Summary
כאן אנו מציגים פרוטוקול להערכת שאירים זרע, נביטה תרדמת בתנאי שדה באמצעות קבור, רצועות זרע שכותרתו כלוריד tetrazolium בדיקות כדאיות (ט"ז).
Introduction
המטרה הכללית של שיטה זו היא להעריך הישרדות זרע ובמהימנות לאורך זמן בתנאי שדה.
בנק זרעי קרקע הם עתודה התפזרו, זרעי קיימא עדיין ungerminated מופצים גם על פני הקרקע, בתוך חול משטח, או בתוך פרופיל הקרקע, אשר עשוי להימשך זמני או במשך שנים רבות 1,2. כאשר שיטות קבורות זרע דומה לזו המוצגת כאן יושמו מחקר 17 שנים באמצעות כמה עשרות מינים, זרעי קיימא נמצאו רבי מהמינים נבדקו 3. תרדמת זרעים היא לחסום זרע נביטה עד השילוב המתאים של תנאי שתיל הישרדות להתעורר 4. נותרים רדומים יכול להרשות זרעים לשרוד בתנאים קשים, כגון טמפרטורות חורף נמוכות, הגבלה מזינה, או בצורה עונתית, עד טריגר חיצוני עבור תרדמת שחרור מאפשר נביטה. מפעיל עבור שחרור תרדמת יכול להשתנות כתוצאה מחשיפת תרכובות קרות, הוארכו שהותירו fזעמם, או תקיפה פיזית על קליפת הזרע דרך שחיקה או במגע עם חומצות הקיבה חיה 5. כרמזי נביטה יכולים להיות סוגים או מינים ספציפיים לעתים קרובות תוצאה של ברירה טבעית בעבר, נביטת זרעים הסתגלותי הוא המתרחש בזמן לא מתאים, ועלול לגרום לתמותת זרע או שתיל או צמיחת שתיל מסכנה. בעוד תרדמת סווגה למספר סוגים על פני המנגנונים של שחרור תרדמת (למשל, תרדמת גופנית, תרדמת פיזיולוגית), 6 תרדמת זרעים נשארת אחד לפחות הבין נושאים בביולוגית צמח. לכן, מחקרים בתחום המאפשרים הערכה על המצב של זרעים בודדים או קבוצות של זרעים בתנאים אקולוגיים רלוונטיים יש כוח הסבר גבוה יותר מענפים פשוט לסמוך על בדיקות נביטת תקן במעבדה.
ניצול של מאפייני זרע ידועים יכול לספק תובנה לתוך המנגנונים של תרדמת. פיקוח על תרדמת זרעים הוא שיתוףmplex, לרבות הבקרה הגנטית של גורמים פיזיולוגיים מורפולוגיים. בעוד הבנה מלאה של הרוחב של מנגנוני תרדמת טרם הובהרה, מודל כללי התפתח, מעורב מערכת יחסים היזון חוזר בין שני ההורמונים הצמחיים Gibberellic החומצה (GA) ו abscisic חומצה (ABA) 7. במודל כללי זו לזרעים עם מרכיב פיסיולוגי התרדמת שלהם, GA משמש אות לשחרור תרדמת, בעוד ABA משמש כדי לשמור על במצב הרדום. השפעות גנטיות אימהיות כמו גם בסביבת הגידול האימהית יכול להשפיע תרדמת ותכונות זרע אחרות, כגון גודל, דרך רקמות שנוצרו אימהי ו -8 אותות התפתחותיים. אימהי שנוצר מבנים חיצוניים (או כיסויי זרע) תהא רשאית להותיר תרדמת, לעיתים בשילוב עם רמזים פיזיולוגיים. מאז כיסויי זרע נגזר אימהי נשלטים על ידי הגנים של הצמח האם, הם עלולים שלא לשקף את ההרכב הגנטי הגרעיני בפועל של הזרע. אנחנו צריכים אותנואד achenes annuus Helianthus מתוך מערך של היברידית יבול-בר חוצה כדי להקניט את השפעות גנטיות העובר לעומת אימהי אלה על מאפייני זרע 9,10. לפיכך, עיצובי מחקר הכוללים מינים שונים, סוגי צלב, או גנוטיפים יכולים ללקט מידע על אקולוגיה וגנטיקה של זרע תרדמת, נביטה והישרדות.
דוגמא חשובה של כמה פנוטיפים נביטה והישרדות זרע יכולים להשפיע דינמיקה באוכלוסייה ניתן לראות אזורי כלאי יבול-בר. בחירה במהלך הביות של צמחי מעובדים תבטל את רוב התרדמת ומפחיתה את יכולתו של זרע לשרוד מחוץ עונת הגידול. עם זאת זרימת גנים, או הכלאה בין הסוגים המעובדים ופרועים באזורים היברידיים יבול-בר יכולה לחדש אללים יבול (או וריאנטים גנטיים) לתוך אוכלוסייה בטבע, עם השפעות אפשריות על דינמיקת בנק זרעים. כלאיים בין קרובים טפחו ופרוע נמצאים פוטנציאל אזורי כלאיים-בר יבול עשוי להחזיקמגוון של פנוטיפים תרדמת ביניים, עם רק כמה פנוטיפים צפויים לשרוד בתנאים מחוץ הטיפוח (למשל, בחודשי החורף) 11.
מטרת כתב היד הזה היא להראות כיצד, בשיטת רצועת קבורת הזרע, אנחנו יכולים להעריך נביטה, תרדמת, והישרדות של מגוון רחב של זני זרעים בתקופות זמן שונים כדי לחקור השונות הטבעיות שלהם בתנאי שדה. בדוגמא שלנו, העסקנו גרעינים מ -15 סוגי צומח פרה היברידי צלב מאז אנו מעוניינים השפעות גנטיות אימהיות העוברות על מאפייני זרע.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. לאסוף זרע ממינים מרובים או מבוקרת צלבים של מין יחיד
הערה: זה זרע למשל בשימוש מ 15 סוגים הדדית בתוך annuus המינים Helianthus (חמניות) באמצעות פרא, היברידי, וסוגי יבול כמו (המייצר זרע) האימהי ההורה.
- בסוף עונת הגידול, לאסוף ראשי זרע בוגרים בשקיות שכותרתו. זרע נקי מזרע מוץ ומניחים מעטפות שכותרתו עם סוג צלב הורי בפורמט סטנדרטי (דהיינו אב x האימהית).
- זרע גורף יחד במעטפות גדולות באמצעות כמויות שווות של זרע ממספר שווה של סוגי צלב הוריים זהים. לדוגמה, 100 זרעים מתוך 10 סוגים צלב עם אותם הורים אימהי ואבהי. לייבל המעטפות עם זיהוי (סוג צלב) מידע. מעטפות גדולות אלו הם אדונים זרע לשימוש במילוי רצועות קבורה בסעיף 2.
| האם אימהי | |||
| האם אבהי | Wild: WxW | F 1: WXC | יבול: CXC |
| Wild: WxW | 0% WxW | 25% F 1 XW † | 50% CxW † |
| BC: WxF1 או F1xW | 12.5% WxBC | 37.5% F 1 xBC | 62.5% CxBC |
| F 1: WXC | 25% WxF 1 † | 50% F 1 XF 1 | 75% CXF 1 † |
| F 2: F 1 XF 1 | 25% WxF 2 | 50% F 1 XF 2 | 75% CXF 2 |
| יבול: CXC | 50% WXC † | 75% F 1 XC † | 100% CXC |
טבלה 1. t צלב הוריםypes המופק אבקה ביד. סוגי צלב היברידיים יבול-בר חמניות יוצרו עם אבקה ביד לשימוש בניסוי קבורת זרע. מתאים לכל סוגי הצלב, ההורה האימהי המפורטים ראשון וההורה האבהי מפורט שני. סוגי צלב מסומנים † הם חלק זוגות סוג צלב גומלין עם אללים יבול באותה% אבל הורים אימהיים שונים. לוח שפורסם בעבר ב: פייס, BA et al. (2015) 15.
2. יצירת רצועות קבורות זרע מותאמים אישית
הערה: בדוגמא זו, היו לנו שלושה טיפולים להסרת תאריך 15 משכפל, כך אנו נדרשים 45 רצועות כוללות. דוגמה זו משתמשת ב -15 תאים לכל רצועת כך, אנו נדרשים מספיק בד או וכילה פוליאסטר מרושת בסדר לשכן 15, 7 x 10 תאים ס"מ. ראה איור 1.
- התחל על ידי חיתוך 20 x 105 ס"מ רצועת בד עבור כל רצועה זרע.
- מדוד וסמן תאים, ואז לקפל את הבד לשניים. שימוש בפוh-טמפרטורה אקדח דבק, לאטום אחד קצר (10 ס"מ) בסוף. לאחר הדבק מתקרר מעט, אבל לא לגמרי, לחץ על הצדדים הבד יחד כדי ליצור חותם.
זהירות: טיפים אקדח דבק ודבק בטמפרטורה גבוהה יכול לגרום לכוויות אם במגע עם העור הוא ממושך. - קווי דבק מהקצה המקופל בקצה הקצר הפתוח בכל סימן תא. לחץ על שני הצדדים הבד יחד לאורך קווי דבק על מנת להבטיח חותמות ללא חורים בין תאים. זרעים הנודדים בין התאים לתרום שגיאה ניסיונית.
הערה: עכשיו כי תאים נוצרו, בקצה פרש צריך להישאר פתוח ומוכן לקבל זרע, וכן פרטים מזהים שלהם (שם סוג צלב). - אקראי להקצות סוגי צלב זרע תאים עבור כל רצועה.
- מלאו תאי זרע עם מספר אחיד של זרעים (20 לכל תא משמשים בדוגמה זו). עבור מדבקות, השתמש סמנים קבעו תעשייתיים על חתך ל-בכושר חצי גן הפלסטיק, כך שהם מסוגליםלעמוד קבורה.
הערה: שיטות תיוג חלופיות יכולות לשמש. - לאחר כל תא מתמלא זרע התווית שלו, לאטום את תא מיד עם אקדח דבק בטמפרטורה גבוהה. המשך עד הרצועה לזרע כולו אטומה לחלוטין. לייבל רצועה הכוללת בתא הראשון עם לשכפל, לחסום ו / או מידע טיפול.
הערה: לצורך המחקר שלנו, מאז נאלצנו להסיר את הזמני, בלוקים, ולשכפל רצועות בתוך בלוקים, כללנו את כל המידע הזה. - בדקו אם פערים בין תאים ודבקים במקום לפי צורך לפני שעברתי לרצועה הבאה.
- מלאו תאי זרע עם מספר אחיד של זרעים (20 לכל תא משמשים בדוגמה זו). עבור מדבקות, השתמש סמנים קבעו תעשייתיים על חתך ל-בכושר חצי גן הפלסטיק, כך שהם מסוגליםלעמוד קבורה.
איור 1. סכמטי זרע רצועת קבורה. דוגמה של רצועת קבורה מראה זיהוי סוג צלב לסלוני הפרט. ההורה אימהי מופיע ראשון עם ההורה האבהי המפורט שני. צבעים מצביעים הורות אימהית שונה,עם צהוב פראי, כחול היברידי F 1, ואדום לזריעה. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
3. Bury רצועות זרע בתחום
- לחפור מגרשים לעומק שצוין רצועות הבית. הקצאת רצועות לבלוקי פרט בו רצועות מסודרות באופן אקראי כדי לאפשר תאריך ההסרה לשמש כזהות עלילת תא הראשית (בדוגמא זו, סוג הצלב) כמו עלילת המשנה בניתוח.
- מכסים רצועות עם האדמה. בד חומרת רשת מתכת Cut להיות 10 סנטימטר גדול יותר מגרשים ומניחים על גבי רצועות קבורות. השתמש U-סיכות כדי לאבטח בקצות קצות בד כיסוי בעפר.
הערה: כיסוי זה מיועד למעט אוכלי זרעים מתחפרים. בתור אפשרות נוספת, מרסר et al. 13 נבנו קבור תיבות של בד חומרה שהקיפו את רצועות הזרע עקב לחץ גופר אינטנסיבי loca בתחומםtion.) - מניח דגלים של המודד צבעוני, להבדיל רצועת תאריכי מיקום והסרה כדי להשלים רשומים כתובים וברור.
4. לחפור רצועות ולהעריך זרע
- לחפור רצועות זרע שהוקצו תאריך הסרה נתון. לשמור על הרצועות בסביבת לחה מגניבה עד שהם מגיעים למעבדה שבה הערכת הזרע תתקיים. ניתן להשיג זאת על ידי לפפה את רצועות העיתון הרטוב והצבתם צידנית על הובלה או משלוח בין לילה.
- שטוף בץ ואדמה מן הרצועות במים עד רצועות נקיות מספיק שברים הללו חיצוניים לא זרעים מעורפלים.
- השתמש במספריים לחתוך תא אחד פתוח בכל פעם. רוזן זרעים מונבטים ולהסיר אותם. רוזן בבירור זרעים מתים (למשל, נרקבו, או זרעים רקוב). מניח זרעי ungerminated על שכותרתו, נייר סופג רטוב פטרי בגודל נוסף להבחין זרעי ungerminated, רדומים, ומתים.
- מניחים צלחות פטרי עם ungerminatedזרעים לתוך מערכת תא צמיחת תנאי נביטה סטנדרטיות: 25 ° C / 10 ° C 12 שעות יום / הלילה. אפשר זרעי שבוע לנבוט. כל זה עושה, ולמנות אותן כפי קיימא, אבל ungerminated מאז הם לא נובטים בתנאי שדה.
- לאחר הטיפול הקאמרי הצמיחה, מבחן הנותר זרעי ungerminated עבור כדאיות באמצעות כלוריד tetrazolium (ט"ז) 13. כדי להשיג זאת, להמציא פתרון אחוז המתאים TZ עבור מין המחקר באמצעות Handbook AOSA tetrazolium בדיקת 14. בדוגמה זו, פתרון 1% משמש.
- חותכים את הזרעים ungerminated לשניים ומניחים מחצית היו העובר האנדוספרם גלויים בצלחת פטרי המכילה פתרון מספיק TZ לכסות את הזרע (זרעים עשויים לצוף, זה בסדר).
- מניחים מנות TZ פטרי לתוך להגדיר באינקובטור ב 30 מעלות צלזיוס ולחכות 3 שעות. הערה: טמפרטורות גבוהות תגרומנה לתגובה מהירה יותר, אם ירצו בכך, אבל overstaining סיכון.
<li> סר צלחות פטרי מן החממה ולהעריך. זרעים אשר מוכתם אדום בעוברים שלהם הם germinable, בעוד זרעים בלא כתם מתים. התייעץ עם מדריך בדיקת AOSA tetrazolium לקבלת פרטים נוספים על מקרים גבוליים מבדיל ומינים בפרט.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
סוגים צלב עם אחוז אלל הורות ועל היבול אימהי מגוון (טבלה 1) שונים ברחבי תאריכי הסרה באחוזים מונבטים, ungerminated, וזרעים מתים (איור. 2 ו -3). באמצעות בדיקות TZ של זרעי ungerminated, מצאנו כמה זרעים רדומים באמת על סילוקו השני (בתחילת האביב) (טבלה 2), בעוד כל הזרעים ungerminated ידי ההסרה השלישית (האביב) נמצאו רדום באמת.
באופן כללי, אחוזי אלל יבול נמוכים מופחתים נביטה הסתגלותי בסתו מאוחר (איור. 2). על סילוקו בתחילת האביב, כל סוגי הצלב היו נביטה גבוהה, אך שונים זה מזה במידה ומשקלם הרוגי ungerminated (האיור. 3). בפרט, סוגים צולבים עם הורות יבול אימהית היו תמותה גבוהה יותר בעוד סוגי צלב בר אימהיים היו בסבירות גבוהים להישאר ungerminated. באביב,נביטה ירדה כמה סוגי צלב. בעוד מנוגד לאינטואיציה, זה כנראה עקב תמותת זרע בתוך הרצועות הקבורות מוקדם נובט סוגי צלב. בהתאם לכך, שיעור התמותה הייתה גבוה יותר עבור סוגי צלב יבול דמוי יותר (כלומר, אלה עם אחוזי אלל יבול הגבוה) המיוצרים על ידי הורים אימהיים יבול (איור. 3)
נביטת איור 2. על סילוקו הראשון בסתו מאוחר. נביטה של סוגים צלב חמניות ברות-יבול במועד ההסרה הראשון, בסתו מאוחר. סוגי צלב מאורגנים על ציר y על ידי הגדלת אחוזי אלל יבול כמסומן. ההורה אימהי מופיע ראשון לכל סוג צלב. נביטה לפחות אמצעי ריבועים (במוטות se) ואחריו באותו מכתב אינם שונים באופן מהותי באמצעות התאמת Tukey-Kramer להשוואות מרובות. איור כבר פורסם בעבר: Pacדואר, et al. (2015) 15. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
איור 3. אחוז מונבטים, ungerminated, ותמותה להסרת השני (בתחילת האביב) והסרת השלישי (באביב). אחוז מונבטים עבור בתחילת האביב (א), באביב (B), אחוז ungerminated עבור בתחילת האביב (C), באביב ( D), ואחוז מת בתחילת האביב (E) והאביב (F תאריכי סילוק). סוגי צומח פרא חמניות צלב היברידי מאורגנים על ידי הגדלת אחוזי אלל יבול, עם הכי הרבה יבול דמוי בחלק העליון של ציר y ו בטבע-כמו רוב בבית התחתון של ציר y. הורה אימהי סוג הצלב מופיע ראשון. לפחות ריבועיםאמצעי זרע נבוט, ungerminated והמת (במוטות se) ואחריו באותו המכתב אינו שונה באופן מהותי באמצעות התאמת Tukey-Kramer להשוואות מרובות. איור כבר פורסם בעבר: פייס, et al (2015) 15.. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.
| סוג קרוס | TZ רדומה | סטיית התקן |
| WxW | 0.071 | .0131 |
| WxBC | 0.041 | .0126 |
| WxF1 | .089 | .0136 |
| WxF2 | 0.054 | .0126 |
| F1xW | 0 | .0126 |
| F1xBC | 0.013 | .0126 |
| WXC | 0.075 | .0131 |
| F1xF1 | 0.007 | .0126 |
| F1xF2 | 0.013 | .0126 |
| CxW | 0 | .0126 |
| CxBC | 0 | .0126 |
| F1xC | 0 | .0126 |
| CxF1 | 0 | .0126 |
| CxF2 | 0 | .0126 |
| CXC | 0 | .0126 |
טבלה 2. זרעים עשויים לתרום לבנק זרע מתמיד. ריבועים פחותים אומרים עבור שבריר האחוז הרדום של זרעי ungerminated על סילוקו השני (בתחילת האביב). זרעים נקבעו קיימא באמצעות כלור tetrazoliumIDE לאחר דגירה בתנאי נביטה חיוביות. לוח שפורסם בעבר ב: פייס, et al (2015) 15..
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
כאן אנו מציגים שיטות באמצעות רצועות קבורת הזרע להתבונן זרע נביטה, תרדמת ותמותה של מלאי מקור מגוונים בתקופות זמן שנבחרו מראש בתחום. היתרונות של שימוש רצועות ולא מנות בודדות לשכב (1) מהירות רצועה ובניית תא על בריאה של מנות בודדות; ו (2) הקלות והמהירות של הסרת תאים מרובים בתנועה אחת ללא הסכנה של השמטת חבילה או הסרה אחד שלא בכוונה. כפי שני מבין המועדים להסרת בדוגמה המוצגת כאן היו בחודשי החורף כאשר הקרקע היא קשה והן מבחינת התנאים הם קרים, שיטה זו מפחיתה הן העבודה ואת הפוטנציאל לטעויות אנוש. רצועות זרע גם סיוע לוגיסטי ניסיוני בכך שהוא מאפשר לחוקרים באקראי במקומות compartmental במעבדה באופן שלא ניתן לשנות על ידי טעות אנוש בתחום. באמצעות מבחר של פעמי הסרה שהקיפה את רוחב היריעה של פעמי נביטה טבעית חזה היינומסוגל לעשות היקשים על בנק זרעי דינמיקה-בדוגמא שלנו פוטנציאל זרע היברידי להתמיד בנק זרעים ולתרום לאוכלוסיות בעתיד. מגבלה אחת של שיטה זו היא שחלק הגירה של זרע בין התאים עשויה להיות בלתי נמנעת, תלוי בגודל של הזרע. מסיבה זו, (וכאמור בפרוטוקול) חשוב כי חוקרים לבדוק שוב את החותמות דבקות בטמפרטורה הגבוהה בין תאים כדי למזער גירת זרע.
כמה בעיות עם ניסויים קבורים זרע ניתן להימנע על ידי חשיבה בערמומיות על עיתוי. בחר את התאריכים מבוקשים קבורים והסרה בזמנים רלוונטיים המחזורים הטבעיים של מיני מחקר ואת מטרות המחקר. עדיף לשתול בהקדם לאחר הזרע טבעי לשפוך ככל האפשר. תאריכי ההסרה יש לבחור מבוסס על תצפיות של זמן הופעתה שתיל שיא הערכת התנהגות נביטה נורמלית; התוספת של בתאריכים מוקדמים יותר גם מאפשרת לחוקרים ללכוד נביטה מוקדמת. Because העבודה הקודמת שלנו ציינה כי כמה נביטה הסתגלותי הייתה המתרחשים עקב להשלים חוסר תרדמת בכמה סוגי צלב, בחרנו תאריך פינוי מוקדם מאוד רק כמה שבועות לאחר הקבורה (הסרת 1, בסוף הסתיו) 15, 16.
היתרון של רצועות על מנות בודדות הוא כי תריסר או יותר תאים יכולים להיקבר, מוסר, ומוערכת כאחת, המאפשרים עיצובים ניסיוניים מורכבים הכול, החלתי בפגישות הסרות מרובות להשקיה או טיפולים מזינים. חוקרים צריכים לדאוג לבנות בלוקים המאפשרים הטיפולים הם מודאגים ביותר בהבנה להיות ההשפעה העיקרית. בדוגמא שלנו הדגישה התנהגות זרע לאורך זמן, אבל טיפולים אחרים יכולים להחיל שיחייב שיקול של פריסת שדה ולשכפל הסדר בתוך בלוקים במהלך שלב תכנון הניסוי. על ידי הקצאת באקראי רצועת עמדה קבורה בתוך בלוקים, זמן הסרת ניתן לנתח כמו ההשפעה העיקרית.
<p class = "jove_content"> לאחר הסרת רצועות זרע, הכנת ערימה מראש שכותרתו נייר סופג פטרי בגודל עבור הרצועה השלמה לפני ההערכה מתחילה מפחית טעויות אנושות. באופן דומה, פתיחה והערכת תא אחד בכל פעם עוזרת לשמור על דיוק. כאשר מנחיתים זרעי ungerminated לתאי הגידול, כדי להיות בטוח כי טמפרטורות היום והלילה להתאמת תנאי נביטת זרעים אופטימליים עבור מיני מחקר. בעוד תנאים סטנדרטיים נביטה (25 ° C / 10 ° 12 C שעה יום / לילה) עשוי להיות מתאים עבור מגוון רחב של מינים, זה לא המקרה עבור כל המינים.תחשוב על זה את יישום טיפול TZ והערכה של דפוסי מכתים זרע משפיעים מאוד משתנה מחקר. בבואו לבחון את זרעי ungerminated לאחר הטיפול הקאמרי הצמיחה, להתייעץ בספרות (או בהוראות בדיקת AOSA tetrazolium 14) עבור בריכוז הנכון של TZ עבור מין נתון. בעוד לשפוט אדם TZ מוכתם seeds, חשוב לזכור את ההבדל בין כדאיויות זרע והיכולת של זרע לנבוט-בחולשת זרעים מוכתמים עשויים להצביע הנושמת רקמות, אשר עשוי להיות מסוגלים להגיח מהאדמה ולייצר שתיל. לאמור, זרעים רדומים באמת הוא אלה שנשארים ungerminated בתנאי נביטה אופטימליים, אך כאשר נבדקו עדיין בתוקף קיימא. זרעים אלה הם הזרעים רק עשויים לתרום לבנק זרע עיקש לנבוט בשנים הבאות.
