Summary
פרוטוקול זה מדגים כיצד לבצע הקלטת תיקון מהדק כל תא על נוירונים ברשתית מן הכנת שטוח הר.
Abstract
הרשתית היונקת היא רקמה שכבתית מורכבת סוגי נוירונים מרובים. כדי להבין כיצד חזותי אותות מעובדים בתוך הרשת הסינפטי המורכבת שלה, הקלטות אלקטרו משמשות לעתים קרובות כדי ללמוד קשרים בין נוירונים בודדים. יש לנו אופטימיזציה הכנה שטוח הר עבור צמד תיקון הקלטה של נוירונים מסומנים גנטי בשני GCL (שכבת תא גנגליון) ו INL (שכבת גרעין פנימית) של רשתית עכבר. נוירונים INL הקלטה שטוח mounts הוא מועדף על פרוסות בגלל קשרים אנכיים וצידית נשמרים בתצורה לשעבר, המאפשר מעגלי רשתית עם רכיבים לרוחב גדולים כדי להיחקר. השתמשנו בהליך זה כדי להשוות תשובות של נוירונים-שותפה מראים רשתית כגון תאי amacrine מספרים כולינרגית (צקים).
Protocol
אישור אתי - נהלים הקשורים בנושאי בעלי חיים בוצעו בהתאם לכללים וההתקנות של ה- National Institutes of הנחיות בריאות חיות מחקר, כפי שאושר על ידי הטיפול בבעלי החיים המוסדי ועדת השימוש של ביילור לרפואה.
חיצוני 1. ופתרונות פנימיים
- השתמש בתמיסת רינגר היונק במהלך דיסקציה רשתית כפתרון החיצוני הקלטת אלקטרו שלאחר מכן. הכן את הפתרון של יונקי רינגר מ 10x פתרון מניות (ללא סידן) ביום ההקלטה, ולהוסיף CaCl 2 טיפה חכמה לאחר 15 דקות של carbogenation (95% O 2, 5% CO 2). הפתרון 1x הסופי מכיל (מ"מ): 120 NaCl, KCl 5, 25 NaHCO 3, 0.8 Na 2 4 HPO, 0.1 לאא 2 4 PO, 2 CaCl 2, 1 MgSO 4 ו -10 D- גלוקוז.
- השתמש בשני פתרונות פנימיים לאפיין תנודות SAC. מִבְחָןהתועלת של פתרונות מוכנים מראש הצמד תיקון הקלטות ממושך כל תא על RGCs עכבר בוגר ולאחסן את אצוות מאומת 500 aliquots μl ב -20 ° C עד השימוש.
- להקלטת תנודה פוטנציאל הממברנה, להשתמש בפתרון פנימי מבוסס אשלגן המכיל (מ"מ): 125 K-גלוקונאט, 8 NaCl, 4 ATP-Mg, 0.5 Li-GTP, 5 EGTA, 10 HEPES ו -0.2% biocytin (w / v). התאם ל- pH 7.3 עם KOH.
- להקלטת מעוררים וזרמים postsynaptic מעכבות, להשתמש בפתרון פנימי מבוססי צזיום המכיל (מ"מ): 100 Cs-methanesulfonate, 8 NaCl, 4 ATP-Mg, 0.5 Li-GTP, 5 EGTA, 10 HEPES ו -0.2% biocytin ( w / v). התאם ל- pH 7.3 עם CsOH.
2. הכנה לקראת יום הקלטה
- כדי להכין קרום nitrocellulose עם חורים פתוחים, באופן ידני אגרוף הממברנה עם אגרופן אישית עשוי מחט מזרק קהה 16 G ולשטח קרום בין שני לוחות זכוכית נקי. במשך מותקן בכלהר הרשתית, לעשות חור מרכזי 0.2 מ"מ קוטר ולהקיף אותו ב -4 חורים גדולים כי הם 1-1.2 מ"מ קוטר.
- כדי לבצע נימה מילוי חוזר אישית לטעינת פתרון פנימי לתוך אלקטרודות, להמיס קצה פיפטה 10 μl באמצע בעדינות להאריך את החלק נמס עד שהוא מתקרר ומתקשה. רק לפני השימוש, השתמש סכין גילוח נקי לקצץ הנימה עד שהוא מעט יותר מאשר טפטפות התיקון.
- משוך טפטפות תיקון ב חולץ לתכנות מ שפופרת זכוכית בורוסיליקט עם נימה פנימית. לייצר את micropipettes ביום הניסוי ולהשתמש בהם מיד.
הערה: לקבלת צקי הקלטה, אנו משתמשים בהגדרה החולצת הבאה: חום: 484; למשוך: 0; מהירות: 25; זמן השהיה: 1; לחץ: 400 וערך הרמפה של 462. את OD ומזהה של צינורות בורוסיליקט הם 1.65 מ"מ ו -1.0 מ"מ, בהתאמה. התנגדות של טפטפות היא 10-14 MΩ. - אחת hr לפני קציר רקמות, להפשיר צינור של פתרון פנימי ידי שאקיng זה על מערבולת עבור> 30 דק '.
3. רשתית Dissection
- להרדים את החיה על ידי isoflurane 4% חמצן עד שבעל החיים מאבדים את היענות קמצוץ בוהן. להקריב את החיה על ידי נקע בצוואר הרחם.
- חותכים שתי העיניים את עצבי הראייה ב 1-2 מ"מ הרחק ראשי עצב הראייה עם איריס מספריים ישר הצביע.
- מגלגלים את העיניים על מגבת נייר נקייה להסיר דם ואז לטבול אותם הפתרון של carbogenated יונקים רינגר. פאנץ חור על לימבוס עם מחט 23 G ולחצות את העיניים על ידי חיתוך לאורך לימבוס עם מספריים מיקרו. הסר את הקרנית ואת העדשה באמצעות מלקחיים בסדר.
- לקבלת ברשתית כל הר, לקלף בעדינות הרשתית כולה את האפיתל פיגמנט עם מלקחיים בסדר ולעשות ארבעה חתכים 1.5-2 מ"מ מאונך מהקצה כלפי ראש עצב הראייה.
- לטבול קרום nitrocellulose אגרוף לתוך צלחת ובעדינות לגרור את הרשתית על זה עםפונה כלפי מעלה GCL. מניח את ראש עצב הראייה לתוך החור במרכז בעת הכנת רשתית כל הר. מעבירים את הממברנה עם הרשתית לעוד צלחת נקייה. בעדינות לשטח את הרשתית עם מברשת צבע עדינה להיראות כמו כלאה מלטזית ולהניח את כל ארבעת קצוות על החורים.
- אם חלק של הרשתית הוא לבחון בכל פעם, לחתוך כל עיינית מוכן משלב 3.3 לתוך 3-4 חתיכות עם סכין גילוח עם האפיתל פיגמנט נשאר מחובר. הגנו על חתיכות בשימוש מן האור בתמיסה carbogenated חיצוניים ולהשתמש בהם בתוך 12 שעות.
- כתם הממברנה nitrocellulose עם פיסת נייר סינון יבש להסיר את קרום הגבלת זגוגי והפנימי עם מלקחי מברשת צבע.
- ודא כי כל קצות הרשתית מחוברים באופן מלא על הקרום לפני העברת ההרכבה לתוך תא ההקלטה עם תלוש כיסוי זכוכית אטום בתחתית. אבטח את הממברנה עם ואקום גריז כדי להחליק את המכסה ואת rehydratדואר הרשתית עם הפתרון החיצוני. היזהר שלא מלכודת כל בועות אוויר מתחת ההרכבה.
- הגדר את התא לבמה של מיקרוסקופ זקוף. Perfuse את החדר עם חם (34-35 מעלות צלזיוס) פתרון חיצוני carbogenated בשיעור של ~ 3 מ"ל לדקה.
- בדוק את הרשתית תחת עדשה אובייקטיבי 10x הראשון, ולאחר מכן להשתמש עדשת מים טבילה 60x לראות נוירונים GCL ו INL תחת התערבות ההפרש לעומת זאת (DIC) ו / או epifluorescence. כדי להמחיש שקי להביע tdTomato, השתמש לבן LED מקור אור בשילוב עם מסנן עירור של 554 ננומטר מסנן פליטה של 581 ננומטר.
4. הקלטת Whole-cell צמד תיקון מ רשתית שטוח ההר
- סנן את הפתרון הפנימי דרך פילטר מזרק לתוך נימת המילוי החוזרת המותאם אישית.
- הכנס את הנימה לתוך micropipette טרי משך לוותר על הפתרון הפנימי סמוכים לקצה עד הפתרון מכסה חוט האלקטרודה הכסף עבור>5 מ"מ. הדקו את micropipette על בעל אלקטרודה עם מוט שאיבה, שדרכו הלחץ בתוך האלקטרודה יכול להיות מותאם על ידי לדחוף או למשוך את הבוכנה של מזרק פלסטיק 10 מ"ל צינור המחובר.
