Summary
निम्न आलेख को प्रभावी ढंग से limbal स्टेम सेल की कमी (LSCD) की एक स्थायी माउस मॉडल बनाने के लिए एक आसान, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य तकनीक प्रदान करता है। इस पशु मॉडल का परीक्षण और limbal स्टेम सेल रोगों के लिए उपचार की प्रभावकारिता की तुलना में उपयोगी है।
Abstract
Limbal स्टेम सेल की कमी (LSCD) खराबी या limbal उपकला स्टेम कोशिकाओं, जिसके बाद कॉर्निया उपकला कंजाक्तिवा साथ बदल दिया है के नुकसान का एक राज्य है। मरीजों आवर्तक कार्निया दोष, दर्द, सूजन, और दूरदृष्टि की कमी से पीड़ित हैं।
इससे पहले, LSCD के एक murine मॉडल करार दिया और दो अन्य मॉडलों की तुलना में था। लक्ष्य LSCD के अनुरूप एक माउस मॉडल है कि दोनों mimics मानव में phenotype और काफी लंबे समय के लिए यह संभव रोग pathophysiology अध्ययन करने के लिए और नए उपचार का मूल्यांकन करने के लिए बनाने के लिए रहता है उत्पादन किया गया था। इधर, तकनीक और अधिक विस्तार से वर्णन किया गया है।
एक घूर्णन गड़गड़ाहट के साथ एक मोटर चालित उपकरण कॉर्निया की सतह से जंग के छल्ले को दूर करने के लिए या रोगियों में pterygium बिस्तर सुचारू करने के लिए डिजाइन किया गया है। यह एक उपयुक्त उपकरण वांछित LSCD मॉडल बनाने के लिए है। यह एक अच्छी टिप है कि यह छोटी सी आँखों पर काम करने के लिए उपयुक्त बनाता है के साथ एक आसानी से उपलब्ध, आसान करने के लिए उपयोग करने के उपकरण के रूप में हैचूहों में। अपने आवेदन आंखों के लिए अनावश्यक आघात रोकता है और यह अवांछित चोटों में परिणाम नहीं करता है, जैसा कि अक्सर रासायनिक चोट मॉडल के साथ मामला है। के रूप में एक कुंद खुरचनी करने का विरोध किया है, यह तहखाने झिल्ली के साथ उपकला हटा। इस प्रोटोकॉल में, limbal क्षेत्र दो बार abraded किया गया था, और फिर पूरे कार्निया उपकला किनारी से किनारी मुंडा किया गया था। स्ट्रोमा चोट से बचने के लिए, देखभाल कॉर्निया की सतह ब्रश करने के लिए एक बार नहीं उपकला पहले ही हटा दिया गया था लिया गया था।
Introduction
कार्निया उपकला स्पष्टता और कॉर्निया की अखंडता को बनाए रखने के लिए आवश्यक है। यह लगातार उपकला स्टेम कोशिकाओं कॉर्निया और कंजाक्तिवा के जंक्शन पर किनारी-एक संकीर्ण जोन में रहने के साथ जीवन भर नए सिरे से है। ये स्वयं renewing limbal स्टेम सेल, कार्निया उपकला regenerating में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभा दोनों सामान्य रूप से और चोट के बाद। इन स्टेम कोशिकाओं के आंशिक या पूर्ण कमी आवर्तक कार्निया अपरदन, दर्द, कार्निया scarring और neovascularization, जाम कोशिकाओं की उपस्थिति में परिणाम है, और इलाज, कार्निया अंधापन अगर छोड़ दिया। इस हालत limbal स्टेम सेल की कमी (LSCD) के रूप में जाना जाता है और अज्ञातहेतुक हो सकता है; अनुवांशिक; या रासायनिक या थर्मल चोटों, लंबे समय तक संपर्क लेंस पहनते हैं, और जीर्ण सूजन 1-6 के कारण हासिल कर ली।
LSCD पर अनुसंधान के लिए एक उपयुक्त पशु मॉडल की आवश्यकता है कि न केवल mimics मनुष्यों में रोग, लेकिन प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और टिकाऊ है, कम से कम एक साथअन्य कार्निया और नेत्र संरचनाओं को चोट के माउंट। यह मॉडल उपचार का आकलन करने और आणविक और सेलुलर स्तर पर रोग तंत्र को स्पष्ट करने के लिए आवश्यक है। 1 से पहले वर्णित के रूप में एक घूर्णन गड़गड़ाहट के उपयोग के साथ, एक बड़ी आसानी से कि ऊपर उल्लिखित फायदे सुविधाएँ और कम से कम तीन महीने के लिए बनी रहती है LSCD के एक माउस मॉडल विकसित कर सकते हैं। इस अध्ययन का लक्ष्य LSCD का एक सरल, प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य और टिकाऊ माउस मॉडल पेश करने के लिए है।
घूर्णन गड़गड़ाहट एक उपयोगी उपकरण है जो समान रूप से अंतर्निहित स्ट्रोमा 1 घायल हुए बिना उपकला को दूर करता है। यह घाव भरने के अध्ययन में केंद्रीय कार्निया कटाव 7, 8 प्रेरित करने के लिए इस्तेमाल किया गया है। एक माउस में LSCD बनाने के लिए इसके द्वारा प्रस्तुत तकनीक से पहले नहीं बताया गया है। इससे पहले शुरू की गई एक कम वर्दी में चोट-विशेष रूप से किनारी-और एक अधिक चर phenotype 1, 9 पर एक कुंद रंग परिणाम के साथ उपकला स्क्रैप, अधिक बहाली ओ के साथ करने के तरीकोंएफ सामान्य कार्निया उपकला 1। कुंद खुरचनी के विपरीत, घूर्णन गड़गड़ाहट अच्छी तरह से 7, 8, 10 के रूप में उपकला तहखाने झिल्ली को हटा। अन्य सूचना तरीकों स्टेम कोशिकाओं को तोड़ने के लिए इस तरह के सोडियम हाइड्रोक्साइड, एन heptanol, और benzalkonium क्लोराइड, जो न केवल अंतर्निहित आंख संरचनाओं के लिए अवांछित चोट उत्पन्न हो सकता है, लेकिन यह भी महत्वपूर्ण सूजन और बाद में कार्निया अपारदर्शन या करने के लिए नेतृत्व कर सकते हैं के रूप में रसायनों के इस्तेमाल को शामिल उपकला स्क्वैमस इतरविकास 11-15। घूर्णन गड़गड़ाहट इन गंभीर जटिलताओं के साथ संबद्ध नहीं है। शल्य चिकित्सा, limbal उपकला हटाने अकेले या रसायनों 10, 11, 16 के उपयोग के साथ, प्रदर्शन करने के लिए और अधिक कठिन है और छोटे आँखें और एक पतली limbal epithelia (चूहों की तरह) के साथ पशुओं में सबसे अच्छा विकल्प नहीं है। इसके अलावा, हैरत की बात है, अभी भी 10 limbectomy पीछे limbal उपकला के कुछ छोड़ सकते हैं।
नीचे वर्णित तकनीक neovascularization एक साथ LSCD में परिणाम होगाडी conjunctivalization कि रोगियों में पूरा LSCD की प्रस्तुति mimics और कम से कम तीन महीने 1 के लिए रहता है। यह जो चूहों में LSCD या घाव भरने pathophysiology, इम्यूनोलॉजी, और संभावित उपचार का अध्ययन करने के उद्देश्य के लिए उपयुक्त है। शायद, कुछ संशोधनों के साथ, इस प्रक्रिया चूहों या खरगोश 10 में प्रदर्शन किया जा सकता है। घूर्णन गड़गड़ाहट कुशलता उपकला को हटा रूप में, यह कार्निया उपकला घर्षण / लोग घायल हो गए हैं और किसी भी संबंधित उपचार या आणविक जीव विज्ञान के अध्ययन में संबंधित किसी भी अनुसंधान के क्षेत्र में उपयोग किया जा सकता है।
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Protocol
जानवरों पर प्रदर्शन सभी प्रक्रियाओं दृष्टि अनुसंधान के क्षेत्र में पशु उपयोग के लिए विजन और नेत्र विज्ञान बयान में अनुसंधान के लिए एसोसिएशन के साथ पालन। छह महीने की उम्र में पुरुष / महिला C57BL / 6J जंगली प्रकार चूहों को चौदह चार इस्तेमाल किया गया: चोट मॉडल के लिए दस चूहों और चार नियंत्रण जानवरों के रूप में (unwounded कॉर्निया)।
