Summary
Bu protokol, düz monte hazırlık retina nöronlar üzerinde tüm hücre yama kelepçe kayıt yapmak gösterilmiştir.
Abstract
Memeli retina birden nöronal tip oluşan tabakalı bir dokudur. onun karmaşık sinaptik ağ içinde nasıl işlendiğini görsel sinyaller anlamak için, elektrofizyolojik kayıtlar sık sık bireysel nöronlar arasındaki bağlantıları incelemek için kullanılır. Biz fare retina GCL (ganglion hücre tabakası) ve INL hem de genetik olarak işaretlenmiş nöronların yama kelepçe kayıt (iç nükleer tabaka) için düz montaj hazırlık optimize ettik. dikey ve yanal hem de bağlantıları eski yapılandırmasında korunur, çünkü düz bağlar kayıt INL nöronlar incelenecek büyük yanal bileşenleri ile retina devreleri izin dilimleri üzerinde tercih edilmektedir. Biz kolinerjik dolup taşan amacrine hücreleri (keseler) olarak retina ayna ortaklı nöronların cevapları karşılaştırmak için bu yordamı kullandık.
Protocol
Etik onayı - kurumsal hayvan bakımı tarafından onaylanmış ve Baylor College of Medicine komitesini kullanmak gibi hayvan denekleri prosedürleri, kuralları ve araştırma hayvanlar için Sağlık kılavuzların National Institutes düzenlemelerine uygun olarak yapılmıştır.
1. Harici ve Dahili Çözümler
- retina diseksiyonu sırasında ve sonraki elektrofizyolojik kayıt harici bir çözüm olarak memeli Ringer çözeltisi kullanın. Kayıt günü (kalsiyum olmadan) 10x stok çözeltisinden, memeli Ringer çözeltisi hazırlayın ve carbogenation 15 dakika (% 95 O2 ve% 5 CO2) sonrasında CaCl2 damla damla ilave edin. Nihai 1x solüsyonu (mM cinsinden) şunları içerir: NaHCO 3, 0.8 Na 2 HPO 4, 0.1 NaH 2 PO 4, 2 CaCl2, 1 MgSO 4 ile 10 D-glikoz 120 NaCl, 5 KCl, 25.
- SAC salınımların karakterize etmek için iki dahili çözümleri kullanın. TestYetişkin fare RGCs üzerinde daha uzun süreli tüm hücre yama kelepçe kayıtları hazırlanan çözeltiler yararlılığı ve kullanılana kadar -20 ° C'de 500 ul alikolar içinde belirlenmiş gruplar saklayın.
- Membran potansiyeli salınım kaydetmek için, (mM olarak) ihtiva eden bir potasyum bazlı içi çözelti kullanımı: 125 K-glukonat, 8 NaCI, 4 ATP mg, 0.5 Li-GTP, 5 EGTA, 10 HEPES ve% 0.2 biocytin (ağırlık / h). KOH ile 7.3 pH ayarlayın.
- (100 CS-metansülfonat, 8 NaCI, 4 ATP mg, 0.5 Li-GTP, 5 EGTA, 10 HEPES ve% 0.2 biocytin: eksitatör inhibe edici postsinaptik akımlar kaydetmek için, (mM olarak) ihtiva eden bir sezyum bir dahili solüsyon kullanmak ağırlık / hacim). CsOH ile 7.3 pH ayarlayın.
Kayıt Günü için 2. Hazırlık
- açık delikli bir nitroselüloz membran hazırlamak için, el ile körleşmiş 16 G şırınga iğnesi yapılmış özel bir zımba ile membran yumruk ve iki temiz bir cam levha arasına membran dümdüz. Bir toptan için, Retina montaj çapı merkezi delik 0.2 mm yapmak ve çapı 1-1,2 mm 4 büyük delikler tarafından onu çevreleyen.
- elektrotlar içine iç çözümü yüklenmesi için özelleştirilmiş bir dolgu iplik yapmak için, ortada bir 10 ul pipet eritmek ve soğur ve sertleşir kadar yavaşça erimiş kısmı uzatmak. Hemen önce, kullanmak biraz daha uzun yama pipetler daha oluncaya kadar filamanın kesmek için temiz bir jilet kullanmak için.
- bir iç filament ile borosilikat cam tüp programlanabilir çektirmenin yama pipetler çekin. Deney günü mikropipetler imalatı ve bunları hemen kullanın.
NOT: Isı: kayıt BİLSEM'ler için, şu çektirmenin ayarını kullanın 484; çekin: 0; hız: 25; gecikme süresi: 1; Basınç: 400 ve 462. borosilikat tüplerin OD ve kimliği bir rampa değeri sırasıyla 1.65 mm ve 1.0 mm vardır. pipetler direnç 10-14 MQ olduğunu. - Bir saat doku hasattan önce, Şeki iç çözümün bir tüp çözülme> 30 dakika boyunca bir girdap üzerinde ng.
3. Retina Diseksiyon
- Hayvan bir ayak tutam yanıt kaybedene kadar oksijen izofluran% 4 ile hayvan anestezisi. servikal dislokasyon ile hayvan kurban.
- uzakta düz sivri iris makası ile optik sinir başları 1-2 mm optik sinirlerin kapalı hem gözbebekleri kesin.
- kan kaldırmak ve daha sonra carbogenated memeli Ringer solüsyonu sokmaktan temiz bir kağıt havlu üzerine gözbebekleri yuvarlayın. 23 G iğne ile limbus üzerinde bir delik ve mikro-makas ile limbusta boyunca keserek gözbebekleri ikiye bölmek. Ince forseps kullanılarak kornea ve lensi çıkarın.
- retina tam montaj için hafifçe ince forseps ile pigmente epitel kapalı tüm retina soyma ve optik sinir başı doğru kenarından dört 1.5-2 mm dik kesim yapmak.
- çanak içine bir delikli nitroselüloz membran daldırın ve hafifçe ile bitti retina sürükleyinGCL taraf yukarı. bir bütün montaj retina hazırlarken orta deliğe optik sinir başını yerleştirin. başka bir temiz kabına retina ile membran aktarın. Yavaşça bir Malta haçı gibi bakmak ve deliklerin üzerine dört kenarı koymak için iyi bir fırça ile retina dümdüz.
- retina kısmı bir seferde incelenecek olursa, pigment epitel bağlı kaldığı bir jilet ile 3-4 parçaya Aşama 3.3 ile üretilen her Göz yuvası kesti. carbogenated dış çözelti içinde ışıktan kullanılmayan parçalarını koruyun ve 12 saat içinde bunları kullanmak.
- Kuru filtre kağıt parçası ile nitroselüloz membran kurulayın ve forseps ile vitreus ve iç sınırlayıcı membran ve bir boya fırçası kaldırın.
- tüm retina kenarları tamamen altta kapalı bir cam kapak kayma ile kayıt odasına aksamını aktarmadan önce zara bağlı olduğundan emin olun. Kapak kayma ve rehydrat vakum gres ile membran sabitleyinDış çözümü ile retina e. montaj altında herhangi bir hava kabarcıkları tuzak dikkatli olun.
- dik bir mikroskop sahneye odasına ayarlayın. dakika başına ~ 3 ml bir oranda sıcak (34-35 ° C) carbogenated dış çözelti ile bölme serpmek.
- diferansiyel girişim kontrast (DIC) ve / veya Epifloresans altında GCL ve INL nöronlar görmek için 60x su daldırma lens kullanabilirsiniz sonra ilk 10x objektif mercek altında retina incelemek ve. tdTomato salgılayan BİLSEM'lere görselleştirmek için, beyaz bir 554 nm'lik bir uyarılma filtreli ve 581 nm'lik bir emisyon filtresi ile birlikte LED ışık kaynağı kullanır.
Düz montaj Retina 4. Tüm hücre yama Kelepçe Kayıt
- Özel bir dolgu filaman bir şırınga filtre ile iç çözelti filtre.
- taze çekilmiş mikropipet içine filamanın yerleştirin ve çözüm> için gümüş elektrot teli kapsayan kadar ucuna yakın iç çözüm dağıtmak5 mm. iterek veya tüp bağlı 10 mi plastik şırınga pistonu çekerek ayarlanabilir elektrodun içinde bu basınç ile bir emme kutuplu bir elektrot tutucu üzerine mikropipet sabitleyin.
- objektif altında pipet bulun ve retina üzerinde ~ 100 um aşağı getirmek. akım-takipçi modu (I = 0) kapsamında, DC ayakta DC gerilim sinyali sıfıra ofset kullanın. O banyoda iken pipet aracılığıyla sabit genlik kare dalga akımları enjekte edilerek mevcut kelepçe (I Kelepçe) modu altında pipet direncini ölçün ve Raccess düğmeyi çevirerek farkı nötralize. Ohm kanunu ile pipet direnci hesaplamak için Raccess topuzu üzerinde okuma kullanın.
- Yavaş yavaş 10 um Retina üzerinde elektroduna ~ getir. elektrot pozitif basınç uygulayın. o retina yaklaştıkça pipet yakın yansıma değişimini izleyin. Çabuk fakat nazikçe GCL içine pipet zorlamak ve pozitif pressu azaltmakhemen yeniden.
- etiketli nöron doğru pipet hareket ettirin. diğer nöronlar, kan damarları ve Muller hücreleri endfeet temastan kaçının. elektrot tıkanmasını önlemek için gerekirse daha pozitif basınç uygulayın.
- Bir çukur görünür olana kadar bir etiketli nöron orta hat yakınında pipet yerleştirin. pozitif basınç serbest bırakın ve plazma zarı pipet üzerine geri sıçrama sağlar.
- Bir Giga-ohm mühür oluşumunu yardım etmek pipet 20 120 pA negatif akımları uygulayın. pipet içine plazma zarı çekmek için gerekirse yumuşak bir emme uygulayın. hücre zarı yırtılmasına mühür oluşumundan sonra 5 dakika bekleyin. Bu dökülen iç çözüm süperfüzyomu tarafından temizlenmesini sağlar. hafif bir emme ile membran rüptürü.
- membran rüptürü sonra ve mevcut kelepçe modunda iken, köprü dengesi üzerinde geçiş ve Raccess düğmesini kullanarak ayarlayın.
NOT: Varsa SAC gibi küçük bir hücre için, sadece hafif ayarlama gereklidir. Alternonları bir arada, kayıt uyarıcı ve sırasıyla (0 mV civarında) (-75 mV civarında) klorür ters potansiyelleri hücreyi ve glutamat tutarak gerilim kelepçe modunda (V Kelepçe) inhibitör postsinaptik akımlar. Kontrol ve ara sıra retina ve / veya mikromanipülatör sürüklenme karşılamak için gerekirse pipet konumunu ayarlayın. - Taze (örn, CNKX, AP5, pikrotoksin, tubokurarin, vs.) ve kanal modülatörleri (ör flupirtin, dopamin, meklofenamik asit, vs.), sinaptik blokerler hazırlanması sırasında veya ilaç tedavisi öncesi, membran potansiyel ya da mevcut bir değişiklik kaydetmek için dondurulmuş stoktan deney günü. carbogenated Ringer solüsyonu ile uyuşturucu seyreltiniz. perfüzyon yoluyla bir toplu şekilde onları uygulayın.
- Kayıttan sonra, yavaşça soma gelen pipet kaldırmak. Temiz bir çanak odasından derleme aktarın. Ayır ve delikli hol olmadan başka basık nitroselüloz zar üzerine retinaya yeniden takmakes fiksasyon sırasında retina düzgünlüğü sağlamak.
- Oda sıcaklığında 30 dakika süreyle% 4 paraformaldehid içinde daldırarak retina sabitleyin. nitroselüloz membran retina çıkarın ve 1x PBS ile yoğun durulayın. 4 ° C, 14% 0.4, Triton X-100 ile 1 x PBS içinde seyreltilmiş boya-konjüge streptavidin ile O / N boyama ile kaydedilen hücre morfolojisini ortaya koyuyor. antifade ortamda retina monte edin ve bir tarama konfokal mikroskop kullanılarak kaydedilen hücreleri gözlemleyin.
