Abstract
Bauchspeicheldrüsenkrebs bleibt eine der Krebsarten, für die das Überleben verbessert hat sich nicht wesentlich in den letzten Jahrzehnten. Nur 7% der diagnostizierten Patienten werden länger als fünf Jahre überleben. Um die Mikroumgebung von Tumoren der Bauchspeicheldrüse zu verstehen und nachzuahmen, verwendeten wir einen murinen orthotopen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs, die in Echtzeit nicht-invasive Bildgebung von Tumorprogression ermöglicht. Bauchspeicheldrüsenkrebszellen exprimieren , grün fluoreszierendes Protein (GFP PANC-1) wurden in Basalmembran - Matrix, hoher Konzentration, ausgesetzt (zB Matrigel HC) mit serumfreiem Medium und dann in den Schwanz der Bauchspeicheldrüse durch Laparotomie injiziert. Die Zellsuspension in der hohen Konzentration Basalmembran-Matrix wird zu einer gelartigen Substanz, sobald es Raumtemperatur erreicht; daher geliert es, wenn es in Kontakt mit der Bauchspeicheldrüse kommt, um eine Dichtung an der Injektionsstelle zu schaffen und eine beliebige Zelle Auslaufen zu verhindern. Tumorwachstum und Metastasierung in andere Organe werden in lebenden wachtenTiere durch Fluoreszenz unter Verwendung. Es ist wichtig, die geeigneten Filter für die Anregung und Emission von GFP zu verwenden. Die Schritte für die orthotope Implantation sind in diesem Artikel beschrieben so Forscher leicht, das Verfahren in nackten Mäusen replizieren können. Die wesentlichen Schritte dieses Protokolls sind Herstellung der Zellsuspension, chirurgische Implantation, und der ganze Körper fluoreszierendes in vivo Bildgebung. Dieses orthotoper Modell ist entwickelt, um die Wirksamkeit neuer Therapeutika auf primären und metastatischen Tumoren zu untersuchen.
Introduction
Bauchspeicheldrüsenkrebs ist mit einer erhöhten Frequenz im Vergleich zu anderen Krebsarten diagnostiziert und ist das 4. häufigste Ursache der durch Krebs verursachten Todesfälle in den Vereinigten Staaten. Ab dem Zeitpunkt der Diagnose, über 90% der Patienten sterben innerhalb von fünf Jahren 1,2. Derzeit ist die chirurgische Tumorentfernung die einzige Heilung für Bauchspeicheldrüsenkrebs, aber weniger als 20% der Patienten sind berechtigt , Chirurgie vor allem , weil zum Zeitpunkt der Diagnose zu unterziehen , die Krankheit in einem fortgeschrittenen Stadium und hat 3,4 metastasiert. Der Mangel an spezifischen Symptome macht Bauchspeicheldrüsenkrebs eine stille Krankheit; einige der Symptome sind Bauchschmerzen, Rückenschmerzen, Appetitlosigkeit, Gelbsucht und Übelkeit; die als gemeinsame Verdauungskrankheiten werden kann 4 leicht zu interpretieren. Aus diesem Grund ist es wichtig, neue pharmakologische Werkzeuge zur Entwicklung in der Diagnose und Behandlung von Bauchspeicheldrüsenkrebs zu unterstützen.
Die Verwendung von Tiermodellen ermöglicht es uns, die Biologie der Pancré zu verstehenatic Krebs und bietet einen Einblick in dieses Wissen auf den Menschen anzuwenden. Xenograft orthotoper Modelle von Bauchspeicheldrüsenkrebs sind realistisch, da Tumoren im Ursprungsorgan 5 wachsen. Im Gegensatz zu heterotoper Modelle, in denen Zelllinien oder Tumorfragmente subkutan implantiert werden, ermöglicht orthotoper Modellierung für die Erholung der Tumor - Mikroumgebung und ahmt die Wechselwirkung von Tumorzellen mit ihrer Umgebung 6. Das Xenograftmodell hier beschrieben leitet Tumoren aus der menschlichen Pankreas-Krebszelllinie PANC-1-GFP, die gentechnisch verändert ist das grün fluoreszierende Protein (GFP) zum Ausdruck bringen. GFP Detektion ermöglicht für eine nicht-invasive Abbildung und Überwachung von Tumorwachstum und Metastasierung 7. Tumorentwicklung erfolgt schnell, spontan und sehr ähnlich , dass von primären Tumoren des menschlichen Patienten mit Bauchspeicheldrüsenkrebs 8. Orthotope Modelle bieten eine genauere Vorhersage der Arzneimittelwirksamkeit in Reaktion auf therapeutische Mittel, währendNachahmen der Tumor-Mikroumgebung.
