Introduction
Murins encéphalomyélite virus de Theiler (TMEV) est un virus à ARN simple brin neurotrope qui infecte la persistance du système nerveux central murin (CNS). Chez les souris sensibles, l'infection par TMEV provoque, une maladie démyélinisante à médiation immunitaire chronique progressive, connue comme la maladie démyélinisante TMEV induite (TMEV-IDD). L'infection expérimentale de souris prend une évolution de la maladie ressemblant à celle observée dans les formes progressives de la sclérose en plaques (SEP). TMEV-IDD est caractérisée par deux phases distinctes: la phase aiguë et la phase chronique. La phase aiguë est une légère, généralement subclinique encéphalite 1,2. La deuxième phase, chronique, commençant environ un mois après l' infection, se compose d'un handicap à évolution lente caractérisée par une démyélinisation, l' inflammation et des lésions axonales 1,2. La faiblesse observée chez les souris est associée à la spasticité et, parfois, des spasmes toniques sévères.
Parce qu'il n'y a pas actuellement medications pour améliorer l'invalidité progressive chez les patients, les chercheurs sont particulièrement attirés par TMEV-IDD, qui représente un modèle animal optimal pour surveiller l'impact des médicaments modificateurs de la maladie sur la progression de la maladie. Cependant, chez la souris, ainsi que chez les patients atteints de sclérose en plaques, la surveillance de la progression de l'invalidité nécessite une observation clinique continue pendant des périodes de temps prolongées. Chez les souris, la surveillance à long terme pour la progression du handicap peut être accompli avec le test de performance Rotarod.
Le test de performance Rotarod est un test de comportement standard qui évalue les fonctions motrices associées telles que la coordination, l'équilibre et la fatigue chez les rongeurs. Les souris doivent garder leur équilibre sur une tige tournante, qui tourne à l'accélération continue; le temps de latence à l'automne de cette tige est enregistrée. Les animaux atteints de troubles neurologiques sont incapables de rester sur la tige de rotation aussi longtemps que les contrôles, et ils tombent normalement quand la vitesse de rotation est supérieure à leurla capacité du moteur. La perte de valeur plus neurologique que les animaux ont, plus vite ils tombent hors de la tige, et plus le temps de latence est.
L'avantage du test Rotarod sur les systèmes traditionnels de notation visuelle est qu'il génère un objectif, mesurable variable le temps de latence, qui peut finalement être utilisée pour des analyses statistiques pour quantifier les effets des thérapies et des procédures expérimentales 3.
Dans le laboratoire de neuro - immunologie (LONI) à Dartmouth, les souris sont soumises à un protocole d'adaptation, où ils sont testés avant l'infection TMEV afin de les familiariser avec la machine et d'évaluer leur «base» de la coordination de l' équilibre normal et le contrôle moteur 4, 5. Une fois la ligne de base est établie et les souris sont infectées par le TMEV, ils sont testés une fois ou deux fois par semaine sur une période de plusieurs mois. Le protocole de test réel dure en moyenne 150 jours, permettant ainsi une évaluation dele déclin de l'équilibre, la coordination et le contrôle du moteur pendant toute la durée de la maladie démyélinisante.
Plusieurs centaines de TMEV-IDD et faux-souris traitées ont été testées à ce jour pour le dysfonctionnement neurologique à Dartmouth. Ces souris avaient reçu divers traitements immunomodulateurs, mais aucun agent pharmacologique n'a été trouvé pour être efficace dans l' amélioration de la progression du handicap 6,7. Le présent article et le protocole lié décrivent comment caractériser l'atteinte neurologique progressive affichée par les souris TMEV-IDD. En particulier, le protocole propose des recommandations de paramètres de test spécifiques jugées généralement appropriées pour étudier le handicap neurologique chez les souris TMEV-IDD en utilisant le test Rotarod. Cette procédure fournit une base de référence pour évaluer (1) la pertinence de ce modèle de souris pour la SP progressive et (2) son utilité pour tester les thérapies visant à traiter les maladies neurologiques progressives telles que la sclérose en plaques. De toute évidence, laRotarod test de performance et le protocole des paramètres de test optimisés et en cours ne sont pas seulement utiles à la détection de handicap neurologique progressive dans le modèle de la souris TMEV-IDD, mais sont également utiles dans la découverte de déficiences dans d'autres modèles viro-induits et / ou souris génétique des maladies neurodégénératives.
