Introduction
Nematoder med deres små, men komplekse nervesystem har vist sig stærke værktøjer til at forstå mange aspekter af neurobiologi, herunder adfærd. Meget af denne forskning har fokuseret på modelorganismen Caenorhabditis elegans, hvor et væld af forskellige adfærdsmønstre med succes er blevet dissekeret og analyseret. Disse omfatter mechanosensory 3, kemotaktisk 4, thermotactic 5,6 og magnetotactic 7 påvirke parring 8,9, læring 10 og fodring behaviors 11. Men andre mere fjernt beslægtede nematodeart vise adfærd, som ikke er observeret i rhabditid C. elegans eller alternativt vise yderligere niveauer af kompleksitet, hvilket rejser relevante spørgsmål vedrørende deres udvikling og regulering. Kan observeres et tilfælde af dette i fjernt beslægtet diplogastrid nematode Pristionchus pacificus, som viser meget mere kompleks fodring værehaviors og rytmer, end der er observeret i C. elegans 1. Dette er på trods af de to arter deler homologe svælg neuroner 12. Sammenfaldende med disse yderligere fodring adfærd, P. pacificus viser også et udvidet kosten rækkevidde, da de er ivrig rovdyr, i stand til at supplere deres bakterielle kost ved også fodring på larver af andre nematoder. Heldigvis P. Pacificus er udviklet som en model for komparativ og integrativ evolutionær biologi og derfor mange molekylære og genetiske værktøjer er nu tilgængelige. Disse omfatter et fuldt sekventeret og kommenteret genom 13, molekylære og genetiske værktøjer, herunder transgener 14 og CRISPR / Cas9 15,16 samt en detaljeret og godt kommenteret fylogeni 17 med over 25 nært beslægtede arter, herunder sine nyopdagede søster arter. Desuden økologi talrige Pristionchus arter herunder P. Pacificus er vill defineres med mange arter der nu er blevet beskrevet deler en necromenic forening med Scarab biller, en vært de ofte deler med andre nematodeart 18. P. Pacificus giver derfor et glimrende modelsystem med til at dissekere udviklingen af nye adfærd og deres økologiske betydning.
For at analysere aggressiv fodring adfærd i nematodearter såsom P. Pacificus vi udviklet flere nye adfærdsmæssige assays for let observation og kvantificering af røveriske handlinger. Som P. Pacificus viser en dimorfe mund struktur, som i høj grad påvirker aggressiv adfærd, identifikation af den korrekte morphotype er afgørende 1,2. Den smalle mouthed stenostomatous morph indeholder en enkelt stump dorsal tand og ikke udøve nogen aggressiv fodring. Alternativt vid hals eurystomatous morf omfatter et meget større klo formet dorsale tand og en ekstra modståendesub-ventrale tand, der tilsammen fungerer effektivt åbne neglebånd af deres bytte. Forholdet mellem aggressiv eurystomatous til den ikke-aggressiv stenostomatous formular varierer blandt Pristionchus arter og også inden for P. pacificus imidlertid procentdelen af eurystomatous munden morph i P. pacificus vildtypestamme (PS312) er normalt 70 - 90% 2. Derudover kan de munden danner nøgletal svinger afhængigt af forskellige miljømæssige påvirkninger (begge kendt, herunder sult og nogle lille molekyle signalering samt ukendte faktorer), således korrekt identifikation og isolering af aggressiv eurystomatous munden formular er afgørende for en vellykket aggressiv analyser.
Sideløbende beskrivelsen af aggressiv munden formularen har vi udviklet en "bid assay" for direkte observation og kvantificering af røveriske adfærd, herunder bidende, drab og fodring begivenheder. Her byttedyr nematoder isoleres gennem filtering af nyligt udsultede kulturer og udsat for aggressiv voksen P. Pacificus, der observeres sammen over en kort tidshorisont. Derudover har vi også udviklet en high throughput "liget assay" for at lette hurtig screening af aggressiv adfærd ved indirekte observation af røveriske begivenheder. Dette drager fordel af tilstedeværelsen af larvestadium lig som et redskab til at screene for predation. Begge analyser giver nem og meget repeterbare metoder til at observere og måle aggressiv adfærd i nematode arter, såsom P. Pacificus.