Wie oben erwähnt, ermöglicht dieses Tiermodell Fluoreszenz Nachweis von Tumorwachstum und Metastasierung in Echtzeit. Fluoreszenznachweis ermöglicht eine direkte / Live-Bildgebung zu Lumineszenz verglichen. Mit Fluoreszenz ist das emittierte Licht das Ergebnis einer Anregung durch ein anderes Licht einer kürzeren Wellenlänge; wohingegen in Lumineszenz, ist das emittierte Licht das Ergebnis einer chemischen Reaktion und nicht starke Emission 9 aufweisen. Weiterhin ist ganzen Körper in vivo Fluoreszenzabbildung für das Tier nicht nachteilig und ermöglicht es den Forschern Tumorwachstum über die Zeit in Reaktion auf therapeutische Behandlungen zu überwachen.
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Protocol
Das Protokoll weiter unten beschrieben wird, unter Anleitung und Genehmigung der Western University Animal Care und Verwenden Ausschuss ausgeführt. Alle Versuche werden unter Einhaltung aller einschlägigen Richtlinien, Vorschriften und Aufsichtsbehörden durchgeführt.
1. Zellkultur
- Herstellung von Komplettmedium
- Mit einer Klasse-II-biologischen Sicherheitsschrank, bereiten komplettes Medium durch aseptisches Zugabe von fötalem Rinderserum (FBS) und Penicillin-Streptomycin (P / S) in einen 500-ml-Flasche RPMI-Medium. Vorsichtig mischen durch Schwenken. Die Endkonzentration jedes Ergänzungsmittel ist 10% FBS und 1% P / S (v / v). Beispielsweise ergänzen 500 ml Medium mit 56 ml FBS und 6 ml P / S.
- Platzieren Komplettmedium in einem Wasserbad bei 37 ° C.
- Auftauen und Propagierung von Zellen
- Abrufen PANC-1-GFP-Zellen aus flüssigem Stickstoff. Tauen Sie das Fläschchen durch vorsichtiges Schütteln in einem Wasserbad bei 37 ° C.
Hinweis:Auftauen sollte schnell sein (ca. 2 - 3 min). - Aufkleber-T-75-Flaschen verwendet werden mit (a) Zell-Linie Name, (b) Passage-Nummer, (c) das Datum und (d) Forscher Initialen.
- Wischen Sie das Fläschchen mit 70% Ethanol und Transfer Fläschchen zu einem Bio-Sicherheitsschrank.
- Um die Zellen zu propagieren, fügen 9,0 ml vollständigem Medium in ein 15 ml konischen Röhrchen. Unter Verwendung einer 1,0 ml Pipette vorsichtig die Zellsuspension und suspendieren es in 9 ml Vollmedium.
- Zentrifuge bei 125 × g für 8 min bei RT. Übertragen Sie die konische Fläschchen auf einem Bio-Sicherheitsschrank und den Überstand aspirieren, ohne das Pellet zu stören.
- Hängen Sie das Pellet in 10 ml frischem Komplettmedium durch sanft die Suspension bis Pipettieren und ab.
- Zähle die Zellen mit einem Hämozytometer und Platte sie in T-75 - Kolben mit einer Dichte von 2,1 x 10 6 Zellen / Kolben. Danach wird der Kolben in einen Inkubator bei 37 ° C und 5% CO 2.
- Überwachen Sie die Zellen täglich von Auge und unter dem Mikroskop. Wenn Grippeid Erneuerung erforderlich ist, aseptisch aspirieren die vollständige Wachstumsmedium aus dem Kolben und entsorgen. In gleichem Volumen von frischem Vollmedium.
- Abrufen PANC-1-GFP-Zellen aus flüssigem Stickstoff. Tauen Sie das Fläschchen durch vorsichtiges Schütteln in einem Wasserbad bei 37 ° C.
- Propagierung von Zellen
- Aseptisch entfernen Medium aus dem Kolben. 5 ml Dulbecco-Phosphatpuffer-Salzlösung (DPBS) Zellen zu spülen und zu verwerfen.
- Lösen sich die Zellen aus dem Kolben durch Zugabe von 3 ml 0,25% Trypsin. Inkubieren Kolben bei 37 ° C und 5% CO 2 für 5 bis 10 min , enthaltend Trypsin.
