.
  8. Bland 10 ul av cellesuspensjonen med 10 ul av Trypan blå flekk og plassere 10 ul av blandingen på en standard hemocytometer for celletelling. Tell antall lyse, runde celler til stede i de fire hjørne rutene (hver inndelt i seksten små firkanter) og dividere med 4 for å få den gjennomsnittlige per hjørne kvadrat. Multiplisere den midlere med 2 for å gjøre rede for flekken fortynningsfaktor og deretter ved 10 4 for å oppnå det totale antall celler pr 1 ml av prøven.

  1. Tilsett 50 mL av museserum til cellesuspensjonen og inkuberes ved 4 ° C i 20 minutter for å blokkere ikke-spesifikk antistoffbinding.
  2. Sentrifuger cellesuspensjonen med museserum ved 200 x g i 4 minutter, fjern supernatanten, og re-suspendere i et vaskemedium ved en konsentrasjon på 1 x 10 6 celler pr 100 ul.
  3. Alikvoter 50 ul hver av cellesuspensjonen for isotype og ufargede styrer inn to polystyren rundbunnet flowcytometri-rør og deretter plassere det gjenværende volum inn i et tredje rør for multi-misfarging.
  4. Legg CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5, og CD146-AF647 antistoffer (alt 1: 100) for enkelt celle suspensjon for multi-farge farging. For isotypekontrollantistoff, legger tilsvarende volumer av PE, APC-Cy7-, PE-Cy7-, PerCP-Cy5.5- og AF647-konjugerte isotype antistoffer. Forsiktig pipette for å blande antistoffer med cellene og inkuberes alle rørene ved 4 ° C i 20min i mørket.
  5. Forbered kompensasjon kontrollperler ved å tilsette en dråpe av positive perler til 100 mL av vask medium i fem polystyren rund bunn flow-Cytometry rør. Legg CD34-PE, CD45-APC-Cy7, CD56-PE-Cy7, CD144-PerCP-Cy5.5, og CD146-AF647 antistoffer (alt 1: 100) individuelt til hver av de 5 rør. Inkuber alle rørene ved 4 ° C i 20 minutter i mørket.
  6. I løpet av inkubasjonen, forberede celle prøverør hver med 500 mL av Endothelial Growth Medium-2 (EGM-2) dyrkningsmedium og sted ved 4 ° C.
  7. Etter antistoff inkubering tilsett 5 ml av vaskemedium for å vaske cellene og perler for å fjerne ubundet antistoff. Sentrifuger alle rør ved 200 xg i 4 min. Gjenta vasking og sentrifugeringstrinn. Dekanter forsiktig supernatanten og pipetten forsiktig når re-suspendere celler.
  8. Re-suspen i vaskemediet i en konsentrasjon på omtrent 1 x 10 6 celler pr 250 ul. Re-suspendere perler i 100 mL av vask medium.
  9. Transportere alle celle og perle suspensjoner til cellen sorter på isen i mørket. Legg en dråpe negative perler til de positive perle kompensasjon kontrollrørene og bruke disse til å sette fluorescens kompensasjon.
  10. Kjør ufargede kontrollceller i henhold til produsentens instruksjoner for å etablere bakgrunnen fluorescens og satt spenningene til følgende: FSC 150V; SSC 290V; V450 / 50 350V; V710 / 50 620V; B530 / 30 400V; B710 / 50 530V; YG780 / 60 460; R670 / 30 480 V; R780 / 60 460V. Kjør isotyper kontroller i henhold til produsentens instruksjoner for å etablere bakgrunn fluorescens terskler knyttet til ikke-spesifikk binding. Kjør multi-farge farget prøve og samle pericyte og adventitia cellepopulasjoner i oppsamlingsrørene (figur 1).
    MERK: Optimal levedyktige celleutbytte er ca 3% av den totale levende celle dissosiasjon for pericytes og 4% for adventitia-celler.