Protocol
1. Mouth formular fænotype
- Mouth Form Identifikation på agarose Pads
Bemærk: For at visualisere nematode munden morfer, immobilisere orme med en mild bedøvelse behandling på agarose puder og observere som følger.- Grow og vedligeholde nematode kulturer som P. Pacificus på 6 cm standard nematodevækst medier (NGM) plader og lever af en bakteriel plæne af E. coli OP50 19.
- Gør agarose puder ved først at tilsætte 0,06 g agarose til 3 ml H2O i et 15 ml rør til at gøre 3 ml 2% agaroseopløsning. Dette kan opbevares i op til et år ved 4 ° C.
- Mix og smelte agarose grundigt i en mikrobølgeovn eller alternativt bruge en varme blok indstillet til> 88 ° C.
- Når fuldt smeltet, tilsættes 10 pi af en 10% natriumazid løsning på agarose og bland grundigt. ADVARSEL: Tør natriumazid er reaktiv og alle former er giftige.
- Anvendelse af en 1 mlmikropipette, placere en dråbe af ikke mindre end 300 pi af flydende agarose azid mix på midten af en standard objektglas.
- Før agaren køler, hurtigt anbringe et andet mikroskopobjektglas oven af dråben for at flade agarosen som danner en pude ved afkøling. Gentag for så mange puder som er påkrævet.
- Lige før brug, skræl fra hinanden de glas objektglas ved at skyde dem fra hinanden. Bemærk: Hvis agarose pads er forberedt for langt i forvejen, de kan være alt for tør og kan skade nematoderne.
- For at overføre orme til de anæstetiske agarose puder, placere en dråbe M9-puffer (2 - 3 i pi) på midten af puden. Pick 2 - 3 i unge P. Pacificus voksne ind i dråbe M9 før du placerer en dækglas forsigtigt over puden. P. Pacificus nematoder vil blive immobiliseret i agarose og klar til at visualisere.
- Overfør mikroskopobjektglasset indeholdende den bedøvede orm til en passende mikroskop and observere under 63X Nomarski optik. Kategorisere morph identiteter baseret på følgende funktioner: tilstedeværelsen af en ekstra sub-ventrale tand, forstørret dorsale tand og bredt mundåbning er tegn på en eurystomatous mund morph dyr, mens tilstedeværelsen af en enkelt dorsal tand og smallere mundingsåbning indikerer en stenostomatous dyr (Figur 1).
Bemærk: For at opretholde helbredet af dyret, bør orme opretholdes på agaren pad for ikke mere end 5 min. - Efter munden morph identifikation, genoprette enten eurystomatous eller stenostomatous nematoder som krævet ved at fjerne dækglasset ved forsigtigt at skubbe det ud af agarose pad. Plukke omhyggeligt udvalgte dyr fra agarose pad (E. coli OP50 kan bruges på pick for at gøre det trægt) på friske NGM plader. Tillad nyttiggørelse fra bedøvelsen indtil normal motile adfærd er genoptaget, hvorpå dyrene er klar til yderligere aggressiv analyser.
<li> Rapid Mouth Fænotype - Placer nematoder på standard NGM plader med en bakteriel plæne af E. coli OP50 på mikroskopet visningsområde.
- Detektere forskelle i munden størrelse og bredde. Bemærk: På dette forstørrelse ingen tand lignende strukturer er observerbare derfor identifikation munden morph er udelukkende baseret på brede munde versus smalle munden.
Bemærkning: Alternativt med mere erfaring, mund formular typen kan analyseres uden behov for nogen anæstetisk behandling via et stereomikroskop med høj forstørrelse (150X).
2. Bite Assay
Bemærk: Bidende analyser foretages en grundig aggressiv adfærdsanalyse.