- מצא פיפטה תחת המטרה להפיל אותו ~ 100 מיקרומטר מעל הרשתית. על פי מצב-חסיד הנוכחי (אני = 0), השתמש לקזז DC לאפס את האות מתח DC עומד. מדוד את התנגדות פיפטה תחת המהדק הנוכחי (אני קלאמפ) מצב על ידי הזרקת זרמי גל מרובע משרעת קבוע דרך פיפטה בזמן שהוא באמבטיה ולנטרל את ההבדל על ידי סיבוב ידית Raccess. השתמש קריאה על הידית Raccess לחשב התנגדות פיפטה ידי חוק אוהם.
- לאט לאט מביאים את האלקטרודה אל ~ 10 מיקרומטר מעל הרשתית. החל לחץ חיובי אל האלקטרודה. צפה שינוי ההשתקפות ליד קץ פיפטה כפי שהוא מתקרב הרשתית. במהירות אבל להכריח פיפטה בעדינות לתוך GCL ולהפחית את pressu החיוביתמחדש מיד.
- הזז את פיפטה לעבר נוירון שכותרתו. הימנע פניית נוירונים אחרים, כלי דם endfeet של תאי מולר. החל יותר לחץ חיובי אם הדבר יידרש כדי למנוע סתימת האלקטרודה.
- מקם את קצה פיפטה ליד קו האמצע של נוירון שכותרתו עד גומה גלויה. שחרר את הלחץ החיובי ולאפשר קרום הפלזמה להתאושש על קצה פיפטה.
- החל 20 עד 120 PA זרמים שליליים אל פיפטה לעזור היווצרות חותם גיגה אוהם. למרוח שאיבה עדינה במידת הצורך למשוך את קרום התא אל פיפטה. מתן 5 דקות לאחר היווצרות חותמת כדי לקרוע את קרום התא. הדבר זה מאפשר הפתרון הפנימי נשפך להיות מסומן על ידי superfusion. לקרוע את הקרום על ידי שאיבה עדינה.
- לאחר קרע הקרום ובעוד במצב מהדק הנוכחי, לעבור על איזון גשר לערוך אותו באמצעות ידית Raccess.
הערה: עבור תאים קטנים כמו SAC, נדרשת התאמה קלה בלבד, אם בכלל. Alternatively, מעורר שיא זרמי postsynaptic מעכבים במצב מהדק מתח (קלאמפ V) על ידי לחיצה על תא פוטנציאלי היפוך של כלוריד (סביב -75 mV) ו גלוטמט (סביב 0 mV), בהתאמה. בדוק ולשנות את מיקום פיפטה במידת הצורך כדי להתאים הרשתית מזדמנים ו / או להיסחף micromanipulator. - כדי להקליט פוטנציאל הממברנה או שינוי הנוכחי לפני, במהלך ואחרי טיפול תרופתי, להכין חוסמי הסינפטי (למשל, CNQX, AP5, picrotoxin, tubocurarine, וכו ') ווסתים ערוץ (למשל, flupirtine, דופמין, חומצה meclofenamic, וכו') טריים על יום הניסוי ממניות קפוא. לדלל את התרופות עם הפתרון של carbogenated רינגר. וליישמם באופן יצווה באמצעות זלוף.
- לאחר ההקלטה, להסיר את פיפטה בעדינות סומה. מעבירים את הרכבה מהאולם אל צלחת נקייה. ניתוק מחדש לצרף את הרשתית על עוד קרום nitrocellulose בברוטליות ללא חול אגרוףes כדי להבטיח שטיחות רשתית במהלך קיבעון.
- תקן את הרשתית על ידי טבילה אותו paraformaldehyde 4% למשך 30 דקות ב RT. הסר את הרשתית מן הקרום nitrocellulose ולשטוף אותו בהרחבה עם 1x PBS. לחשוף את המורפולוגיה של התאים שרשמה O / מכתים N עם streptavidin צבען מצומדות מדולל 1x PBS עם 0.4% Triton X-100 ב 4 ° C 14. הר הרשתית במדיום antifade ולבחון תאים רשמו באמצעות מיקרוסקופ confocal סריקה.