4. Cell Culture

  1. Velge passende størrelse kulturplater i henhold til resultatet av FACS-sortering. Tilsett 100 ul steril 0,2% gelatinoppløsning per cm2 vekstområde og agitere manuelt for å belegge hele brønnene. Inkuber platene ved 4 ° C i 10 minutter og fjern gelatinoppløsning helt. Hold samles cellene på is mens de forbereder kulturplater.
    Merk: Fersk sortert pericytes og adventitia-celler vokser godt når sådd ut ved en tetthet på 30 000 til 40 000 celler / cm2 på gelatin-belagte kulturoverflaten.
  2. Sentrifuger nylig oppsamlede celler ved 200 xg i 4 minutter og forsiktig re-suspen cellepelleten i en passende mengde av EGM-2.Seed cellene på gelatin-belagte plater.
    Merk: Det virkelige antall celler som skal sådd per brønn, og mengden av EGM-2 som skal tilsettes, avhenger av valget plate. For eksempel, 0,5 ml og 1 ml EGM-2 er nødvendig per brønn i 48- og 24-brønners plater hhv.
  3. Utveksling EGM-2 for perivaskulær cellevekst medium (DMEM supplert med 20% FBS og 1% P / S) for både pericytes og adventitia-celler når cellene har slått seg ned og festet til platen (etter minst 72 timer). Endre media hver 72 timer fra da av. Gjennomføre innledende og alle påfølgende inkubering i 5% CO 2 og ved 37 ° C.
  4. Distansere celler ved hjelp av 0,05% Trypsin EDTA når pericytes og adventitia celler nå 80 til 90% samløpet. Stans med 20% FBS i PBS, sentrifuger ved 200 xg i 4 min, re-suspen i perivaskulær cellevekstmedium, og deretter passasje cellene ved et 1: 3-forhold på ikke-belagte polystyren-kulturplater. Fra Passage to og utover, passasje cellene på en 1: 5-forhold (eller på ca. 7000 celler / cm2) til ubestrøket polystyren kultur plater eller kolber.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Enkeltceller ble skilles fra rusk og dubletter på grunnlag av forover og side scatter distribusjoner. Levende celler, ble identifisert ved deres manglende evne til å ta opp fargestoff DAPI. Den gating strategien ble valgt på grunnlag av isotypekontrollantistoff merking av dette live, hel-hjerte celledissosiasjon (figur 1). Fra levende celler, ble CD45 + -celler første silt ut, etterfulgt av CD56 + celler. CD144 + endotelceller ble deretter fjernet fra CD56 - fraksjonen. Fra denne siste befolkningen, CD146 + / CD34 - pericytes og CD146 - ble / CD34 + adventitia celler valgt og deretter samlet (figur 2). Umiddelbart etter celle samling, en liten prøve av hver undergruppe (500-1000 celler) ble gjen kjørt gjennom sorter for å bekrefte at celle fordelingen var slik det står i den opprinnelige form. FACS-rensede hjerteinfarkt Peric ytes og adventitia-celler både oppviser en spindel for å stel cellemorfologi i kultur (figur 3).

Figur 1
Figur 1:. FACS gating Strategi Representative prikker plott av isotypekontrollantistoff merket dissosiert menneskelige hjertet celler illustrere plasseringen av sorterings portene .. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 2
Figur 2: FACS Rensing av hjerteinfarkt perivaskulær celler Representant sortering av de to subpopulasjoner av hjerte perivaskulær forløper celler fra en enkelt menneske hjerteinfarkt prøve..es / ftp_upload / 54252 / 54252fig2large.jpg "target =" _ blank "> Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3:. Perivaskulær Cell morfologi i Kultur De to hjerte perivaskulær forløper cellepopulasjoner, pericytes (venstre panel) og adventitia celler (høyre) ble sortert til homogenitet ved FACS rensing og ytterligere utvidet i kultur (ved passering 3, Scale barer = 50 mikrometer ). klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Økende bevis støtter en begrenset evne til reproduksjon av den voksne menneskehjertet etter skade. Identifisering og karakterisering av innfødte forloperceller ansvarlige for slike regenerativ respons i skadde hjerter er avgjørende for både forståelsen av tilhørende mekanismer og signalveier og utvikling av metoder for å utnytte disse cellene terapeutisk.

