Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Lateral Kronisk Kraniell Window Forberedelse Aktiverer Published: December 29, 2016 doi: 10.3791/54701

Summary

Kirurgisk okklusjon av en distal midten cerebral arterie gren (MCAO) er en hyppig brukt modell i eksperimentell slag forskning. Dette manuskriptet beskriver den grunnleggende teknikk for permanent MCAO, kombinert med innsetting av en lateral kranial vindu, som gir mulighet for langsgående intravital mikroskopi i mus.

Abstract

Focal cerebral iskemi (dvs. hjerneinfarkt) kan forårsake stor hjerneskade, som fører til et alvorlig tap av nervefunksjonen og dermed til en rekke motor og kognitive funksjonshemninger. Den høye forekomsten utgjør en alvorlig helsebelastning, som hjerneslag er blant de viktigste årsakene til langvarig uførhet og død på verdensbasis en. Utvinning av neuronal funksjon er, i de fleste tilfeller, bare delvis. Så langt er behandlingstilbud svært begrenset, særlig på grunn av den smale tidsvinduet for trombolyse 2,3. Bestemme metoder for å akselerere utvinning fra hjerneslag forblir en førsteklasses medisinsk mål; Dette har imidlertid vært hemmet av utilstrekkelige mekanistiske innsikt i gjenopprettingsprosessen. Eksperimentelle takts forskere ofte ansette gnagermodeller av fokal cerebral iskemi. Utover den akutte fase, slag forskning i økende grad fokusert på den subakutte og kroniske fasen etter cerebral ischemi. De fleste hjerneslag forskere søke permanent eller transient okklusjon av MCA i mus eller rotter. Hos pasienter, okklusjoner av MCA er blant de hyppigste årsakene til hjerneinfarkt 4. Foruten proksimale okklusjon av MCA bruker filament modell, er kirurgisk okklusjon av distal MCA trolig den mest brukte modellen i eksperimentell slag forskning fem. Okklusjon av en distal (til forgrening av lenticulo-stripete arterier) MCA gren deler vanligvis striatum og fremst påvirker neocortex. Vessel okklusjon kan være permanent eller forbigående. Høy reproduserbarhet av lesjon volum og svært lav dødelighet i forhold til det langsiktige utfallet er de viktigste fordelene med denne modellen. Her viser vi hvordan du utfører en kronisk hjerne vindu (CW) forberedelse lateralt for sagittal sinus, og etterpå hvordan å kirurgisk indusere en distal slag under vinduet ved hjelp av en kraniotomi tilnærming. Denne tilnærmingen kan brukes for sekvensiell avbildning av akutte og kroniske endringer som følge av iskemi viaepi-opplysende, konfokal laser scanning, og to-foton intramikroskopi.

Protocol

ETIKK UTTALELSE: Forsøk med dyr fag ble utført i samsvar med de retningslinjer og bestemmelser fastsatt av Landesamt fuer Gesundheit und Soziales, Berlin, Tyskland (G0298 / 13) og Arrive kriterier som gjelder. For denne studien, 10- til 12-uker gamle hann C57BL / 6J-mus ble anvendt.

1. Lateral Kronisk Kranio Window Forberedelse

  1. Utføre anestesi med en subkutan injeksjon av ketamin (90 mg / kg) og xylazin (10 mg / kg). Test for tilstrekkelig sedasjon med en smerte stimulans.
  2. Sterilisere kirurgiske instrumenter og kirurgiske feltet med 70% etanol.
  3. Fjern hodehår fra nakken til øynene med en gnager barbermaskin.
  4. Fest hodet i en stereotaktisk ramme.
  5. Bruk Dexpanthenol øyesalve på begge øynene for å unngå dehydrering.
  6. Rengjør den kirurgiske området for å fjerne alle hårene og sterilisere den med 3 lag 74,1% etanol og 10% 2-propranolol.
  7. Utfør en midtlinjensnitt fra nakken til øynene med en skalpell.
  8. Span huden klaff med 4 telt sting.
  9. Fjern periosteum nøye på venstre halvkule ved å skrape den av med en skalpell til et punkt der den temporale muskelen begynner.
    MERK: Dette preparatet tjener også til å skape en god vedheft område for dental lim, som fester glasset.
  10. Utføre en fronto-parietale kraniotomi med en diameter på 4 mm ved tynning skallen ved kanten av benet klaff ved hjelp av en microdrill. Påfør saltvannsoppløsning under boring for å unngå varmeskader.
  11. Hev benet klaff med kanyler og fjerne den ved hjelp microforceps.
  12. Skyll nøye og grundig med saltvannsoppløsning.
  13. Bland dental limet før den har den riktige konsistens, og ikke væske (dvs. limet bør ikke produsere tråder lenger). Plasser den på benet rundt kraniotomi.
  14. Plasser et dekkglass med en 6 mm diameter på forberedt lim og fikse det med the resten av dental lim. Vær sikker på at det er vanntette. Vent til limet er tørket og hardt ved å teste den med pinsett.
    MERK: En ekstra vanning akselererer herdeprosessen.
  15. Fjern telt sting og lukke såret med hud sting.
  16. Trekk opp huden på flanken av musen. Sett en nål subkutant og forsiktig erstatte 0,5 ml sterilt saltvann subkutant for væskebalansen.
  17. Etter operasjonen, holde dyr i det oppvarmede utvinning bur i 90 min. Vent til dyrene er helt våken før du forlater dem uten tilsyn. Vent til dyrene er helt friske når de går dem til et bur med andre dyr.
  18. Gjenta subkutane saltvann volum substitusjon etter ca 12 timer, som beskrevet i trinn 1,16.
  19. Påfør alltid analgesi via sonde eller direkte inn i munnhulen etter operasjonen (for eksempel paracetamol (10 mg / ml) eller andre ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler).
  20. Undersøk betingelse av dyrene hver dag etter operasjonen, og alltid gi mashed animalsk mat på gulvet i en petriskål å gjøre å spise enkel og for å unngå kritiske vekttap etter operasjonen.
    MERK: intramikroskopi kan utføres på den første dagen etter kranie vindu forberedelse.
  21. Påfør isoflurananestesi og fikse dyret i en hodeholderen. Åpne huden sutur og rengjøre vinduet med bomullspinner og sterilt saltvann. Etter 24 timer, bør den kraniale vinduet være fylt med cerebrospinal væske ved det tidspunktet, som muliggjør avbildning. Utfør bildebehandling ved hjelp av etablerte mikroskopi protokoller 18.

2. Distal MCAO

MERK: MCAO prosedyren skal utføres omtrent 5 d etter CW forberedelse. Dette reduserer interferens fra immunreaksjon forårsaket av CW preparat med den strek-induserte immunreaksjon.

"Src =" / files / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg "/>
Figur 1. Oversikt over Distal MCAO. A. Dette er en fin oversikt om fartøyene før op. B. Fartøyene etter første bipolar kontakt. C. Fartøyene etter andre bipolar kontakt. D. Oversikten om fartøyene, som er fullstendig lukket nå. E. Endelig oversikt med lavere forstørrelse. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

  1. Bedøver mus ved hjelp av en anestesimaske og en passende bedøvelse regime, i samråd med veterinær ansatte (f.eks induksjon med 1,5 - 2% isofluran og vedlikehold med 1,0 til 1,5% isofluran i 2/3 N 2 O og 1/3 O 2 via en fordamper).
  2. Barbere og fjerne hår og desinfiser huden og omkringliggende pels med en passende middel (f.eks 70% etylalkohol), og tørk den etterpå.
  3. At kroppstemperaturen til mus ved 36,5 ° C ± 0,5 ° C i løpet av operasjonen. En tilbakemeldinger kontrollert varmepute, oppvarmet i henhold til rektal temperatur på musen, er sterkt anbefalt.
  4. Plasserer dyret i lateral stilling. Fest nesen i anestesi maske og juster isofluran konsentrasjon til 1,0 til 1,5%.
  5. Påfør våt salve (Dexpanthenol) til begge øynene.
  6. Bruk huden innsnitt gjort for CW forberedelse.
  7. Forsiktig skille huden og identifisere den temporale muskelen under.
  8. Justere energien av den høyfrekvente generator (5 - 7 W) og bruke den bipolare modus.
  9. Bruk electrocoagulation pinsett og forsiktig fjerne temporale muskel fra skallen, og skaper en muskel klaff, uten helt å fjerne muskelen.
  10. Identifiser MCA under den gjennomsiktige hodeskalle i rostral del av tinningområdet, dorsal til retro-Orbital sinus. Hvis MCA delinger ikke kan identifiseres, prøve å identifisere fartøyet mest rostralt.
  11. Thin skallen over MCA gren med en microdrill mens kontinuerlig vanning for å unngå varmeskader.
  12. Løft benet med kanyler og ta den med microforceps.
  13. Redusere energien til den høyfrekvente generator til 3 - 5 W
  14. Approach arterien ovenfra og forsiktig berøre den med bipolar tang på begge sider uten å løfte fartøyet.
  15. Koagulere arterien proksimalt og distalt til fartøyet bifurkasjonen.
  16. Vent i 30 sekunder, og trykk deretter på arterien forsiktig for å sikre at blodgjennomstrømningen er permanent avbrutt. Gjenta electrocoagulation hvis en recanalization er observert.
  17. Fix tinningmuskelen med 1 eller 2 masker på muskelen innsetting for å dekke beinet defekt, hvis det er mulig.
  18. Suturer såret og plassere dyret i det oppvarmede utvinning boksen. Generelt, dyr utvinning raskt etter volatile ANESThesia.
  19. For volum substitusjon, anvende 0,5 ml sterilt saltvann subkutant, som beskrevet i trinn 1,16.
  20. Etter operasjonen, at dyrene å bo i oppvarmet utvinning bur i 90 min. Vent til dyrene er bevisst før du forlater dem uten tilsyn. Bare returnere dem til et bur med andre dyr når de er fullt restituert.
  21. Gjenta volum substitusjon, som forklart i trinn 1,16, etter 12 timer.
  22. Påfør postoperativ analgesi via drikkevann (f.eks paracetamol (10 mg / ml) eller andre ikke-steroide antiinflammatoriske legemidler).
  23. Sjekk den medisinske tilstanden til dyrene hver dag etter operasjonen. Gi mashed animalsk mat i en petriskål på gulvet for å forenkle spise og for å minimere postoperativ vekttap.

3. Sham Treatment

  1. Utfør alle prosedyrer identisk til trinn 1 og 2, som er beskrevet ovenfor, inkludert CW forberedelse-unnta ikke koagulerer utsatt cerebri arriet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Tidslinjen og representative resultater er vist i figurene 2 og 3. Cranial vindu forberedelse, med en liten hjerne vindu lateralt for superior sagittal sinus (figur 2 B, C, D) resulterer i en svært lav dødelighet og sykelighet når utført av en erfaren kirurg. Alle de 10 dyrene overlevde, og alle kroniske CW kan brukes for høy bildekvalitet, selv 28 dager etter operasjonen. Det var ikke noe problem med sårinfeksjoner eller andre komplikasjoner.

På grunn av den korte eksponering for flyktige anestesi og bare mindre hjerneskade, ca 10 - 15 min etter distal MCAO og overføring til oppvarmet utvinning bur, alle dyr var våken, fritt bevegelige i utvinningen buret, og i samspill med kullsøsken. Generelt dødelighet av den distale MCAO-modellen er mindre enn 5% og forekommer hovedsakelig som et resultat av vaskulær injury og påfølgende blødning under MCAO kirurgi. Dødelighet i løpet av 28-dagers observasjonsperioden etter distal MCAO forekommer svært sjelden. Morfologisk kan lesjonen vurderes ved bruk av histologi eller MR (figur 3 A, B). I tillegg MR målinger tilbyr muligheten til å vurdere lesjon volum og progresjon i lengde måte. En MR utført 24 timer etter iskemi tydelig viser iskemisk lesjonen ligger under kronisk CW, mens du følger humbug kirurgi, ingen skadede kortikal vev funnet (figur 3A). MRI-resultater viser klart den streng begrensning av lesjonen til hjernebarken, således skåner striatum, i motsetning til den filamentøse MCAO-modellen (figur 3B). Den laterale kronisk CW forberedelse gjør langsiktig visualisering av kortikal blodkar og mikrosirkulasjonen av epi-fluorescens mikroskopi (figur 3C, øvre del) og subkortikale områder ved to-foton mikroskopi (Figure 3C, nedre del). Videre er det mulig å avbilde molekylære reaksjonsveier og celle-til-celle-interaksjoner med fluorescens-merkede celler eller autofluorescens målinger, slik som fluorescens levetid avbildning. Som vist i figur 3D, bevirker den distale MCAO-modellen høyt reproduserbare ischemiske lesjoner. Når det gjelder infarktvolum, forventer vi et standardavvik under 15% i et enkelt sett med operasjoner. Som nevnt ovenfor, i motsetning til modeller for proksimale MCAO, dødeligheten er ganske lav for distal modell 5. Ved hjelp av sekvensiell MR, lesjon, volum og ødem progresjon følgende fokus cerebral iskemi kan vurderes. MR på 24 timer og 96 timer etter permanent distal MCAO viste ingen signifikant progresjon av T2 hyperintensities.

Figur 2
Figur 2: Kronisk Kranio Window forberedelse. (A) Representant tidslinje. <strong> (B) Merking området der kraniotomi foregår, lateralt for time muskel, medial til superior sagittal sinus, og dorsal til bregma. (C) Brain overflaten etter en kraniotomi, med en intakt dura lag og dekkglasset på plass; sirkelen viser plasseringen av den iskemiske området etter distal MCAO. (D) Endelig kronisk hjerne vindu med fast dekke glass, klar for repeterende bildebehandling for flere uker (b = bregma, TM = temporale muskel, SSS = superior sagittal sinus, ai = areal på iskemi). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Figur 3
Figur 3: Kombinasjon av Lateral Kronisk CW og Distal MCAO eller Sham Surgery. (A) Et MRI utført 24 timer etter sham kirurgi ikke viser noen lesioned kortikale vev. (B) MR utført 24 timer etter iskemi tydelig viser iskemisk lesjon (*) plassert under kronisk CW. (C) intra epi-fluorescens imaging (øvre del) og to-foton imaging (nedre del) av kortikale blodkar. (D) infarktvolum vurderes via MR på 24 timer og 96 timer etter iskemi, viser en gjennomsnittlig lesjon volum på 13,16 2,3 mm 3 på 24 timer og 12,2 1,9 mm 3 i 96 timer. Hvert punkt representerer et individuelt dyr (n = 10 dyr per gruppe, gjennomsnitt ± SEM). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Hjerneslag er blant de viktigste årsakene til langvarig uførhet og død på verdensbasis en. Utover akutt behandling, undersøke nye tilnærminger og mekanismer for å akselerere og øke utvinningen etter hjerneslag forblir en førsteklasses medisinsk mål 7. Eksperimentelle takts forskere ofte ansette gnagermodeller av fokal cerebral iskemi. Faktisk modeller induserende forbigående eller permanent MCAO etterligne en av de mest vanlige typene av fokal cerebral ischemi hos pasienter 4. Foruten proksimale okklusjon av MCA, er filament modell for kirurgisk okklusjon av distal MCAO trolig den mest brukte modellen i eksperimentell hjerneslag forskning 5,19. Her beskriver vi den grunnleggende teknikken for permanent distal MCAO kombinert med en lateral CW, tilbyr muligheten for langsgående intramikroskopi i mus. Høy reproduserbarhet av lesjon volum, samt svært lav dødelighet, særlig med hensyn til å studere langsiktige resultater, are de viktigste fordelene med denne murine modell. I denne cortical hjerneslag modellen, kan blodårer i slaget området og peri-infarkt region visualiseres via kronisk CW. Ved hjelp av en multi-fluorescens epifluorescens videomicroscopic system, blodstrømningsdynamikken og den dynamiske rekruttering av sirkulerende celler kan visualiseres. Blodkar blir visualisert ved hjelp av fluorescerende merkede makromolekyler, slik som dekstraner eller albumin. Celler kan merkes enten ved fluorescerende fargestoffer eller av genetiske modeller, slik som benmarg-kimærer med GFP-positive dyr. Videre, for å studere celle-til-celle-interaksjoner og dynamikken i ekstravaskulære celler, kan en to-foton laser scanning mikroskop konfokalt anvendes. Imaging opp til 250 um under den kortikale overflaten kan utføres. Igjen blir blodkar farges ved hjelp av fluorescerende merkede makromolekyler, og celler er merket genetisk (for eksempel ved hjelp av den transgene GFP-nestin mus).