הערה: נהלים מעורבים paraformaldehyde, אשר תנודתי רעילה, צריכים להתנהל בתא טיוטת בטיחות.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
קלטות נציג וחוץ צקי OFF-סוג של רשתית עכבר deafferentated מוצגות באיור 1. תאים כולינרגית בשני GCL ו INL ניתן לזהות באופן אמין על ידי קרינת tdTomato וממוקדת להקלטת מהדק תיקון כל תא תחת DIC (איור 1 א) לחשוף תנודה של הפוטנציאלים הממברנה שלהם (עקבות למעלה) ואת הזרמים סינפטיים המניעים אותם (עקבות תחתונות, איור 1B). זרמים סינפטיים מעכבים ו מעוררים מתגלים על ידי החזקת התאים ב 0 mV ו -75 mV, בהתאמה, בתנאים מהדקים מתח (איור 1B, עקבות תחתונות). Arborization ורמות ריבוד אופיינית SAC הדנדריטים ב IPL (תרשים 1C) ניתן דמיינו ידי מכתים streptavidin פוסט הוק עבור biocytin dialyzed פנימי. את המקצב ותדיר תנודות פוטנציאל הממברנה ושינויים הנוכחיים postsynaptic יכוללכימות על ידי חישוב צפיפות ספקטרלית כוח. המצור תרופתי, או היעדרה, שניתן להשתמש בהם כדי להבחין מנגנוני הסינפטי שונים שבבסיס תנודה פוטנציאל הממברנה 7.
איור 1. הפוטנציאלים מורפולוגיה הממברנה של התא וחוץ amacrine OFF-מהספרים ברשתית עכבר נוב. (א) הן על-sacs ב GCL ו OFF-sacs ב INL זוהו בקלות על ידי ביטוי tdTomato מונחה Cre וממוקדות להקלטה תחת דסק"ש. ברי סולם שווים 20 מיקרומטר כמצוינים. (ב) העקבות העליונות שינויי פוטנציאל הממברנה רשמו מאזנות וחוץ-צקים כמצוין. העקבות התחתונות הם שוטפים סינפתטי קצבי נציג (EPSC) המניע את התנודה של קרום הפוטנציאל ואת הנוכחי postsynaptic מעכב בקצב לא הסדיר (IPSC). (Cפוסט) אפיון היסטולוגי הוק של תאי רשם מצביע על רמות מורפולוגיה ריבוד הדנדריטים SAC הטיפוסיות ב IPL. ברי סולם שווים 50 מיקרומטר כמצוינים. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
מעבדות רבות הקליטו מתא עצב GCL בדירת הר הכנה 15-18, אך ההליכים שלנו מאפשרים הקלטה מתא עצב INL. הרינו להדגיש מספר צעדים חיוניים להקלטות שגרה מוצלחות.
רעננויות השטיחות של הרשתית חשובות חודר אותו עם טפטפת הקלטה. בהקשר זה, את הקובץ המצורף האיתן של הרשתית אל קרום nitrocellulose אגרוף הוא מעל לכל מושגת על ידי קליטה חולפת של פתרון ואחריו להחזרת נוזלים בזמן (שלב 3.4-3.6). במהלך תקופה קצרה זו, בדרך כלל פחות מ -30 שניות, הזגוגית מתנהגת כמו ג'לי רופף וניתן התקלפו. הטכניקה שלנו היא יעילה יותר בהשוואה להליכים כמה שפורסם, שבו הזגוגית מוסרת באופן ידני בתמיסה 17,19 או על ידי פעולות אנזימטיות 18,20. שיטה נוספת היא שימוש תכוף לקרוע את קרום ההגבלה הפנימי מסיר בעזרת פיפטה תיקון ריקה עבור כל תאשיירשם 21,22. אנחנו לא לרדוף את שיטת הקריעה מחששת פריקת הרשתית. עם זאת, קילוף שקוף מעט דמוי ג'לי את הזגוגית כאשר לעתים לנשל את הרשתית מן הקרום. זוהי אפוא צעד אשר דורש תרגול כמו השמירה של רשתית על קרום nitrocellulose חיונית הקלטה נוירונים INL. שיטה טובה היא להשתמש קרום nitrocellulose פחוס היטב hydrated מלא. נקודת ראוי לציין כאן היא trade-off לכאורה בין אזור לצריבה (כלומר, בגודל של חור אגרוף), השטיחות של הרשתית, וחוסנו של זיקה הממברנה. חלון הקלטה גדול עדיף אבל חור אגרוף גדול אומר שיש באזור קרום פחות עבור הרשתית לצרף. בדומה לכך, גובר הרשתית מעל חור קטן מבטיח מצורף מוצק אך שטיחות עשויות להיות מופחתות, וכך גם באזור לצריבה.
כדי להכניס אלקטרודה דרך הזגוגית אלGCL ו INL (שלב 4.4), אנחנו מיישמים לחץ חיובי כדי למנוע שיבוש האלקטרודה. הצמצום המיידי של הלחץ הזה על חדירה לתוך הרשתית הנו עניין מהותי הפחתת רקע מכתים לשימורי תנודה. נקודת המחאה חשובה היא לקצר את הזמן בין החדירה וקבלת החותם, רצוי פחות מ -30 שניות עבור נוירונים GCL ותוך 60 שניות עבור נוירונים INL. נקודה חשובה נוספת היא תקופת ההמתנה 5 דקות אחרי ההיווצרות של חותם גיגה אוהם ולפני נקרע הקרום. תקופת המתנה זה מבטיחה את הסליקה של הפתרון הפנימי נשפך בנתיב של האלקטרודה רלוונטי במיוחד כאשר פתרון פנימי מבוסס אשלגן משמש בשל תוכן אשלגן הגבוה עשוי זמנית depolarize נוירונים שכנים ומפריע תנודה. לבסוף, תכונה לא שגרתית מעט לגישתנו (שלב 4.7) היא שאנחנו מתקרבים תא, ליצור חותם גיגה אוהם, ולאחר מכן לקבל כל תא גישה תחת מו מהדק הנוכחידה, כפי שנמסר על ידי ד"ר רורי McQuiston של אוניברסיטת וירג'יניה, שעזרו לנו עם הקלטות אלקטרו הראשונית שלנו. שיטה זו מאפשרת שינוי ההתנגדות המהיר על פריצה כדי לנפול בפח על ידי שינויי מתח (גלויים באמצעות אוסצילוסקופ) ומגן התא רשם מהנדנדה הפתאומית של פוטנציאל הממברנה ברמה-התא כולו. תכונה שימושית נוספת של השיטה שלנו היא הזרם השלילי מוחל על הקצה האלקטרודה, אשר מסייע למשוך פוספוליפידים בממברנה בעלי מטען חשמלי חיובי ומקל היווצרות חותמת.
באשר לשימור מעגלי רשתית לרוחב, הכנת פרוסה אופקית של 20 הרשתית הוצעה. אמנם שיטה זו יעילה חושפת את דנדריטים אופקי הרחבת קשרים סינפטיים ב IPL להקלטת הדמיה, המסלול האנכי לצערי מופרת ומכאן שיטה זו יכולה לשמש רק עבור מטרות מוגבלות. לבסוף, החידודים אנו ליישםנהלים כני הקלטת רקמות לאפשר הקלטות ממוקדות שיגרתיות של נוירונים INL כגון OFF-צקי 7. על ידי שילוב שני פוטוני הדמיה והניגודיות שיפור מיקרוסקופיה, מיקוד התאים דו הקוטביים תאים אופקיים ליד שכבת plexiform החיצונית עבור מהדק תיקון הקלטה בתנאי תאורה שונים נחשב כיום ריאלי הכנה שטוח הר.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fixed-stage fluorescent microscope with DIC | Olympus | BX51-WI | |
| Micromanipulators | Sutter | MP-225 | |
| Patch clamp amplifier | A-M System | AM2400 | |
| AD converter | National Instrument | NI-USB-6221 | |
| Heater controller | Warner Instrument | TC-324B | |
| Inline heater | Warner Instrument | SC-20 | |
| Peristaltic pump | Rainin | Dynamax | |
| pipette puller | Sutter Instrument | P-1000 | |
| Glass tube with filament | King Precision Glass | Customized | |
| Stimulator | A.M.P.I. | Master-8 | |
| Biocytin | Sigma | B4261 | |
| NaCl | Sigma | S6191 | |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| NaHCO3 | Fisher | BP328-1 | |
| Na2HPO4 | Sigma | S0876 | |
| Na2HPO4 | Sigma | S5011 | |
| CaCl2 | Sigma | C5670 | |
| MgSO4 | Sigma | M1880 | |
| D-glucose | Sigma | G6152 | |
| K-gluconate | Sigma | G4500 | |
| ATP-Mg | Sigma | A9187 | |
| Li-GTP | Sigma | G5884 | |
| EGTA | Sigma | E0396 | |
| HEPES | Sigma | H4034 | |
| KOH | Sigma | P5958 | |
| Cs-methanesulfonate | Sigma | C1426 | |
| CsOH | Sigma | 232041 | |
| Syringer filter | Nalgene | 171 | |
| 1 ml syring | Rainin | 17013002 | |
| 10 μl pipette tip | Genesee Scientific | 24-130RL | |
| Streptavidin-488 | ThermoFisher | S-11223 | |
| 10x PBS | Lonza | 17-517Q |
References
- Choi, H., et al. Intrinsic bursting of AII amacrine cells underlies oscillations in the rd1 mouse retina. J Neurophysiol. 112 (6), 1491-1504 (2014).
- Gregg, R. G., et al. Nyctalopin expression in retinal bipolar cells restores visual function in a mouse model of complete X-linked congenital stationary night blindness. J Neurophysiol. 98 (5), 3023-3033 (2007).
- Hellmer, C. B., Ichinose, T. Recording light-evoked postsynaptic responses in neurons in dark-adapted, mouse retinal slice preparations using patch clamp techniques. J Vis Exp. (96), (2015).
- Tu, H. Y., Bang, A., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. Increased dendritic branching in direction selective retinal ganglion cells in nob1 mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (13), (2014).
- Tu, H. Y., Chen, Y. J., Chiao, C. C., McQuiston, A. R., Chen, C. K. J. Rhythmic membrane potential fluctuations of cholinergic amacrine cells in mice lacking ERG b-waves. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
- Demas, J., et al. Failure to maintain eye-specific segregation in nob, a mutant with abnormally patterned retinal activity. Neuron. 50 (2), 247-259 (2006).
- Tu, H. Y., Chen, Y. J., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. A Novel Retinal Oscillation Mechanism in an Autosomal Dominant Photoreceptor Degeneration Mouse Model. Front Cell Neurosci. 9, 513 (2015).
- Borowska, J., Trenholm, S., Awatramani, G. B. An intrinsic neural oscillator in the degenerating mouse retina. J Neurosci. 31 (13), 5000-5012 (2011).
- Margolis, D. J., Detwiler, P. B. Cellular origin of spontaneous ganglion cell spike activity in animal models of retinitis pigmentosa. J Ophthalmol. , (2011).
- Stasheff, S. F. Emergence of sustained spontaneous hyperactivity and temporary preservation of OFF responses in ganglion cells of the retinal degeneration (rd1) mouse. J Neurophysiol. 99 (3), 1408-1421 (2008).
- Trenholm, S., Awatramani, G. B. Origins of spontaneous activity in the degenerating retina. Front Cell Neurosci. 9, 277 (2015).
- Trenholm, S., et al. Intrinsic oscillatory activity arising within the electrically coupled AII amacrine-ON cone bipolar cell network is driven by voltage-gated Na+ channels. J Physiol. 590 (Pt 10), 2501-2517 (2012).
- Chen, C. K. J., et al. Cell-autonomous changes in displaced cholinergic amacrine cells lacking Gbeta5. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
- O'Brien, B. J., Isayama, T., Richardson, R., Berson, D. M. Intrinsic physiological properties of cat retinal ganglion cells. J Physiol. 538 (Pt 3), 787-802 (2002).
- Lee, S., et al. An Unconventional Glutamatergic Circuit in the Retina Formed by vGluT3 Amacrine Cells. Neuron. 84 (4), 708-715 (2014).
- Hoggarth, A., et al. Specific wiring of distinct amacrine cells in the directionally selective retinal circuit permits independent coding of direction and size. Neuron. 86 (1), 276-291 (2015).
- Margolis, D. J., Gartland, A. J., Singer, J. H., Detwiler, P. B. Network oscillations drive correlated spiking of ON and OFF ganglion cells in the rd1 mouse model of retinal degeneration. PLoS One. 9 (1), e86253 (2014).
- Schmidt, T. M., Kofuji, P. An isolated retinal preparation to record light response from genetically labeled retinal ganglion cells. J Vis Exp. (47), (2011).
- Ivanova, E., Yee, C. W., Sagdullaev, B. T. Increased phosphorylation of Cx36 gap junctions in the AII amacrine cells of RD retina. Front Cell Neurosci. 9, 390 (2015).
- Enoki, R., Koizumi, A. A method of horizontally sliced preparation of the retina. Methods Mol Biol. 935, 201-205 (2013).
- Akrouh, A., Kerschensteiner, D. Morphology and function of three VIP-expressing amacrine cell types in the mouse retina. J Neurophysiol. 114 (4), 2431-2438 (2015).
- Wei, W., Elstrott, J., Feller, M. B. Two-photon targeted recording of GFP-expressing neurons for light responses and live-cell imaging in the mouse retina. Nat Protoc. 5 (7), 1347-1352 (2010).