- Grow og vedligeholde nematode kulturer på standard NGM plader (6 cm) og foder på en bakteriel plæne af E. coli OP50 19.
- Gør assayplader ved at dyrke en stor mængde udvalgt prey nematodelarverne såsom C. elegans eller alternatively en passende økologisk relevant bytte. Bemærk: Voksen C. elegans er for store til at være egnet bytte, så det er vigtigt at bruge larvestadiet.
- Vedligehold C. elegans eller andre potentielle byttedyr på standard NGM plader og foder på en bakteriel plæne af E. coli OP50 indtil befolkningen er frisk udsultet, hvilket resulterer i en overflod af ung L1 larver.
Bemærk: Tid til sult afhænger af talrige miljømæssige og eksperimentelle faktorer, herunder antal nematoder bruges til at starte kulturen, mængden af E. coli OP50 tilsat, og den omgivende temperatur.
- Vedligehold C. elegans eller andre potentielle byttedyr på standard NGM plader og foder på en bakteriel plæne af E. coli OP50 indtil befolkningen er frisk udsultet, hvilket resulterer i en overflod af ung L1 larver.
- Vask fire eller flere frisk sultede bytte plader med M9 og videregive ormen løsning gennem to 20 um filtre til at fjerne alle store dyr og eventuelle resterende æg før samling i en 15 ml rør. Kun små larver bør forblive i opløsningen.
- Til dannelse af en larve pellet centrifugeres den filtrerede bytte ved 377 xg i 1 min.
- Screen rovnematoder for den krævede munden morph (protokol 1).
- Brug standard ormen plukke teknikker og en let stereomikroskop 19, overføre korrekt klassificerede rovdyr på assaypladen. Sørge for at overføre så lidt OP50 bakterier som muligt til assaypladen når der overføres rovdyr for at minimere bakteriel forurening. Vent 15 minutter for at tillade ormen at komme sig fra stress af at blive overført og tjekke for vildtype motile adfærd for at sikre orme er ikke blevet beskadiget af overførslen.
Bemærk: Der er ingen grund til at sulte P. pacificus, da de er meget effektive rovdyr af andre nematodelarverne selv mens mætte på bakterier. - Efter genopretning, observere rovdyr hjælp af en lys stereomikroskop i 10 min. Med dette udstyr, observere og karakterisere forskellige fodring begivenheder såsom bidende, kendetegnet ved rovdyr begrænse bevægelsen af byttet, drab, hvor ved en åbning af byttet neglebånd registreres; og fodring, kategoriseret efter en observerbar forbrug af de byttedyr indmaden (figur 2A, B og Movie 1).
- Gentages analysen ved screening og observation af en mindst 10 rovnematoder at sikre nøjagtighed.
Bemærk: 3 pi ren orm pellet på faste assayplader indeholder> 3,000 bytte larver. Dette er tilstrækkeligt til at frembringe hyppig kontakt mellem rovdyr og byttedyr.
3. Corpse Assay
Bemærk: Corpse analyser fremme en hurtigere kvantificering af aggressiv adfærd.
- Grow og vedligeholde nematode kulturer på standard NGM plader og foder på en bakteriel lAWN E. coli OP50 19. Generere triplikater af assaypladerne tidligere nævnte (protokol 2.1 - 2.5).
- Screen rovnematoder for den krævede munden morph som beskrevet i protokol 1. Brug standard ormen plukke teknikker og en lys stereomikroskop transfer 5 aggressiv nematoder med den nødvendige munden morph til hvert assay plade. Lad rovdyr sammen med byttet i 2 timer.
- Efter 2 timer skærmbilledet assaypladen for tilstedeværelsen af tømte lig (figur 2B og C). Identificer lig med fravær af motilitet sammen med åbenlyse morfologiske defekter, herunder utætte indmad eller mangler orm fragmenter.
4. Analyse af svælg og Tand Movement
- Grow og vedligeholde nematode kulturer på standard NGM plader og foder på en bakteriel plæne af E. coli OP50 19. Generere assayplader som tidligere (protokol 2.1 - 2.5) nævnt. Hvis standard 6 cmNGM plader ikke passer mellem det objektive og mikroskop scenen, bruge låget af små 35 mm petriskåle indeholdende 2 ml NGM som et passende alternativ.
- Screen rovnematoder for den krævede munden morph som beskrevet i protokol 1. Brug standard orm plukke teknikker og en let stereomikroskop, overføre en enkelt korrekt klassificeret rovdyr på assaypladen. Vent 15 minutter for at tillade ormen at komme sig fra stress af at blive overført.
- Overhold rovdyr på et mikroskop ved 40 - 63X Normaski, med en high-speed kamera (film 2 og 3). Optag svælg pumpning og tand bevægelse over 15 sek, 50 Hz i mindst 20 dyr for at sikre nøjagtig kvantificering. Replay indspillet film ved den ønskede hastighed for at tælle de enkelte pumper og tand begivenheder.
Bemærk: Pumpning observeres i corpus, placeret i midten af pharynx, mens tand bevægelse kan detekteres i munden åbning og er kun observeres fra ryggens tand.
Representative Results
Efter vellykket identifikation af den passende munden morph i P. kan påvises Pacificus, klare forskelle mellem eurystomatous og stenostomatous dyr (figur 3) med kun de eurystomatous dyr engagere sig i at dræbe adfærd. I stenostomatous dyr synes denne adfærd skal undertrykkes helt. Endvidere forskelle i tanden aktivitet og svælg pumpning af eurystomatous dyr på bakterier og byttedyr (figur 4 og Film 2 og 3) er også indlysende. Mens aggressiv fodring, er at pumpe sats reduceres til under det observeret under bakteriel fodring og tand der registreres bevægelser i en en til en forhold med svælg pumpning. Dette er en potentiel indikation af centrale reguleringsmekanismer modulerer adfærdsmæssige respons på forskellige kost.
s / ftp_upload / 54.404 / 54404fig1.jpg "/>
Figur 1. P. Pacificus har en Mouth dimorphism som påvirker Fodring Behavior. (A) Den eurystomatous munden formen er i stand til predation og har en bred mundingsåbning med en stor klo formet dorsal tand (falsk-farvet rød) og (B) et stort modstående krogformet sub-ventrale tand (falsk-farvet blå). (C) Den stenostomatous mund formular er kun i stand til at fodre på bakterier og har en smallere mund åbning med en flint formet dorsal tand (falsk-farvet rød) og (D) ingen sub-ventrale tand (*). Normaski billeder er 63X og skala bar repræsenterer 10 um. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 3. Resultater af Bite og Corpse Analyser på C. elegans bytte. (A) Bidende adfærd er kun tydelig i eurystomatous munden formularen med denne adfærd ikke vises i stenostomatous dyr. Error søjle repræsenterer standardafvigelsen af 10 gentagelser. (B) Sammenfaldende med ingen bidende adfærd fremgår stenostomatous dyr, liget assays afslører også slagtekroppe udelukkende på assayplader af eurystomatous dyr. Fejl søjle repræsenterer standardafvigelsen af 5 gentagelser. Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 4. Eurystomatous Pumping Vurder og Tand Bevægelse under Predatory Fodring. Tand bevægelse kun observeres, mens eurystomatous dyr er involveret i aggressiv fodring. Det falder også sammen med en reduktion i svælg pumpning. Error søjle repræsenterer standardafvigelsen af 10 replikater. href = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig4large.jpg" target = "_ blank"> Klik her for at se en større version af dette tal.
annonce / 54.404 / 54404movie3.jpg "/>
Movie 3. Zoomet i High-speed kamera af Tooth Bevægelse Under Prædation. (Højreklik for at downloade).