Tidligere protokoller er beskrevet isoleringen av perivaskulære forløper celleundergrupper fra human skjelettmuskel 25. Men den direkte anvendelse av disse teknikkene til hjertevev ofte resulterer i meget dårlige celleutbytte. Derfor har vi gjort store justeringer i protokollen for å berike to diskrete subpopulasjoner av perivaskulær forløper celler, nemlig pericytes og adventitia celler, fra menneske hjerteinfarkt biopsier og legge til rette for samtidig rensing av begge undergrupper. Isolering av begge cellepopulasjoner fra same prøven ikke bare optimaliserer bruken av edle hjerte- vev biopsi, men gir også direkte sammenligning av forskjellige perivaskulær celle undergrupper.

For å oppnå det maksimale utbytte av celler, er helsen av vevsprøve av avgjørende betydning. Maksimale levedyktige celleutbytte for pericytes og adventitia-celler er omtrent 3% og 4% av den totale levende celle dissosiasjon respektivt. Utbytter kan variere sterkt fra omkring 30 000 til 400 000 celler pr undergruppe, og er sterkt avhengig av en rekke faktorer, inkludert mengden og kvaliteten av utgangs vev og bevaring varighet. Perivaskulær celler er relativt delikat; Prøvene viser tegn på autolyse endring alltid gi lave celle tall etter FACS. Tilsvarende perivaskulære celler som er følsomme for sterke fordøyelse teknikker, og over-fordøyelse vil også resultere i et redusert utbytte av levedyktige celler. Tilpasninger av tiden fordøyelsen og agitasjon hastighet kan være nødvendig ved individual laboratorier. Til slutt vil donor alder og utvalgsstørrelse også ha store konsekvenser for celleutbytte.

Vi har omfattende karakterisert kardiale pericytes oppnådd på denne måte 3. Disse cellene demonstrerte homogenitet i kultur uten endotelceller forurensning. Befolknings dobling tider med rundt 60 timer mellom passasjer 3 og 12 ble registrert med konsekvent uttrykk for både vanlige pericyte markører (alkalisk fosfatase, NG2 og α-SMA) og klassiske MSC markører (CD44, CD73, CD90 og CD105) i denne perioden. Forbløffende nok ble det funnet at etter demetylering, en brøkdel av hjerte pericytes uttrykte cardiomyogenic transkripsjonsfaktorer Nkx2.5 og GATA4. Når co-dyrket med neonatal rotte cardiomyocytes, en brøkdel av demetylerte hjerte pericytes uttrykte sarcomeric protein markører alfa-actinin og hjerte troponin-T, med en mindre gruppe ytterligere stiller spontane cytoplasmatiske kalsium flukser. Samlet utgjør disse funnene Suggest at en subpopulasjon av hjerte pericytes besitter cardiomyogenic potensial og kan derfor spille en rolle i den indre myokardial reparasjonsprosessen. I sammenligning med pericytes, hjerte adventitia celler forblir i stor grad uncharacterized. Våre upubliserte foreløpige data tyder på at hjerte adventitia celler uttrykker noen pericyte markører som PDGFR-β og NG2, om enn på lavere nivåer enn hjerte pericytes, mens miste CD34 i kultur. Disse cellene uttrykker også klassiske MSC markører og vise osteogene og adipogenic differensiering potensial. Videre studier av hjerte adventitia celler inkludert angiogene og pro-kardio egenskaper er pågående.