Cranial vindukirurgi er utført via en kraniotomi uten å åpne dura. En stor fallgruve er å uhell skade dural lag og cortex under når du åpner skallen med microdrill. Derfor krever denne teknikk også visse tekniske ferdigheter for å unngå skade på dura og cortex, som induserer en immunreaksjon, og påvirker mikroskopi resultater. Alternativt blir en potensiell tynnet-skalle modell begrenset av mindre pålitelig mikroskopi kvalitet på grunn av den gjenværende skallen, særlig på lang sikt. Ofte er repeterende skalle tynning er nødvendig, mens i CW-modellen, varer vinduet kvalitet i flere måneder, inntil skalle gjenvekst eller durale fortykningsmidler påvirker bildekvalitet 14,20. En modulering av denne modell med en tynnet-skalle preparat ville være mulig. Dural lag bør stå på hjernen for å unngå skade eller eksitasjon av hjernebarken. Bare hvis en direkte påføring på det iskemiske området er ønsket i en eksperimentell modell kan dura gjenflyttet, forsiktig og uten å skade noen bygge bro årer.

I motsetning til modeller som kombinerer en CW og induserende målrettet kar okklusjon via bestråling av sirkulerende fotosensitisere, som fører til bare meget små ischemiske lesjoner, distale MCAO-modellen etterligner flertallet av humane slag som er plassert i det kortikale MCA-område 13. For å unngå interferens med en forbigående betennelsesreaksjon på grunn av CW preparatet må vinduet være forberedt på flere dager før distal MCAO kirurgi.

En rekke tester for å evaluere funksjonelle samt atferdsmessige aspekter hos gnagere er tilgjengelige (f.eks ganganalyse, rotarod test, test pol, fjerning test klebemiddel, trapp test, åpen felttest, og Morris vannlabyrint) 21. I alle disse testene, mus utsatt for MCAO utføre mindre vellykket enn kontrolldyrene med hensyn til kortsiktige og mellomlang sikt utfall. Imidlertid, med hensyn til evaluering avlangsiktige resultater, må det erkjennes at sensitiviteten av funksjonelle tester er svært begrenset i form av distal MCAO, samt mild proksimale MCAO 19,21-23.

Distal MCAO, utført av godt trente kirurger, kan induseres i løpet av mindre enn 20 minutter og kan produsere svært reproduserbare iskemiske lesjoner. Imidlertid krever reproduserbarhet en grundig kontroll av confoundere. Forskjeller i kirurgisk teknikk kan føre til forskjeller i infarktstørrelse 24. Ulike musestammer kan vise et annet slag utfall på grunn av forskjell i cerebral vaskulær anatomi mellom stammer. Videre, som kroppstemperaturen påvirker neuronal skade og mottakeligheten for iskemi, med hypotermi som fører til mindre lesjoner og hypertermi til mer alvorlige mangler 25,26, temperaturkontroll og vedlikehold er svært relevant i denne modellen, så vel som i andre ischemi modeller 27. Generelt, fysiologiske parametere, slik som blod Manometerre og blod gasser, er viktige confounders av resultatet og må kontrolleres for 28. I tillegg er valg av anestesi svært viktig, fordi enkelte aktører kan utøve direkte nervecellene effekter eller opptre indirekte via vasoaktive egenskaper 29. Derfor eksponering for anestesi bør standardiseres og holdes så kort som mulig. Til slutt, boforhold, som bruk av berikelse, kan påvirke hjerneslag utfall i tillegg, og dermed bør være standardisert og beskrevet i forskningsrapporter 30. For å produsere relevante prekliniske resultater for utvikling av nye terapeutiske tilnærminger, standardisering, kvalitetssikring og rapportering er av den største betydning 31.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Binocular surgical microscope Zeiss Stemi 2000 C
Light source for microscope Zeiss CL 6000 LED
Heating pad with rectal probe FST 21061-10
Stereotactic frame Kopf Model 930
Anaethesia system for isoflurane Draeger
Isoflurane Abott
Dumont forceps #5 FST 11251-10
Dumont forceps #7 FST 11271-30
Bipolar Forceps Erbe 20195-501
Bipolar Forceps  Erbe                              20195-022
Microdrill FST                              18000-17         
Needle holder FST 12010-14
5-0 silk suture Feuerstein, Suprama
7-0 silk suture Feuerstein,Suprama
8-0 silk suture Feuerstein, Suprama
Veterinary Recovery Chamber Peco Services V1200