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Protocol
Tous les travaux d'animaux utilise des protocoles examinés et approuvés par le Comité institutionnel des animaux soin et l'utilisation (IACUC) à Geisel School of Medicine à Dartmouth.
1. Le modèle de souris
- L' induction de la maladie démyélinisante induite TMEV
- Déplacer les cages contenant 4 à 6 semaines d'âge SJL femelle / Jhan souris du rack à un espace de travail confortable. Marquer la souris (par exemple, avec une étiquette d'oreille ou poinçon) pour permettre une évaluation individuelle de la maladie clinique et histologique.
- Dessinez 30 pi de TMEV infectant stock (unités formant 2 x 10 6 de la plaque; PFU) dans du PBS dans un 29-gauge insuline seringue et une aiguille.
- Préparer la machine à gaz d'anesthésie: vérifier le système pour assurer la présence de quantités suffisantes d'oxygène et isoflurane pendant toute la durée de la procédure.
- Allumez le débitmètre à 1 L / min. Placer l'animal dans la chambre d'aspiration et de sceller la partie supérieure. Allumez le vaporizer à 3,5% et de suivre l'animal jusqu'à recumbent.
- Enlever l'animal de la chambre et tester la souris par pincement de la patte pour assurer une anesthésie adéquate. Le manque de réponse à une pincée forte indique une anesthésie adéquate.
- Nettoyer le site d'injection avec 70% d'alcool isopropylique.
- Injecter 30 ul de TMEV infectant stocks dans l'hémisphère cérébral droit par injection à main levée (figure 1). Le site d'injection est à mi-chemin entre la ligne des yeux et de l'oreille et juste à côté de la ligne médiane.
- Retour de la souris dans sa cage de retenue une fois pleinement alerte et mobiles (généralement de 3 - 5 min).
- Euthanize souris par exsanguination cardiaque ou une perfusion de 3 à 6 mois après l'infection TMEV, en fonction de la rapidité du développement de la maladie.
2. Rotarod Analyse
- L'appareil Rotarod
- souris d'essai avant l'infection TMEV afin de les familiariser avec lemachine et d'évaluer leur contrôle de la coordination de la balance de base et le moteur normal.
- Démarrez le protocole d'adaptation sur les jours -5 après l'infection (dpi, soit 5 jours avant l' infection TMEV).
- Laisser les souris s'acclimater à la salle d'essai pendant au moins 30 min avant Rotarod tests, afin de leur permettre d'adapter à l'environnement.
- Assurez - vous que l'unité Rotarod et l'ordinateur sont branchés et connectés les uns aux autres (figure 2).
- Pré-régler le Rotarod avec les ppp -5 paramètres de protocole de formation, comme décrit dans le tableau 1.
- Enregistrez le fichier de travail avec la date et l'identification des informations.
- Déplacer la cage contenant l'équipe à tester du rack à une table à côté de la Rotarod. Les souris sont généralement testés dans des escouades de 4.
- Ramassez une souris par la queue et le placer sur la tige, opposée à l'opérateur. Répétez l'opération pour la deuxième à la quatrième souris. Si une souris falls ou des sauts, placez-le dans sa voie sur le Rotarod jusqu'à ce que toutes les souris sont en position. Ignorer si des souris se tournent pour faire face à l'opérateur.
- Après le chargement de toutes les souris, appuyez sur la touche "Entrée" pour commencer l'expérience. Observer les minuteries démarrent automatiquement et les rotations par minute (rpm) sur l'écran pour chaque voie.