Protokollen er beskrevet her gjør det mulig for simultan, prospektiv rensing av hjerte pericytes og adventitia-celler fra et enkelt humant hjertevev prøven. Disse cellene representerer nye hjerte forløper celle populasjoner med potensielle cardiomyogenic egenskaper som kan vise seg å være egnet candidates for fremtidige cellen terapi.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
AbC Anti-mouse Bead Kit Molecular Probes A-10344
Collagenase I Gibco 17100-017 Reconstitute powder as required and filter sterilise
Collagenase II Gibco 17101-015
Collagenase IV Gibco 17104-019
anti-human CD34-PE BD Pharmingen 555822 Keep sterile
anti-human CD45-APC-Cy7 BD Pharmingen 557833 Keep sterile
anti-human CD56-PE-Cy7 BD Pharmingen 557747 Keep sterile
anti-human CD144-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
anti-human CD146-AF647 AbD Serotec MCA2141A647 Keep sterile
EGM2-BulletKit Lonza CC-3162 For collection of cells and culture until adhered
DMEM, high glucose, GlutaMAX without sodium pyruvate ThermoFischer Scientific 10566-016
Fetal Bovine Serum ThermoFischer Scientific 10500-064 Freeze in aliquots and keep sterile
Gelatin Sigma Aldrich G1393 Dilute with sterile water
IgG1k-PE BD Pharmingen 559320 Keep sterile
IgG1k-APC-Cy7 BD Pharmingen 557873 Keep sterile
IgG1k-PE-Cy7 BD Pharmingen 557872 Keep sterile
IgG1k-PerCP-Cy5.5 BD Pharmingen 561566 Keep sterile
IgG1k-647 AbD Serotec MCA1209A647 Keep sterile
Mouse serum Sigma Aldrich M5905 Keep sterile
Paraffin Film - Parafilm M Sigma Aldrich P7793
Penicillin-Streptomycin Gibco 15979-063 Freeze in aliquots and keep sterile
Phosphate buffered saline pH 7.4 ThermoFischer Scientific 10010-023 Keep sterile
Red Blood Cell Lysing Buffer Hybri-Max Sigma Aldrich R7757 Keep sterile
Trypan Blue Solution Sigma Aldrich T8154
Trypsin-EDTA 0.5%(10x) Invitrogen 15400-054
 FACSARIA FUSION BD Pharmingen Fluorescence Activated Cell Sorter

