Summary
यहाँ हम दफन, लेबल बीज स्ट्रिप्स और tetrazolium क्लोराइड (चतुर्थ) व्यवहार्यता परीक्षण का उपयोग कर क्षेत्र की स्थिति के तहत बीज उत्तरजीविता, अंकुरण और निद्रा का आकलन करने के लिए एक प्रोटोकॉल प्रस्तुत करते हैं।
Introduction
इस विधि के समग्र लक्ष्य मज़बूती से क्षेत्र की शर्तों के तहत समय के साथ बीज अस्तित्व का आकलन करने के लिए है।
मिट्टी बीज बैंकों वितरित या तो मिट्टी की सतह पर, सतह कूड़े के भीतर, या मिट्टी प्रोफाइल के भीतर छितरी हुई है, व्यवहार्य अभी तक ungerminated बीज, जो क्षणिक या कई वर्षों 1,2 के लिए बना रह सकता है के एक आरक्षित हैं। बीज दफन यहाँ प्रस्तुत उन लोगों के लिए इसी तरह के तरीकों कई दर्जन प्रजातियों का उपयोग कर एक 17 साल के अध्ययन के लिए लागू किया गया है, व्यवहार्य बीज 3 का परीक्षण किया प्रजातियों में से कई में पाए गए। बीज निद्रा अंकुरण बीज के लिए जब तक जीवित रहने के अंकुर के लिए शर्तों का उचित संयोजन उठता 4 एक ब्लॉक है। जब तक निद्रा-रिहाई के लिए एक बाहरी ट्रिगर अंकुरण के लिए अनुमति देता है निष्क्रिय शेष, बीज इतनी कम सर्दियों के तापमान, पोषक तत्व सीमा, या मौसमी सूखे के रूप में कठोर परिस्थितियों, जीवित रहने के लिए अनुमति दे सकते हैं। निद्रा-रिहाई के लिए ट्रिगर जोखिम से बढ़ा ठंड, एफ द्वारा छोड़ा यौगिकों करने के लिए भिन्न हो सकते हैंगुस्सा, या घर्षण या जानवर पेट में एसिड 5 के साथ संपर्क के माध्यम से बीज कोट पर शारीरिक हमला। अंकुरण संकेतों पीढ़ी या विशिष्ट प्रजातियों हो सकता है और अक्सर अतीत प्राकृतिक चयन से परिणाम के रूप में, maladaptive बीज अंकुरण जो कि एक अनुचित समय पर होता है, और बीज या अंकुर मृत्यु या गरीब अंकुर विकास में हो सकता है। निद्रा निद्रा रिहाई (जैसे, शारीरिक निद्रा, शारीरिक निद्रा) के तंत्र पर आधारित प्रकार की एक संख्या में वर्गीकृत किया गया है, जबकि 6 बीज निद्रा कम से कम से एक प्लांट बायोलॉजी विषय में समझ में आ बनी हुई है। इस प्रकार, क्षेत्र अध्ययन है कि व्यक्ति के बीज या प्रासंगिक पारिस्थितिक की शर्तों के तहत बीज के समूहों की स्थिति के आकलन के लिए अनुमति देते हैं कि उन लोगों के बस प्रयोगशाला में मानक अंकुरण परीक्षण पर भरोसा करते हैं की तुलना में अधिक व्याख्यात्मक शक्ति है।
ज्ञात बीज विशेषताओं का शोषण निद्रा के तंत्र में अंतर्दृष्टि प्रदान कर सकते हैं। बीज निद्रा का नियंत्रण सह हैmplex, शारीरिक और रूपात्मक कारकों के आनुवंशिक नियंत्रण भी शामिल है। निद्रा तंत्र के विस्तार की पूरी समझ अभी तक स्पष्ट हो गया है, वहीं एक सामान्य मॉडल में उभरा है, दो संयंत्र हार्मोन gibberellic एसिड (जीए) और abscisic एसिड (ए.बी.ए.) 7 के बीच एक राय रिश्ते से जुड़े। उनकी निद्रा के लिए एक शारीरिक घटक के साथ बीज के लिए इस सामान्यीकृत मॉडल में, जीए जबकि ए.बी.ए. निष्क्रिय स्थिति बनाए रखने के लिए कार्य करता है, निद्रा रिहाई के लिए संकेत के रूप में कार्य करता है। मातृ आनुवंशिक प्रभाव के साथ ही मातृ विकास पर्यावरण माता के रूप में उत्पन्न ऊतकों और विकास का संकेत है 8 के माध्यम से निद्रा और इस तरह के आकार के रूप में अन्य बीज लक्षण, प्रभावित कर सकते हैं। माता के बाहरी ढांचे (या बीज कवरिंग) उत्पन्न शारीरिक संकेतों के साथ संयोजन में समय पर, निद्रा बनाए रखने के लिए कर सकता है। चूंकि माता के रूप में ली गई बीज कवरिंग माँ संयंत्र के जीन द्वारा नियंत्रित कर रहे हैं, वे बीज की वास्तविक परमाणु आनुवंशिक मेकअप प्रतिबिंबित नहीं कर सकते। हम हमेंएड फसल जंगली संकर की एक सरणी से सूरजमुखी बीज achenes विशेषताओं पर इन मातृ बनाम भ्रूण आनुवंशिक प्रभाव बाहर तंग करने के लिए पार 9,10। इस प्रकार, अध्ययन डिजाइन कि विभिन्न प्रजातियों, पार प्रकार, या जीनोटाइप में शामिल हैं के बारे में जानकारी बटोरने कर सकते हैं पारिस्थितिकी और बीज निद्रा, अंकुरण और अस्तित्व की आनुवंशिकी।
कैसे बीज अंकुरण और अस्तित्व phenotypes जनसंख्या गतिशीलता को प्रभावित कर सकते हैं की एक महत्वपूर्ण उदाहरण फसल जंगली संकर क्षेत्रों में देखा जा सकता है। पौधों की खेती की पातलू दौरान चयन सबसे निद्रा समाप्त और एक बीज की बढ़ती मौसम के बाहर जीवित रहने की क्षमता कम कर देता है। फिर भी जीन प्रवाह, या संकरण, खेती और जंगली प्रकार के बीच फसल जंगली क्षेत्रों में संकर बीज बैंक गतिशीलता पर संभावित प्रभाव के साथ एक जंगली आबादी में फसल alleles (या आनुवंशिक वेरिएंट) reintroduce कर सकते हैं। खेती और जंगली रिश्तेदारों के बीच संकर संभावित फसल जंगली संकर क्षेत्रों में पाया अधिकारी हो सकता हैमध्यवर्ती निद्रा phenotypes की एक किस्म है, केवल कुछ ही खेती (जैसे, सर्दियों के महीनों) 11 के बाहर की स्थिति जीवित रहने के लिए उम्मीद phenotypes के साथ।
इस पांडुलिपि के उद्देश्य को दिखाने के लिए, बीज दफन पट्टी पद्धति का उपयोग करके, हम इस क्षेत्र की शर्तों के तहत उनके प्राकृतिक विभिन्नता जांच करने के लिए अलग अलग समय समय पर अंकुरण, निद्रा, और बीज प्रकार की एक सीमा के अस्तित्व का मूल्यांकन कर सकते है। हमारे उदाहरण में, हम 15 फसल जंगली संकर पार प्रकार से सूरजमुखी के बीज कार्यरत बाद से हम बीज विशेषताओं पर मातृ एवं भ्रूण आनुवंशिक प्रभाव में रुचि रखते हैं।
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Protocol
1. कई प्रजातियों या एक प्रजाति के नियंत्रित पार से बीज इकट्ठा
नोट: प्रजातियों सूरजमुखी (सूरजमुखी) मातृ (बीज उत्पादन) माता-पिता के रूप में जंगली, संकर, और फसल प्रकार का उपयोग कर के भीतर 15 पार प्रकार से यह उदाहरण बीज का इस्तेमाल किया।
- बढ़ती मौसम के अंत में, लेबल बैग में परिपक्व बीज सिर इकट्ठा। फूस और जगह बीज से बीज स्वच्छ मानक प्रारूप (यानी, मातृ एक्स पैतृक) में माता पिता का पार प्रकार के साथ लेबल लिफाफे में।
- बड़े लिफाफे में एक साथ थोक बीज समान पैतृक पार प्रकार की एक समान संख्या से बीज के बराबर मात्रा में इस्तेमाल करते हैं। उदाहरण के लिए, एक ही मातृ एवं पैतृक माता-पिता के साथ 10 पार प्रकार से 100 बीज। की पहचान (पार प्रकार) के बारे में जानकारी के साथ लिफाफे लेबल। ये बड़े लिफाफे धारा 2 में दफन स्ट्रिप्स भरने में उपयोग के लिए बीज स्वामी हैं।
| मातृ जनक | |||
| पैतृक जनक | जंगली: WxW | एफ 1: WXC | फसल: CXC |
| जंगली: WxW | 0% WxW | 25% एफ 1 XW † | 50% CXW † |
| BC: WxF1 या F1xW | 12.5% WxBC | 37.5% एफ 1 XBC | 62.5% CxBC |
| एफ 1: WXC | 25% WxF 1 † | 50% एफ 1 एक्सएफ 1 | 75% CXF 1 † |
| एफ 2 एफ 1 एक्सएफ 1 | 25% WxF 2 | 50% एफ 1 एक्सएफ 2 | 75% CXF 2 |
| फसल: CXC | 50% WXC † | 75% एफ 1 XC † | 100% CXC |
तालिका 1. माता पिता का पार टीहाथ परागण। सूरजमुखी की फसल जंगली संकर पार प्रकार से उत्पादित बीज ypes दफन प्रयोग में इस्तेमाल के लिए हाथ-परागण के साथ तैयार किए गए। सब पार प्रकार के लिए, मातृ माता-पिता पहले सूचीबद्ध और पैतृक माता पिता दूसरी सूचीबद्ध। क्रॉस प्रकार † के साथ चिह्नित ही% फसल alleles लेकिन अलग मातृ माता पिता के साथ पारस्परिक पार प्रकार जोड़े का हिस्सा हैं। पेस, बीए एट अल: तालिका में पहले में प्रकाशित किया गया है। (2015) 15।
2. कस्टम बीज दफन स्ट्रिप्स बनाएं
नोट: इस उदाहरण के लिए, हम तीन हटाने की तारीख उपचार और 15 प्रतिकृति था, इसलिए हम 45 स्ट्रिप्स की कुल आवश्यकता है। इस उदाहरण का उपयोग करता पट्टी प्रति 15 डिब्बों हां, तो हम 15, 7 x 10 सेमी डिब्बों घर के लिए पर्याप्त ठीक meshed पॉलिएस्टर कपड़े या जाल मच्छर की आवश्यकता है। चित्रा 1 देखें।
- प्रत्येक बीज पट्टी के लिए कपड़े की एक 20 x 105 सेमी पट्टी काटने के द्वारा शुरू करो।
- उपाय और डिब्बों के निशान, तो आधे में कपड़े गुना। एक hig का प्रयोगएच तापमान गोंद बंदूक, एक छोटी (10 सेमी) अंत सील। एक बार गोंद से थोड़ा है, लेकिन पूरी तरह से नहीं होता है, एक मुहर बनाने के लिए एक साथ कपड़े पक्षों दबाएँ।
चेतावनी: उच्च तापमान गोंद और गोंद बंदूक सुझावों का जलता पैदा कर सकता है, तो त्वचा के साथ संपर्क लम्बी है। - प्रत्येक डिब्बे के निशान पर खुला छोटे अंत करने के लिए मुड़ा किनारे से गोंद लाइनों। डिब्बों के बीच छेद के बिना जवानों सुनिश्चित करने के लिए गोंद तर्ज पर एक साथ दो पक्षों कपड़े दबाएँ। डिब्बों के बीच पलायन बीज प्रयोगात्मक त्रुटि के लिए योगदान करते हैं।
नोट: अब जब कि डिब्बों बनाया गया है, सामने आया किनारे खुले और बीज और उनकी पहचान की जानकारी (पार प्रकार नाम) प्राप्त करने के लिए तैयार रहना चाहिए। - बेतरतीब ढंग से प्रत्येक पट्टी के लिए डिब्बों को बीज पार प्रकार आवंटित।
- बीज की एक समान संख्या (प्रत्येक डिब्बे के लिए 20 इस उदाहरण में उपयोग किया जाता है) के साथ बीज डिब्बों भरें। लेबल के लिए, कट-फिट प्लास्टिक गार्डन डार्ट्स पर औद्योगिक स्थायी मार्कर का उपयोग इतना है कि वे करने में सक्षम हैंदफन झेलने।
नोट: वैकल्पिक लेबलिंग तरीकों का इस्तेमाल किया जा सकता है। - बाद प्रत्येक डिब्बे बीज और उसके लेबल से भर जाता है, उच्च तापमान गोंद बंदूक के साथ तुरंत डिब्बे सील। आगे बढ़ें जब तक पूरे बीज पट्टी पूरी तरह से बंद है। दोहराने, ब्लॉक और / या उपचार के बारे में जानकारी के साथ पहले डिब्बे में समग्र पट्टी लेबल।
नोट: हमारे अध्ययन के लिए, जब से हम अस्थायी हटाने, ब्लॉक, था और ब्लॉकों के भीतर स्ट्रिप्स को दोहराने के लिए, हम इस जानकारी के सभी शामिल थे। - के रूप में अगले पट्टी पर जाने से पहले की जरूरत डिब्बों और मौके गोंद के बीच अंतराल के लिए जाँच करें।
- बीज की एक समान संख्या (प्रत्येक डिब्बे के लिए 20 इस उदाहरण में उपयोग किया जाता है) के साथ बीज डिब्बों भरें। लेबल के लिए, कट-फिट प्लास्टिक गार्डन डार्ट्स पर औद्योगिक स्थायी मार्कर का उपयोग इतना है कि वे करने में सक्षम हैंदफन झेलने।
चित्रा 1. दफन बीज पट्टी योजनाबद्ध। व्यक्ति डिब्बों के लिए पार प्रकार पहचान दिखा दफन पट्टी का उदाहरण है। मातृ माता पिता दूसरी सूचीबद्ध पैतृक माता-पिता के साथ पहली बार सूचीबद्ध है। रंग अलग मातृ पितृत्व संकेत मिलता है,जंगली के लिए पीला, एफ 1 संकर के लिए नीले, और फसल के लिए लाल रंग के साथ। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
3. फील्ड में बीज स्ट्रिप्स गाड़
- घर स्ट्रिप्स करने के लिए निर्दिष्ट गहराई तक भूखंडों खोदो। अलग-अलग ब्लॉकों में जो स्ट्रिप्स बेतरतीब ढंग से हटाने की तारीख के लिए अनुमति देने के लिए व्यवस्था कर रहे हैं के लिए स्ट्रिप्स मुख्य साजिश और डिब्बे पहचान (इस उदाहरण में, पार प्रकार) विश्लेषण में subplot के रूप में के रूप में इस्तेमाल किया जा करने के लिए निरुपित।
- पृथ्वी के साथ स्ट्रिप्स कवर। कट धातु जाल हार्डवेयर कपड़े भूखंडों और दफन स्ट्रिप्स से अधिक जगह की तुलना में 10 सेमी बड़ा हो सकता है। का प्रयोग करें U-पिन पृथ्वी के साथ किनारों और कपड़ा कवर किनारों को सुरक्षित करने के लिए।
नोट: इस कवर के बिल खोदने बीज शिकारियों को छोड़कर के लिए है। एक अन्य विकल्प के रूप में, मर्सर एट अल। 13 निर्माण और दफन हार्डवेयर कपड़े के बक्से है कि उनके क्षेत्र में लोका तीव्र गोफर दबाव की वजह से बीज स्ट्रिप्स घिरेtion।) - रंगीन सर्वेक्षक के झंडे की जगह पट्टी स्थान और हटाने तिथियों स्पष्ट लिखित रिकॉर्ड करने के लिए पूरक भेद करने के लिए।
4. स्ट्रिप्स खुदाई और बीज का मूल्यांकन
- बीज स्ट्रिप्स एक दिया हटाने की तारीख को सौंपा खोदो। एक शांत नम वातावरण में स्ट्रिप्स को बनाए रखने के लिए जब तक वे प्रयोगशाला जहां बीज मूल्यांकन जगह ले जाएगा तक पहुँचने। यह गीला अखबार में लपेटकर स्ट्रिप्स और उन्हें परिवहन या रातोंरात शिपिंग के लिए एक कूलर में रखने के द्वारा पूरा किया जा सकता है।
- पानी में स्ट्रिप्स से कीचड़ और मिट्टी कुल्ला जब तक स्ट्रिप्स पर्याप्त है कि बाहरी मलबे होगा अस्पष्ट नहीं बीज साफ कर रहे हैं।
- एक समय में खुला एक डिब्बे में कटौती करने के लिए कैंची का प्रयोग करें। अंकुरित बीज गणना और उन्हें हटा दें। स्पष्ट रूप से मृत बीज (जैसे, सड़, या putrefied बीज) की गणना करें। लेबल, गीला पेट्री आकार स्याहीचट कागज पर ungerminated बीज प्लेस आगे, ungerminated निष्क्रिय, और मृत बीज अलग करने के लिए।
- ungerminated साथ पेट्री डिश रखें25 डिग्री सेल्सियस / 10 डिग्री सेल्सियस 12 घंटा दिन / रात: मानक अंकुरण की स्थिति के लिए एक विकास कक्ष सेट में बीज। एक सप्ताह के बीज अंकुरित करने की अनुमति दें। किसी भी है कि है, व्यवहार्य के रूप में इन गिनती, लेकिन ungerminated के बाद से वे क्षेत्र की स्थिति के तहत उगना नहीं किया।
- विकास कक्ष उपचार के बाद, परीक्षण tetrazolium क्लोराइड (चतुर्थ) 13 का उपयोग कर व्यवहार्यता के लिए ungerminated बीज शेष। इसे पूरा करने के AOSA tetrazolium परीक्षण हैंडबुक 14 का उपयोग अध्ययन प्रजातियों के लिए चतुर्थ उचित के एक प्रतिशत के समाधान को बनाते हैं। इस उदाहरण के लिए, एक 1% समाधान किया जाता है।
- छमाही में ungerminated बीज कट और एक आधा जगह थे भ्रूण और एण्डोस्पर्म बीज को कवर करने के लिए पर्याप्त चतुर्थ समाधान युक्त एक पेट्री डिश में दिखाई दे रहे हैं (बीज फ्लोट कर सकते हैं, यह ठीक है)।
- चतुर्थ पेट्री डिश एक मशीन 30 डिग्री सेल्सियस पर सेट में रखें और 3 घंटा इंतजार करें। नोट: उच्च तापमान, एक तेजी से प्रतिक्रिया में परिणाम होगा अगर वांछित है, लेकिन overstaining एक जोखिम है।
<li> इनक्यूबेटर से पेट्री डिश निकालें और मूल्यांकन। जबकि बेदाग बीज मर चुके हैं कि उनके बीज भ्रूण में लाल दाग है, germinable हैं। विशिष्ठ सीमांत मामलों और विशेष प्रजाति के बारे में अधिक विस्तार के लिए AOSA tetrazolium परीक्षण हैंडबुक से परामर्श करें।
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Representative Results
विविध मातृ पितृत्व और फसल एलील प्रतिशत (तालिका 1) के साथ क्रॉस प्रकार हटाने तिथियों भर में मतभेद प्रतिशत में अंकुरित, ungerminated, और मृत बीज (छवि। 2 और 3)। Ungerminated बीज के चतुर्थ परीक्षण का उपयोग करना, हम दूसरे हटाने (जल्दी वसंत) (तालिका 2) में कुछ सही मायने में निष्क्रिय बीज पाया है, जबकि सभी बीज तीसरे हटाने (वसंत) द्वारा ungerminated वास्तव में निष्क्रिय होना पाया गया है।
सामान्य में, कम फसल एलील प्रतिशत देर से आते हैं (छवि। 2) में maladaptive अंकुरण कम हो। जल्दी वसंत हटाने पर, सभी प्रकार के पार उच्च अंकुरण था, लेकिन उनके अनुपात मर चुका है और ungerminated (छवि। 3) में मतभेद था। विशेष रूप से, फसल मातृ पितृत्व के साथ पार प्रकार उच्च मृत्यु दर था, जबकि मातृ जंगली पार प्रकार के और अधिक ungerminated रहने की संभावना है। वसंत तक,अंकुरण कुछ पार प्रकार के लिए मना कर दिया। जबकि काउंटर सहज ज्ञान युक्त, यह पहले पार प्रकार germinating के लिए दफन स्ट्रिप्स के भीतर बीज मृत्यु दर के कारण होने की संभावना है। तदनुसार, मृत्यु दर अधिक थी फसल की तरह पार प्रकार के लिए उच्च (यानी, उच्च फसल एलील प्रतिशत के साथ उन) फसल मातृ माता-पिता द्वारा उत्पादित (छवि। 3)
चित्रा 2. देर से गिरावट में पहली हटाने पर अंकुरण। पहले हटाने की तारीख में सूरजमुखी की फसल जंगली पार प्रकार के अंकुरण, देर से गिरावट में। क्रॉस प्रकार बढ़ती फसल एलील प्रतिशत के रूप में चिह्नित द्वारा y अक्ष पर आयोजित कर रहे हैं। मातृ माता पिता के प्रत्येक पार प्रकार के लिए पहले सूचीबद्ध है। अंकुरण कम से कम वर्गों साधन (एसई सलाखों के साथ) एक ही पत्र के बाद कई तुलना के लिए एक Tukey-क्रेमर समायोजन का उपयोग काफी अलग नहीं कर रहे हैं। चित्रा पहले में प्रकाशित किया गया है: पीएसीई, एट अल। (2015) 15। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
चित्रा 3. प्रतिशत अंकुरित, ungerminated, और दूसरा हटाने (जल्दी वसंत) और तीसरे हटाने (वसंत)। प्रतिशत जल्दी वसंत ऋतु (ए), बसंत (बी) के लिए अंकुरित, प्रतिशत ungerminated जल्दी वसंत ऋतु (सी), वसंत के लिए के लिए मृत्यु दर ( डी), और जल्दी वसंत प्रतिशत (ई) और वसंत (एफ) को हटाने की दिनांकों को मर चुका है। सबसे फसल की तरह y अक्ष के शीर्ष और y अक्ष के तल पर सबसे जंगली की तरह पर सूरजमुखी की फसल जंगली संकर पार प्रकार के साथ, फसल एलील प्रतिशत बढ़ाने के द्वारा आयोजित कर रहे हैं। पार प्रकार मातृ माता-पिता पहले सूचीबद्ध है। कम से कम दो गुना, अंकुरित ungerminated और मृत बीज (एसई सलाखों के साथ) एक ही पत्र के द्वारा पीछा के लिए इसका मतलब है कई तुलना के लिए एक Tukey-क्रेमर समायोजन का उपयोग काफी अलग नहीं कर रहे हैं। चित्रा पहले में प्रकाशित किया गया है: पेस, एट अल (2015) 15।। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।
| पार प्रकार | चतुर्थ प्रसुप्त | मानक त्रुटि |
| WxW | 0.071 | 0.0131 |
| WxBC | 0.041 | 0.0126 |
| WxF1 | 0.089 | 0.0136 |
| WxF2 | 0.054 | 0.0126 |
| F1xW | 0 | 0.0126 |
| F1xBC | 0.013 | 0.0126 |
| WXC | 0.075 | 0.0131 |
| F1xF1 | 0.007 | 0.0126 |
| F1xF2 | 0.013 | 0.0126 |
| CXW | 0 | 0.0126 |
| CxBC | 0 | 0.0126 |
| F1xC | 0 | 0.0126 |
| CxF1 | 0 | 0.0126 |
| CxF2 | 0 | 0.0126 |
| CXC | 0 | 0.0126 |
तालिका 2 बीज एक लगातार बीज बैंक में योगदान करने की संभावना है। कम से कम वर्गों दूसरा (जल्दी वसंत) हटाने पर ungerminated बीजों का प्रतिशत निष्क्रिय अंश के लिए इसका मतलब है। बीज tetrazolium Chlor का उपयोग कर व्यवहार्य होने के लिए निर्धारित किया गया थाअनुकूल अंकुरण की स्थिति में ऊष्मायन के बाद आईडीई। पेस, एट अल (2015) 15:। मेज पहले में प्रकाशित किया गया है।
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Discussion
यहाँ हम इस क्षेत्र में चुने हुए समय समय पर बीज अंकुरण, निद्रा और विविध बीज कंपनियों के शेयरों की मृत्यु दर निरीक्षण करने के लिए बीज दफन स्ट्रिप्स का उपयोग करने के लिए तरीके प्रस्तुत करते हैं। स्ट्रिप्स के बजाय अलग-अलग पैकेट (1) अलग-अलग पैकेट के सृष्टि पर पट्टी और डिब्बे के निर्माण की गति में झूठ का उपयोग कर के लाभ; और (2) आसानी और एक पैकेट को छोड़ते हुए या अनजाने में एक को हटाने के खतरे के बिना एक प्रस्ताव में कई डिब्बों को हटाने की गति। यहाँ प्रस्तुत उदाहरण में हटाने की तारीखों की दो सर्दियों के महीनों के दौरान के रूप में थे जब मिट्टी कठिन है और क्षेत्र की स्थिति ठंडा कर रहे हैं, इस विधि दोनों श्रम और मानव त्रुटि के लिए क्षमता कम कर देता है। बीज स्ट्रिप्स भी शोधकर्ताओं ने एक तरह से है कि क्षेत्र में मानव त्रुटि द्वारा परिवर्तित नहीं किया जा सकता है में प्रयोगशाला में पूरक स्थानों randomize करने की अनुमति देकर प्रयोगात्मक रसद सहायता। हटाने बार के चयन के माध्यम से उस भविष्यवाणी की प्राकृतिक अंकुरण बार हम थे की चौड़ाई घेरसंभावित बीज बैंक के बारे में inferences बनाने की गतिशीलता में हमारे उदाहरण के लिए संकर बीज बीज बैंक में जारी रहती है और भविष्य आबादी के लिए योगदान करने के लिए सक्षम है। इस पद्धति की एक सीमा है कि डिब्बों के बीच बीज का कुछ माइग्रेशन अपरिहार्य हो सकता है, बीज के आकार पर निर्भर करता है। इस कारण से, (और प्रोटोकॉल में कहा गया है) के रूप में यह महत्वपूर्ण है कि जांचकर्ताओं को उच्च तापमान गोंद जवानों डिब्बों के बीच बीज पलायन को कम से कम करने के लिए दोहरी जांच।
बीज दफन प्रयोगों के साथ कुछ समस्याएं समय के बारे में सोच बड़ी चतुराई से बचा जा सकता है। अध्ययन प्रजातियों के प्राकृतिक चक्र और अध्ययन उद्देश्यों के लिए प्रासंगिक समय पर दफन और हटाने तारीखों का चयन करें। यह रूप में जल्द ही के बाद प्राकृतिक बीज के रूप में संभव बहाने संयंत्र के लिए सबसे अच्छा है। हटाने की तारीखें सामान्य अंकुरण व्यवहार के मूल्यांकन के लिए चोटी के अंकुर उद्भव के समय के अवलोकन के आधार पर चयन किया जाना चाहिए; पहले तारीखों के अलावा भी शोधकर्ताओं जल्दी अंकुरण पर कब्जा करने की अनुमति देता है। Because हमारे पिछले काम संकेत दिया था कि कुछ maladaptive अंकुरण कुछ पार प्रकारों में निद्रा की कमी को पूरा करने के कारण होने वाली थी, हम केवल कुछ ही हफ्तों दफन (1 हटाने, देर से आते हैं) 15, 16 के बाद एक बहुत जल्दी हटाने की तारीख का चयन किया।
अलग-अलग पैकेट के ऊपर स्ट्रिप्स के लाभ यह है कि एक दर्जन या अधिक डिब्बों, दफन किया जा सकता हटा दिया, और एक के रूप में मूल्यांकन, जटिल प्रयोगात्मक सिंचाई या पोषक तत्व उपचार करने के लिए कई हटाने तारीखों से सब कुछ शामिल डिजाइन के लिए अनुमति देता है। जांचकर्ता ब्लॉक कि उपचार वे समझ के साथ सबसे अधिक चिंतित मुख्य प्रभाव होना करने के लिए कर रहे हैं अनुमति के निर्माण के लिए ध्यान रखना चाहिए। हमारे उदाहरण के समय के साथ बीज व्यवहार पर जोर दिया है, लेकिन अन्य उपचार के लिए लागू किया जा सकता है कि क्षेत्र के लेआउट के विचार की आवश्यकता है और प्रयोगात्मक डिजाइन चरण के दौरान ब्लॉकों के भीतर व्यवस्था को दोहराने जाएगा। बेतरतीब ढंग से ब्लॉकों के भीतर पट्टी दफन स्थिति बताए रखकर हटाने के समय मुख्य प्रभाव के रूप में विश्लेषण किया जा सकता है।
<पी वर्ग = "jove_content"> बीज स्ट्रिप्स के हटाने के बाद, पूरे पट्टी से पहले मूल्यांकन शुरू होता है के लिए पेट्री आकार स्याहीचट कागज के एक पूर्व लेबल ढेर तैयारी मानव त्रुटि को कम करता है। इसी तरह, खोलने और एक समय में एक ही डिब्बे के मूल्यांकन सटीकता बनाए रखने में मदद करता है। जब विकास कक्षों में ungerminated बीज रखने के लिए सुनिश्चित करें कि दिन और रात के तापमान अध्ययन प्रजातियों के लिए इष्टतम बीज अंकुरण की स्थिति से मेल हो। मानक अंकुरण की स्थिति (25 डिग्री सेल्सियस / 10 डिग्री सेल्सियस के 12 घंटे के दिन / रात) प्रजातियों में से एक विस्तृत विविधता के लिए उपयुक्त हो सकता है, यह सभी प्रजातियों के लिए मामला नहीं है।कि चतुर्थ उपचार आवेदन और बीज धुंधला पैटर्न के मूल्यांकन जोरदार अध्ययन के परिणाम को प्रभावित करती है पर विचार करें। जब विकास कक्ष उपचार के बाद ungerminated बीज का मूल्यांकन, एक दिया प्रजातियों के लिए चतुर्थ का सही एकाग्रता के लिए साहित्य (या AOSA tetrazolium परीक्षण हैंडबुक 14) से परामर्श करें। जबकि पहचानने व्यक्ति चतुर्थ दाग रोंeeds, यह बीज व्यवहार्यता और एक बीज के अंकुरित-दुर्बलता के दाग बीज ऊतक, जो मिट्टी से उभरने और एक अंकुर उत्पादन करने में असमर्थ हो सकता है respiring का संकेत हो सकता क्षमता के बीच के अंतर को याद करने के लिए महत्वपूर्ण है। यही कारण है कि कहा गया है, वास्तव में निष्क्रिय बीज उन है कि इष्टतम अंकुरण की स्थिति के तहत ungerminated रहते हैं, फिर भी जब जांच अभी भी दृढ़ता से व्यवहार्य हैं। इन बीजों एक लगातार बीज बैंक में योगदान और भविष्य के वर्षों में अंकुरित होने की संभावना केवल बीज होते हैं।
इन तरीकों के लिए आवेदनों की संख्या में यहाँ उल्लिखित उन से परे संभव हो रहे हैं। बीज दफन स्ट्रिप्स प्रयोगात्मक इकाइयों और प्रयोगात्मक डिजाइन के लगभग किसी भी संख्या के लिए अनुकूलित किया जा सकता है। वे विभिन्न प्रजातियों, बीज आकार, या स्थितियों / उपचार तुलना करने के लिए लागू किया जा सकता है। इन तरीकों पर निर्माण क्षमता एक पारिस्थितिकी प्रासंगिक संदर्भ में कई प्रजातियों के मूल बीज जीव विज्ञान के ज्ञान को गहरा करने के लिए है।
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Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Small coin envelopes | Any | ||
| Large coin envelopes | Any | ||
| fine meshed polyester mosquito netting | Any | ||
| high-temperature glue gun | Any | ||
| high-temperature glue stick refills | Any | ||
| Industrial permenant markers | Any | ||
| plastic garden labels | Any | ||
| scissors | Any | ||
| Shovel | Any | ||
| Metal mesh hardward cloth | Any | ||
| Surveyor's flags, multiple colors | Any | ||
| Wet newspaper | Any | ||
| cooler | Any | ||
| blotter paper | Any | ||
| petri dishes | Any | ||
| Temp. controlled growth chamber | Any | ||
| razor blades | Any | ||
| Petri dishes | Any | ||
| Tetrazolium chloride | Any | ||
| water | Any | ||
| heat incubator | Any |
References
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