Not: uçucu ve toksik olan paraformaldehid içeren prosedürler, güvenlik için bir taslak odası içinde yapılmalıdır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Içi ve bir deafferentated fare retina kapalı tip BİLSEM'lerin Örnek kayıtları, Şekil 1 'de gösterilmiştir. GCL ve INL hem de kolinerjik hücre güvenilir tdTomato floresan ile tanımlanmış ve DIC altında bütün hücre yama kelepçe kayıt için hedef olabilir (Şekil 1 A) onların membran potansiyelleri (üst izleri) ve (alt izleri, Şekil 1B) o sürücü sinaptik akımların salınımını ortaya çıkarmak için. Inhibitör ve eksitatör sinaptik akımlar gerilim kelepçe koşulları (Şekil 1B, alt izleri) altında, sırasıyla 0 mV ve -75 mV, hücreleri tutarak ortaya çıkar. IPL (Şekil 1C) Tipik SAC dendritik arborization ve tabakalaşma seviyeleri içten diyaliz biocytin için post hoc streptavidin boyama ile görülebilir. ritmisite ve membran potansiyeli dalgalanma ve postsinaptik akım değişikliklerinin sıklığı cangüç spektral yoğunluğu hesaplanmak suretiyle ölçülebilir. Farmakolojik blokajı veya bunun olmaması, membran potansiyeli salınım 7 altında farklı sinaptik mekanizmaları ayırt etmek için kullanılabilir.
Şekil 1. Morfoloji ve membran Nob fare retinasında içi ve dışı dolup taşan amacrine hücre potansiyelleri. (A) Her iki INL de GCL ON-keselerinde ve OFF-keseleri kolayca Cre odaklı tdTomato ifade tarafından tespit ve kayıt için hedef alındı DIC altında. belirtildiği gibi Ölçek çubukları 20 uM eşittir. (B) üst izleri gösterildiği gibi içi ve dışı SAC kaydedilen membran potansiyeli değişikliklerdir. alt izleri temsilcisi ritmik eksitatör postsinaptik akım potansiyel ve aritmik inhibitör postsinaptik akımı (IPSC) membran salınımını sürücü (EPSC). (Cı) Kaydedilen hücrelerin Post hoc histolojik karakterizasyonu IPL tipik SAC dendritik morfoloji ve tabakalaşma seviyelerini gösterir. Ölçek çubukları belirtildiği gibi 50 mikron eşit. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Birçok laboratuvar hazırlık 15-18 montaj düz GCL nöronlardan kaydettik, ama bizim prosedürler INL nöronlardan kayıt izin verir. Biz burada başarılı rutin kayıtlar için kritik olan birkaç adım vurgulamak.
retina tazelik ve düzlük bir kayıt pipet ile nüfuz için önemlidir. Bu bağlamda, delme nitroselüloz zara retinanın sağlam bağlanma çok önemlidir ve zamanında tekrar nemlendirme (Aşama 3.4-3.6) ve ardından çözelti geçici emme ile elde edilir. Bu kısa dönemde, genellikle az 30 sn, vitreus gevşek jöle gibi davranır ve soyulmuş olabilir. Vitröz el çözelti 17,19 veya enzimatik işlemlerden 18,20 çıkarılır çok yayınlanan prosedürlere karşılaştırıldığında bizim tekniği daha etkilidir. Başka sık kullanılan bir yöntem, her bir hücre için boş bir yama pipet kullanarak kapalı iç sınırlayıcı membran gözyaşı olduğunu21,22 kaydedilecek. Biz retina sökülmesi korkusuyla yırtılma yöntemini takip etmedi. Ancak, biraz şeffaf ve jölemsi vitreus off soyma zamanlarda membran retinayı yerinden edebilir. Bu nedenle nitroselüloz membran üzerinde retina tutma INL nöronlar kayıt için gerekli olduğu gibi pratik gerektirir bir adımdır. İyi bir uygulama, iyi basık ve tam sulandırılmış nitroselüloz membran kullanmaktır. Burada kayda değer bir nokta kaydedilebilir alanı arasındaki belirgin trade-off (yani, bir delikli delik boyutu), retina düzlüğü ve zara eki sıkılığını. Daha geniş bir kayıt penceresi tercih ama daha büyük bir yumruk delik retina eklemek için daha az membran alanı olduğu anlamına gelmektedir. Benzer şekilde, daha küçük bir delik üzerine retina monte firması eki sağlamaktadır, ancak düzgünlük indirgenebilir ve bu nedenle kayıt alanıdır.
