Abstract
इस प्रोटोकॉल एक तीन आयामी (3 डी) की पीढ़ी के पूर्व vivo जिगर मॉडल और अध्ययन और वायरल वेक्टर प्रणालियों के विकास के लिए अपने आवेदन का वर्णन है। मॉडल एक मानव hepatocyte सेल लाइन के साथ एक decellularized चूहा जिगर के बाह्य मैट्रिक्स repopulating द्वारा प्राप्त की है। मॉडल एक vascularized 3 डी सेल प्रणाली में अध्ययन के लिए परमिट, रहने वाले जानवरों के साथ संभावित हानिकारक प्रयोगों की जगह ले। एक और लाभ यह मॉडल है, जो पशु मॉडलों की तुलना में मानव शरीर क्रिया विज्ञान के करीब है की humanized स्वभाव है।
इस अध्ययन में, हम एडिनो से जुड़े वायरस (एएवी वेक्टर) से ली गई एक वायरल वेक्टर के साथ इस जिगर मॉडल के पारगमन प्रदर्शित करता है। छिड़काव सर्किट है कि मीडिया के साथ 3 डी मॉडल जिगर की आपूर्ति वेक्टर लागू करने के लिए एक आसान साधन प्रदान करता है। प्रणाली जिगर के प्रमुख चयापचय मापदंडों की निगरानी के लिए परमिट। अंतिम विश्लेषण के लिए, ऊतकों के नमूनों recellulariza की सीमा निर्धारित करने के लिए ले जाया जा सकताऊतकीय तकनीक द्वारा tion। वायरस वेक्टर और दिया transgene की अभिव्यक्ति का वितरण मात्रात्मक पीसीआर (qPCR), पश्चिमी सोख्ता और immunohistochemistry द्वारा विश्लेषण किया जा सकता है। बुनियादी अनुसंधान के क्षेत्र में और जीन चिकित्सीय अनुप्रयोगों के विकास में वेक्टर मॉडल के कई अनुप्रयोगों उपन्यास एंटीवायरल चिकित्सा विज्ञान के विकास, कैंसर अनुसंधान, और वायरल वैक्टर के अध्ययन और उनके संभावित दुष्प्रभावों सहित, कल्पना की जा सकती है।
Protocol
नोट: आरएल Landesamt फर Gesundheit und Soziales (LaGeSo) से अंगों के explantation के लिए नैतिक अनुमोदन प्राप्त किया। यकृत Wister चूहों से explanted थे। अवर रग Cava और जिगर के पोर्टल शिरा एक 22 जी प्रवेशनी साथ cannulated थे। Explanted यकृत की decellularization के लिए तरीके में पहले से वर्णित किया गया है। यहां इस्तेमाल किया 1% सोडियम deoxycholate के साथ एक चूहा जिगर के अत्यधिक छिड़काव द्वारा प्राप्त किया गया 4,5 कोशिकी matrices।
1. एक चूहा जिगर के बाह्य मैट्रिक्स (ईसीएम) के Recellularization
- यकृत सेल लाइन HepG2 का विस्तार
- संस्कृति रोसवेल पार्क मेमोरियल संस्थान (RPMI) 1640 मध्यम 10% भ्रूण बछड़ा सीरम, 2 मिमी glutamine, और पेनिसिलिन 2 मिमी और स्ट्रेप्टोमाइसिन, प्रत्येक के साथ पूरक में हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा सेल लाइन HepG2।
- T175 बोतलों में 1.5 x 10 7 कोशिकाओं बीज और 37 डिग्री सेल्सियस और 5% सीओ 2 में कोशिकाओं को विकसित 2।
- 300 XG पर कोशिकाओं नीचे स्पिन और उन्हें 4 मिलीलीटर पीबीएस में resuspend और एक माइक्रोस्कोप के तहत एक Neubauer चैम्बर के साथ कोशिकाओं की गिनती। एक T175 बोतल लगभग 4.5 10 x 7 कोशिकाओं निकलेगा।