מספר יישומים עבור שיטות אלה אפשריים מעבר לאלה המפורטים כאן. יכולות להיות מותאמות אישית זרע רצועות קבורות עבור עיצובים כל מספר של ניסוי יחידות וניסיוני כמעט. הם יכולים להיות מיושמים כדי להשוות מינים שונים, בגדלים זרע, או תנאים / טיפולים. בונים על שיטות אלה יש פוטנציאל להעמיק את הידע של הביולוגיה זרע היסוד של מינים רבים בהקשר רלוונטי מבחינה אקולוגית.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Small coin envelopes | Any | ||
| Large coin envelopes | Any | ||
| fine meshed polyester mosquito netting | Any | ||
| high-temperature glue gun | Any | ||
| high-temperature glue stick refills | Any | ||
| Industrial permenant markers | Any | ||
| plastic garden labels | Any | ||
| scissors | Any | ||
| Shovel | Any | ||
| Metal mesh hardward cloth | Any | ||
| Surveyor's flags, multiple colors | Any | ||
| Wet newspaper | Any | ||
| cooler | Any | ||
| blotter paper | Any | ||
| petri dishes | Any | ||
| Temp. controlled growth chamber | Any | ||
| razor blades | Any | ||
| Petri dishes | Any | ||
| Tetrazolium chloride | Any | ||
| water | Any | ||
| heat incubator | Any |
References
- Walck, J. L., Baskin, J. M., Baskin, C. C., Hidayati, S. N. Defining transient and persistent seed banks in species with pronounced seasonal dormancy and germination patterns. Seed Sci Res. 15 (3), 189-196 (2005).
- Alexander, H. A., Schrag, A. M. Role of soil seed banks and newly dispersed seeds in population dynamics of the annual sunflower. Helianthus annuus. J Ecol. 91, 987-998 (2003).
- Burnside, O. C., Wilson, R. G., Weiseberg, S., Hubbard, K. Seed longevity of 41 weed species buried 17 years in eastern and western. Weed Sci. 44 (1), 74-86 (1996).
- Baskin, C. C., Baskin, J. M. Seeds: Ecology, biogeography, and evolution of dormancy and Germination. , Academic Press. San Diego, CA. (2001).
- Finch-Savage, W. E., Leubner-Metzger, G. Seed dormancy and the control of germination. New Phytol. 171, 501-523 (2006).
- Baskin, J. M., Baskin, C. C. A classification system for seed dormancy. Seed Sci Res. 14 (1), 1-16 (2004).
- Donohue, K., et al. Environmental and genetic influences on the germination of Arabidopsis thaliana in the field. Evolution. 54 (4), 740-757 (2005).
- Roach, D. A., Wulff, R. D. Maternal effects in plants. Ann Rev Ecol Syst. 18, 209-235 (1987).
- Pace, B. A., Alexander, H. M., Emry, J. D., Mercer, K. L. Seed fates in crop-wild hybrid sunflower: crop allele and maternal effects. Evol Appl. 8 (2), 121-132 (2015).
- Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids. Am J Bot. 101 (7), 1176-1188 (2014).
- Stewart, N. C., Matthew, J., Halfhill, D., Warwick, S. I. Transgene introgression from genetically modified crops into their wild relatives. Genetics. 4, 806-817 (2003).
- Mercer, K. L., Shaw, R. G., Wyse, D. L. Increased germination of diverse crop-wild hybrid sunflower seeds. Ecol Appl. 16, 845-854 (2006).
- Delouche, J. C., Still, T. W., Rapset, M., Lienhard, M. The tetrazolium test for seed viability. Mississippi Sta Uni Ag Exp Sta Techn Bull. 51, 1-63 (1962).
- Association of Official Seed Analysts. Tetrazolium Testing Handbook. , 653 Constitution Avenue NE, Washington, DC 20002, USA. (2010).
- Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids. Am J Bot. 10 (7), 1176-1188 (2014).
- Weiss, A. N., Primer, S. B., Pace, B. A., Mercer, K. L. Maternal effects and embryo genetics: germination and dormancy of crop-wild sunflower hybrids. Seed Sci Res. 23, 241-255 (2013).