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bergmann, O., et al. Evidence for cardiomyocyte renewal in humans. Science (New York, N.Y.). 324, (5923), 98-102 (2009).
  2. Laflamme, A., Murry, C. E. Heart regeneration. Nature. 473, (7347), 326-335 (2011).
  3. Chen, W. C. W., et al. Human myocardial pericytes: multipotent mesodermal precursors exhibiting cardiac specificity. Stem cells (Dayton, Ohio). 33, (2), 557-573 (2015).
  4. Campagnoli, C., Roberts, I. A., Kumar, S., Bennett, P. R., Bellantuono, I., Fisk, N. M. Identification of mesenchymal stem/progenitor cells in human first-trimester fetal. Blood. 98, (8), 2396-2402 (2001).
  5. Zuk, P. A., et al. Human adipose tissue is a source of multipotent stem cells. Molecular biology of the cell. 13, (12), 4279-4295 (2002).
  6. Chen, S., et al. Effect on left ventricular function of intracoronary transplantation of autologous bone marrow mesenchymal stem cell in patients with acute myocardial infarction. The American journal of cardiology. 94, (1), 92-95 (2004).
  7. Ringdén, O., et al. Mesenchymal stem cells for treatment of therapy-resistant graft-versus-host disease. Transplantation. 81, (10), 1390-1397 (2006).
  8. Kharaziha, P., et al. Improvement of liver function in liver cirrhosis patients after autologous mesenchymal stem cell injection: a phase I-II clinical trial. European journal of gastroenterology & hepatology. 21, (10), 1199-1205 (2009).
  9. Spaeth, E., Klopp, A., Dembinski, J., Andreeff, M., Marini, F. Inflammation and tumor microenvironments: defining the migratory itinerary of mesenchymal stem cells. Gene therapy. 15, (10), 730-738 (2008).
  10. Yan, X., et al. Injured microenvironment directly guides the differentiation of engrafted Flk-1(+) mesenchymal stem cell in lung. Experimental hematology. 35, (9), 1466-1475 (2007).
  11. Van Poll, D., et al. Mesenchymal stem cell-derived molecules directly modulate hepatocellular death and regeneration in vitro and in vivo. Hepatology (Baltimore, Md.). 47, (5), 1634-1643 (2008).
  12. Popp, F. C., et al. Mesenchymal stem cells can induce long-term acceptance of solid organ allografts in synergy with low-dose mycophenolate. Transplant immunology. 20, (1-2), 55-60 (2008).
  13. Li, Z., Zhang, C., Weiner, L. P., Zhang, Y., Zhong, J. F. Molecular characterization of heterogeneous mesenchymal stem cells with single-cell transcriptomes. Biotechnology advances. 31, (2), 312-317 (2013).
  14. Crisan, M., et al. A perivascular origin for mesenchymal stem cells in multiple human organs. Cell stem cell. 3, (3), 301-313 (2008).
  15. Ozerdem, U., Stallcup, W. B. Early contribution of pericytes to angiogenic sprouting and tube formation. Angiogenesis. 6, (3), 241-249 (2003).
  16. Rucker, H. K., Wynder, H. J., Thomas, W. E. Cellular mechanisms of CNS pericytes. Brain research bulletin. 51, (5), 363-369 (2000).
  17. Betsholtz, C. Insight into the physiological functions of PDGF through genetic studies in mice. Cytokine & Growth Factor Reviews. 15, (4), 215-228 (2004).
  18. Gerhardt, H., Betsholtz, C. Endothelial-pericyte interactions in angiogenesis. Cell and tissue research. 314, (1), 15-23 (2003).
  19. Crisan, M., Chen, C. W., Corselli, M., Andriolo, G., Lazzari, L., Péault, B. Perivascular multipotent progenitor cells in human organs. Annals of the New York Academy of Sciences. 1176, 118-123 (2009).
  20. Kang, S. G., et al. Isolation and perivascular localization of mesenchymal stem cells from mouse brain. Neurosurgery. 67, (3), 711-720 (2010).
  21. Chen, C. W., et al. Human pericytes for ischemic heart repair. Stem cells (Dayton, Ohio). 31, (2), 305-316 (2013).
  22. Campagnolo, P., et al. Human adult vena saphena contains perivascular progenitor cells endowed with clonogenic and proangiogenic potential. Circulation. 121, (15), 1735-1745 (2010).
  23. Katare, R., et al. Transplantation of human pericyte progenitor cells improves the repair of infarcted heart through activation of an angiogenic program involving micro-RNA-132. Circulation research. 109, (8), 894-906 (2011).
  24. Corselli, M., Chen, C. W., Sun, B., Yap, S., Rubin, J. P., Péault, B. The Tunica Adventitia of Human Arteries and Veins As a Source of Mesenchymal Stem Cells. Stem Cells and Development. 21, (8), 1299-1308 (2012).
  25. Crisan, M., et al. Purification and long-term culture of multipotent progenitor cells affiliated with the walls of human blood vessels: myoendothelial cells and pericytes. Methods in cell biology. 86, 295-309 (2008).
Isolering av perivaskulær multipotente forløpercelle populasjoner fra humane kardiale Tissue
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Baily, J. E., Chen, W. C. W., Khan, N., Murray, I. R., González Galofre, Z. N., Huard, J., Péault, B. Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue. J. Vis. Exp. (116), e54252, doi:10.3791/54252 (2016).More

Baily, J. E., Chen, W. C. W., Khan, N., Murray, I. R., González Galofre, Z. N., Huard, J., Péault, B. Isolation of Perivascular Multipotent Precursor Cell Populations from Human Cardiac Tissue. J. Vis. Exp. (116), e54252, doi:10.3791/54252 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter