Summary
يوضح هذا البروتوكول كيفية تنفيذ خلية كاملة تسجيل المشبك التصحيح على الخلايا العصبية للشبكية من إعداد شقة جبل.
Abstract
شبكية العين الثدييات هي نسيج الطبقات تتألف من أنواع الخلايا العصبية متعددة. لفهم كيفية الإشارات البصرية يتم معالجتها داخل الشبكة متشابك معقد لها، وتستخدم التسجيلات الكهربية في كثير من الأحيان إلى دراسة الروابط بين الخلايا العصبية الفردية. لقد الأمثل لإعداد جبل مسطح لتسجيل المشبك التصحيح من الخلايا العصبية ملحوظ وراثيا في كل العمالي (طبقة الخلايا العقدية) والقائمة العراقية الوطنية (طبقة النووية الداخلية) من شبكية العين الماوس. تسجيل الخلايا العصبية INL في يتصاعد مسطحة ويحظي على شرائح ليتم الحفاظ على الاتصالات الرأسية والجانبية في تكوين السابق، والسماح الدوائر الشبكية مع مكونات جانبية كبيرة لدراستها. وقد استخدمنا هذا الإجراء لمقارنة الاستجابات من الخلايا العصبية المرآة شراكة في شبكية العين مثل خلايا عديم الاستطالات النجمي كوليني (الحويصلات).
Protocol
أجريت الإجراءات التي تجرى على الحيوانات وفقا للقواعد والأنظمة المعمول بها في المعاهد الوطنية للصحة المبادئ التوجيهية لحيوانات التجارب، كما وافقت عليها رعاية الحيوان المؤسسية واستخدام لجنة من كلية بايلور للطب - الموافقة الأخلاقية.
1. الخارجية وحلول داخلي
- استخدام الحل الثدييات قارع الأجراس خلال تشريح شبكية العين وهو الحل الخارجي في تسجيل الكهربية لاحق. إعداد الحل قارع الأجراس الثدييات من 10X حل سهم (بدون الكالسيوم) في يوم تسجيل وإضافة CaCl 2 قطرة من الحكمة بعد 15 دقيقة من carbogenation (95٪ O 2 و 5٪ CO 2). يحتوي النهائي 1X الحل (مم): 120 كلوريد الصوديوم، 5 بوكل، 25 NaHCO 3، 0.8 نا 2 هبو 4، 0.1 ناه 2 ص 4، 2 CaCl 2، 1 MgSO 4 و 10 مد الجلوكوز.
- استخدام اثنين من الحلول الداخلية لتوصيف التذبذبات SAC. اختبارفائدة من الحلول التي يجري اعدادها في خلية كاملة التسجيلات المشبك التصحيح طويلة على RGCs الماوس الكبار وتخزين دفعات التحقق في 500 مكل في -20 درجة مئوية حتى الاستخدام.
- لتسجيل غشاء التذبذب المحتملين، واستخدام الحل الداخلي القائم على البوتاسيوم الذي يحتوي على (مم): 125 K-غلوكونات، 8 كلوريد الصوديوم، 4 ATP-المغنيسيوم، و 0.5 ليثيوم GTP، 5 EGTA، 10 HEPES و 0.2٪ biocytin (ث / الخامس). ضبط درجة الحموضة إلى 7.3 مع KOH.
- لتسجيل مثير والتيارات بعد المشبكي المثبط، استخدام حل يستند إلى السيزيوم الداخلي الذي يحتوي على (مم): 100 CS-methanesulfonate، 8 كلوريد الصوديوم، 4 ATP-المغنيسيوم، و 0.5 ليثيوم GTP، 5 EGTA، 10 HEPES و 0.2٪ biocytin ( ث / ت). ضبط درجة الحموضة إلى 7.3 مع CsOH.
2. إعداد ليوم تسجيل
- لإعداد غشاء النيتروسليلوز مع الثقوب مفتوحة، يدويا لكمة الغشاء مع الناخس مخصصة مصنوعة من أضعفت 16 G إبرة حقنة وتتسطح الغشاء بين اثنين من لوحات زجاجية نظيفة. لwhole-جبل شبكية العين، وجعل ثقب المركزي 0.2 مم في القطر، وتحيط بها 4 الثقوب الكبيرة التي هي 1-1،2 ملم في القطر.
- لجعل خيوط الردم مخصصة لتحميل الحل الداخلي إلى الأقطاب، تذوب 10 ميكرولتر ماصة في الوسط وإطالة بلطف الجزء ذاب حتى يبرد ويصلب. فقط قبل استخدامها، واستخدام شفرة حلاقة نظيفة لخفض خيوط حتى كان أطول قليلا من ماصات التصحيح.
- سحب ماصات التصحيح في مجتذب برمجة من أنبوب الزجاج البورسليكات مع خيوط الداخلي. تصنيع بال micropipettes في يوم التجربة والاستفادة منها على الفور.
ملاحظة: للحصول على تسجيل الحويصلات، ونحن نستخدم الإعداد مجتذب التالي: الحرارة: 484. سحب: 0؛ السرعة: 25. تأخير الساعة: 1؛ الضغط: 400 وقيمة المنحدر من 462. والتطوير التنظيمي ومعرف من أنابيب البورسليكات و1.65 ملم و 1.0 ملم على التوالي. المقاومة من الماصات هي 10-14 MΩ. - واحد ساعة قبل الحصاد الأنسجة، وذوبان الجليد أنبوب من حل داخلي من قبل SHAKIنانوغرام على دوامة ل> 30 دقيقة.
3. الشبكية تشريح
- تخدير الحيوان بنسبة 4٪ الأيزوفلورين في الأكسجين حتى يفقد الحيوان الاستجابة لقرصة أخمص قدميه. التضحية الحيوانية خلع عنق الرحم.
- قطع كل من مقل العيون قبالة الأعصاب البصرية في 1-2 ملم بعيدا عن رؤساء العصب البصري مع قزحية مستقيمة وأشار مقص.
- لفة مقل العيون على منشفة ورقية نظيفة لإزالة الدم ومن ثم تزج بهم في carbogenated حل قارع الأجراس في الثدييات. لكمة ثقب في حوف مع 23 G إبرة وشطر مقل العيون عن طريق قطع على طول حوف مع مقص الصغرى. إزالة القرنية والعدسة باستخدام ملقط غرامة.
- لشبكية العين كله جبل، قشر بلطف شبكية العين بأكملها قبالة الظهارة الصباغية مع ملقط غرامة وإجراء تخفيضات أربعة 1.5-2 مم المتعامدة من على حافة تجاه رأس العصب البصري.
- تزج غشاء النيتروسليلوز لكمات في طبق وسحب بلطف شبكية العين أكثر من ذلك معالجانب العمالي تصل. ضع رأس العصب البصري في حفرة مركز عند إعداد شبكية العين كلها جبل. نقل الغشاء مع شبكية العين في صحن نظيف آخر. تتسطح بلطف شبكية العين باستخدام فرشاة الطلاء غرامة لتبدو وكأنها الصليب المالطي ووضع كل أربع حواف خلال الثقوب.
- إذا كان جزء من شبكية العين ومن المقرر أن ينظر في وقت واحد، وقطع كل فنجان العين المحضرة من الخطوة 3.3 إلى 3-4 قطع بشفرة حلاقة مع يبقى الظهارة الصباغية المرفقة. حماية القطع غير المستخدمة من ضوء في حل خارجي carbogenated واستخدامها خلال 12 ساعة.
- وصمة عار على غشاء النيتروسليلوز مع قطعة من ورق الترشيح جافة وإزالة الغشاء المحدد الزجاجي والداخلي مع ملقط وفرشاة الدهان.
- تأكد من أن جميع حواف الشبكية هي التي تعلق تماما لغشاء قبل نقل التجمع في غرفة تسجيل مع مختوم زلة غطاء زجاجي في القاع. تأمين الغشاء مع الشحوم فراغ إلى انزلاق الغطاء وrehydratالبريد شبكية العين مع الحل الخارجي. يجب الحرص على عدم اعتراض أي فقاعات الهواء تحت التجميع.
- تعيين غرفة على مرحلة المجهر تستقيم. يروي الغرفة مع الدافئة (34-35 درجة مئوية) حل خارجي carbogenated بمعدل ~ 3 مل لكل دقيقة.
- فحص شبكية العين تحت عدسة الهدف 10X أولا، ومن ثم استخدام عدسة 60X الغمر بالمياه لرؤية العمالي وINL الخلايا العصبية تحت المقابل تدخل الفرق (DIC) و / أو epifluorescence. لتصور الحويصلات، معربا عن tdTomato، استخدم الأبيض مصدر ضوء LED في تركيبة مع مرشح الإثارة من 554 نانومتر وعامل تصفية الانبعاثات من 581 نانومتر.
4. خلية كاملة المشبك التصحيح التسجيل من مسطحة جبل الشبكية
- تصفية حل داخلي من خلال مرشح حقنة في خيوط الردم المخصصة.
- إدراج خيوط في micropipette سحبت حديثا والاستغناء عن حل داخلي بالقرب من الحافة حتى يغطي حل السلك الكهربائي الفضة ل>5 مم. ربط micropipette على حامل القطب مع القطب الشفط، والتي من خلالها الضغط داخل القطب يمكن تعديلها عن طريق دفع أو سحب الغواص من 10 مل حقنة بلاستيكية متصلة أنبوب.
- البحث ماصة تحت هدف واسقاطها إلى ~ 100 ميكرون فوق الشبكية. في ظل وضع أتباع الحالي (I = 0)، واستخدام تعويض العاصمة إلى الصفر يقف العاصمة إشارة الجهد. قياس المقاومة ماصة تحت المشبك الحالي وضع (أنا المشبك) عن طريق حقن السعة ثابتة التيارات موجة مربعة من خلال ماصة أثناء وجوده في الحمام وتحييد الفرق من خلال تحويل مقبض الباب Raccess. استخدام القراءة على مقبض Raccess لحساب المقاومة ماصة بموجب القانون أوم.
- جلب ببطء القطب إلى ~ 10 ميكرون فوق الشبكية. تطبيق الضغط الايجابي إلى القطب. مشاهدة التغيير انعكاس بالقرب من غيض ماصة وهي تقترب من شبكية العين. بسرعة ولكن قوة بلطف ماصة في GCL وتقليل لض إيجابيإعادة فورا.
- نقل ماصة نحو الخلايا العصبية المسمى. تجنب الاتصال الخلايا العصبية الأخرى، والأوعية الدموية وendfeet الخلايا مولر. الضغط أكثر إيجابية إذا لزم الأمر لمنع القطب انسداد.
- ضع طرف ماصة بالقرب من خط الوسط من الخلايا العصبية المسماة حتى الدمل مرئيا. الافراج عن الضغط الايجابي والسماح للغشاء البلازما لترتد مرة أخرى على طرف ماصة.
- تطبيق 20-120 التيارات السلبية السلطة الفلسطينية إلى ماصة للمساعدة في تشكيل ختم جيجا أوم. تطبيق طيف الامتصاص إذا لزم الأمر لسحب غشاء البلازما في ماصة. انتظر 5 دقائق بعد تشكيل ختم للتمزق غشاء الخلية. وهذا يسمح للحل داخلي امتد إلى أن يتم مسح من قبل superfusion. تمزق الغشاء من قبل طيف الامتصاص.
- بعد تمزق الغشاء وأثناء وجوده في وضع المشبك الحالي، والتحول في توازن الجسر وتعديله باستخدام مقبض Raccess.
ملاحظة: للحصول على زنزانة صغيرة مثل SAC، فقط هناك حاجة إلى تعديل طفيف، إن وجدت. Alternatively، سجل مثير والتيارات بعد المشبكي المثبط في وضع المشبك الجهد (V المشبك) من خلال عقد الخلية في إمكانات عكس كلوريد (حوالي -75 بالسيارات) والغلوتامات (حوالي 0 بالسيارات)، على التوالي. فحص وضبط الموقف ماصة إذا لزم الأمر لاستيعاب شبكية العين العرضية و / أو الانجراف micromanipulator. - لتسجيل غشاء المحتملة أو تغيير الحالي قبل وأثناء وبعد العلاج الدوائي، وإعداد حاصرات متشابك (على سبيل المثال، CNQX، AP5، بيكروتوكسين، توبوكورارين، الخ) وجهري قناة (على سبيل المثال، flupirtine، الدوبامين، حمض meclofenamic، وما إلى ذلك) جديدة على يوم التجربة من الأسهم المجمدة. تمييع المخدرات مع حل carbogenated رينغر. تطبيقها بطريقة دفعة من خلال نضح.
- بعد تسجيل، وإزالة بلطف ماصة من سوما. نقل التجمع من غرفة إلى طبق نظيف. فصل وإعادة نعلق شبكية العين على آخر غشاء النيتروسليلوز بالارض دون الحول لكماتوفاق لضمان ثبات شبكية العين أثناء التثبيت.
- إصلاح شبكية العين عن طريق غمر في 4٪ امتصاص العرق لمدة 30 دقيقة في RT. إزالة الشبكية من غشاء النيتروسليلوز وشطفه على نطاق واسع مع برنامج تلفزيوني 1X. الكشف عن التشكل من الخلايا التي سجلتها O / N تلطيخ مع streptavidin صبغ مترافق المخفف في برنامج تلفزيوني 1X مع 0.4٪ تريتون X-100 في 4 درجات مئوية (14). تركيب شبكية العين في وسط antifade ومراقبة الخلايا المسجلة باستخدام المجهر متحد البؤر.
ملاحظة: إجراءات تنطوي على امتصاص العرق، والتي هي متقلبة والسامة، ينبغي أن تجري في مشروع غرفة للسلامة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
وأظهرت تسجيلات تمثيلية من داخل وخارج نوع الحويصلات من شبكية العين الماوس deafferentated في الشكل 1. خلايا الكوليني في كل العمالي وINL يمكن بشكل موثوق به من tdTomato مضان وتستهدف خلية كاملة تسجيل المشبك التصحيح تحت مدينة دبي للإنترنت (الشكل 1A) للكشف عن التذبذب من طاقاتهم غشاء (أعلى آثار) والتيارات متشابك أن قيادتها (آثار أسفل، الشكل 1B). وكشف التيارات متشابك المثبطة ومثير من خلال عقد الخلايا في 0 بالسيارات و-75 بالسيارات، على التوالي، في ظل ظروف الجهد المشبك (الشكل 1B، آثار أسفل). نموذجية SAC شجيري تشجر والطبقية المستويات في IPL (الشكل 1C) يمكن تصور من قبل اللاحق streptavidin تلطيخ لbiocytin مدال داخليا. والنظمية وتيرة التذبذب غشاء المحتملة والتغيرات الحالية بعد المشبكي يمكنيكون كميا عن طريق حساب الكثافة الطيفية. الحصار الدوائي، أو عدم وجودها، ويمكن استخدامها لتمييز آليات متشابك المختلفة الكامنة وراء غشاء المحتملة التذبذب 7.
الشكل 1. مورفولوجيا وغشاء إمكانات داخل وخارج النجمي خلية عديم الاستطالات في شبكية العين الماوس نوب. (أ) كل من على الأكياس في GCL وOFF الحويصلات في INL تم التعرف بسهولة عن طريق التعبير tdTomato مدفوعة لجنة المساواة العرقية وهدفا للتسجيل تحت مدينة دبي للإنترنت. أشرطة النطاق تساوي 20 ميكرون كما هو محدد. (ب) بالنسبة للشركات آثار هي التغيرات المحتملة غشاء المسجلة من داخل وخارج الأكياس كما هو محدد. آثار أسفل هي التمثيلي الإيقاعي مثير الحالية بعد المشبكي (EPSC) التي تدفع التذبذب للغشاء الإمكانات وعدم اتساق نبضات القلب الحالية بعد المشبكي المثبط (IPSC). (C) المشاركة خاصة توصيف النسيجي للخلايا سجلت يشير SAC شجيري التشكل والتكوين الطبقي مستويات نموذجية في IPL. أشرطة النطاق تساوي 50 ميكرون كما هو محدد. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وقد سجلت العديد من المعامل من الخلايا العصبية العمالي في الشقة جبل إعداد 15-18، ولكن إجراءاتنا السماح تسجيل من الخلايا العصبية INL. ونحن نؤكد هنا العديد من الخطوات التي تعتبر بالغة الأهمية للتسجيلات روتينية ناجحة.
نضارة والتسطيح للشبكية مهمة لاختراق ذلك مع ماصة تسجيل. في هذا الصدد، والالتزام الراسخ من الشبكية إلى غشاء النيتروسليلوز اللكم هو الهدف الأسمى ويتحقق عن طريق امتصاص عابر حل تليها الإماهة في الوقت المناسب (الخطوة 3،4-3،6). وخلال هذه الفترة القصيرة، عادة ما تكون أقل من 30 ثانية، والجسم الزجاجي يتصرف مثل هلام فضفاضة ويمكن خلع. لدينا التقنية أكثر كفاءة بالمقارنة مع العديد من الإجراءات المنشورة، حيث يتم إزالة الجسم الزجاجي يدويا في حل 17،19 أو عن طريق الإجراءات الأنزيمية 18،20. طريقة أخرى تستخدم في كثير من الأحيان هو تمزق الغشاء المحدد الداخلي من استخدام التصحيح ماصة فارغة لكل خليةليتم تسجيلها 21،22. نحن لم يتابع طريقة تمزيق خوفا من الترجل شبكية العين. ومع ذلك، تقشير قبالة زجاجي شفاف نوعا ما ومثل هلام في بعض الأحيان قد طرد شبكية العين من الغشاء. لذا هذه خطوة التي تتطلب الممارسة الإبقاء على شبكية العين على غشاء النيتروسليلوز ضروري لتسجيل الخلايا العصبية INL. ومن الممارسات الجيدة لاستخدام جيدا بالارض ورطب تماما غشاء النيتروسليلوز. وهناك نقطة جديرة بالملاحظة هنا هو واضح مفاضلة بين منطقة للتسجيل (أي حجم ثقب اللكم)، والتسطيح من شبكية العين، وثبات التعلق الغشاء. ويفضل نافذة تسجيل أكبر لكن حفرة لكمات أكبر يعني أن هناك أقل مساحة غشاء لشبكية العين لنعلق على. وبالمثل، تركيب شبكية العين خلال فتحة أصغر يضمن الالتزام الراسخ لكن قد يتم تخفيض التسطيح، وذلك هو مجال للتسجيل.
لإدراج القطب من خلال الجسم الزجاجي إلىوالعمالي وINL (الخطوة 4.4)، ونحن نطبق الضغط الايجابي لمنع القطب التشويش. التخفيض الفوري لهذا الضغط على تغلغل في شبكية العين أمر بالغ الأهمية للحد من خلفية تلطيخ وللحفاظ على التذبذب أيضا. نقطة تفتيش المهمة هي لتقصير الوقت بين الاختراق والحصول على الختم، ويفضل أن يكون أقل من 30 ثانية لالخلايا العصبية العمالي وخلال 60 ثانية عن الخلايا العصبية INL. نقطة أخرى مهمة هي 5 دقائق الانتظار فترة ما بعد تشكيل ختم جيجا أوم وقبل تمزق الغشاء. هذه الفترة الانتظار يضمن المقاصة من حل داخلي سالت في مسار القطب وأهمية خاصة عند استخدام الحل الداخلي البوتاسيوم مقرها لأن محتوى البوتاسيوم مرتفع قد يزيل الاستقطاب مؤقتا الخلايا العصبية المجاورة وتزعج التذبذب. أخيرا، وهي ميزة غير تقليدية إلى حد ما من نهجنا (الخطوة 4.7) هي أننا نقترب من خلية، شكل خاتم جيجا أوم، ومن ثم الوصول خلية كاملة تحت مو المشبك الحاليدي، كما نصح الدكتور روري McQuiston من جامعة فرجينيا كومنولث، الذين ساعدونا من خلال التسجيلات الكهربية الأولية. وتسمح هذه الطريقة التغيير المقاومة سريع على كسر في أن استولت عليها تغيرات الجهد (وضوحا من خلال الذبذبات)، ويحمي الخلايا المسجلة من التأرجح المفاجئ للغشاء المحتملة على مستوى خلية كاملة. ميزة أخرى مفيدة لأسلوبنا هو السلبية الحالية المطبقة على طرف القطب، مما يساعد على جذب الفوسفورية غشاء موجبة الشحنة ويسهل تشكيل الختم.
وفيما يتعلق بالحفاظ على الدوائر الشبكية الجانبية، وقد اقترح إعداد شرائح أفقيا من شبكية العين 20. في حين أن هذا الأسلوب يكشف بكفاءة التشعبات التوسع أفقيا والاتصالات المشبكية في IPL لتسجيل والتصوير، للأسف تعطلت المسار الرأسي، وبالتالي هذه الطريقة يمكن أن تستخدم إلا لأغراض محدودة. وأخيرا، فإن التحسينات ننفذ فيإجراءات إعداد الأنسجة وتسجيل تسمح روتين المستهدفة تسجيلات من الخلايا العصبية INL مثل OFF الحويصلات 7. من خلال دمج اثنين من الفوتون التصوير وتعزيز التباين المجهري، واستهداف الخلايا القطبين والخلايا الأفقية بالقرب من طبقة ضفيري الخارجي من أجل التصحيح المشبك تسجيل في ظل ظروف الإضاءة المختلفة يعتبر الآن ممكنا في إعداد شقة جبل.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fixed-stage fluorescent microscope with DIC | Olympus | BX51-WI | |
| Micromanipulators | Sutter | MP-225 | |
| Patch clamp amplifier | A-M System | AM2400 | |
| AD converter | National Instrument | NI-USB-6221 | |
| Heater controller | Warner Instrument | TC-324B | |
| Inline heater | Warner Instrument | SC-20 | |
| Peristaltic pump | Rainin | Dynamax | |
| pipette puller | Sutter Instrument | P-1000 | |
| Glass tube with filament | King Precision Glass | Customized | |
| Stimulator | A.M.P.I. | Master-8 | |
| Biocytin | Sigma | B4261 | |
| NaCl | Sigma | S6191 | |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| NaHCO3 | Fisher | BP328-1 | |
| Na2HPO4 | Sigma | S0876 | |
| Na2HPO4 | Sigma | S5011 | |
| CaCl2 | Sigma | C5670 | |
| MgSO4 | Sigma | M1880 | |
| D-glucose | Sigma | G6152 | |
| K-gluconate | Sigma | G4500 | |
| ATP-Mg | Sigma | A9187 | |
| Li-GTP | Sigma | G5884 | |
| EGTA | Sigma | E0396 | |
| HEPES | Sigma | H4034 | |
| KOH | Sigma | P5958 | |
| Cs-methanesulfonate | Sigma | C1426 | |
| CsOH | Sigma | 232041 | |
| Syringer filter | Nalgene | 171 | |
| 1 ml syring | Rainin | 17013002 | |
| 10 μl pipette tip | Genesee Scientific | 24-130RL | |
| Streptavidin-488 | ThermoFisher | S-11223 | |
| 10x PBS | Lonza | 17-517Q |
References
- Choi, H., et al. Intrinsic bursting of AII amacrine cells underlies oscillations in the rd1 mouse retina. J Neurophysiol. 112 (6), 1491-1504 (2014).
- Gregg, R. G., et al. Nyctalopin expression in retinal bipolar cells restores visual function in a mouse model of complete X-linked congenital stationary night blindness. J Neurophysiol. 98 (5), 3023-3033 (2007).