1. पशु तैयारी
- एक 100 मिलीग्राम / किग्रा ketamine के एक intraperitoneal इंजेक्शन और 5 मिलीग्राम / किलो xylazine मिश्रण के साथ एक माउस anesthetize। संज्ञाहरण के बाद प्रभाव में ले लिया गया है, संज्ञाहरण गहराई पुष्टि करने के लिए पैर की अंगुली चुटकी; पशु प्रतिक्रिया नहीं करनी चाहिए।
- किसी भी पिछले कार्निया चोट के अभाव सत्यापित करने के लिए प्रयोगों का आयोजन करने से पहले एक भट्ठा दीपक के नीचे आंख का निरीक्षण किया।
- आंख पर 1% tetracaine हाइड्रोक्लोराइड की एक बूंद टपकाना। 60 के बाद - 90 सेकंड, संवेदना के अभाव पुष्टि करने के लिए कॉर्निया पलटा टेस्ट। Proparacaine हाइड्रोक्लोराइड 0.5% बजाय प्रयोग किया जा सकता है।
- जब कार्निया सनसनी का नुकसान हुआ हैनिश्चित, धीरे आंखों पर और आंख के आसपास बालों पर 5% povidone आयोडीन की एक बूंद जगह है। 1 मिनट के बाद ड्रॉप से साफ कर लें या उपकरण टिप के साथ हस्तक्षेप से बालों को रोकने के लिए आंख के आसपास बालों पर फैल गया।
2. कॉर्नियल उपकला abrading
- सर्जिकल दस्ताने और एक गाउन पहनें। एक बाँझ घूर्णन गड़गड़ाहट और बाँझ चिमटी की एक जोड़ी: आवश्यक उपकरण तैयार करें। बेहतर नियंत्रण के लिए है, तुला चिमटी का उपयोग करें। प्रक्रिया के दौरान एक बाँझ शीट पर उपकरण रखें।
- तुला हुआ चिमटी का प्रयोग, नाक की ओर से पलकों हथियाने और धीरे से आंख से आंख proptosing स्थिर। बहुत अधिक दबाव के प्रयोग से बचें।
- एक सर्जिकल माइक्रोस्कोप के तहत, दो बार बाँझ घूर्णन गड़गड़ाहट का उपयोग limbal क्षेत्र के आसपास 360 डिग्री दाढ़ी। दौर प्रति 6 सेकंड - 5 की रफ्तार के साथ किनारी चारों ओर जाओ।
ध्यान दें: गड़गड़ाहट से एक निश्चित गति है। हालांकि, यह स्थापित गति से बारी बारी से करने के लिए, "अंत अखरोट" पूरी तरह से कड़ा किया जाना चाहिए। - किनारी से पूरे कार्निया उपकला हटाये घूर्णन गड़गड़ाहट के साथ किनारी करने के लिए। बेहतर परिणामों के लिए, एक परिपत्र फैशन में उपकरण कदम है और यह कुछ हद तक कार्निया सतह के समानांतर अपनी टिप के पार्श्व पक्ष के साथ काम करने के लिए पकड़। स्ट्रोमा फिर से ब्रशिंग क्षेत्रों में जहां उपकला पहले ही हटा दिया गया है नहीं द्वारा घायल नहीं ख्याल रखना। आंख पर कोई दबाव लागू न करें। ब्रश टिप साफ आवश्यकता के रूप में।
- कॉर्निया पर बाँझ फॉस्फेट बफर खारा की एक बूंद टपकाना और एक नरम ऊतक सफाई के साथ किसी भी असम्बद्ध उपकला शीट पोंछ।
- शेष उपकला दाढ़ी, यदि कोई हो।
- सर्जरी के दौरान माउस पूंछ पर ध्यान दे।
नोट: किसी भी आंदोलन होता है, संज्ञाहरण गहराई फीका है और आगे इंजेक्शन की आवश्यकता है। प्राथमिक इंजेक्शन की मात्रा के दो तिहाई के लिए एक-तिहाई पर्याप्त होना चाहिए। एनेस्थेटिक दवा के साथ पशु जरूरत से ज्यादा नहीं है। - एक और आंखों पर उन्हें प्रयोग करने से पहले सभी उपकरण जीवाणुरहित।
3. पुष्टि पूरा उपकला निकालना
- कॉर्निया पर 1 मिलीग्राम / एमएल fluorescein सोडियम की एक बूंद लागू करें। 30 सेकंड के बाद कॉर्निया स्वच्छ और एक कोबाल्ट ब्लू फिल्टर के साथ एक खुर्दबीन के नीचे यह जांच उपकला का पूरी तरह हटाने की पुष्टि करें।
नोट: उपकला दोष के साथ कॉर्नियल क्षेत्रों में हरे रंग की कल्पना कर रहे हैं।
4. पोस्ट आपरेशन की देखभाल
- एक हीटिंग कंबल पर पशु रखो और एक सुरक्षित जगह में रखने के (जैसे, अपने पिंजरे में), जबकि वसूली के तहत। होश में लोगों की कंपनी में एक बेहोश पशु न रखें।
- 1% इरिथ्रोमाइसिन नेत्र मरहम लागू करें। यह भी आंख सूखापन को रोकने जाएगा। आवेदन एक सप्ताह के लिए एंटीबायोटिक दैनिक जारी रखें।
- 0.1 मिलीग्राम इंजेक्षन / किलो buprenorphine subcutaneously प्रक्रिया के बाद और फिर 12 घंटे के बाद। दो दिनों के लिए दो बार प्रति दिन इंजेक्शन जारी रखें।
- 30 के लिए पशु पालन - 45 मिनट, संज्ञाहरण से पूरी तरह ठीक होने तक।
ध्यान दें: उदर की सतह पर सांस की मांसपेशियों के हल्के आंदोलन पशु कल्याण को इंगित करता है, जबकि वसूली के तहत।
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Representative Results
इस तकनीक के प्रदर्शन के बाद एक महीने के भीतर, कॉर्निया की 100% सतही neovascularization विकसित (चित्रा 1 ए। तस्वीरें एक उज्ज्वल क्षेत्र और कोबाल्ट ब्लू फिल्टर के तहत एक भट्ठा दीपक से जुड़े एक कैमरा के साथ ले जाया गया)। 18/20 (90%) आँखों के अलावा, neovascularization पूरे कार्निया सतह (चित्रा 1 ए) शामिल किया गया। 2/20 (10%) में, neovascularization चार में से तीन कार्निया quadrants में मनाया गया था, लेकिन यह अभी भी कार्निया केंद्र पर पहुंच गया।
LSCD के विकास को मान्य करने के लिए, पूरे माउंट immunostaining 1 प्रदर्शन किया गया था। यह कदम प्रोटोकॉल का हिस्सा नहीं है और लक्ष्यों और हितों के आधार पर बदला जा सकता है। तीन रूपों LSCD के संकेतक के रूप में माना गया: cytokeratin (सीके) की अनुपस्थिति 12, एक मध्यवर्ती रेशा सामान्य कार्निया उपकला कोशिकाओं 17, 18 के लिए विशिष्ट; CK8 की उपस्थिति, एक सरल epithelia मार्कर
सामान्य, रिहाई कॉर्निया एक्सप्रेस CK12-एक परिपक्व कार्निया उपकला कोशिकाओं 17, 18 कॉर्निया की सतह -throughout के विशिष्ट मार्कर, लेकिन वे किसी भी CK8 से रहित हैं या जाम पूरे माउंट नमूनों की कार्निया हिस्से पर कोशिकाओं (MUC5AC) (चित्रा 1 बी) । सामान्य आंखों की तुलना में, CK12 अभिव्यक्ति injur पर लगभग अनुपस्थित है Y मॉडल कॉर्निया, वे काफी CK8 के लिए सकारात्मक धुंधला दिखाने के लिए और कोशिकाओं जाम (चित्रा 1 बी) है। इन टिप्पणियों LSCD के विकास का संकेत मिलता है।
अगर immunostaining परिणाम बढ़ाता में रुचि रखते हैं, उपयोग छवि-जम्मू को अलग से एक ही सेटिंग के तहत माइक्रोस्कोप द्वारा उठाए गए मूल, अनछुए छवियों पर 20 immunostaining घनत्व यों की। संक्षेप में, पूरे माउंट नमूने की कार्निया भाग का चयन उस क्षेत्र के लिए एकीकृत घनत्व और क्षेत्र को मापने, और पृष्ठभूमि 20 के लिए सही घनत्व की गणना। CK8 घनत्व को CK12 के अनुपात से पहले नमूने 1 की एक बड़ी संख्या पर प्रस्तुत किए गए। की तुलना में कम अनुपात नियंत्रण करने के लिए (सामान्य कॉर्निया) और कॉर्निया की सतह पर जाम कोशिकाओं की उपस्थिति LSCD के विकास का प्रदर्शन।