- Étant donné que chaque animal tombe de la tige, enregistrer la vitesse de la tige au moment de la chute, ainsi que la durée du temps de l'animal est resté sur la tige. La tige continuera à tourner jusqu'à ce que le dernier animal est tombé de l'ensemble de tige.
- Après toutes les souris ont chuté, utiliser un mouchoir pour enlever toute boli fécales et l'urine de la tige. La présence de l'urine et des matières fécales peut affecter la capacité des souris à saisir la tige.
- Après un repos de 3 minutes, donner aux souris un second, puis un troisième procès. Le temps maximum par procès unique est de 240 sec. Administrer un total de 3 essais au cours de chaque journée de test.
- Retour les souris dans leur cage et les retourner à la crémaillère. A la fin de la session expérimentale, nettoyer le Rotarod avec de l'eau et du savon pour enlever toute la matière fécale de la machine.
- Essuyer la plaque de base avec de l'éthanol à 70%. Arroser toute la machine avec du dioxyde de chlore pour désinfecter.
- Les jours - 4, - 3, - 2 et - 1 pi, pré-régler le Rotarod avec les paramètres de protocole de formation appropriés, tel que décrit dans le tableau 1, et répétez les étapes 2.1.2 à 2.1.12.
- Après avoir obtenu les mesures de base, d'infecter les souris avec TMEV. Prévoyez une période de récupération de pi 6 jours.
| Protocole | Journée Test | La fréquence | Vitesse de démarrage (rpm) | MaxVitesse (rpm) | Accélération | Les procès | ITI |
| (rpm / sec) | (N x sec) | (min) | |||||
| Entraînement | - 5 dpi | Un jour | 1 | 12 | 01/03 | 3x240 sec | 3 |
| - 4 dpi | Un jour | 1 | 13 | 01/03 | 3x240 sec | 3 | |
| - 3 dpi | Un jour | 1 | 14 | 01/03 | 3x240 sec | 3 | |
| - 2; - 1 dpi | Un jour | 5 | 40 | 01/03 | 3x240 sec | 3 | |
| Expérimental | De 7-50 dpi | 2 semaines | 5 | 40 | 05/30 | 3x240 sec | 3 |
| À partir de 51-150 dpi | 1 semaine | 5 | 40 | 05/30 | 3x240 sec | 3 |
Tableau 1: Rotarod Paramètres dans la formation et des protocoles expérimentaux.
- Le protocole expérimental Rotarod
- Sur +7 dpi, pré-régler le Rotarod avec les paramètres de protocole expérimentaux appropriés, tel que décrit dans le tableau 1. Répétez les étapes 2.1.2 à 2.1.10.
- À la fin du procès n ° 3, peser chaque souris et faire une note du poids du corps sur la feuille de données. Nettoyer et désinfecter le Rotarod comme par étapes 2.1.11 et 2.1.12.
- Tester les souris deux fois par semaine pendant les 6 semaines suivantes, tel que décrit ci-dessus. Au bout de 6 semaines (dans laquelle les souris ont probablement atteint une phase de plateau) 8,9, tester les souris une fois par semaine avec le même experimental protocole. Le protocole de test réel dure en moyenne 150 jours, selon le cours de la maladie spécifique.
- Index fonctionnelle neurologique
- Exporter les données brutes dans un fichier tableur et analyser les résultats.
- Data Express comme temps de fonctionnement (figure 3A): ceci est le temps de fonctionnement normal , plus le temps de rotation passive , moins le temps de retard de rotation (tableau 2) 10. Calculer le temps moyen en cours d'exécution des trois essais par jour.
- Exprimer les données comme un indice neurologique fonctionnel (NFI, figure 3B).
- Calculez le seuil de performance de base de chaque souris individuelle. Le seuil de performance de base est déterminée comme étant la moyenne de toutes les durées de fonctionnement du jour + 15 à + 45 pi de 6,7.