नोट: सुनिश्चित संस्कृति ईसीएम प्रति 6 एक्स 10 8 HepG2 कोशिकाओं (10 x 175 x 10 4-5 8 कोशिकाओं से प्रत्येक के साथ 2 सेमी संस्कृति बोतल) के साथ चूहे जिगर ईसीएम की Recellularization के लिए पर्याप्त सेल नंबर शामिल हैं।
चित्रा 1. bioreactor प्रणाली। ए) इस बायोरिएक्टर प्रणाली कस्टम बनाया था। यह 37 डिग्री सेल्सियस और 5% सीओ 2 अंग मॉडल बनाए रखता है। क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप के प्रवाह की दर को व्यक्तिगत रूप से नियंत्रित किया जा सकता है। बी) जिगर एक विकास कक्ष में रखा गया है और कनेक्टएक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप, एक मध्यम जलाशय, एक बुलबुला जाल और एक प्रेशर सेंसर के होते हैं जो छिड़काव सर्किट, के लिए एड। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
- ईसीएम की Recellularization
- बायोरिएक्टर प्रणाली स्थापित, एक जिगर छिड़काव चैम्बर, एक छिड़काव प्रणाली, मध्यम के एक जलाशय और एक बुलबुला जाल से युक्त। बायोरिएक्टर प्रणाली (121 डिग्री सेल्सियस, 15 मिनट) जीवाणुरहित।
- एक क्रमिक वृत्तों में सिकुड़नेवाला पंप के साथ बायोरिएक्टर सिस्टम को जोड़ने और एक मशीन उपयुक्त परिस्थितियों को उपलब्ध कराने में यह जगह (37 डिग्री सेल्सियस, 5% सीओ 2)। बायोरिएक्टर प्रणाली (चित्रा 1) के जिगर छिड़काव कक्ष में जगह decellularized चूहा जिगर scaffolds 8।
- कनेक्ट cannulated पोर्टल शिरा और रग कावा छिड़काव प्रणाली के लिए ट्यूब क्लिप का उपयोग कर। 150 मिलीलीटर RPMI माध्यम के साथ पाड़ संतुलित करना (1.1 में वर्णित)1.25 मिलीग्राम / मिनट के प्रवाह की दर के साथ 5 डी पर।
- मीडिया सर्किट से जिगर पाड़ डिस्कनेक्ट और एक 5 मिलीलीटर सिरिंज का उपयोग कर के माध्यम से पोर्टल शिरा 3 एक्स 10 8 HepG2 कोशिकाओं के साथ पाड़ (5 मिलीलीटर में) टीका लगाना, हवा बुलबुला गठन से बचने और कोशिकाओं उनके लिए incubating द्वारा ईसीएम फिर से आबाद करने की अनुमति पंप के साथ पाड़ में 1 घंटे के बंद कर दिया।
- धीरे-धीरे पंप का समायोजन, 10 मिनट के लिए 1.25 मिलीग्राम / मिनट के साथ शुरू से प्रवाह की दर में वृद्धि; 2.5 मिलीग्राम / मिनट 20 मिनट के लिए और अंत में 3.75 मिलीग्राम / 30 मिनट के लिए मिनट।
- दोहराएँ कदम 1.2.4-1.2.5 6 एक्स 10 8 की कुल सेल नंबर तक पहुँचने के लिए।
- 3.75 मिलीग्राम / मिनट की एक प्रवाह दर पर बायोरिएक्टर प्रणाली को चलाने के। संस्कृति 2 सप्ताह के लिए recellularized चूहा जिगर।
नोट: ताजा मध्यम (50 एमएल) हर दूसरे दिन के साथ मध्यम से एक तिहाई बदलें। संस्कृति के माध्यम नमूना ऐसे लैक्टेट डिहाइड्रोजनेज गतिविधि, मध्यम नमूनों की पीएच और ग्लूकोज और लैक्टेट की एकाग्रता के रूप में शारीरिक मापदंड, को मापने के लिए।
2. Recellularized चूहा जिगर का पारगमन
- एएवी वैक्टर के बड़े पैमाने पर उत्पादन
- , उत्पादन को शुद्ध, और एएवी वैक्टर यों के रूप में पहले से वर्णित: 11