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चित्रा 1: कॉर्नियल Phenotype चूहे में LSCD बनाने के बाद। भट्ठा दीपक परीक्षा से पता चलता है कि सभी कॉर्निया एक महीने (ए, स्केल पट्टी: 0.5 मिमी) द्वारा neovascularization के कुछ डिग्री का विकास। एक सामान्य कॉर्निया सभी कॉर्निया के ऊपर CK12 व्यक्त करता है, लेकिन किसी भी CK8 या जाम कोशिकाओं (MUC5AC) से रहित है। CK12, LSCD मॉडल में अनुपस्थित है CK8 और जाम कोशिकाओं कॉर्निया (बी, स्केल पट्टी: 200 माइक्रोन) पर प्रकट हुए। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
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Discussion
यह लेख एक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है और अपेक्षाकृत सरल तकनीक LSCD के एक माउस मॉडल बनाने के लिए वर्णन करता है। वहाँ है कि ध्यान देने योग्य हैं इस मॉडल के कई महत्वपूर्ण पहलू हैं। सबसे पहले, विपरीत मॉडल है कि रसायनों के 11, 12 का उपयोग करें, चोट मुख्य रूप से सतह उपकला (और तहखाने झिल्ली), अंतर्निहित कार्निया स्ट्रोमा करने के लिए या अन्य intraocular संरचनाओं के लिए कम से कम नुकसान के साथ शामिल है। इस प्रकार, वहाँ केवल सीमित सूजन और जख्म, जो दोनों की प्रक्रिया को जटिल और इसे और अधिक कठिन limbal स्टेम कोशिकाओं के उद्देश्य से किसी भी हस्तक्षेप के परिणाम का आकलन करने के लिए कर सकते हैं। ली एट अल द्वारा एक दिलचस्प हाल के एक अध्ययन। 10 है, जो शल्य चिकित्सा और रासायनिक उपचार के विभिन्न संयोजनों के साथ घूर्णन गड़गड़ाहट के उपयोग की तुलना, यह भी गड़गड़ाहट पाया सुरक्षित और खरगोशों में LSCD बनाने में अधिक प्रभावी होने के लिए। दूसरा, मॉडल कम से कम करने के लिए तीन महीने 1 के लिए स्थिर हो रहा है। इस मॉडल बनाने का उपयोग शामिल हैघूर्णन गड़गड़ाहट, एक साधन है कि चिकित्सकों जो जो माउस लोग घायल हो गए अध्ययनों से कर के रूप में कॉर्निया के साथ काम करते हैं, के रूप में अच्छी तरह से परिचित है। एक कुंद रंग का उपयोग पर इसका लाभ यह है कि चोट और अधिक समान और प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य 1 है।
बेहतर limbal स्टेम कोशिकाओं को नष्ट करने के लिए, limbal क्षेत्र में दो बार इलाज किया गया था। माउस आँखों पर काम करने का अनुभव के आधार पर, और अधिक से अधिक दो राउंड के उपचार अक्सर limbal रक्त वाहिकाओं abrades और खून बह रहा कारण बनता है। मामले में तकनीक अन्य पशुओं में प्रयोग किया जाता है, इस कदम कार्निया उपकला मोटाई के आधार पर संशोधित किया जा सकता है। इस अध्ययन में, एक 0.5 एमएम गड़गड़ाहट टिप के साथ एक मोटर चालित उपकरण उपयोग किया गया था; अन्य आकृतियों और आकारों में गड़गड़ाहट सुझावों को भी उपलब्ध हैं और कार्निया विशिष्टताओं पर और आंख के आकार पर निर्भर करता है बजाय प्रयोग किया जा सकता है। ली एट अल। 10 2.5 एमएम गड़गड़ाहट सूचना लगातार खरगोश कार्निया और limbal epithelia दूर करने के लिए उपयुक्त हो।