- Beobachten Zellen unter dem Mikroskop (10-facher Vergrößerung) und sicherzustellen, dass sie sind rund und verdrängt.
- Neutralisieren Trypsin durch ein gleiches Volumen von komplettem Medium Zugabe und brechen Klumpen durch vorsichtiges Pipettieren nach oben und unten.
- Zählen Sie die Zellen unter Verwendung eines Hämozytometers und übertragen die entsprechenden Zellsuspensionsvolumen an neue Kolben bei der Zelldichte in 1.2.7 erwähnt; fügen Sie genug frische Medien so das endgültige Volumen 10 ml pro Flasche ist.
- Handy SuspensIonen-Injektionspräparat
Hinweis: Da die Basalmembranmatrix, hohe Konzentration, bei RT erstarrt, halten alle Materialien auf dem Eis. Legen Sie alle sterilen Pipettenspitzen und Fläschchen in den Gefrierschrank über Nacht, und auf Eis halten, während auf der Aufhängung arbeiten.- Halten Sie eine Flasche von RPMI-Medium ohne Zusätze auf Eis. Auftauen Basalmembranmatrix, hohe Konzentration, durch Anweisungen folgenden Herstellers. Vorzugsweise aliquoten in kleinere Fläschchen , um mehrere Gefrier-Auftau - Zyklen 10 zu vermeiden.
- Absaugen Medien aus allen Flaschen und spülen mit 5 ml DPBS. Wiederholen Sie alle Schritte auf dem letzten Abschnitt bis 1.3.4 zu treten.
- Übertragen Inhalt in einen 15 ml konischen Röhrchen und zentrifugiert bei 125 g für 8 min bei RT. Übertragen konische Fläschchen auf die biologische Sicherheit Kabinett und erneut zu suspendieren Pellet mit 10 ml DPBS.
- Pipette vorsichtig die Suspension des Pellets aufzubrechen nach oben und unten. Zählen von Zellen mit einer Zählkammer.
- Zentrifuge wieder wie in s skizzierttep 1.4.3. Überstand absaugen und in Abhängigkeit von der Anzahl der Zellen, fügen geeignete Verdünnungsmittel , um 3 x 10 6 Zellen in einem Volumen von 50 & mgr; l. 1 (v / v) Verhältnis: Das Verdünnungsmittel wird in einer 1 ein Gemisch von serumfreien Medien und hohe Konzentration Keller Matrix Membran sein.
- Vortex die Suspension sanft und auf Eis halten zu allen Zeiten. Die Suspension ist jetzt bereit für die Injektion.
- chirurgische Implantation
Hinweis: Stellen Sie sicher, dass alle chirurgischen Materialien und Instrumente sind steril. Üben Sie aseptische Techniken zu allen Zeiten.- Legen Sie ein Heizkissen auf den Tisch und Deckel mit einem sterilen Tuch. Stellen Sie die Anästhesiegerät und sicherzustellen, alle Lieferungen in greifbarer Nähe sind.
- Legen Sie die Schnauze des Tieres in die Narkosemaske und eingerichtet, um die Anästhesie bis 1 l / min Sauerstoff und 2,5% Isofluran.
- Vorsichtig schrubben die Flanke des Tieres mit Jod und spülen mit 70% Ethanol. Dreimal wiederholen.
- Bestätige dasTier wird durch Einklemmen der Hinterpfote vollständig betäubt. Das Tier ist völlig betäubten und bereit für die Operation, wenn keine Antwort beobachtet wird. Wenn jedoch das Tier zuckt zusammen, gewährleisten eine ausreichende Anästhesie im Verdampfer ist und lassen Sie das Tier mehr Zeit vollständig unter Narkose zu gehen.
- Last etwa 200 & mgr; l der Zellsuspension in ein 1,0 ml TB-Spritze mit einer 18 G-Nadel (vorher abgekühlt). Ersetzen Sie die Nadel mit einer 27 G-Nadel und zurück zum Eis bis zum Gebrauch.
- Suchen Sie den allgemeinen Bereich der Milz (linken oberen Quadranten des Bauches) und mit einer Pinzette Drücken Sie die Haut an der Spitze dieser Region. Mit chirurgische Scheren einen Einschnitt machen von etwa 1,0 cm eine Tasche zu erstellen. In ähnlicher Weise eine Prise der glatten Muskulatur auf der Oberseite der Milz und durchgeschnitten, um die Bauchhöhle zu gelangen.