- संक्षेप में, रोलर बोतलों में एएवी वैक्टर उत्पादन और iodixanol ढाल centrifugation द्वारा उन्हें शुद्ध। PD10 जेल निस्पंदन स्तंभों पर निस्पंदन द्वारा अवशिष्ट iodixanol निकालें। qPCR द्वारा एएवी वेक्टर एकाग्रता एक मानक के रूप में जीनोमिक एएवी डीएनए का उपयोग निर्धारित करते हैं।
नोट: स्वयं पूरक, छद्म AAV2 / 6 वर्तमान अध्ययन में इस्तेमाल वेक्टर एक पत्रकार पारगमन दक्षता और एक endogenously व्यक्त जीन की पछाड़ना के लिए एक shRNA अभिव्यक्ति कैसेट (मानव cyclophilin बी (hCycB), चित्रा 2) के रूप में प्रदर्शित करने के लिए EmGFP इनकोडिंग । सीरोटाइप 6 (2.7 x 10 13 जिगर मॉडल के अनुसार एएवी वैक्टर) के छद्म scAAV वैक्टर के लिए पर्याप्त मात्रा में किया जाता है।
- संक्षेप में, रोलर बोतलों में एएवी वैक्टर उत्पादन और iodixanol ढाल centrifugation द्वारा उन्हें शुद्ध। PD10 जेल निस्पंदन स्तंभों पर निस्पंदन द्वारा अवशिष्ट iodixanol निकालें। qPCR द्वारा एएवी वेक्टर एकाग्रता एक मानक के रूप में जीनोमिक एएवी डीएनए का उपयोग निर्धारित करते हैं।
- , उत्पादन को शुद्ध, और एएवी वैक्टर यों के रूप में पहले से वर्णित: 11
चित्रा 2. आत्म पूरक, छद्म AAV2 / 6 वेक्टर वर्तमान अध्ययन में इस्तेमाल के मानचित्र। जीनोम AAV2 के उल्टे टर्मिनल दोहराता (आईटीआर) के होते हैं और साथ ही साथ सीएमवी प्रमोटर के नियंत्रण के तहत EmGFP encodes नियंत्रण के तहत एक shRNA के रूप में एक U6 प्रमोटर की। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
- लिवर मॉडल के पारगमन
- पीबीएस के संबंधित मात्रा जोड़कर 5 मिलीलीटर में 2.7 x 10 13 वेक्टर जीनोम की एक अंतिम एकाग्रता के लिए एएवी वेक्टर समाधान समायोजित करें।
- प्रवेशनी से ट्यूबिंग को हटाने के द्वारा मीडिया सर्किट से जिगर डिस्कनेक्ट। पोर्टल शिरा के प्रवेशनी के लिए एक 5 मिलीलीटर सिरिंज कनेक्ट और पूर्ण एएवी वेक्टर समाधान (5 एमएल) इंजेक्षन।
नोट: Optionallवाई, जोड़ने फिनोल लाल (5 माइक्रोग्राम / एमएल) के जिगर भर एएवी वेक्टर समाधान के वितरण का पालन करें। - पम्पिंग के बिना 1 घंटे के लिए सेते हैं। धीरे-धीरे प्रवाह की दर में वृद्धि, 10 मिनट के लिए 1.25 मिलीलीटर के साथ शुरू / मिनट; 2.5 मिलीलीटर / 20 मिनट और 30 मिनट के लिए 3.75 मिलीग्राम / मिनट के लिए मिनट। संस्कृति 6 दिनों में recellularized चूहा जिगर।
ध्यान दें: मध्यम से एक तिहाई को बदलें 1.2.7 के तहत नोट के रूप में दी
3. Recellularized transduced चूहा जिगर का आकलन
- Hematoxylin और eosin (एचई) धुंधला और Immunohistochemical विश्लेषण
- एक छुरी का उपयोग कर प्रत्येक जिगर पालि से नमूने (0.5 x 0.5 x 1.5-2 सेमी) ले लो।
- (3.1.1) से 4% paraformaldehyde (पीएफए) 4 डिग्री सेल्सियस पर 1.5 घंटे के लिए 4% sucrose के समाधान में नमूने सेते हैं। (चेतावनी: पीएफए विषाक्त और कैंसर है हमेशा के लिए एक धूआं हुड के भीतर पीएफए रखने के लिए और उपयुक्त सुरक्षात्मक कपड़े पहनते हैं।।) धो पीबीएस के साथ तीन बार (धोने कदम प्रति 1 मिनट) और 8% में सेते4 डिग्री सेल्सियस पर सुक्रोज रात भर।
- प्लास्टिक cryomolds में मध्यम फिक्सिंग डालो, हवा के बुलबुले के मध्यम मुक्त फिक्सिंग में नमूने जगह है। फिक्सिंग के माध्यम जोड़ें जब तक नमूना अच्छी तरह से कवर किया जाता है। स्टोर -80 डिग्री सेल्सियस तक आगे उपयोग में एम्बेडेड नमूने हैं।
- एक cryotome 12 के साथ क्रायो वर्गों (10 माइक्रोन) तैयार करें। Hematoxylin + eosin धुंधला 8 से Recellularization का आकलन करें। जीन के हित (: EmGFP यहाँ) के लिए immunohistochemical धुंधला द्वारा पारगमन दक्षता का आकलन करें।
- आणविक जैविक नमूने
- एक बायोप्सी पंच (व्यास में 4 मिमी) के साथ प्रत्येक जिगर पालि नमूना। कुल शाही सेना, डीएनए और प्रोटीन को अलग EmGFP की transgene अभिव्यक्ति के आकलन के लिए निर्माता के निर्देशों के अनुसार, और hCycB 8 नीचे दस्तक।
Representative Results
Recellularization की हद तक के आकलन के लिए, क्रायो वर्गों प्रत्येक recellularized जिगर मॉडल के प्रत्येक पालि से तैयार थे। वर्गों तो hematoxylin और eosin धुंधला द्वारा विश्लेषण किया गया। चित्रा 3 में देखा जा सकता है, तीन जिगर मॉडल के प्रत्येक पालि, TLM1, TLM2 के रूप में चिह्नित और Ctrl (नियंत्रण जिगर मॉडल है कि recellularized गया था, लेकिन transduced नहीं) (जिगर मॉडल 1 +2 transduced), HepG2 कोशिकाओं के साथ repopulated थे। इस हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा सेल लाइन एक 15 वर्षीय लड़के की अर्जेंटीना ट्यूमर के ऊतक से स्थापित किया गया था। जिगर मॉडलों के कुछ क्षेत्रों में अधिक गहराई दूसरों की तुलना में recellularized थे। इन बदलावों के लिए कारणों से निर्धारित किया जा रह है।
चित्रा 3. Hematoxylin और तीन में से प्रत्येक पालि की eosin दाग जिगर के मॉडल का विश्लेषण किया TLM1 + 2:। Transduced जिगरमॉडल 1 और 2; Ctrl .: नियंत्रण जिगर मॉडल है कि recellularized गया था, लेकिन transduced नहीं। स्केल पट्टी: 200 माइक्रोन। (रेफरी से अनुमति के साथ पुन: मुद्रित। 8.) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
अगले चरण में, जिगर मॉडल के पारगमन मूल्यांकन किया गया था। यह अंत करने के लिए, डीएनए जिगर मॉडलों में से प्रत्येक के 28 पंच बायोप्सी से तैयार किया गया था और वेक्टर अनुमापांक qPCR द्वारा मात्रा गया था। औसत पर, 55 और 90 सेल (वी.जी. / सेल) के अनुसार भाँति वेक्टर जीनोम दो transduced जिगर मॉडल के लिए मापा गया। 2 डी सेल संस्कृति में प्रयोगों से पता चला है 30 वी.जी. / सेल मजबूत transgene अभिव्यक्ति और आरएनएआई की मध्यस्थता मुंह बंद करने के लिए पर्याप्त हैं। EmGFP का उत्पादन आरटी पीसीआर और पश्चिमी सोख्ता द्वारा विश्लेषण किया गया था। वास्तव में, रिपोर्टर की अभिव्यक्ति mRNA और प्रोटीन के स्तर पर बायोप्सी के 80-90% में पाया गया था, क्रमशः।8 पारगमन दक्षता के लिए एक व्यापक तस्वीर प्राप्त करने के लिए, क्रायो वर्गों immunohistologically विश्लेषण किया गया। चित्रा 4 में देखा जा सकता है, जिगर मॉडल के क्षेत्रों है कि सफलतापूर्वक recellularized थे के रूप में DAPI धुंधला द्वारा कल्पना भी मजबूत फ्लोरोसेंट संकेत EmGFP अभिव्यक्ति की प्रतिरक्षाऊतकरसायन विश्लेषण में दे दी है। जैसी कि उम्मीद थी, नियंत्रण जिगर मॉडल, एएवी वैक्टर के साथ नहीं इलाज किया, किसी भी EmGFP अभिव्यक्ति नहीं दिखा था।