içine vitreus aracılığıyla bir elektrot eklemek içinGCL ve INL (4.4 Adım), biz elektrot sıkışmasını önlemek için pozitif bir basınç uygulayın. retina içine penetrasyon üzerine, bu basınç derhal azalma boyama arka azaltmak ve salınım korumak için önemlidir. Önemli bir kontrol noktası penetrasyonu ve mühür, GCL nöronlar ve INL nöronlar için 60 saniye içinde, tercihen en az 30 sn elde arasındaki süreyi kısaltmak olduğunu. Bir diğer önemli nokta Giga-ohm mühür oluşumundan sonra ve membran rüptürü önce 5 dakika bekleme dönemidir. Bu bekleme süresi, elektrodun yolunda dökülen iç çözümün temizlenmesini sağlar ve yüksek potasyum içeriği geçici olarak komşu nöronlar depolarize ve salınımını rahatsız olabilir, çünkü bir potasyum bazlı iç çözüm kullanıldığında özellikle geçerlidir. Son olarak, bizim yaklaşımımız (Adım 4.7) biraz sıradışı özelliği hücre yaklaşımı biz bir giga-ohm mühür formu, ve sonra geçerli kelepçe mo altında tüm hücre erişmek olduğunude, bizim ilk elektrofizyolojik kayıtlar ile bize yardımcı Virginia Commonwealth Üniversitesi'nden Dr. Rory McQuiston tarafından tavsiye olarak. Bu yöntem molası-in sırasında hızlı direnç değişimi (bir osiloskop ile görünür) gerilim değişiklikleri tarafından yakalanan ve tam hücre seviyesinde membran potansiyeli ani salıncak kaydedilen hücreyi korur sağlar. Bizim yöntemin bir diğer yararlı özelliği pozitif yüklü membran fosfolipidleri çekmek yardımcı olur ve mühür oluşumunu kolaylaştıran elektrot ucu, uygulanan negatif akımdır.
Lateral retina devrelere korunması ile ilgili olarak, retina 20 bir yatay dilimleri hazırlama önerilmiştir. Bu yöntem etkili bir şekilde yatay olarak genişletilmesi dendrit ve kayıt ve görüntüleme için IPL sinaptik bağlantıları ortaya birlikte dikey yolu, ne yazık ki bozulur ve bu nedenle bu yöntem, sadece sınırlı amaçlar için de kullanılabilir. Son olarak, iyileştirmeler biz uygulamakdoku hazırlanması ve kayıt prosedürleri gibi OFF-SAC 7 olarak INL nöronların rutin hedef kayıtları izin verir. Çeşitli ışıklandırma koşulları altında kayıt yama kelepçe için dış pleksiform tabakasının yakın bipolar hücreleri ve yatay hücreleri hedef, iki foton görüntüleme içeren ve kontrast mikroskobu geliştirerek şimdi düz monte hazırlık uygulanabilir olarak kabul edilir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Fixed-stage fluorescent microscope with DIC | Olympus | BX51-WI | |
| Micromanipulators | Sutter | MP-225 | |
| Patch clamp amplifier | A-M System | AM2400 | |
| AD converter | National Instrument | NI-USB-6221 | |
| Heater controller | Warner Instrument | TC-324B | |
| Inline heater | Warner Instrument | SC-20 | |
| Peristaltic pump | Rainin | Dynamax | |
| pipette puller | Sutter Instrument | P-1000 | |
| Glass tube with filament | King Precision Glass | Customized | |
| Stimulator | A.M.P.I. | Master-8 | |
| Biocytin | Sigma | B4261 | |
| NaCl | Sigma | S6191 | |
| KCl | Sigma | P5405 | |
| NaHCO3 | Fisher | BP328-1 | |
| Na2HPO4 | Sigma | S0876 | |
| Na2HPO4 | Sigma | S5011 | |
| CaCl2 | Sigma | C5670 | |
| MgSO4 | Sigma | M1880 | |
| D-glucose | Sigma | G6152 | |
| K-gluconate | Sigma | G4500 | |
| ATP-Mg | Sigma | A9187 | |
| Li-GTP | Sigma | G5884 | |
| EGTA | Sigma | E0396 | |
| HEPES | Sigma | H4034 | |
| KOH | Sigma | P5958 | |
| Cs-methanesulfonate | Sigma | C1426 | |
| CsOH | Sigma | 232041 | |
| Syringer filter | Nalgene | 171 | |
| 1 ml syring | Rainin | 17013002 | |
| 10 μl pipette tip | Genesee Scientific | 24-130RL | |
| Streptavidin-488 | ThermoFisher | S-11223 | |
| 10x PBS | Lonza | 17-517Q |
References
- Choi, H., et al. Intrinsic bursting of AII amacrine cells underlies oscillations in the rd1 mouse retina. J Neurophysiol. 112 (6), 1491-1504 (2014).
- Gregg, R. G., et al. Nyctalopin expression in retinal bipolar cells restores visual function in a mouse model of complete X-linked congenital stationary night blindness. J Neurophysiol. 98 (5), 3023-3033 (2007).
- Hellmer, C. B., Ichinose, T. Recording light-evoked postsynaptic responses in neurons in dark-adapted, mouse retinal slice preparations using patch clamp techniques. J Vis Exp. (96), (2015).
- Tu, H. Y., Bang, A., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. Increased dendritic branching in direction selective retinal ganglion cells in nob1 mice. Invest Ophthalmol Vis Sci. 55 (13), (2014).
- Tu, H. Y., Chen, Y. J., Chiao, C. C., McQuiston, A. R., Chen, C. K. J. Rhythmic membrane potential fluctuations of cholinergic amacrine cells in mice lacking ERG b-waves. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
- Demas, J., et al. Failure to maintain eye-specific segregation in nob, a mutant with abnormally patterned retinal activity. Neuron. 50 (2), 247-259 (2006).
- Tu, H. Y., Chen, Y. J., McQuiston, A. R., Chiao, C. C., Chen, C. K. A Novel Retinal Oscillation Mechanism in an Autosomal Dominant Photoreceptor Degeneration Mouse Model. Front Cell Neurosci. 9, 513 (2015).
- Borowska, J., Trenholm, S., Awatramani, G. B. An intrinsic neural oscillator in the degenerating mouse retina. J Neurosci. 31 (13), 5000-5012 (2011).
- Margolis, D. J., Detwiler, P. B. Cellular origin of spontaneous ganglion cell spike activity in animal models of retinitis pigmentosa. J Ophthalmol. , (2011).
- Stasheff, S. F. Emergence of sustained spontaneous hyperactivity and temporary preservation of OFF responses in ganglion cells of the retinal degeneration (rd1) mouse. J Neurophysiol. 99 (3), 1408-1421 (2008).
- Trenholm, S., Awatramani, G. B. Origins of spontaneous activity in the degenerating retina. Front Cell Neurosci. 9, 277 (2015).
- Trenholm, S., et al. Intrinsic oscillatory activity arising within the electrically coupled AII amacrine-ON cone bipolar cell network is driven by voltage-gated Na+ channels. J Physiol. 590 (Pt 10), 2501-2517 (2012).
- Chen, C. K. J., et al. Cell-autonomous changes in displaced cholinergic amacrine cells lacking Gbeta5. Invest Ophthalmol Vis Sci. 56 (7), (2015).
- O'Brien, B. J., Isayama, T., Richardson, R., Berson, D. M. Intrinsic physiological properties of cat retinal ganglion cells. J Physiol. 538 (Pt 3), 787-802 (2002).
- Lee, S., et al. An Unconventional Glutamatergic Circuit in the Retina Formed by vGluT3 Amacrine Cells. Neuron. 84 (4), 708-715 (2014).
- Hoggarth, A., et al. Specific wiring of distinct amacrine cells in the directionally selective retinal circuit permits independent coding of direction and size. Neuron. 86 (1), 276-291 (2015).
- Margolis, D. J., Gartland, A. J., Singer, J. H., Detwiler, P. B. Network oscillations drive correlated spiking of ON and OFF ganglion cells in the rd1 mouse model of retinal degeneration. PLoS One. 9 (1), e86253 (2014).
- Schmidt, T. M., Kofuji, P. An isolated retinal preparation to record light response from genetically labeled retinal ganglion cells. J Vis Exp. (47), (2011).
- Ivanova, E., Yee, C. W., Sagdullaev, B. T. Increased phosphorylation of Cx36 gap junctions in the AII amacrine cells of RD retina. Front Cell Neurosci. 9, 390 (2015).
- Enoki, R., Koizumi, A. A method of horizontally sliced preparation of the retina. Methods Mol Biol. 935, 201-205 (2013).
- Akrouh, A., Kerschensteiner, D. Morphology and function of three VIP-expressing amacrine cell types in the mouse retina. J Neurophysiol. 114 (4), 2431-2438 (2015).
- Wei, W., Elstrott, J., Feller, M. B. Two-photon targeted recording of GFP-expressing neurons for light responses and live-cell imaging in the mouse retina. Nat Protoc. 5 (7), 1347-1352 (2010).