- greifen Sie vorsichtig das Schwanzende der Milz und ziehen Sie sie aus dem Körper heraus. Die Bauchspeicheldrüse wird die Milz angebracht werden. Verbreiten Sie die Bauchspeicheldrüse ein nasses st miterile Q-Tip und den Schwanz des Pankreas finden.
- die 50 & mgr; l Injektion in den Schwanz des Pankreas liefern, lassen Sie die Nadel innerhalb 10 Sekunden und drehen sich langsam die Nadel aus der Bauchspeicheldrüse. Eine erfolgreiche Implantation wird aussehen wie eine oberflächliche Blase ohne Leckagen.
- Rückkehr der Bauchspeicheldrüse und Milz in die Bauchhöhle. Zuerst die Muskeln umschließen und dann die Haut getrennt umschließen. Verwenden Sie einen 6-0 Naht oder Klammer den Schnitt zu schließen. Zur Vermeidung von Schmerzen im Tier, verabreichen Ketoprofen subkutan (SC) (5 mg / kg) über 24 Stunden. (- 0,1 mg / kg 0,05) alle 12 Stunden über einen 36 Stunden-Zeitraum Alternativ Buprenorphin sc verabreichen.
- Gewinnen Sie das Tier aus der Narkose und wieder in seinem Käfig. Auch für Schmerzen zu überwachen. Chirurgie - Die Tiere müssen mit der Schmerzlinderung bei der (präemptive oder sogar vor) zur Verfügung gestellt werden. Zusätzliche Schmerzlinderung müssen Tiere zur Verfügung gestellt werden, die Schmerzen nach IACCUC-Protokoll auftreten oder wie sie die vorgeschriebene beidazu neigt, Tierarzt oder designee.
- In vivo Imaging
Hinweis: Bildaufnahme wurde ein kommerzieller Bildsystem mit einer dunklen Kammer und den entsprechenden Filtern für GFP-Bildgebung ausgestattet unter Verwendung. Die Bildaufnahme wurde mit einer CCD-Kamera und ein optisches System durchgeführt, bestehend aus austauschbaren Anregungs- / Emissionslinsen (Anregung: 455 bis 495 nm; Emission: 513-557 nm). Hellfeldbilder wurden für jeden Zeitpunkt bei 1 x 1 Binning ohne Filter eingefangen. Die Anregung von GFP verwendet, um eine Xenon Multispektraldaten Lichtquelle. Die Tiere wurden unter Anästhesie während des gesamten Bilderzeugungsprozesses gehalten , indem die Anästhesiemaschine zu einem Gasverteiler Anästhesie in die dunkle Kammer des Abbildungssystems integriert verbindet.- Anesthetize das Tier, wie in 1.5.2 beschrieben. Ein Narkosemaske ist im Inneren der kommerziellen dunklen Kammer des Bildgebungssystems, um das Tier unter Narkose während der Bildgebung zu haltenverarbeiten.
- Stellen Sie die richtigen Anregungs- und Emissionsfilter auf.
- Beginnen Sie, indem nur ein Anfangsbild mit weißem Licht zu erhalten. Halten Sie die gleiche Position des Tieres in der gesamten Imaging-Sitzung und wechseln Sie zu GFP Filter ein zweites Bild zu nehmen.
- Die besten Ergebnisse erzielen beide Bilder überlagern. Analysieren Sie das Bild für fluoreszierende Fläche und Intensität.
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Representative Results
Dieses Verfahren beschreibt eine chirurgische orthotope Implantation von fluoreszierenden menschlichen Zellen Bauchspeicheldrüsenkrebs, bei der Herstellung der Zellsuspension zur Injektion, richtige Anästhesie für Nagetiere, Lieferung der Zellsuspension durch Laparotomie Fokussierung und die Verwendung von Fluoreszenz - in - vivo Kleintierbildgebung. Die Detektion eines grünen Fluoreszenzsignal (GFP - Signal) zwischen zwei und drei Wochen nach der Implantation, bietet Forscher einen visuellen Hinweis der Anwesenheit einer Entwicklung von Bauchspeicheldrüsenkrebs - Tumor (Abbildung 1) , um zu bestätigen, Fig . 1 besteht aus drei Bildern einer Maus mit PANC-1-GFP fluoreszierenden Tumor. Die erste ist , unter weißem Licht (1A) aufgenommen; das zweite Bild unter blaues Fluoreszenzlicht genommen (Anregung: 455 bis 495 nm; Emission: 513-557 nm) zur Abbildung der grünen Fluoreszenz von der Pankreastumor 1 PANC emittiert (Abbildung 1B); die dritte ist eine Zusammensetzung ausdie beiden ersten und zeigt die Position des Tumors im Körper der Maus (1C). Tiere , die Tumore nicht entwickeln keine GFP - Signal (Abbildung 2) zeigen. Weiterhin repräsentative Bilder von Tumorprogression über die Zeit kann nicht-invasiv überwacht werden, indem das GFP - Signal zu unterschiedlichen Zeitpunkten der Aufnahme (3), Fig . 3 mehrere Verbunde aus GFP - Signale über die Zeit zeigt. Da die Zeit fortschreitet und die Tumorgröße zunimmt, erhöht sich die GFP-Signal. Zwanzig Tage nach der Implantation, wird der Tumor als kleiner grünen Punkt und 50 Tage nach der Implantation, die Tumorgröße steigt signifikant. 4A zeigt Metastasen in Milz, Leber und Magen - Darm - Trakt, die bestätigt werden kann , nachdem das Tier wurde euthanasiert und die Organe für die ex vivo - Fluoreszenzbildgebung (4B) entfernt.
Abbildung 2: Implantation Fehlerbehebung, Mangel an Fluoreszenz Darstellung einer Maus zu einem Zeitpunkt , wo der Tumor noch nicht entwickelt war. (A) Das Bild wurde erhalten mitweißes Licht und kein Filter. (B) Das Bild wurde unter Verwendung von Blaulicht und spezifische Filter für GFP erhalten. (C) Ein zusammengesetztes Bild von A und B. Bitte hier klicken um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 3: In vivo Echtzeit Fluorescent Imaging Primärtumorwachstum zu verfolgen. In - vivo - Bildgebung von PANC-1 - GFP Progression Bauchspeicheldrüsenkrebs zu verschiedenen Zeitpunkten nach der Implantation. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
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Discussion
Wir beschreiben ein orthotoper murinen Modell von Bauchspeicheldrüsenkrebs , die GFP zum Ausdruck bringt, so dass nicht-invasive Überwachung des Tumorwachstums unter Verwendung von ganzen Körper in vivo Fluoreszenz - Bildgebung (Abbildung 1). Diese Technik ermöglicht es, die Tumor - Entwicklung in Echtzeit (Abbildung 3) zu überwachen; es kann ein wichtiges Instrument für die Forscher, die therapeutische Wirksamkeit von neuen Wirkstoffen gegen Bauchspeicheldrüsenkrebs zu untersuchen. Ein weiterer wichtiger Aspekt dieses Modells ist, dass GFP-Fluoreszenz einen visuellen Hinweis über die erfolgreiche Implantation und das Wachstum von Bauchspeicheldrüsenkrebs zur Verfügung stellt; die sonst schwierig sein, in lebenden Tieren zu messen. In Übereinstimmung mit dem klinischen Umfeld, bietet dieses Modell einen Einblick auf die Metastasierung. Es zeigt Metastasierung in die umliegenden Organe: Milz, mesenterischen Lymphknoten, Leber und Magen - Darm - Trakts (Abbildung 4). Wir beobachteten Metastasen bereits 7 Wochen nach Transplantation. PANC-1 Metastasen gewesen rep18 Wochen 11 - im Bereich von 10 orted. Die Zeit, zu der Metastase beobachtet wird, kann von der Anzahl der implantierten Zellen, Implantation und Visualisierungstechniken abhängen. In der aktuellen Studie haben wir uns für ein grün fluoreszierendes Zelllinie Panc-1-GFP, die im Handel erhältlich ist. Das beschriebene Modell hier ist reproduzierbar und die Metastasen können leicht sichtbar gemacht werden, da sie helle Fluoreszenz haben. Eine Einschränkung Xenograft - Nacktmaus - Modelle von etablierten Krebszelllinien gewonnen wird die Möglichkeit reduziert Tumor Heterogenität im Vergleich zu einer ursprünglichen humanen Tumor 12; dennoch ist das Modell reproduzierbar, leicht zu entwickeln und seine Fortschritte bei lebenden Tieren folgen. Weiterhin weiterhin Xenograft Mausmodellen weit verbreitet in der Krebsforschung verwendet werden.
Die fluoreszierend markierten Zellen müssen mit gleichen Volumen eiskaltem Basalmembran 8 gemischt in eiskaltem serumfreiem Medium pelletiert und wieder suspendiert werden. Die Zellsuspension muss m seinaintained auf Eis zu jeder Zeit Gelierung oder Verfestigung zu verhindern. Es ist wichtig, die Spritzen mit einer 18-Gauge-Nadel, um die Zellen zu lysieren zu vermeiden, zu laden. Wenn die Zellen lysiert werden, wird die Zellsuspension unbrauchbar und kein Tumorwachstum erreicht werden (Abbildung 2). Unmittelbar nach der Injektion erlauben etwa 10 sec für die Zellsuspension vor von der Injektionsstelle zum Entfernen der Nadel zu verfestigen. Die Erstarrungseigenschaften der Suspension erlaubt es uns, die Zellen ohne Leckage von der Injektionsstelle zu injizieren. Der Austritt von Zellen zur Metastasierung als Artefakt führen und nicht von Zelle Verbreitung. Wir haben dieses orthotope Implantation PANC-1 - GFP - Zelllinie optimiert unter Verwendung von 3 x 10 6 Zellen pro 50 & mgr; l Injektion; andere Zelllinie Implantationen muss empirisch ermittelt werden. Höhere Mengen der Einspritzung bis zu 100 & mgr; l enthält 500.000 Zellen wurden in der Literatur 12 berichtet. Die wichtigsten Optimierungsparameter taken zu berücksichtigen waren erfolgreich orthotope Tumorwachstum und positiver Tumor Bildgebung mittels GFP-Fluoreszenz innerhalb von drei Wochen nach der Implantation.
Das Tumorwachstum und die Entwicklung wird nicht nur durch die Anzahl der Zellen injiziert beeinflusst, sondern auch von dem Alter der verwendeten Mäusen. Wir haben athymische Nacktmäuse verwendet und festgestellt, daß im Alter von 6 bis 8 Wochen junge Mäuse unter Verwendung reproduzierbarere Ergebnisse liefert, wenn sie älteren Mäusen verglichen. Da diese Mäuse im Alter von, beginnen sie eine gewisse Immunität wiederzuerlangen, die in Ablehnung der menschlichen Pankreaszellen führen kann. Die Abbildungstechniken, die hier beschrieben sind, nicht auf orthotoper Verwendung beschränkt; sie können auch für heterotope Implantation von Tumoren verwendet werden. Darauf zu achten, Auto-Fluoreszenz zu vermeiden, die den Tumor GFP-Signal verdecken. Bestimmte Kunststoffe für Anästhesie Schläuche verwendet werden, können Autofluoreszenz Artefakte erzeugen.
Fluorescent Ganzkörper - Bildgebung ermöglicht die schnelle Analyse von Tumorwachstum und Progression 13. Ein großer Vorteil der Fluoreszenz unter Verwendung ist die Fähigkeit , 14 Krebs ohne die traditionellen umständliche Verfahren der histopathologischen Untersuchung oder Immunhistochemie zu verfolgen. Dieses Modell verfügt über helle Fluoreszenz und ermöglicht die Bildaufnahme ohne die Notwendigkeit von Hautlappen oder andere Manipulationen. Die Fluoreszenz unterscheidet sich von Biolumineszenz, dass es kein Licht basierend auf einer chemischen Reaktion; es absorbiert nur Licht und reemits es bei einer niedrigeren Frequenz. Orthotopische Xenotransplantatmodellen bieten wertvolles Wissen und Verständnis von Pankreastumorbiologie, die in neuartigen Therapien für den menschlichen Gebrauch übersetzt werden kann.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI media 1640 | Caisson Labs | RPL03-500ML | |
| Fetal Bovine Serum | Gibco | 10437-077 | |
| Penicillin Streptomycin | Thermo Ficher Sci | 15140-122 | |
| Matrigel HC basement membrane, high concentration | Corning | 354248 | |
| SutureVet PGA 6-0 PGA | Henry Schein | 39010 | |
| Alcare or Foamed Antiseptic Handrub | Steris | 639680 | |
| DPBS (Dubelcco's Phosphate-Buffered saline) | Thermo Ficher Sci | 21300025 | |
| TB Syringe 27 G 1/2 | Becton Dickinson | 305620 | |
| Isoflurane | Blutler Schein | 50562 | |
| Ketoprofen | Fort Dodge Animal Health | ||
| Surgical Scissors, 5.5" straight mayo | Henry Schein | 22-1600 | |
| PANC-1 GFP cell line | Anticancer, Inc | ||
| Small Animal Imaging System: iBox Scientia | UVP, LLC. Upland, CA. | Small Animal Imaging System to observe the fluorescent tumor in live animals |
References
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