चित्रा 4. EmGFP अभिव्यक्ति की Immunohistochemical विश्लेषण प्रकोष्ठों कि repopulated जिगर मॉडल DAPI धुंधला (नीला) द्वारा कल्पना थे। EmGFP अभिव्यक्ति immunochemical धुंधला (लाल) द्वारा कल्पना की गई थी। TLM1 + 2: transduced जिगर मॉडल 1 और 2; Ctrl .: नियंत्रण जिगर मॉडल है कि recellularized गया था, लेकिन transduced नहीं। स्केल पट्टी: 200 माइक्रोन। (अनुमति के साथ फिर से मुद्रितरेफरी से। 8.) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
एक अंतिम परीक्षण में, hCycB की एएवी की मध्यस्थता पछाड़ना QRT- पीसीआर द्वारा विश्लेषण किया गया था। HCycB की पछाड़ना, 70 और 90% के बीच होना पाया गया दो transduced जिगर मॉडल के सभी खण्डों (चित्रा 5) से अधिक औसत।
HCycB की चित्रा एएवी-transduced 3 डी जिगर मॉडल में hCycB 5. आरएनएआई की मध्यस्थता पछाड़ना। मुंह बंद QRT- पीसीआर द्वारा निर्धारित किया गया था। मतलब मूल्यों और मानक विचलन (एसडी) गैर transduced नियंत्रण का मतलब मूल्य को (TLM1 और 2 क्रमशः) प्रत्येक transduced 3 डी मॉडल जिगर के सभी नमूनों के लिए गणना की गई है और सामान्यीकृत (Ctrl।)। (आर से अनुमति के साथ पुन: मुद्रितएफई। 8.) यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
Discussion
पुनर्गठन 3 डी यकृत यहाँ वर्णित एक humanized प्रणाली में वायरल वैक्टर अध्ययन करने के लिए एक मॉडल प्रदान करते हैं। एक मानव हेपैटोसेलुलर कार्सिनोमा सेल लाइन के साथ एक चूहा जिगर के ईसीएम की Repopulation एक vascularized प्रणाली है जो बड़े बायोलॉजिक्स के अध्ययन परमिट उत्पन्न करता है। इन परिणामों के एक सबूत की अवधारणा है कि पुनर्गठन जिगर मॉडल कुशलता से एक वायरल वेक्टर के साथ ट्रांसड्यूस जा सकती हैं।
यहाँ दिखाया प्रयोगों के लिए, जिगर के हर पालि एएवी वेक्टर द्वारा transduced किया गया था। हालांकि, कुछ प्रारंभिक प्रयोगों में, एकल पालियों कोशिकाओं के साथ repopulated नहीं थे। यह नाड़ी तंत्र occluding से सेल मलबे या अन्य घटकों को रोकने के लिए इसलिए महत्वपूर्ण है। सभी पालियों भरकर रखा जा सकता है कि क्या परीक्षण करने के लिए, इस तरह के फिनोल लाल के रूप में एक गैर-विषाक्त डाई जिगर मॉडल के माध्यम से निकाले जा सकते हैं।
एक और महत्वपूर्ण बात जिगर पाड़ बाँझ रखे हुए है। जबकि इथेनॉल या एंटीबायोटिक दवाओं के साथ इलाज disadv हैantageous नाड़ी तंत्र के लिए, γ विकिरण के साथ बाह्य मैट्रिक्स के विकिरण वाहिकाओं संरक्षित और नमूना निष्फल।
इसके अलावा, explanted यकृत का आकार, अलग है, इसलिए कि Recellularization प्रक्रिया और repopulation समय के लिए इस्तेमाल कोशिकाओं की संख्या प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य परिणाम प्राप्त करने के लिए समायोजित किया जा सकता है।
चूहा वर्तमान अध्ययन में इस्तेमाल यकृत अपेक्षाकृत बड़े हैं और कोशिकाओं और परीक्षण अभिकर्मकों (जैसे, एएवी वैक्टर) की बड़ी मात्रा की आवश्यकता होती है। इसके अलावा, repopulation प्रक्रिया दो सप्ताह से अधिक ले लिया। यह प्रतिकृति जो उचित प्रयास के साथ किया जा सकता है की संख्या को सीमित करता है। वर्तमान में हम माउस यकृत, जो चूहे यकृत की मात्रा का केवल लगभग पांचवां रहे हैं के लिए मॉडल स्थापित कर रहे हैं, कम कोशिकाओं और कम परीक्षण अभिकर्मकों के उपयोग की अनुमति। हालांकि सेल नंबर की आनुपातिक पैमाने नीचे उचित लगता है, सही मात्रा furt में निर्धारित करने की आवश्यकताउसके प्रयोगों।
वर्तमान मॉडल की एक और कमी हेपैटोसेलुलर HepG2 सेल लाइन का इस्तेमाल होता है। प्रयोगों से प्रेरित pluripotent स्टेम सेल से भेदभाव hepatocytes है, जो एक physiologically अधिक प्रासंगिक मॉडल प्रदान करेगा के उपयोग को विकसित करने के लिए चल रहे हैं। इसके अलावा, जिगर hepatocytes, जैसे, Kupffer कोशिकाओं और sinosoids के अलावा अनेक प्रकार की कोशिकाओं के होते हैं। हम मानते हैं कि विभिन्न प्रकार की कोशिकाओं को उनके प्राकृतिक वातावरण फिर से आबाद होगा जब एक ईसीएम अनेक प्रकार की कोशिकाओं के साथ recellularized है।
3 डी मॉडल जिगर कई लाभों को जोड़ती है। विवो मॉडल में पारंपरिक का एक बड़ा नुकसान है कि पशु शरीर क्रिया विज्ञान मानव शरीर क्रिया विज्ञान से काफी अलग है। एक मानव रोगी के उपचार के विषाक्त दुष्प्रभाव इसलिए नहीं चल पाता रह सकती है। इस कमी को मानव कोशिकाओं के साथ 3 डी जिगर मॉडल है कि और अधिक बारीकी से हू के जीव विज्ञान को प्रतिबिंबित पुनर्गठन से दूर किया जा सकताआदमी रोगियों।
जिगर मॉडल का दूसरा लाभ यह पशु कल्याण के लिए अपने योगदान है। हालांकि पशु घटकों पुनर्गठन प्रयोगों के लिए आवश्यक हैं, दृष्टिकोण अभी भी 3R सिद्धांत (प्रतिस्थापन, कमी, शोधन) के उद्देश्य के रूप में अधिशेष जानवरों है कि, अन्य पशु प्रयोगों के लिए बलिदान किया गया यानी, कोई अतिरिक्त जानवरों की जरूरत है और किया जा सकता है इस प्रकार है दृष्टिकोण पूरी तरह से जो अक्सर इन विवो प्रयोगों के साथ जुड़ा हुआ है जानवरों की पीड़ा से बचा जाता है। Spheroids एक 3 डी प्रणाली में सेलुलर प्रक्रियाओं का अध्ययन करने के लिए एक विकल्प के उपकरण हैं। हालांकि, spheroids vascularized नहीं कर रहे हैं ताकि बड़े पदार्थों और बायोलॉजिक्स संरचना के भीतरी भागों में गहरी पैठ नहीं है। इन समस्याओं vascularized 3 डी जिगर मॉडल के साथ दूर किया गया है।
यहाँ वर्णित प्रयोगों में, एएवी वैक्टर, जांच की गई, क्योंकि वे जीन चिकित्सीय के लिए सबसे होनहार उम्मीदवारों में से एक हैंअनुप्रयोगों। के रूप में कई जीन चिकित्सकीय दृष्टिकोण जिगर को लक्षित है, जैसे, हेपेटाइटिस वायरस के साथ या अल्फा -1-ऐन्टीट्रिप्सिन की कमी के संक्रमण के उपचार के लिए उद्देश्य, 3 डी जिगर इन एएवी वेक्टर विकास की प्रक्रिया में इस्तेमाल किया जा सकता है। यह, ज़ाहिर भी अन्य hepatotropic वायरल वैक्टर, जैसे, adenoviral वैक्टर के अध्ययन के लिए उपयुक्त है। इसके अलावा, यह इस तरह के हेपेटाइटिस बी या सी वायरस के रूप में संक्रामक हेपेटाइटिस वायरस का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। यह, उदाहरण के लिए, नई एंटीवायरल रणनीतियों डिजाइन करने के लिए नियोजित किया जा सकता है। इसके अलावा, 3 डी मॉडल अंग उपकरण का वादा किया नया cytostatic चिकित्सा कैंसर के इलाज के लिए और विषाक्तता अध्ययन बाहर ले जाने के लिए विकसित करने के लिए प्रतिनिधित्व करते हैं। लंबे समय पर, कृत्रिम यकृत प्रत्यारोपण के रूप में पुनर्योजी चिकित्सा में इस्तेमाल किया जा सकता है। साथ में ले ली, 3 डी मॉडल जिगर जैव चिकित्सा अनुसंधान के अन्य क्षेत्रों संक्रमण जीव विज्ञान में आवेदन की एक विस्तृत रेंज प्रदान करता है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Incubator | Fraunhofer | / | |
| Peristaltic Pump | Fraunhofer | / | |
| Flange with groove | Duran | 2439454 | modified by gaffer |
| O-Ring Transparent | Duran | 2922551 | |
| Quick Release Clamp | Duran | 2907151 | |
| Flat Flange Lid | Duran | 2429857 | modified by gaffer |
| Screw thread Tube | Duran | 2483802 | modified by gaffer |
| Screw thread Tube | Duran | 2483602 | modified by gaffer |
| Silicone sealing Ring | Duran | 2862012 | |
| Screw Cap | Duran | 2924013 | |
| Screw Cap | Duran | 2924008 | |
| Screw Cap with aperture | Duran | 2922709 | |
| Screw Cap with aperture | Duran | 2922705 | |
| Filter | Sarstedt | 831,826,001 | |
| Silicone Tubing | VWR | 228-1500 | |
| Tube connector | Ismatec | ISM556A | |
| Biocompatible Tubing | Ismatec | SC0736 | |
| T175 culture flasks | Greiner bio-one | 660 160 | |
| RPMI 1640 | BioWest SAS (Th. Geyer) | L0501-500 | |
| glutamine | BioWest SAS (Th. Geyer) | X0551-100 | |
| Trypsin | BioWest SAS (Th. Geyer) | L0940-100 | |
| penicillin/streptomycin | BioWest SAS (Th. Geyer) | L0022-100 | |
| fetal calf serum | cc pro | S-10-M | |
| Tissue-Tek O.C.T. | Weckert-Labortechnik | 600001 | |
| HepG2 | DSMZ | ACC 180 | |
| Cryomold 15 x 15 x 5 mm | Sakura | 4566 | |
| Biopsy punch 4 mm | pfm medical | 48401 | |
| Nucleospin miRNA | Macherey & Nagel | 740971.10 | |
| Nucleospin RNA/DNA Buffer Set | Macherey & Nagel | 740944 |
References
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