- Calculer le NFI comme la moyenne des trois derniers temps moyens de fonctionnement divisé par le seuil de performance de base de ce que 6,7 de souris spécifique </ Sup>.
NOTE: Si le test de fois en cours d'exécution pour une souris le jour + 72, + 76 et + 79 pi sont 55 sec, 45 sec et 50 sec, et le temps de référence pour la même souris était de 135 sec, le NFI pour que la souris sur +79 dpi sera [(45 + 50 + 55) / 3] / 135 ou 0,37.
- Exprimer les données comme un NFI ajusté (adjNFI; Figure 3C): ajuster les données NFI par une valeur de la population pour l'expérience unique.
- Calculer la adjNFI en divisant la valeur NFI par le NFI moyen obtenu par le groupe témoin traité ce jour-là en particulier.
| Terme | Définition |
| temps de fonctionnement normal | Le temps total de la souris passe en cours d' exécution activement sur la tige tournante, à savoir, la latence à l' automne. |
| temps de rotation passive | Le Amontage de fois que la souris est restée sur la tige dans le mode de rotation passive. |
| temps de retard de rotation | La durée pendant laquelle la souris reste sur la tige pendant le mode de rotation passive |
| Mode de rotation passive | Lorsque la souris saisit la tige et tourne sans avoir à déambuler. |
| temps de session total | Montant total du temps de la souris reste sur la tige tournante pendant la session. |
| la performance de base | les performances du moteur pré-dommages évalués pour déterminer le seuil de performance minimum. |
| Neurologique fonction index (NFI) | Index clinique, qui compare chaque performance du moteur de la souris, à savoir, temps de fonctionnement, à tout moment à ses performances de pointe. |
| Ajusté indice de la fonction neurologique (de adjNFI) | Quand un processus de normalisation est appliquée pour ajuster les données NFI par une valeur de la populationl'expérience unique. |
| valeur de la population | Valeur moyenne NFI obtenue par le groupe témoin traité à un jour précis. |
Tableau 2: Définitions des Rotarod paramètres adoptés pour Quantifier neurologiques.
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Representative Results
Le but de cette expérience représentative était de comparer l'incapacité neurologique induite par la souche Daniels (DA) et la souche bean de TMEV. Aux fins de la présente étude, un groupe de 32 souris SJL femelles ont été infectées par voie intracrânienne avec TMEV, soit la souche DA (n = 16) ou la souche BEAN (n = 16), et leurs signes cliniques ont été suivis au fil du temps. Un groupe supplémentaire de 20 souris a été simulée traitée (ie, une solution saline a été injectée par voie intracrânienne) et servi groupe témoin en bonne santé.
Le test de performance Rotarod a été utilisé pour évaluer la progression de la maladie chronique chez les souris TMEV infectées et des contrôles factices. Les souris ont été marqués individuellement l'oreille et soumis au protocole d'adaptation de tous les jours de la semaine avant l'injection de TMEV, puis le protocole de test réel qui a duré 125 jours. Pour chaque jour de test, la durée de fonctionnement, défini comme étant la longueur de timoi la souris resté sur la tige, a été stocké individuellement pour chaque souris que la moyenne des 3 essais pour ce jour-là. données Rotarod est également exprimée en NFI et comme simulacre normalisé adjNFI.
Comme on le voit sur la figure 3A, l' infection par TMEV affectée négativement le temps de fonctionnement des souris. A mesures répétées à deux voies ANOVA ont révélé un effet significatif de l' infection TMEV (F = 56,76, p <0,0001), ainsi qu'un effet significatif du temps (F = 3,26, p <0,0001) et une interaction temps-traitement (F = 8,065, p <0,0001). Multiple test de comparaison de la Dunnett suivante a révélé que les deux groupes de souris TMEV infectées avaient des valeurs de NFI significativement plus faibles que ceux des souris sham (p ≤ 0,01; Figure 3B). La différence était statistiquement significative à partir de la journée + 61 pi jusqu'à la fin du suivi (Figure 3B). Il n'y avait pas de différence comparing progression du handicap chez les souris infectées par la souche bean et les personnes infectées par la souche DA à tous les points de temps (p> 0,5; Figure 3C).
Figure 1:. Injection intracrânienne Pour effectuer des injections intracrâniennes, la souris est et retenu sur une surface solide anesthésiés au gaz. Jusqu'à 30 ul sont injectés en toute sécurité dans le cerveau de la souris. Le site d'injection est d'environ mi-chemin entre la ligne des yeux et l'oreille et juste à côté de la ligne médiane. Une aiguille de 30 G perfore directement le crâne, et une seringue à insuline est idéalement utilisé pour empêcher l'aiguille de l' extension trop profondément dans le cerveau. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 2:. L'appareil Rotarod Le test Rotarod est un test neurocomportemental standard dans lequel les souris sont formés pour fonctionner sur une tige en rotation et sont chronométrés pour combien de temps ils peuvent rester sur la tige , car elle accélère lentement. La tige est suspendue au-dessus d'un plancher de la cage, et les souris essayer naturellement de rester sur la tige pour éviter de tomber au sol. La chute de la tige à la base de l'instrument ne provoque pas de dommage à la souris. A) Un appareil de Rotarod standard se compose d'une tige entraînée par un moteur à vitesse constante ou une accélération. B) Les panneaux divisent la tige dans des couloirs séparés, chacun étant adapté pour un animal individuel. Un nombre total de 4 souris peut être testée au cours de chaque essai. C) La tige est 1.18. (Environ 3 cm) de diamètre, et sa surface est moletée, permettant à la souris pour obtenir une meilleure adhérence. La chute de la souris est précisément suivie par un faisceau de photo quienregistre automatiquement la quantité de temps passé sur la tige. Les données expérimentales sont enregistrées dans un ordinateur après les souris ont tous chuté de la tige. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
Figure 3:. Rotarod test de performance chez les souris TMEV infectées et Sham-contrôles Le test Rotarod a été réalisée pour mesurer la fonction motrice du trompe - l'œil, DA-infectées, et les souris BEAN-infectées. Outre le temps (sec) (A) en cours d' exécution, les données Rotarod ont également été exprimées par un indice de la fonction neurologique (NFI) (B), et une imposture normalisée ajustée NFI (adjNFI) (C). La latence de tomber d'un Rotarod accélération a été mesurée dans trois essais par jour. Les données sont présentées comme moyenne ± erreur standard de la moyenne (SEM). Blue cercle, n = 16 souris BEAN-infectées; carrés rouges, n = 16 souris DA-infectées; triangles noirs, n = 20 témoins sham. S'il vous plaît cliquer ici pour voir une version plus grande de cette figure.
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Discussion
Malgré certaines limites, le test de performance Rotarod représente un outil important pour l'évaluation de la fonction motrice et le dysfonctionnement dans TMEV-IDD ainsi que l'effet des interventions pharmacologiques sur la progression du handicap chez les souris.
Le test Rotarod a été décrite pour la première en 1957 comme un outil de mesure des déficits neurologiques chez les rongeurs 11. Rongeurs doivent marcher sur une tige tournante, avec l'augmentation de la vitesse de rotation, et essayer d'éviter de tomber au sol. La latence de tomber est enregistrée et utilisée comme point final quantitatif pour la fonction motrice: la déficience neurologique plus les animaux ont, plus vite ils tombent hors de la tige. L'avantage évident de ce test sur les systèmes traditionnels de notation visuelle est qu'il génère une variable objective qui peut être utilisé à des fins statistiques pour quantifier les effets des thérapies et des procédures expérimentales sur la progression du handicap 3. systèmes de notation visuels tels que le refle redressementx test peut être préféré comme étant un test plus simple et plus rapide pour évaluer les capacités locomotrices chez les souris. Cependant, ces systèmes manquent de précision d'un test quantitatif comme le test de performance Rotarod, et ils ne devraient donc pas être utilisés pour surveiller l'histoire naturelle ou des changements phénotypiques des souris souffrant de troubles neurologiques doux et progressif. D'autre part, les tests visuels comme le test du réflexe de redressement sont particulièrement adaptés à des souris qui sont trop jeunes ou trop affecté à tester sur le Rotarod.
Afin d'éviter des évaluations déformées du test Rotarod, les paramètres d'essai (taille, la vitesse et l' accélération de la tige tournante; quantité de formation donnée à l'animal, et le traitement des données finales) doivent être reproduites avec soin 3. Aujourd'hui, le test de performance Rotarod est toujours le test de comportement du moteur le plus couramment utilisé, mais il y a peu de consensus sur les paramètres d'essai idéal pour produire des résultats optimaux. Nous avons trouvéDes études avec des souris TMEV-IDD qui ont utilisé des diamètres de tige de 1,18 à 1,6 po. (3-4 cm) 12,13, les taux à vitesse fixe de 5 à 10 tours par minute 12,13, et des taux de 5 à 10 tr / min d'accélération 12-14. Cependant, on ignore si les conclusions sur les différences neurologiques seraient généraliser à d'autres conditions d'essai. Le présent protocole offre des recommandations de paramètres spécifiques de tests qui ont été optimisées et sont donc appropriés pour étudier le handicap neurologique progressive dans le modèle de la souris TMEV-IDD de MS en utilisant le test Rotarod. En particulier, avant d'entreprendre une étude de la fonction motrice Rotarod chez la souris, il est recommandé un certain nombre de facteurs potentiellement importants, entre autres, la performance de base et passive rotation-être considéré.
Tout d' abord, en ce qui concerne la performance de base: exercées et des souris non infectées à améliorer leurs performances du moteur au fil du temps, pour finalement atteindre un plateau stable pendant plusieurs jours ou semaines 8,9. Ceci est erésultat de e du processus normal de l'apprentissage moteur. Toutefois, cette amélioration est pas permanente, et si les souris sont laissés sans formation pendant plusieurs jours, leur performance du moteur sur la tige tournante chutera rapidement 9. Par conséquent, une détermination de la performance de base est cruciale pour différencier l'apprentissage moteur et la récupération effective après une intervention thérapeutique, ainsi qu'entre une baisse du rendement du moteur physiologique et la détérioration due à une procédure expérimentale.
Notre protocole Rotarod optimisé prévoit de former des souris TMEV-IDD de + 15 à + 45 dpi (ie, entre l'encéphalite aiguë, qui se produit au sein de + 3 à + 12 dpi, et feu maladie démyélinisante chronique, qui se développe à partir de + 30 à + 40 dpi) 15. Cela permet l'évaluation de la performance du moteur à la suite d'une démyélinisation progressive et exclut tout déficit qui contribuent en raison du début de l'encéphalite ainsi. Idéalement, la formation Rotarod doit être effectuée avantl'induction de la maladie. Cependant, dans le but de développer une infection chronique du système nerveux central, les souris SJL doivent être injectés par le virus avant leur 7 ème semaine de 16 ans. Comme il est généralement admis que l'âge des animaux que le test Rotarod peut être effectuée sur est de 8 à 26 semaines 17, une session de formation efficace ne peut être réalisée chez la souris avant l' infection TMEV.
Formation et évaluation de la performance de base sont également importantes pour exclure l'effet de la faible motivation, manque de performance de base, et de faibles capacités d'apprentissage. Chaque animal est différent, et ces différences doivent être pris en compte dans l'évaluation de la performance du moteur. Il est préférable de remédier à l'aide d'un indice de performance normalisé de référence, également connu sous le nom de l'IFN. Cet indice tient également compte des fluctuations de performance qui pourraient être observées chez des souris au cours des différentes séances d'essais. Performance variabilité est un problème commun dans les tests de comportement, principalement en raison de facteurs extérieurs à l'expérimentationprotocole, telles que la faible motivation et les expériences passées de l'animal. La moyenne temps de course pour les trois derniers points de temps de chaque souris fournit une estimation de la tendance centrale de la distribution qui est prévu si la performance reste stable. Ceci explique la variabilité au jour le jour la performance individuelle. handicap neurologique sévère est alors définie par des valeurs NFI inférieure ou égale à 0,3, alors que les souris relativement non affectées sont notées avec NFI valeurs supérieures ou égales à 0,7. Malheureusement, cette stratégie ne supprime pas complètement le problème que les changements de motivation pourraient affecter les performances du moteur. Pour remédier à ce problème en outre, les souris peuvent être formés avec l'ajout de fonctionnalités de motivation spécifiques, telles que la privation de nourriture légère avant la formation ou une augmentation de la peur de tomber causée par des hauteurs réglables tombant de 17,5 à 23,5 po. (44,5 à 60 cm).
Deuxièmement, en ce qui concerne les rotations passives ou en boucle: peut-être la menace la plus importante pour la validité des données Rotarod est l'apparition de rotations passives qui se posent lorsque la souris peut accrocher et faire tourner passivement que la tige tourne 18. Bien que la rotation passive est observée sur le Rotarod, en particulier chez les souris connaissant des problèmes de coordination motrice, ce comportement peut entraîner une adaptation à la fin de tomber de la tige, ce qui indique de façon incorrecte une absence de déficit moteur. Par conséquent, une mesure secondaire de la coordination motrice perturbée, ce qui devrait être pris en compte dans l'analyse des données, est le décompte du nombre de fois que la souris se transforme autour de la tige sans tomber. En outre, la rotation passive est fortement influencée par les paramètres de la tâche tels que le degré de la tige 18 de diamètre, de vitesse et d' accélération. Il n'y a pas de solutions parfaites pour réduire le risque de rotation passive, mais une résolution possible peut être l'utilisation d'une tige d'un diamètre plus grand ( par exemple, 1,18 à 3,15 po. (3-8 cm)) ou des nervures moins prononcés de manière à réduire légèrement la poignée de la souris. </ P>
Une limitation de l'essai de performance Rotarod est que l'évaluation du moteur est limitée à une durée d'observation courte. En outre, les tests à différents points de temps dans le cycle lumière-obscurité peut modifier le résultat des tests de comportement 19. Ainsi, afin de remédier à ces problèmes, plusieurs entreprises développent des systèmes d'analyse maison de cage innovantes qui fournissent 24/7 surveillance des comportements de rongeurs. Ces systèmes de surveillance représentent sûrement la technologie la plus récente et la plus excitante disponible en rongeurs recherche comportementale, mais sont encore extrêmement coûteux et pas toujours accessibles aux laboratoires de recherche.
En résumé, le test de performance Rotarod est un test relativement simple, peu coûteux et bien caractérisé pour l'évaluation à long terme de handicap neurologique chez TMEV-IDD, un modèle murin de sclérose en plaques progressive. L'avantage de ce test sur les symptômes cliniques traditionnels marquer des systèmes est qu'il génère une variable objective quantifier les effets de différents médicaments, conditions et procédures sur la fonction motrice. Compte tenu de la robustesse du test de performance Rotarod, en appliquant quelques précautions simples, tel que décrit ci-dessus, cette procédure fournit une base de référence pour évaluer (1) la pertinence du modèle de souris TMEV-IDD pour la SP progressive et (2) son utilité pour tester les thérapies visant à traiter les maladies neurologiques progressives telles que la sclérose en plaques.
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Mice SJL/JCrHsd 4 to 6 weeks old | Envigo | #052 | |
| TMEV virus stock | |||
| Isoflurane vaporizer | Harvard Apparatus | #340471 | |
| Insulin Syringes U- 100 29 g x 0.5 cc | BD | #328203 | |
| Rotamex-5 4 Lane Rota-Rod for Mice with RS-232 and Software | Columbus Instruments | #0890M |
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