इष्टतम प्राप्त करने के लिएनतीजा, limbal और कार्निया epithelia एक परिपत्र फैशन में मुंडा कर रहे थे और गड़गड़ाहट के पार्श्व की ओर इस्तेमाल किया गया था। उपकरण टिप के साथ हस्तक्षेप से पशु बाल रोकने के लिए, povidone आयोडीन बूंद बजाय से साफ किया जा रहा है, आंख के आसपास बालों पर फैल गया था। उपकरण, एक स्थान में स्थिर रुप से संचालित नहीं होना चाहिए क्योंकि इस छिद्र का कारण बन सकता है। एक बहुत ही धीमी गति से खून बह रहा में परिणाम कर सकते हैं पर किनारी का इलाज; दौर प्रति लगभग 6 सेकंड की गति एक C57BL / 6J माउस आंख के लिए उपयुक्त है। इसे फिर से ब्रशिंग नंगे स्ट्रोमा से बचने के लिए महत्वपूर्ण है, क्योंकि यह अधिक सूजन और स्ट्रोमा अपारदर्शन प्रेरित करेगा। जबकि उपकला abrading दबाव आंखों के लिए लागू नहीं किया जाना चाहिए। प्रक्रिया के बाद, कॉर्निया fluorescein डाई के साथ सना हुआ था पूरा उपकला हटाने के बारे में सुनिश्चित बनाने के लिए। यह जानवरों की वसूली के दौरान आंख सूखापन को रोकने के लिए महत्वपूर्ण है। सीमाओं कि इस तकनीक स्टेम कोशिकाओं की 100% नहीं निकाल सकते हैं। यह भी कुछ हद तक ऑपरेटर पर निर्भर है और सह देने के लिए अभ्यास की आवश्यकता हैnsistent का परिणाम है।
जब कार्निया उपकला phenotype का अध्ययन, पूरे माउंट धुंधला इस मॉडल के परिणाम का आकलन करने के लिए सबसे अच्छा तरीका है। इसका कारण यह है कि यह अनुमति देता है पूरे कार्निया उपकला पर एक बार मूल्यांकन किया जाना है, जबकि पार वर्गों केवल एक विशेष खंड के बारे में जानकारी देना होता है।
इस चलाया तकनीक के रूप में अच्छी तरह से अन्य पशुओं में चूहों में LSCD पैदा कर सकते हैं, और शायद। यह LSCD का एक उपयुक्त मॉडल उपन्यास उपचार अध्ययन करने के लिए और रोग pathophysiology के व्यापक पहलुओं की खोज करने के लिए प्रदान करता है। कुछ परिवर्तन के साथ, यह भी कार्निया घाव भरने, angiogenesis, और lymphangiogenesis अध्ययन में उपयोगी हो सकता है।
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Acknowledgments
लेखकों, रुथ Zelkha, एमएस धन्यवाद इमेजिंग में उसकी उदार सहायता के लिए। यह अनुसंधान मुझे नैदानिक वैज्ञानिक विकास कार्यक्रम पुरस्कार K12EY021475 द्वारा समर्थित किया गया था, एआरडी, राष्ट्रीय नेत्र संस्थान, एनआईएच, और अनुसंधान से एक अप्रतिबंधित अनुदान अंधापन को रोकने के कोर से अनुदान EY01792 को R01 EY024349-01A1 अनुदान। एआरडी रिसर्च से अंधापन को रोकने के लिए एक कैरियर विकास पुरस्कार के प्राप्तकर्ता है।
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Rotating burr: AlgerBrush II rust ring remover | Rumex International Co, Clearwater, FL | 16-141 | 0.5 mm burr. Also available from other companies. |
| Surgical microscope | Wild Heerbrugg, Switzerland | Wild M691 | |
| Digital camera | Nikon, Thailand | ||
| Nikon FS-2 slit lamp | Nikon, Japan | ||
| Polyclonal anti-CK12 antibody | Santa Cruz Blotechnology, CA, | SC-17101 | 1:100 concentration |
| Monoclonal anti-CK8 antibody | TROMA-I-s, Iowa City, IA | AB_531826 | 1:50 concentration |
References
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