Introduction
Nematoder med sina små men komplexa nervsystem har visat sig vara kraftfulla verktyg för att förstå många aspekter för neurobiologi, inklusive beteende. En stor del av denna forskning har fokuserat på modellorganism Caenorhabditis elegans i vilka en mängd olika beteenden har framgångsrikt dissekeras och analyserats. Dessa inkluderar mechanosensory 3, kemotaktisk 4, thermotactic 5,6 och magnetotactic 7 påverka parning 8,9, lärande 10 och utfodring beteenden 11. Men andra mer avlägset besläktade nematoden arter uppvisar beteenden som inte observeras i rhabditid C. elegans eller alternativt visa ytterligare nivåer av komplexitet, vilket väcker relevanta frågor om deras utveckling och reglering. Ett sådant exempel på detta kan observeras i avlägset besläktade diplogastrid nematod Pristionchus pacificus, som visar mycket mer komplex utfodring varahaviors och rytmer än vad som observerats i C. elegans 1. Detta trots de två arterna dela homologa svalget neuroner 12. Sammanfaller med dessa ytterligare utfodring beteenden, P. pacificus visar också ett utökat kost intervall, eftersom de är ivrig rovdjur, kan komplettera deras bakterie diet genom att också livnär sig på larver av andra nematoder. Lyckligtvis P. pacificus har utvecklats som en modell för jämförande och integrerande evolutionsbiologi och därmed många molekylära och genetiska verktyg finns nu tillgängliga. Dessa inkluderar ett fullt sekvenseras och kommenterad genomet 13, molekylära och genetiska verktyg, inklusive transgener 14 och crispr / Cas9 15,16 samt en detaljerad och väl kommenterad fylogeni 17 med över 25 närbesläktade arter, inklusive dess nyupptäckta systerarter. Dessutom ekologi talrika Pristionchus arter inklusive P. pacificus är vill definieras med många arter har nu beskrivits dela en necromenic förening med scarabskalbaggar, en värd de ofta dela med andra nematoder arter 18. P. pacificus ger därför ett utmärkt modellsystem som att dissekera utvecklingen av nya beteenden och deras ekologiska betydelse.
För att analysera rovdjur utfodring beteenden i nematoder arter såsom P. pacificus vi utvecklat flera nya beteendemässiga analyser för enkel observation och kvantifiering av underprissättning åtgärder. Som P. pacificus visar en dimorphic mun struktur, som starkt påverkar underprissättning, identifiering av den korrekta morphotype är viktigt 1,2. Den smala mun stenostomatous morph innehåller en enda trubbig rygg tand och inte utöva någon underprissättning utfodring. Alternativt inkluderar stor öppning eurystomatous morph en mycket större klo formad dorsala tand och en ytterligare motståendesub-ventrala tand, som tillsammans verkar för att effektivt öppna nagelbanden av sitt byte. Förhållandet mellan den predatory eurystomatous till den icke-predatory stenostomatous formen varierar bland Pristionchus arter och även inom P. pacificus dock andelen eurystomatous mun morph i P. pacificus vildtyp stam (PS312) är vanligtvis 70-90% 2. Dessutom kan munnen bildar förhållandena fluktuerar olika miljöpåverkan (båda kända, inklusive svält och några små signalmolekyl liksom okända faktorer), vilket korrekt identifiering och isolering av rovgiriga eurystomatous munnen formen är en förutsättning för framgångsrika rovdjur analyser.
Vid sidan av beskrivningen av rovdjur munnen formen har vi utvecklat en "bite analys" för direkt observation och kvantifiering av rovdjurs beteenden inklusive bitande, döda och utfodring händelser. Här bytes nematoder isoleras genom filtreringning av nya svalt kulturer och exponeras för aggressiv vuxen P. pacificus, som observeras tillsammans under en kort tidsrymd. Dessutom har vi också utvecklat en hög genomströmning "lik analys" för att underlätta snabb screening av underprissättning genom indirekt observation av rovdjurs händelser. Detta drar fördel av närvaron av larv lik som ett verktyg för att screena för predation. Båda analyserna ger en enkel och mycket repeterbara metoder för observation och mätning av underprissättning i nematoder arter såsom P. pacificus.
Protocol
1. Mun formen Fenotypning
- Mun Form Identifiering på agaros Pads
Obs: För att visualisera nematoden mun morfar, immobilisera maskar med en mild bedövningsmedel behandling på agaros kuddar och observera följande.- Växa och behålla nematod kulturer som P. pacificus på 6 cm standard nematod tillväxt media (NGM) plattor och livnär sig på en bakteriematta av E. coli OP50 19.
- Gör agaros kuddar genom att först tillsätta 0,06 g agaros till 3 ml H2O i en 15 ml rör för att göra 3 ml 2% -ig lösning. Detta kan lagras i upp till ett år vid 4 ° C.
- Blanda och smälta agarosen noggrant i en mikrovågsugn eller använd ett värmeblock satt till> 88 ° C.
- När helt smält, tillsätt 10 ul av en 10% natriumazid lösning på agaros och blanda väl. VARNING: Torr natriumazid är reaktiv och alla former är giftiga.
- Med hjälp av en 1 mlmikropipett, placera en droppe av inte mindre än 300 pl av den flytande agaros azid blandningen på mitten av en standard glas objektglas.
- Innan ägarn svalnar snabbt placera en andra mikroskopglas på toppen av droppen i syfte att platta till agaros, som bildar en dyna vid kylning. Upprepa så många kuddar som krävs.
- Precis före användning, skal isär objektglas genom att skjuta dem med varandra. Obs: Om agaros kuddar bereds för långt i förväg de kan vara alltför torr och kan skada nematoder.
- För att överföra maskar till anestesi agaros kuddar, placera en droppe M9 buffert (2-3 l) på mitten av plattan. Välj 2-3 ung P. pacificus vuxna in i droppe M9 innan du placerar ett täckglas försiktigt över kudden. P. pacificus nematoder kommer att immobiliseras i agarosen och redo att visualisera.
- Överför objektglas innehållande sövd masken till en lämplig mikroskop ennd provet i 63X Nomarski optik. Kategori morf identiteter baserade på följande funktioner: närvaron av en ytterligare underventrala tand, förstorad rygg tand och bred mun öppning är ett tecken på en eurystomatous mun morph djur, medan närvaron av en enda rygg tand och smalare mun öppning indikerar en stenostomatous djur (Figur 1).
Obs: För att bibehålla hälsan hos djuret, bör maskar hållas på agar pad för högst fem minuter. - Efter mun morph identifiering, återhämta sig antingen eurystomatous eller stenostomatous nematoder som krävs genom att ta bort locket glida genom att försiktigt dra bort agarosen pad. Noggrant välja de utvalda djur från agarosen pad (E. coli OP50 kan användas på pick att hjälpa till att göra den klibbigare) på färska NGM tallrikar. Tillåta återhämtning från bedövningen tills normal rörliga beteende har återupptagits på vilka djur är redo för ytterligare rovdjur analyser.
<li> Rapid Mouth Fenotypning - Placera nematoder på standard NGM plattor med en bakteriell gräsmatta av E. coli OP50 på mikroskop visningsområdet.
- Upptäcka skillnader i munnen storlek och bredd. Obs: Vid denna förstoring ingen tand liknande strukturer kan observeras därför mun morph identifiering endast grundar sig på breda munnar kontra smala munnar.
Obs! Du kan med mer erfarenhet, mun formen typ kan analyseras utan behov av någon bedövningsmedel behandling via en stereo med hög förstoring (150X).
2. Bite Assay
Obs: Sticks analyser att en detaljerad rovdjursbeteendeanalys.
- Växa och behålla nematod kulturer på standard NGM plattor (6 cm) och livnär sig på en bakteriematta av E. coli OP50 19.
- Göra analysplattor genom att odla en stor kvantitet av valda byten nematodlarver såsom C. elegans eller alnativt en lämplig ekologiskt relevant byte. Obs: Vuxen C. elegans är för stora för att vara lämpliga byten så det är viktigt att använda larvstadiet.
- Upprätthålla C. elegans eller andra potentiella bytesdjur på standard NGM plattor och foder på en bakteriematta av E. coli OP50 tills befolkningen nyligen svalt, vilket resulterar i ett överflöd av unga L1 larver.
Obs: Tid för svält är beroende av ett stort antal miljö- och experimentella faktorer, bland annat antalet nematoder som används för att starta kultur, mängden E. coli OP50 sattes och den omgivande temperaturen.
- Upprätthålla C. elegans eller andra potentiella bytesdjur på standard NGM plattor och foder på en bakteriematta av E. coli OP50 tills befolkningen nyligen svalt, vilket resulterar i ett överflöd av unga L1 larver.
- Tvätta fyra eller fler färsk svalt bytes plattor med M9 och passera masken lösningen genom två 20 pm filter för att ta bort alla stora djur och alla ägg som är kvar innan samlingen i en 15 ml tub. Endast små larver bör förbli i lösningen.
- För att bilda ett larv pellet centrifugera den filtrerade rov vid 377 xg under 1 min.
- Skärm rovdjur nematoder för önskad munnen morph (protokoll 1).
- Med användning av standardsnäck plocka tekniker och en lätt stereo 19, överföra korrekt klassificerade rovdjur på analysplattan. Var noga med att överföra så lite OP50 bakterier som möjligt till analysplattan vid överföring rovdjur för att minimera bakteriell kontamination. Vänta 15 minuter för att tillåta masken att återhämta sig från den stress som överförs och kontrollera vildtyp rörliga beteende för att säkerställa maskar har inte skadats av överföringen.
Obs: Det finns ingen anledning att svälta P. pacificus, eftersom de är mycket effektiva rovdjur i andra nematodlarver även när väl matas på bakterier. - Efter återhämtning, observera rovdjur med hjälp av en lätt stereo under 10 minuter. Med denna utrustning, observera och karakterisera olika utfodrings händelser såsom bitande, kännetecknas av rovdjur att begränsa rörelse byte, döda, där genom en öppning av bytet nagelband upptäcks; och utfodring, kategoriserade efter en observerbar konsumtion av bytes innanmätet (Figur 2A, B och film en).
- Upprepa analysen genom screening och observera minst 10 enskilda predatory nematoder att säkerställa noggrannheten.
Obs: 3 il ren masken pellets på standardanalysplattorna innehåller> 3000 byte larver. Detta är tillräckligt för att generera täta kontakter mellan rovdjur och bytesdjur.
3. Corpse Assay
Obs: Corpse analyser underlätta en snabbare kvantifiering av underprissättning.
- Växa och behålla nematod kulturer på standard NGM plattor och livnär sig på en bakteriell lawn av E. coli OP50 19. Generera triplikat av analysplattorna tidigare nämnda (protokoll 2,1-2,5).
- Skärm rovdjur nematoder för önskad munnen morf som beskrivs i protokoll 1. Med användning av standardsnäck plocka tekniker och en lätt stereoöverföring 5 rovdjur nematoder med erforderlig munnen morph till varje analysplatta. Lämna rovdjuren tillsammans med byte för två timmar.
- Efter 2 h skärm analysplattan med avseende på närvaro av tömda lik (figur 2B och C). Identifiera lik genom frånvaron av rörlighet tillsammans med uppenbara morfologiska defekter inklusive läckande inälvor eller saknas mask fragment.
4. Analys av Pharyngeal och tand rörelse
- Växa och behålla nematod kulturer på standard NGM plattor och livnär sig på en bakteriematta av E. coli OP50 19. Generera analysplattor som tidigare (protokoll 2,1-2,5) nämns. Om standard 6 cmNGM plattor passar inte mellan målet och mikroskop scenen, använd locket på små 35 mm petriskålar innehållande 2 ml NGM som ett lämpligt alternativ.
- Skärm rovdjur nematoder för önskad munnen morf som beskrivs i protokoll 1. Använd standard mask plocka tekniker och en lätt stereo, överföra en enda korrekt klassificeras rovdjur på analysplattan. Vänta 15 minuter för att tillåta masken att återhämta sig från den stress som överförs.
- Följ rovdjur på en mikroskop vid 40 - 63X Normaski, med en höghastighetskamera (filmer 2 och 3). Spela svalget pumpning och tand rörelse över 15 sekunder, vid 50 Hz i åtminstone 20 djur för att säkerställa korrekt kvantifiering. Replay inspelade filmer på önskad hastighet för att räkna enskilda pumpar och tand händelser.
Obs: Pumpning observeras i corpus, som ligger i mitten av svalget, medan tand rörelse kan detekteras i mynningen och är bara observeras från rygg tanden.
Representative Results
Efter framgångsrik identifiering av den lämpliga munnen morf i P. pacificus, tydliga skillnader mellan eurystomatous och stenostomatous djur kan upptäckas (Figur 3) med endast eurystomatous djur som bedriver döda beteende. I stenostomatous djur detta beteende tycks undertryckas helt. Vidare skillnader i tand aktivitet och svalg pumpning av eurystomatous djur på bakterier och byte (Figur 4 och filmer 2 och 3) är också uppenbara. Medan aggressiv utfodring, är pumphastigheten reduceras under den som observerades under bakteriell matning och tand rörelse detekteras i en 1-1-förhållande med svalg pumpning. Detta är en potentiell indikation på viktiga regleringsmekanismer som modulerar beteende svar på olika kost.
s / ftp_upload / 54404 / 54404fig1.jpg "/>
Figur 1. P. pacificus har en mun dimorphism som påverkar ätbeteende. (A) eurystomatous mun formen är i stånd att predation och har en bred mun öppning med en stor klo formad rygg tand (falskt färgad röd) och (B) en stor motsatt krokformade sub-ventrala tand (falskt färgad blå). (C) Den stenostomatous mun formen är endast kunna livnära sig på bakterier och har en smalare mun öppning med en flinta formad rygg tand (falskt färgad röd) och (D) ingen sub-ventrala tanden (*). Normaski bilder är 63X och skala stapel representerar 10 mikrometer. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Resultat från Bite och Corpse analyser på C. elegans rovet. (A) Bitande beteende är bara uppenbar i eurystomatous munnen form med detta beteende inte i stenostomatous djur. Felstapel representerar standardavvikelsen för 10 replikat. (B) sammanfaller med någon bitande beteende framgår stenostomatous djur, lik analyser avslöjar också slaktkroppar bara på analysplattor av eurystomatous djur. Felstapel representerar standardavvikelsen för 5 upprepningar. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 4. Eurystomatous pumphastighet och tand Rörelse under Predatory Feeding. Tooth rörelse endast observeras när eurystomatous djur är engagerade i underprissättning utfodring. Detta sammanfaller också med en minskning av svalg pumpning. Felstapel representerar standardavvikelsen för 10 replikat. href = "https://www.jove.com/files/ftp_upload/54404/54404fig4large.jpg" target = "_ blank"> Klicka här för att se en större version av denna siffra.
ad / 54.404 / 54404movie3.jpg "/>
Film 3. Inzoomad höghastighetskamera av tand rörelse under Predation. (Högerklicka för att ladda ner).
Discussion
Nematoder ge ett kraftfullt system för att förstå neurobiologi och beteende med C. elegans hittills är det viktigaste verktyget. Men många nematoder arter, inklusive P. pacificus visa beteenden som är frånvarande eller varierar i komplexitet från modellorganism C. elegans och därmed höja fascinerande frågor om utveckling och reglering av dessa beteenden. En sådan ytterligare beteenden som finns i många andra nematoder arter, inklusive P. pacificus är förmågan att komplettera sin bakterie kost genom att delta i rovdjurs utfodring ett 20. Därför har vi utvecklat och beskrivit ett detaljerat protokoll för enkel och snabb karaktärisering av dessa tidigare oanalyserade rovdjurs beteenden i nematoder.
För det första har vi tillhandahållit metoder för att screena för variationer i matningsanordningen i nematoden munnen. Identifieringen av rätt mun typ är ett viktigt första sTep för framgångsrika predation analyser som, åtminstone inom Pristionchus släktet endast eurystomatous djur klarar av underprissättning utfodring. Det är bäst att identifiera munnen morfar med "snabba mun fenotypning" protokoll som beskrivs i protokoll 1,2 eftersom denna metod är mycket mindre invasiv och därför är det mindre troligt att rovdjurs beteenden kan störas. Det är dock rekommenderas att först bekanta sig med de olika mun strukturer genom identifiering med bedövade djur på agar kuddar (protokoll 1,1).
Efter identifiering av den önskade munnen morf, har vi beskrivit två analyser för att kvantifiera predatory utfodring. Dessa är en snabb, hög genomströmning "lik analys" (protokoll 3) och en mer tidskrävande men mer djupgående beteendeanalys genom "bita analys" (protokoll 2). Båda dessa protokoll är mycket flexibla vilket möjliggör flera modifieringar för att optimera analyserna beroende på experimenTal krav. För bett analyser med användning av P. pacificus rovdjur på C. elegans rov, observationer av predatory beteende interaktioner för ett tidsfönster på 10 min var tillräcklig för att kvantifiera en betydande mängd av bites tillsammans med andra händelser utfodrings. För "liket analyser" igen utnyttjar P. pacificus rovdjur på C. elegans byte, 5 rovdjur under 2 timmar producerade lätt kvantifierbara och konsekventa liket nummer som möjliggör snabb beteendeanalys. Emellertid bör det noteras olika arter av predatory nematod rör sig med olika hastigheter, äta i olika takt och allmänt uppvisar en stor mångfald i andra beteenden 1. Dessutom kan olika bytesdjur också ätas i olika takt för liknande skäl. Det rekommenderas därför att optimera analyser baserade på nematoden arter testade både rovdjur och bytesdjur, och även för eventuella skillnader i miljöförhållanden. Under både "bite" och "corpse "analyser är det viktigt att både byte och rovdjur är friska, så stressade eller skadade rovdjur kommer inte döda effektivt. Dessutom färska analysplattor är viktigt eftersom äldre plattor kan bli uttorkad vilket negativt påverkar hälsan hos de nematoder som leder till felaktiga analyser. Förhoppningen är också att framtida iterationer av dessa rovdjurs analyser kommer att kunna dra nytta av de senaste framstegen inom teknik för att automatisera mycket av analysen som har åstadkommits för att undersöka många beteenden som observerats i C. elegans 21, 22. för närvarande problem kommer sannolikt att uppstå i nematoder såsom P. pacificus eftersom de verkar mycket mer känsliga för kontakt, vilket gör isolering och immobilisering i mikroflödeskammare som kan upphäva rovdjurs matning. att övervinna detta kan vara utmanande men skulle underlätta enskilda nematoder som ska screenas för subtilare underprissättning beteenden.
Slutligen har vi också metoder for undersöka nematoden matningsanordningen själv underlätta jämförelser mellan rovdjur och bakterieutfodringslägen genom att kvantifiera tand och svalgpump kinetik med hjälp av en höghastighetskamera (protokoll 4). Kvantifiering av svalgpumphastigheter i C. elegans har använts för att övervaka utfodring under många år 23 dock C. elegans saknar varje form av mun LITEN TAND och även saknar underprissättning beteenden. Genom att kombinera kvantifieringen av svalget pumpa med den för tand aktivitet kan någon innervation av tänderna som är specifika för predation kan också observeras. På grund av förstoringen som krävs för att följa tandrörelsen djuren rör sig ofta av fokalplanet, det är därför oftast bara möjligt att observera tand för korta tidsfönster. Dessutom, till skillnad C. elegans, svalget av P. pacificus inte kontinuerligt pumpa, snarare bedriver perioder av pumpning och utfodring. Därför, för noggrann svalg pumping takt medan utfodring som skall bestämmas, är det viktigt att spela in 15 sek av kontinuerlig matning.
Dessa metoder presenteras här ger därför den första ramen för att utreda rovdjur beteenden i nematod system. Dessutom, de kan också vara anpassningsbar för användning vid undersökning övriga interaktioner inom nematoden ekosystemet inklusive påverkan av ytterligare ekologiskt relevanta organismer predation inklusive mikroorganismer, svampar och kvalster . Således ger de en möjlighet att dissekera hur dessa rovgiriga beteenden regleras, hur de kan ha utvecklats och även deras ekologiska betydelse.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Nylon net filters (20 µm) | Merck Millipore Ltd | NY2004700 | Used to filter worms just leaving larvae for use as prey. |
| PP Funnel for filter (54 mm) | Duran | 292215003 | Used to filter worms just leaving larvae for use as prey. |
| Small petri dish (35/10 mm) | Greiner Bio-One | 627102 | For imaging on High speed camera |
| Zeiss SteREO Discovery V12 | For mouth form identificaton | ||
| Axio-Imager A1 | For mouth form identificaton | ||
| Glass Slides | Roth | H869 | |
| Cover Slips | Roth | 657 | |
| Motion Scope M3 Highspeed camera | IDT | High speed camera | |
| Video zoom 44 ENG 1/2" 0.5X to 2.4X | Zeis | 452984-0000-000 | High speed camera zoom |
| Nematode Growth Medium (NGM) ingredients: | |||
| Agar | Roth | 5210.2 | CAS-Nr. 9002-18-0 |
| Sodium chloride (NaCl) | Roth | 3957 | CAS-Nr. 7647-14-5 |
| Bacto Tryptone | BD | 211699 | Lot 4316614 |
| Calcium chloride dihydrate (CaCl2) | Sigma-Aldrich | C3306 | CAS-Nr. 10035-04-8 |
| Cholesterol from lanolin | Sigma-Aldrich | F 26732 00050 | CAS-Nr. 57-88-5 |
| Magnesium sulfate heptahydrate (MgSO4) | Merck | 1,058,861,000 | CAS-Nr. 10034-99-8 |
| Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) | ACROS organics | 271080025 | CAS-Nr. 7778-77-0 |
| 6 cm petri dish | Greiner Bio-One | 628102 | |
| 3.5 cm petri dish | Greiner Bio-One | 627102 | |
| M9 ingredients: | |||
| Potassium dihydrogen phosphate (KH2PO4) | ACROS organics | 271080025 | CAS-Nr. 7778-77-0 |
| Sodium hydrogen phosphate heptahydrate (NaHPO4) | Sigma-Aldrich | S9390-500G-D | CAS-Nr. 7782-85-6 |
| Sodium chloride (NaCl) | Roth | 3957 | CAS-Nr. 7647-14-5 |
References
- Wilecki, M., Lightfoot, J. W., Susoy, V., Sommer, R. J. Predatory feeding behaviour in Pristionchus nematodes is dependent on phenotypic plasticity and induced by serotonin. J Exp Biol. 218 (Pt 9), 1306-1313 (2015).
- Ragsdale, E. J., Muller, M. R., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. A Developmental Switch Coupled to the Evolution of Plasticity Acts through a Sulfatase. Cell. 155 (4), 922-933 (2013).
- Goodman, M. B. Mechanosensation. WormBook. , 1-14 (2006).
- Rankin, C. H. Nematode behavior: the taste of success, the smell of danger! Curr Biol. 16 (3), R89-R91 (2006).