- Hellmer, C. B., Ichinose, T. Recording light-evoked postsynaptic responses in neurons in dark-adapted, mouse retinal slice preparations using patch clamp techniques. J Vis Exp. (96), (2015).
- Tu, H. Y., Bang, A., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. Increased dendritic branching in direction selective retinal ganglion cells in nob1 mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (13), (2014).
- Tu, H. Y., Chen, Y. J., Chiao, C. C., McQuiston, A. R., Chen, C. K. J. Rhythmic membrane potential fluctuations of cholinergic amacrine cells in mice lacking ERG b-waves. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
- Demas, J., et al. Failure to maintain eye-specific segregation in nob, a mutant with abnormally patterned retinal activity. Neuron. 50 (2), 247-259 (2006).
- Tu, H. Y., Chen, Y. J., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. A Novel Retinal Oscillation Mechanism in an Autosomal Dominant Photoreceptor Degeneration Mouse Model. Front Cell Neurosci. 9, 513 (2015).
- Borowska, J., Trenholm, S., Awatramani, G. B. An intrinsic neural oscillator in the degenerating mouse retina. J Neurosci. 31 (13), 5000-5012 (2011).
- Margolis, D. J., Detwiler, P. B. Cellular origin of spontaneous ganglion cell spike activity in animal models of retinitis pigmentosa. J Ophthalmol. , (2011).
- Stasheff, S. F. Emergence of sustained spontaneous hyperactivity and temporary preservation of OFF responses in ganglion cells of the retinal degeneration (rd1) mouse. J Neurophysiol. 99 (3), 1408-1421 (2008).
- Trenholm, S., Awatramani, G. B. Origins of spontaneous activity in the degenerating retina. Front Cell Neurosci. 9, 277 (2015).
- Trenholm, S., et al. Intrinsic oscillatory activity arising within the electrically coupled AII amacrine-ON cone bipolar cell network is driven by voltage-gated Na+ channels. J Physiol. 590 (Pt 10), 2501-2517 (2012).
- Chen, C. K. J., et al. Cell-autonomous changes in displaced cholinergic amacrine cells lacking Gbeta5. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
- O'Brien, B. J., Isayama, T., Richardson, R., Berson, D. M. Intrinsic physiological properties of cat retinal ganglion cells. J Physiol. 538 (Pt 3), 787-802 (2002).
- Lee, S., et al. An Unconventional Glutamatergic Circuit in the Retina Formed by vGluT3 Amacrine Cells. Neuron. 84 (4), 708-715 (2014).
- Hoggarth, A., et al. Specific wiring of distinct amacrine cells in the directionally selective retinal circuit permits independent coding of direction and size. Neuron. 86 (1), 276-291 (2015).
- Margolis, D. J., Gartland, A. J., Singer, J. H., Detwiler, P. B. Network oscillations drive correlated spiking of ON and OFF ganglion cells in the rd1 mouse model of retinal degeneration. PLoS One. 9 (1), e86253 (2014).
- Schmidt, T. M., Kofuji, P. An isolated retinal preparation to record light response from genetically labeled retinal ganglion cells. J Vis Exp. (47), (2011).
- Ivanova, E., Yee, C. W., Sagdullaev, B. T. Increased phosphorylation of Cx36 gap junctions in the AII amacrine cells of RD retina. Front Cell Neurosci. 9, 390 (2015).
- Enoki, R., Koizumi, A. A method of horizontally sliced preparation of the retina. Methods Mol Biol. 935, 201-205 (2013).
- Akrouh, A., Kerschensteiner, D. Morphology and function of three VIP-expressing amacrine cell types in the mouse retina. J Neurophysiol. 114 (4), 2431-2438 (2015).
- Wei, W., Elstrott, J., Feller, M. B. Two-photon targeted recording of GFP-expressing neurons for light responses and live-cell imaging in the mouse retina. Nat Protoc. 5 (7), 1347-1352 (2010).
