Summary
초파리 애벌레 수지상 arborization (다) 신경 세포를 사용하여 신경 세포의 형태 형성의 연구는 면역에 의해 신경 세포와 표피 단백질의 현장 시각화 혜택을 누릴 수 있습니다. 우리는 애벌레 몸 벽에서 근육 조직을 제거하여 다 신경 세포와 주변 표피 세포의 면역 형광 분석을 개선하는 절차를 설명합니다.
Abstract
초파리 애벌레 수지상 arborization (다) 신경 세포는 신경 세포의 형태 형성의 메커니즘을 조사하는 인기 모델입니다. 다 신경 따라서 표피가 신경을 분포시키다 세포와 면역에 의해 모두 neuronally 및 epidermally 발현 된 단백질의 현장 시각화에서 자신의 분석 혜택과 통신 개발한다. 면역 실험 애벌레 필렛을 준비하는 전통적인 방법은 신경 세포와 표피 단백질 이미징 몇 가지 과제를 제시, 신체 벽의 대부분을 덮고있는 근육 조직을 그대로 둡니다. 여기에서 우리는 초파리 애벌레 필레에서 근육 조직을 제거하는 방법을 설명합니다. 이 프로토콜은, 달리 근육 조직에 의해 가려 단백질의 촬상을 가능하게 신호 대 잡음 비를 향상시키고, DA 신경 발달을 연구 초해 현미경의 사용을 용이하게한다.
Introduction
초파리 애벌레 수지상 arborization (다) 신경 세포는 그들의 유전자 조작에 복종 할 의무 그들이 이미지화 할 수있는 용이성에 신경 발달을 연구하기위한 귀중한 모델을 제공합니다. 이 감각 뉴런은 수상 돌기의 형태 형성 1-3을 제어하는 다양한 경로의 식별 수단이되고있다.
다 뉴런의 네 가지 클래스 (클래스 I - IV) 애벌레 표피 신경을 분포시키다. 이러한 신경 세포는 수상 돌기는 주로 2 차원 배열을 형성 4,5-으로 기저막와 표피 사이에 놓여. 네 개의 클래스, 클래스 IV 다 신경 세포는 다른 동물의 감각 뉴런과 같은 가장 높은 분기 아버과를 가지고,이 아버의 동화는 개발 6-9에 대한 주변 조직에서 고유 요소뿐만 아니라 큐, 특히 표피가 필요합니다 .
연구 방법 등의 연결 및 추가-신경 사실을 확인하는 방법ORS 면역 형광에 의해 반응계 내에서 단백질 발현을 검출하는 능력에서 수지상 형태 형성 이득을 제어한다. 유충의 외부 표피는 항체에 꿰 뚫을 수없는, 그러나이 장애는 쉽게 잘 확립 된 해부 방법 10, 11을 통해 애벌레 필렛의 준비에 의해 극복된다. 그러나, 기저막 단지 내부 놓여 체벽 근육 조직 DA 신경 세포 및 상피 세포의 가시화를 향해 여러 과제를 제공한다. 우선, 근육 조직, 체벽 대부분 라인은 크게 신경 또는 표피 조직에서 나오는 형광 신호를 가린다. 이것은 실질적으로 샘플 신호 대 잡음비를 감소시킨다. 둘째, 많은 관련 단백질은 근육 조직에서뿐만 아니라 신경 세포 또는 표피에서 발현 될 수있다. 이 근육 유래 형광 신호는 신경 세포 또는 표피에서 형광 신호의 상기 모호한 검출 쉽다. 마지막으로, 아니 현미경 기술의 발전서브 회절 해상도에서 샘플 w 허가 이미징 및 상피 세포 (12, 13)를 신경 세포에서 발현되는 단백질의 현지화 안목과 주변에 특히 도움이 될 수 있습니다. 그러나 잡음비 및 커버 슬립을 시료의 근접에 강한 신호로부터 초해 현미경 이점 통해 촬상. 신호 대 잡음 비를 감소 이외에 유생 체벽 근육 거리시켜 초 해상 현미경 방법으로 달성 될 수있는 개선 된 이미지 해상도를 한정 커버 슬립에서 DA 뉴런. 면역 형광 분석을위한 과제 외에도, 근육 조직은 애벌레 몸 벽에 감각 뉴런에서 전기 생리 기록에 대한 장벽을 제공합니다. 그것의 제거는 따라서 감각 뉴런 (14)의 신경 생리 학적 조작 도움이됩니다.
여기 초파리 유충 근조직의 수동 제거하는 방법이 기재되어있다. 우리는 우리의 프로토콜 페이지 입증그렇지 근조직 의해 가려 단백질 ermits 면역 촬상 클래스 IV 다 뉴런의 시각화를위한 신호 대 노이즈 비율을 개선하고, 더 나은 DA 신경 단백질 및 세포 구조의 공간적 관계를 식별하기 위해 초해 현미경의 사용을 가능하게하며 표피.
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Protocol
주 : 근육을 제거 (도 1)에 대한 절차는 유충 필렛을 제조하는 전술 한 방법의 변형이다. 선행 근육 제거를 수행하는 단계는 간단하게 설명하고 리더 상세한 설명은 이전 연구 10, 11로 지칭된다.
차가운 식염수 1. 해부 애벌레
- 차가운 HL3.1 식염수 15 차가운 칼슘 2 + - 무료 HL3.1 식염수 (11) (표 1)의 작동 희석을 준비합니다. 접시의 바닥을 충당하기 위해 충분한 차가운 생리 식염수와 실리콘 엘라스토머 접시에 애벌레를 놓습니다.
참고 : 식염수의 선택에 관한 토론을 참조하십시오.
| 1 배 HL3.1 식염수 (PH 7.2) |
| 5 mM의 HEPES |
| 70 mM의 염화나트륨 |
| 1.5 mM의 염화칼슘 2 (칼슘 - 무료 식염수를 위해 생략) |
| 4 밀리미터의 MgCl 2 |
| 10 밀리미터의 NaHCO3 |
| 5mM의 트레 |
| 115 MM의 자당 |
| 4 ° C에서 필터 소독 및 저장 |
| 참고 : 체액 곤충 구성을 모방 |
차가운 식염수 표 1. 구성.
- 복부면을 위로 유충을 배치합니다. 유충의 복부 표면은 전방에서 후방으로 실행하는 기본 애벌레 기관 튜브에 의해 복부 dentical 벨트와 지느러미 측에서 식별 할 수 있습니다. 전방 - 후방 방향으로 유충을 스트레칭과에 머리와 꼬리를 핀곤충 핀을 사용 접시 해부 실리콘 엘라스토머. 한쪽 끝에서 시작하여 다른 방향으로 진행, 복부 정중선을 따라 잘라 미세 해부 가위를 사용합니다.
참고 :이 방향은 다 신경 세포의 일반적 연구 등의 클러스터를 유지합니다. - 유충이 절개 된 후, 책을 여는 것처럼 해부 접시 네 모서리를 고정. 중추 신경계, 창자 및 기관을 포함한 내부 장기를 잡아 제거하는 집게를 사용합니다. 필렛이 팽팽하지만 최대한 뻗어있다 그래서 곤충 핀을 조정합니다.
참고 : 근육은 분절 경계에서 몸 벽에 고정된다. 근육이 몸 벽의 대부분을 커버하지만, 그들은 지느러미 중간 선 부근의 좁은 영역에 존재하지 않는다.
2. 근육 제거
- 근육 조직이 존재하지 유충의 지느러미 중간 선을 찾습니다. 이 평평한 가능한 방향으로 근육 조직 아래에 삽입 될 수있는 하나의 셉 단자를 배치합니다.
- 에서 시작지느러미 중간 선은 세그먼트의 전방 경계 근처에 조심스럽게 집게와 표피 사이의 접촉을 최소화하기 위해주의하면서 근육과 표피 사이의 겸자 단자를 밀어 넣습니다.
- 하나의 고정 점에서 몸 벽 근육의 부착을 깰 위로 집게를 잡아 당깁니다. 관심의 나머지 헤미 세그먼트 (들)에 대해이 과정을 반복합니다.
참고 :이 프로토콜은 각각 다 신경 세포의 수상 돌기 필드의 후방의 보존을 최적화합니다. 수지상 필드의 앞쪽 부분을 유지하려면, 각 세그먼트의 후방 끝 부분에 집게의 단자를 삽입하는 것이 가장 좋습니다. - 애벌레 필렛이 최대로 모든 방향으로 뻗어되도록 곤충 핀을 다시 조정합니다.
- 그것은 아직도 25 분 동안 PBS에서 감기, 새로 제조 한 4 % 포름 알데히드를 사용하여 해부 접시에 고정되어있는 동안 필렛을 수정합니다.
- PBS에 5 번 씻어.
- 접점을 최소화하기 위해주의하면서 조심스럽게 나머지 고정 점에서 근육 조직을 멀리 당겨 집게를 사용하여표피와 CT.
- 고정 해제 및 1.5 ml의 microcentrifuge 관에 해부 접시에서 필렛을 제거합니다. 이전 11 설명 된 바와 같이, 모든 후속 세척, 차단 및 면역 형광 염색 단계를 수행합니다.
3. 마운트 애벌레 필렛
- 우선 가능한 샘플이 평평하게하기 위해 미세 해부 가위를 사용하여 머리와 꼬리를 제거합니다. 커버 슬립에 직면 필렛의 내면 antifade mountant에 커버 슬립에 필렛을 탑재합니다.
- 커버 슬립에 현미경 슬라이드를 삽입하고 설치 매체를 분산 부드럽게 누르십시오. 위에 현미경 슬라이드 플립과 매니큐어를 사용하여 슬라이드에 커버 슬립을 밀봉. 프레젠테이션은 적어도 한 달 동안 -20 ℃에서 저장 될 수있다.
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Representative Results
우리는 함께 막 마커로 표지 클래스 IV 다 신경과 중격 접합 단백질 Coracle (코라) 및 디스크 대형 (통해 Dlg)를 공동 시각화 면역 실험에서 신호 대 잡음 비를 향상시키기 위해 근육 제거의 유용성을 입증 CD4- tdTomato.
코라 이전 DA 신경 돌기는 상피 세포에 의해 둘러싼 다 신경 세포의 형태 형성 및 기능과 관련하여 연구를 4,6-9,16 돌기 한 많은 식별 표피 인자의 하나이다되는 책자를 식별하는 데 사용되어왔다. 항을 DsRed와 면역 염색하면 신경 세포 (적색) 및 안티 코라 항체 (녹색)가 근육을 제거 (근육 오프)와 애벌레 필레에 수행 된 감지하고 그대로 근육과 (근육)에 있습니다. 각 조건에 대해, 클래스 IV 다 신경의 후방 수지상 필드는 레이저 스캐닝 공 초점 현미경을 사용하여 영상화 하였다. 이미지 ID를 사용하여 얻을 수 있었다두 조건에 대한 entical 영상 매개 변수를 설정합니다. 우리는 추가로 근조직의 간섭을 보상하기 위해 증가 된 레이저 전력을 사용하여 필렛 근육에 이미징.
근육 오프 샘플에서, 코라는 명확 클래스 IV 다 신경 세포의 수상 돌기를 따라 간헐적 책자에서, 표피 세포의 경계에서 검출하고, 클래스 IV 다 신경 소마 (그림 2C)를 요약 될 수있다. 대조적으로, 이들 도메인의 위치 파악은 주로 (도 2A-2B) 레이저 출력이 증가하더라도, 근육에 샘플 어둡게 하였다. 근육 온 샘플 코라 주로 근육, 기관지에서 가시화시키고 근육 제거의 결과로서 원통 벽으로부터 분리 될 신경근 접합부 (NMJ)에서. 이들 조직에서 나오는 형광 신호가 셀 경계 표피하고 본체 WAL의 좁은 스트립을 제외하고, 책자 덴 드라이트하는 편재 코라의 대부분을 가려근육가없는 지느러미 중간 선 근처 리터. 클래스 IV 다 신경 소마를 설명 코라는 근육에 샘플 (그림 2A-2B)에 가시화되지 않았습니다. 예컨대하는 Dlg와 같은 높은 근육 발현이 epidermally 발현 된 단백질의 시각화는 특히 문제가된다. 근육에 샘플에서, 표피에서하는 Dlg의 분포는 거의 완전히 근육과 NMJ (그림 2D)에서 형광에 의해 가려했다. 근육 제거한 후, 용이하게하는 Dlg DA 신경 돌기를 따라 간헐적 책자에서 표피 세포 경계를 검출하고, 클래스 IV 다 신경 소마 (도 2e)를 개설한다. 따라서, 근육 제거는 달리 근육과 관련된 조직에 의해 가려 epidermally 및 neuronally 발현 된 단백질의 시각화를 가능하게한다.
또한,이 클래스 IV DA 신경 세포 마커 형광 강도가 감소 등장 관찰 필레 근육에촬상 파라미터는 두 개의 샘플 제제 (도 2A, 2C) 사이에서 일정하게 유지 될 때 근육 오프 필렛에 비해. 증가 된 레이저 파워에 의해, 클래스 IV 다 신경 마커의 겉보기 형광 강도 근육 오프 샘플과 일치 할 수 있지만, 배경 잡음 (도 2B, 2C)를 증가시켰다. 따라서, 근육의 제거가 우리의 샘플에서의 신호 대 잡음비를 향상시킨다.
마지막으로, 근육 조직을 제거하여 얻은 개선 서브 회절 해상도 클래스 IV 다 뉴런의 촬상에 적용 할 수 있는지를 실험했다. 이를 위해, 3 차원 구조의 조명 현미경 (SIM) 영상화는 약 120 nm의 폭 (13)의 해상도를 실현하는 실시 하였다. 공 촛점 이미징과 마찬가지로, 우리는 먼저 동일한 촬영 조건에서 다음 레이저 파워를 최적화 한 후, 코라 및 클래스 IV 다 신경 세포에 대한 면역 염색 근육에 근육 오프 필렛, 박람회를 비교근육에 샘플 URE 시간, 이미지 처리. 근육 오프 필렛 (도 3A-3C)에 비해 유사 초점 현미경에, 근육에 소음 비율을 실질적으로 감소 신호가 관찰되었다. 또한, 영상 재구성 근육 오프 샘플에 선명하게 나타났다. 비교하여 근육에 샘플 적은 명백 아티팩트가 관찰되었고 코라 수지상 책자보다 쉽게 (도 3B, 3C)을 해결 하였다. 덴 드라이트 막은 근육 오프 필레에 폭 약 114 nm에서 측정하지만 근육에 필렛 (그림 3D, 3E)에서 폭 272 나노 미터로 등장 할 수있다. 따라서, 우리의 프로토콜은 클래스 IV 다 신경 세포의 시각화 슈퍼 해상도 현미경의 적용을 가능하게한다.
근육 제거 절차 1. 개요도. 유충은 해부 및 실리콘에 고정됩니다엘라스토머는 요리를 해부. 근육 조직을 제거하려면, 하나의 집게 단자는 세그먼트 경계 (2.2) 근처의 지느러미 중간 선에서 시작하여 근육과 표피 세포의 층 사이에 삽입된다. 포셉은 근육과 신체 벽 (2.3) 사이의 첨부 파일을 깰 위쪽으로 당겨진다. 이 관심 분야에 대해 반복 한 후 유충은 포름 알데히드 (2.5)에 고정되어있다. 고정 후, 집게는 몸 벽 (2.7-2.8)에 남아있는 근육 조직을 분리하는 데 사용되는 애벌레 표피와 표피는 빨간색, 오렌지색 클래스 IV 다 녹색 신경 및 근육을 묘사하고 있습니다. (2.2)과 (2.7)에 세트가 하나의 애벌레 헤미 세그먼트의 단면도를 나타낸다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2. 근육 제거. (; AC 녹색) 또는하는 Dlg (녹색, DE) 근육 조직 (A, B, D) 및 근육 조직 (C, E)없이 검출 된 공 초점 다 뉴런과 코라의 표피 면역 형광의 영상이 향상됩니다. 클래스 IV 다 신경 세포는 UAS-CD4를 표현하는 GAL4 '477 드라이버를 사용하여 표시 하였다 : tdTomato 및 항을 DsRed 항체 (적색) 검출. 코라 표지 근육에 근육 오프 샘플 먼저 동일한 조건 (A, C)에서 공 초점 현미경으로 몇 군데 있었다 후 증가 레이저 파워와 근육 간섭 (B)을 보상하기 위해. 하는 Dlg 표지 근육에 근육 오프 샘플을 개별적으로 최적화 된 조건에서 몇 군데 있었다. 모든 이미지는 공 촛점 Z-전망이다. 중간 (녹색)과 하단 (적색) 패널은 개별 채널을 보여; 상단 패널은 통합 채널입니다. 