Discussion
Nematoder er et effektivt system til at forstå neurobiologi og adfærd med C. elegans hidtil er den primære værktøj. Dog, mange nematoder arter, herunder P. Pacificus display adfærd, som er fraværende eller varierer i kompleksitet fra modelorganismen C. elegans og derfor rejser fascinerende spørgsmål vedrørende udviklingen og reguleringen af disse adfærdsmønstre. En sådan ekstra adfærd findes i mange andre nematodeart herunder P. Pacificus er evnen til at supplere deres bakteriel kost ved at engagere sig i aggressiv fodring 1, 20. Vi har derfor udviklet og beskrevet en detaljeret protokol til nem og hurtig karakterisering af disse tidligere unanalyzed aggressiv adfærd i nematoder.
For det første har vi tilvejebragt fremgangsmåder til screening for ændringer i fodring apparatur som nematode munden. Identifikationen af den korrekte mund type er et vigtigt første sTEP for en vellykket prædation analyser som, i hvert fald inden for Pristionchus slægten kun eurystomatous dyr er i stand til aggressiv fodring. Det er bedst at identificere munden morphs med "hurtig munden fænotypebestemmelse" protokollen beskrevet i protokol 1.2 da denne metode er langt mindre invasiv og derfor er det mindre sandsynligt, at aggressiv adfærd kan forstyrres. Det anbefales dog, at først blive fortrolig med de forskellige munden strukturer ved identifikation med bedøvede dyr på agar pads (protokol 1.1).
Efter identifikation af den ønskede munden morph, har vi beskrevet to assays til kvantificering aggressiv fodring. Disse er en hurtig, high throughput "liget assay" (protokol 3) og en mere tidskrævende, men mere dybdegående adfærdsanalyse gennem "bid-analysen" (protokol 2). Begge disse protokoller er meget fleksible tillader adskillige modifikationer for at optimere assayene afhængigt af Experimenlæggende krav. For bite assays under anvendelse P. Pacificus rovdyr på C. elegans bytte, observationer af aggressiv adfærdsmæssige interaktioner for et tidsvindue på 10 min var tilstrækkelig til at kvantificere en betydelig mængde af bites sammen med andre fodring begivenheder. For "liget analyser" igen udnytte P. Pacificus rovdyr på C. elegans bytte, 5 rovdyr for 2 timer producerede let kvantificerbare og konsekvente liget tal giver mulighed for hurtig adfærdsanalyse. Imidlertid bør det bemærkes, forskellige arter af aggressiv nematode spil i forskellige hastigheder, spise med forskellige hastigheder og generelt udviser en stor mangfoldighed i andre funktionsmåder 1. Derudover kan forskellige byttedyr også spises på forskellige satser for tilsvarende grunde. Det anbefales derfor at optimere assays baseret på de testede både som rovdyr og byttedyr nematode arter, og også for eventuelle forskelle i miljøforholdene. Under både "bid" og "korpse "analyser er det afgørende, at både bytte og rovdyr er sunde, som understreget eller tilskadekomne rovdyr vil ikke dræbe effektivt. Desuden frisk assayplader er afgørende som ældre plader kan blive tørret ud som krænker sundheden for nematoderne fører til fejlagtige assays. det er også håbet, at fremtidige gentagelser af disse aggressiv analyser vil være i stand til at drage fordel af de seneste teknologiske fremskridt med henblik på at automatisere meget af analysen som er blevet gennemført for at undersøge mange adfærd observeret i C. elegans 21, 22. i øjeblikket problemer vil kunne opstå i nematoder såsom P. Pacificus som de vises meget mere følsomme til at kontakte, hvilket gør isolering og immobilisering i mikrofluide kamre, der kan ophæve aggressiv fodring. overvinde dette kan vise sig udfordrende, men vil lette individuelle nematoder skal screenes for nuanceret aggressiv adfærd.
Endelig har vi også tilvejebragt fremgangsmåder for undersøge nematode fodring apparatet selv lette sammenligninger mellem aggressiv og bakterielle fodring tilstande ved at kvantificere tand og svælg pumpe kinetik ved hjælp af en high-speed kamera (protokol 4). Kvantificeringen af pharyngeal pumpehastigheder i C. elegans er blevet anvendt til at overvåge fodring i mange år 23 imidlertid C. elegans mangler enhver form for munden denticle og også mangler aggressiv adfærd. Ved at kombinere en kvantificering af pharyngeal pumpning med den for tand aktivitet, kan ethvert innervation af tænderne specifikke for predation ligeledes iagttages. På grund af forstørrelsen forpligtet til at overholde tanden bevægelse dyrene bevæger sig ofte ud af fokusplanet, og dermed er det normalt kun er muligt at observere tand for korte tidsvinduer. Derudover, i modsætning til C. elegans, svælget af P. Pacificus ikke kontinuerligt pumpe, snarere den går i perioder med pumpning og fodring. Derfor, for præcis svælg pumping satser mens fodring skal bestemmes, er det vigtigt at registrere 15 sek kontinuerlig fodring.
Disse metoder præsenteres her giver derfor de første rammer for at efterforske aggressiv adfærd i nematoder systemer. Desuden kan de også kunne tilpasses til brug i efterforskningen andre interaktioner inden for nematode økosystem, herunder indflydelsen af yderligere økologisk relevante organismer på prædation herunder mikroorganismer, svampe og mider . de giver således et middel til at dissekere hvordan disse røveriske adfærd er reguleret, hvordan de kan have udviklet sig, og også deres økologiske betydning.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Nylon net filters (20 µm) | Merck Millipore Ltd | NY2004700 | Used to filter worms just leaving larvae for use as prey. |
| PP Funnel for filter (54 mm) | Duran | 292215003 | Used to filter worms just leaving larvae for use as prey. |
| Small petri dish (35/10 mm) | Greiner Bio-One | 627102 | For imaging on High speed camera |
| Zeiss SteREO Discovery V12 | For mouth form identificaton | ||
| Axio-Imager A1 | For mouth form identificaton | ||
| Glass Slides | Roth | H869 | |
| Cover Slips | Roth | 657 | |
| Motion Scope M3 Highspeed camera | IDT | High speed camera | |
| Video zoom 44 ENG 1/2" 0.5X to 2.4X | Zeis | 452984-0000-000 | High speed camera zoom |
| Nematode Growth Medium (NGM) ingredients: | |||
| Agar | Roth | 5210.2 | CAS-Nr. 9002-18-0 |
| Sodium chloride (NaCl) | Roth | 3957 | CAS-Nr. 7647-14-5 |
| Bacto Tryptone | BD | 211699 | Lot 4316614 |
| Calcium chloride dihydrate (CaCl2) | Sigma-Aldrich | C3306 | CAS-Nr. 10035-04-8 |
| Cholesterol from lanolin | Sigma-Aldrich | F 26732 00050 | CAS-Nr. 57-88-5 |
| Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4) | Merck | 1,058,861,000 | CAS-Nr. 10034-99-8 |
| Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) | ACROS organics | 271080025 | CAS-Nr. 7778-77-0 |
| 6 cm petri dish | Greiner Bio-One | 628102 | |
| 3.5 cm petri dish | Greiner Bio-One | 627102 | |
| M9 ingredients: | |||
| Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) | ACROS organics | 271080025 | CAS-Nr. 7778-77-0 |
| Sodium hydrogen phosphate heptahydrate (NaHPO4) | Sigma-Aldrich | S9390-500G-D | CAS-Nr. 7782-85-6 |
| Sodium chloride (NaCl) | Roth | 3957 | CAS-Nr. 7647-14-5 |
References
- Wilecki, M., Lightfoot, J. W., Susoy, V., Sommer, R. J. Predatory feeding behaviour in Pristionchus nematodes is dependent on phenotypic plasticity and induced by serotonin. J Exp Biol. 218 (Pt 9), 1306-1313 (2015).
- Ragsdale, E. J., Muller, M. R., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. A Developmental Switch Coupled to the Evolution of Plasticity Acts through a Sulfatase. Cell. 155 (4), 922-933 (2013).
- Goodman, M. B. Mechanosensation. WormBook. , 1-14 (2006).
- Rankin, C. H. Nematode behavior: the taste of success, the smell of danger! Curr Biol. 16 (3), R89-R91 (2006).
- Beverly, M., Anbil, S., Sengupta, P. Degeneracy and neuromodulation among thermosensory neurons contribute to robust thermosensory behaviors in Caenorhabditis elegans. J Neurosci. 31 (32), 11718-11727 (2011).
- Kimata, T., Sasakura, H., Ohnishi, N., Nishio, N., Mori, I. Thermotaxis of C. elegans as a model for temperature perception, neural information processing and neural plasticity. Worm. 1 (1), 31-41 (2012).
- Vidal-Gadea, A., et al. Magnetosensitive neurons mediate geomagnetic orientation in Caenorhabditis elegans. Elife. 4, (2015).
- Chute, C. D., Srinivasan, J. Chemical mating cues in C. elegans. Semin Cell Dev Biol. 33, 18-24 (2014).
- Sherlekar, A. L., Lints, R. Nematode Tango Milonguero - the C. elegans male's search for the hermaphrodite vulva. Semin Cell Dev Biol. 33, 34-41 (2014).
- Sasakura, H., Mori, I. Behavioral plasticity, learning, and memory in C. elegans. Curr Opin Neurobiol. 23 (1), 92-99 (2013).
- Avery, L., You, Y. J. C. elegans feeding. WormBook. , 1-23 (2012).
- Bumbarger, D. J., Riebesell, M., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. System-wide Rewiring Underlies Behavioral Differences in Predatory and Bacterial-Feeding Nematodes. Cell. 152 (1-2), 109-119 (2013).
- Dieterich, C., et al. The Pristionchus pacificus genome provides a unique perspective on nematode lifestyle and parasitism. Nature Genetics. 40 (10), 1193-1198 (2008).
- Schlager, B., Wang, X. Y., Braach, G., Sommer, R. J. Molecular Cloning of a Dominant Roller Mutant and Establishment of DNA-Mediated Transformation in the Nematode Pristionchus pacificus. Genesis. 47 (5), 300-304 (2009).
- Witte, H., et al. Gene inactivation using the CRISPR/Cas9 system in the nematode Pristionchus pacificus. Dev Genes Evol. 225 (1), 55-62 (2015).
- Lo, T. W., et al. Precise and Heritable Genome Editing in Evolutionarily Diverse Nematodes Using TALENs and CRISPR/Cas9 to Engineer Insertions and Deletions. Genetics. 195 (2), 331-348 (2013).
- Sommer, R. J., McGaughran, A. The nematode Pristionchus pacificus as a model system for integrative studies in evolutionary biology. Molecular Ecology. 22 (9), 2380-2393 (2013).
- Herrmann, M., et al. The nematode Pristionchus pacificus (Nematoda : Diplogastridae) is associated with the oriental beetle Exomala orientalis (Coleoptera:Scarabaeidae) in Japan. Zoological Science. 24 (9), 883-889 (2007).
- Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis. J Vis Exp. (47), e2293 (2011).
- Serobyan, V., Ragsdale, E. J., Sommer, R. J. Adaptive value of a predatory mouth-form in a dimorphic nematode. Proc. R. Soc. B Biol. Sci. 281, 20141334 (2014).
- Albrecht, D. R., Bargmann, C. I. High-content behavioral analysis of Caenorhabditis elegans in precise spatiotemporal chemical environments. Nat Methods. 8 (7), 599-605 (2011).
- Yeminin, E., Jucikas, T., Grundy, L. J., Brown, A. E., Schafer, W. R. A database of Caenorhabditis elegans behavioral phenotypes. Nat Methods. 9 (10), 877-879 (2013).
- Raizen, D. M., Lee, R. Y. N., Avery, L. Interacting Genes Required for Pharyngeal Excitation by Motor Neuron MC in Caenorhabditis elegans. Genetics. 141 (4), 1365-1382 (1995).