- Beverly, M., Anbil, S., Sengupta, P. Degeneracy and neuromodulation among thermosensory neurons contribute to robust thermosensory behaviors in Caenorhabditis elegans. J Neurosci. 31 (32), 11718-11727 (2011).
- Kimata, T., Sasakura, H., Ohnishi, N., Nishio, N., Mori, I. Thermotaxis of C. elegans as a model for temperature perception, neural information processing and neural plasticity. Worm. 1 (1), 31-41 (2012).
- Vidal-Gadea, A., et al. Magnetosensitive neurons mediate geomagnetic orientation in Caenorhabditis elegans. Elife. 4, (2015).
- Chute, C. D., Srinivasan, J. Chemical mating cues in C. elegans. Semin Cell Dev Biol. 33, 18-24 (2014).
- Sherlekar, A. L., Lints, R. Nematode Tango Milonguero - the C. elegans male's search for the hermaphrodite vulva. Semin Cell Dev Biol. 33, 34-41 (2014).
- Sasakura, H., Mori, I. Behavioral plasticity, learning, and memory in C. elegans. Curr Opin Neurobiol. 23 (1), 92-99 (2013).
- Avery, L., You, Y. J. C. elegans feeding. WormBook. , 1-23 (2012).
- Bumbarger, D. J., Riebesell, M., Rodelsperger, C., Sommer, R. J. System-wide Rewiring Underlies Behavioral Differences in Predatory and Bacterial-Feeding Nematodes. Cell. 152 (1-2), 109-119 (2013).
- Dieterich, C., et al. The Pristionchus pacificus genome provides a unique perspective on nematode lifestyle and parasitism. Nature Genetics. 40 (10), 1193-1198 (2008).
- Schlager, B., Wang, X. Y., Braach, G., Sommer, R. J. Molecular Cloning of a Dominant Roller Mutant and Establishment of DNA-Mediated Transformation in the Nematode Pristionchus pacificus. Genesis. 47 (5), 300-304 (2009).
- Witte, H., et al. Gene inactivation using the CRISPR/Cas9 system in the nematode Pristionchus pacificus. Dev Genes Evol. 225 (1), 55-62 (2015).
- Lo, T. W., et al. Precise and Heritable Genome Editing in Evolutionarily Diverse Nematodes Using TALENs and CRISPR/Cas9 to Engineer Insertions and Deletions. Genetics. 195 (2), 331-348 (2013).
- Sommer, R. J., McGaughran, A. The nematode Pristionchus pacificus as a model system for integrative studies in evolutionary biology. Molecular Ecology. 22 (9), 2380-2393 (2013).
- Herrmann, M., et al. The nematode Pristionchus pacificus (Nematoda : Diplogastridae) is associated with the oriental beetle Exomala orientalis (Coleoptera:Scarabaeidae) in Japan. Zoological Science. 24 (9), 883-889 (2007).
- Chaudhuri, J., Parihar, M., Pires-daSilva, A. An Introduction to Worm Lab: from Culturing Worms to Mutagenesis. J Vis Exp. (47), e2293 (2011).
- Serobyan, V., Ragsdale, E. J., Sommer, R. J. Adaptive value of a predatory mouth-form in a dimorphic nematode. Proc. R. Soc. B Biol. Sci. 281, 20141334 (2014).
- Albrecht, D. R., Bargmann, C. I. High-content behavioral analysis of Caenorhabditis elegans in precise spatiotemporal chemical environments. Nat Methods. 8 (7), 599-605 (2011).
- Yeminin, E., Jucikas, T., Grundy, L. J., Brown, A. E., Schafer, W. R. A database of Caenorhabditis elegans behavioral phenotypes. Nat Methods. 9 (10), 877-879 (2013).
- Raizen, D. M., Lee, R. Y. N., Avery, L. Interacting Genes Required for Pharyngeal Excitation by Motor Neuron MC in Caenorhabditis elegans. Genetics. 141 (4), 1365-1382 (1995).