근조직의 경계 (점선), 클래스 IV다 신경 소마 (시안 화살표), 코라와하는 Dlg는 책자 (흰색 화살표), 표피 세포 경계 (마젠타 화살표), NMJ (노란색 화살표) 및 기관 (주황색 화살표) 표시됩니다 덴 드라이트. 스케일 바 = 20 μm의. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3. 근육 제거 다 신경 세포와 표피 세포. 근육 손상 (A, B) 및 후 근육 제거 (C)와 클래스 IV 다 신경 세포의 코라 (녹색)의 면역 형광 검출 이미징의 슈퍼 해상도를 사용합니다. . 클래스 IV 다 신경 세포는 그림 2에서와 같이 표시하고 근육 기능과 근육 - 오프 샘플을 먼저 동일한 조건 (A, C)에서 구조화 조명 현미경으로 몇 군데 있었다; 근육-에 샘플(A)로하는 후 근육 장애 (B)을 보상하기 위해 증가 된 레이저 파워 및 노출 시간에 다시 묘화 하였다. 모든 이미지는 Z-전망이다. AC의 중간 (녹색)과 하단 (적색) 패널은 개별 채널을 보여줍니다. AC의 상단 패널은 병합입니다. 표피 세포 경계 (마젠타 화살표), 코라 덴 드라이트 책자 (흰색 화살표) 및 영상 재구성 이슈 (노란색 화살표)가 표시됩니다. B와 C의 바닥 패널의 세트는 각각 D와 E에 해당합니다. 수지상 막의 명백한 폭은 근육에 (D)과 근육 - 오프 (E) 샘플에 표시됩니다. 스케일 바 = 3 μm의 (AC)와 0.5 μm의 (D, E). 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
여기 프로토콜 초파리 유충 필렛의 근조직의 수동 제거를 위해 설명된다. 이 프로토콜은 이전에 애벌레 해부 기술 10, 11 설명 수정합니다. 유충은 실리콘 엘라스토머 접시에 해부 한 후, 지느러미 중간 선이 있습니다. 단일 셉 가닥은, 그 평탄한 가능한 방향으로 조심스럽게 지느러미 중간 선 근처의 근육 조직과 표피 사이에 삽입됩니다. 포셉 부드럽게 관심의 각 애벌레 세그먼트에서 하나의 앵커 포인트에서 별도의 근육 조직을 위쪽으로 당겨진다. 애벌레 필렛은 집게 나머지 고정 점에서 근육을 멀리 당겨 다시 사용 후 차가운 포름 알데히드에 고정되어있다.
이 근육 제거 절차 후 고정의 전체를 수행하도록 유혹하는 동안, 우리는 신장 근육, 한 번 고정, 렌더링, 평탄화를 유지하고 밀접하게, 심지어 앵커 지점에서 분리 한 후 표피에 나란히 놓이는 것을 발견그것은 어려운 하부 조직에 손상을주지 않고 조작하기. 또한, 우리의 경험에서 고정 근조직 취성이고 체벽의 완전한 제거를 방지하기 쉽게 눈물. 반대로 근육 전에 정착 한 기준점으로부터 분리 될 때,보다 용이하게 집게로 잡고 애벌레 체벽으로부터 당겨질 수 조직 스텁을두고 고정 중에 잔존 기준점을 향해 수축된다.
가장 샘플을 유지하기 위해 상당한주의를 근육 분리 절차 중에 집게와 표피 사이의 접촉을 최소화하기 위해주의해야한다. 그 결과, 우리 프로토콜은 전술 한 박리 기술 (10, 11)에 수분을 추가 할 수있다. 조직의 열화를 방지하기 위해 고정 전에 해부 유충의 수는 시간이 경과하게는 25 분 미만이되도록 제한되어야한다. 또한, 우리는 집게의 여러 쌍을 테스트하는 것이 좋습니다 - 동일 개월의 집게를델 형상 선명도 상당히 다를 수 - 상기 범위 조정은 어느 필렛은 조직 보존 및 박리 속도를 개선하기 위해 종래 근육 제거 연신되어있다.
마지막으로, 우리는 애벌레 해부 동안 표준 HL3.1 식염수에 비해 칼슘 - 무료 HL3.1 식염수를 사용하여 실험을하는 것이 좋습니다. 칼슘의 부재에서, 유충 근육 수축이 크게 감소된다. 따라서, 애벌레 필렛은 칼슘 - 무료 HL3.1 식염수에 해부 할 때 조작하는 것이 더 쉬울 수있다. 그러나, 우리는 근육 수축은 근육과 표피 사이에 공간을 만들고 표피 손상의 위험을 최소화하면서이이 조직 사이의 집게의 삽입을 용이하게 할 수있는 것을 찾을 수 있습니다. 결과적으로, 표준 HL3.1 표피 및 DA 뉴런의 무결성을 보존하는 것이 바람직 할 수있다. 식염수와 선택 중 하나가 사용자에게 남아와 우리는 좋은 결과를 얻을 수 있습니다.
우리의 프로토콜이 증가하면서전술 한 박리 기술 (10, 11)의 길이와 복잡성, 그것은 유충 감각 뉴런 및 표피 세포 이미징에 유용한 여러 향상된 기능을 제공한다. 첫째, 그렇지 근육 조직에 의해 가려 neuronally epidermally 및 발현 된 단백질의 영상화를 허용한다. 둘째, 잡음비 형광 신호를 향상시킨다. 마지막으로, 그것은 DA 신경 표피 단백질 공간 관계의 우수한 차별 초해 현미경의 사용을 가능하게한다. 우리는 근육 제거 다음 발견했을 향상된 영상 품질 가능성 샘플 및 커버 슬립 사이에 감소 된 광자 흡수 및 산란뿐만 아니라 감소 된 거리의 결과이다. 여기서 증명되지 않았지만, 근육 제거 가능성 또한 면역의 질 향상, 표피 및 DA 뉴런 항체 접속을 향상시킨다. 큰 항체 접근성은 absen에서 수행 면역 프로토콜에 특히 유용 할 수있다제 4 permeabilizing 조직의 가전.
이 프로토콜을 사용하여 얻은 개선 감각 뉴런의 수상 돌기 형태 형성을 조절하는 신경 세포와 표피 요인의 연구에 도움이 가능성이 있습니다. 또한, 근육 제거는 이전에 애벌레 몸 벽에 감각 뉴런의 전기 생리 연구를 촉진하고이 프로토콜의 수정 된 버전은 애벌레 감각 뉴런의 신경 생리 학적 조작을 사용하는 미래 연구에 유용 할 수 있습니다. 마지막으로,이 프로토콜의 수정 된 버전은 유전자 발현 프로파일 링을위한 단일 다 신경 세포의 분리 등의 다른 응용을 향해 유용 할 수있다.
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Disclosures
저자는 공개 아무것도 없어.
Acknowledgments
우리는 현미경에 도움이 토론 게리 Laevsky 감사합니다. NIH에 의해 투자 된이 작품은 ERG에 R01GM061107 및 R01GM067758을 부여
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Dumont #5 tweezers | Electron Microscopy Sciences | 72701-D | |
| Micro Scissors, 8 cm, straight, 5 mm blades, 0.1 mm tips | World Precision Instruments | 14003 | |
| Sylgard 184 silicone elastomer kit | Dow Corning | 3097358-1004 | for dissecting plates |
| Austerlitz insect pins, 0.1 mm | Fine Science Tools | 26002-10 | |
| Fostec 8375 light source | Artisan Technology Group | 62792-4 | |
| Zeiss Stemi 2000 | Carl Zeiss Microscopy | ||
| Vectashield antifade mounting medium | Vector Laboratories | H-1000 | for confocal microscopy |
| Prolong Diamond antifade mountant | Life Technologies | P36970 | for structured illumination microscopy |
| Micro cover glass, 22 x 22 mm, No. 1.5 | VWR | 48366-227 | |
| Superfrost Plus microscope slides, 25 x 75 x 1.0 mm | Fisherbrand | 12-550-15 | |
| Mouse anti-Coracle antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | C615.16 | supernatant, dilute 1:50 |
| Mouse anti-Discs large antibody | Developmental Studies Hybridoma Bank | 4F3 | supernatant, dilute 1:50 |
| Rabbit anti-dsRed antibody | Clontech | 632496 | dilute 1:1,000 |
| Goat anti-rabbit antibody, Alexa Fluor 568 conjugated | ThermoFisher Scientific | A-11011 | dilute 1:1,000 |
| Goat anti-mouse antibody, Alexa Fluor 488 conjugated | ThermoFisher Scientific | A-11001 | dilute 1:500 |
References
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