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mukherjee, D., Patil, C. G. Epidemiology and the global burden of stroke. World Neurosurg. 76 (6), Suppl 85-90 (2011).
  2. Ebinger, M., Prüss, H., et al. Effect of the use of ambulance-based thrombolysis on time to thrombolysis in acute ischemic stroke: a randomized clinical trial. JAMA. 311 (16), 1622-1631 (2014).
  3. Ebinger, M., Lindenlaub, S., et al. Prehospital thrombolysis: a manual from Berlin. J vis Exp. (81), e50534 (2013).
  4. Bogousslavsky, J., Van Melle, G., Regli, F. The Lausanne Stroke Registry: analysis of 1,000 consecutive patients with first stroke. Stroke. 19 (9), 1083-1092 (1988).
  5. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J Vis Exp. (47), (2011).
  6. Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
  7. Meairs, S., Wahlgren, N., et al. Stroke research priorities for the next decade--A representative view of the European scientific community. Cerebrovasc Dis. 22 (2-3), 75-82 (2006).
  8. Rosamond, W., Flegal, K., et al. Heart disease and stroke statistics--2007 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 115 (5), 69-171 (2007).
  9. Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. The science of stroke: mechanisms in search of treatments. Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).
  10. Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view. Trends Neurosci. 22 (9), 391-397 (1999).
  11. Dirnagl, U., Endres, M. Found in Translation: Preclinical Stroke Research Predicts Human Pathophysiology, Clinical Phenotypes, and Therapeutic Outcomes. Stroke. , (2014).
  12. Prinz, V., Hetzer, A. -M., et al. MRI heralds secondary nigral lesion after brain ischemia in mice: a secondary time window for neuroprotection. J Cereb Blood Flow Metab. , (2015).
  13. Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain. J Vis Exp. (61), (2012).
  14. Holtmaat, A., Bonhoeffer, T., et al. Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
  15. Iadecola, C., Dirnagl, U. The microcircualtion--fantastic voyage: introduction. Stroke. 44 (6), Suppl 1 83 (2013).
  16. Blinder, P., Tsai, P. S., Kaufhold, J. P., Knutsen, P. M., Suhl, H., Kleinfeld, D. The cortical angiome: an interconnected vascular network with noncolumnar patterns of blood flow. Nat Neurosc. 16 (7), 889-897 (2013).
  17. Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Drew, P. J., Nishimura, N., Schaffer, C. B., Kleinfeld, D. Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain. J Cereb Blood Flow Metab. 32 (7), 1277-1309 (2012).
  18. Cabrales, P., Carvalho, L. J. M. Intravital microscopy of the mouse brain microcirculation using a closed cranial window. J Vis Exp. (45), (2010).
  19. Rosell, A., Agin, V., et al. Distal occlusion of the middle cerebral artery in mice: are we ready to assess long-term functional outcome. Transl Stroke Res. 4 (3), 297-307 (2013).
  20. Dorand, R. D., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex. Intravital. 3 (2), (2014).
  21. Balkaya, M., et al. Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).
  22. Balkaya, M., Kröber, J., Gertz, K., Peruzzaro, S., Endres, M. Characterization of long-term functional outcome in a murine model of mild brain ischemia. J Neurosci Methods. 213 (2), 179-187 (2013).
  23. Freret, T., Bouet, V., et al. Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: Usefulness of adhesive removal test. Beh Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).
  24. Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. RODENT STROKE MODEL GUIDELINES FOR PRECLINICAL STROKE TRIALS (1ST EDITION). J Exp Stroke Trans Med. 2 (2), 2-27 (2009).
  25. Florian, B., Vintilescu, R., et al. Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia. Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).
  26. Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats. Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).
  27. Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes. Stroke. 35 (7), 1720-1725 (2004).
  28. Shin, H. K., Nishimura, M., et al. Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia. Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).
  29. Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism. Neuroreport. 13 (11), 1431-1435 (2002).
  30. Gertz, K., Priller, J., et al. Physical activity improves long-term stroke outcome via endothelial nitric oxide synthase-dependent augmentation of neovascularization and cerebral blood flow. Circ Res. 99 (10), 1132-1140 (2006).
  31. Dirnagl, U. Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research. J Cereb Blood Flow Metab. 26 (12), 1465-1478 (2006).

Tags

Neuroscience cerebral iskemi slag distal MCAO cranial vindu intramikroskopi to-foton mikroskopi
Lateral Kronisk Kraniell Window Forberedelse Aktiverer<em&gt; I Vivo</em&gt; Observasjon etter Distal Middle Cerebral arterieokklusjon i Mus
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bayerl, S. H., Nieminen-Kelhä,More

Bayerl, S. H., Nieminen-Kelhä, M., Broggini, T., Vajkoczy, P., Prinz, V. Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice. J. Vis. Exp. (118), e54701, doi:10.3791/54701 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter