Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

Lateral Kronisk Kraniell fönster Framställning Aktiverar Published: December 29, 2016 doi: 10.3791/54701

Summary

Kirurgisk ocklusion av en distal mellersta cerebral artär gren (MCAo) är en ofta använd modell i experimentell stroke forskning. Detta manuskript beskriver den grundläggande tekniken för permanent MCAo, kombinerat med insättning av en lateral kraniell fönster, vilket ger möjlighet för längs intravital mikroskopi i möss.

Abstract

Fokal cerebral ischemi (dvs ischemisk stroke) kan orsaka allvarliga hjärnskador, vilket leder till en allvarlig förlust av neuronal funktion och följaktligen till en värd av motoriska och kognitiva funktionsnedsättningar. Den höga förekomsten utgör en allvarlig hälsobörda, som stroke är bland de främsta orsakerna till långvarig funktionsnedsättning och död över hela världen en. Återvinning av neuronal funktion är, i de flesta fall endast partiell. Hittills är behandlingsalternativ mycket begränsade, särskilt på grund av den snäva tidsfönster för trombolys 2,3. Fastställande metoder för att påskynda återhämtningen från stroke fortfarande ett utmärkt medicinsk mål; men detta har hindrats av otillräckliga mekaniska insikter i återhämtningsprocessen. Experimentella strokeforskare använder ofta gnagarmodeller av fokal cerebral ischemi. Bortom den akuta fasen, är stroke allt mer fokuserat på subakut och kronisk fas efter cerebral ischemi. De flesta strokeforskare gäller permanent eller transient ocklusion av MCA hos möss eller råttor. Hos patienter, inneslutningar av MCA är bland de vanligaste orsakerna till ischemisk stroke 4. Förutom proximal ocklusion av MCA använder trådmodellen, är kirurgisk ocklusion av distala MCA förmodligen den mest använda modellen i experimentell stroke forskning 5. Ocklusion av en distal (till förgrening av lenticulo-striate artärer) MCA gren reservdelar typiskt striatum och främst drabbar neocortex. Kärlocklusion kan vara permanent eller övergående. Hög reproducerbarhet av skada volym och mycket låga dödstal i förhållande till den långsiktiga resultat är de viktigaste fördelarna med denna modell. Här visar vi hur du utför en kronisk kraniell fönster (CW) förberedelse sidled till sinus sagittalis, och därefter hur man kirurgiskt framkalla en distal slag under fönstret med hjälp av en kraniotomi tillvägagångssätt. Denna metod kan användas för sekventiell avbildning av akuta och kroniska förändringar efter ischemi viaepi-belysning, konfokala laserskanning, och två-foton intravital mikroskopi.

Protocol

ETIK ANALYS: Experiment som involverar djurförsök har utförts i enlighet med de riktlinjer och regler som anges av Landesamt für Gesundheit und Soziales, Berlin, Tyskland (G0298 / 13) och anländer kriterier, som är tillämpligt. För denna studie 10- till 12-veckor gamla C57BL / 6J-möss användes.

1. Lateral Kronisk Kraniell fönster Framställning

  1. Utföra anestesi med en subkutan injektion av ketamin (90 mg / kg) och xylazin (10 mg / kg). Test för adekvat sedering med en smärtstimulans.
  2. Sterilisera kirurgiska instrument och kirurgiska området med 70% etanol.
  3. Ta bort håret på huvudet från halsen till ögonen med en gnagare rakapparat.
  4. Fäst huvudet i en stereotaktisk ram.
  5. Använd dexpantenol ögonsalva på båda ögonen för att undvika uttorkning.
  6. Rengöra det kirurgiska området för att ta bort alla hårstrån och sterilisera den med 3 lager av 74,1% etanol och 10% 2-propanolol.
  7. Utför en mittlinjeincision från halsen till ögonen med användning av en skalpell.
  8. Spänner huden flik med 4 tält suturer.
  9. Ta bort benhinnan försiktigt på den vänstra hjärnhalvan genom att skrapa bort det med en skalpell till den punkt där den temporala muskeln börjar.
    OBS: Denna beredning tjänar även till att skapa en god vidhäftning område för tandvård lim, som fixerar täckglaset.
  10. Utför en fronto-parietal kraniotomi med en diameter på 4 mm genom gallring skallen vid kanten av benet luckan med en Microdrill. Applicera saltlösning under borrning för att undvika värmeskador.
  11. Höj benet flik med kanyler och ta bort den med hjälp av microforceps.
  12. Skölj noggrant och utförligt med koksaltlösning.
  13. Blanda tandvård lim tills den har rätt konsistens och är inte vätska (dvs limmet ska inte producera trådar längre). Placera den på benet runt kraniotomi.
  14. Placera ett täckglas med en 6 mm diameter på den förberedda lim och fixa det med the resten av tand lim. Var säker på att det är vattentätt. Vänta tills limmet torkas och hårt genom att testa den med pincett.
    OBS: En extra bevattning påskyndar härdningsprocessen.
  15. Ta bort tenting suturer och stänga såret med huden suturer.
  16. Dra upp huden på flanken av musen. Sätt en nål subkutant och försiktigt ersätta 0,5 ml steril koksaltlösning subkutant för vätskebalansen.
  17. Efter operationen, hålla djuren i den uppvärmda återhämtning buren under 90 min. Vänta tills djuren är fullt vaken innan du lämnar dem utan uppsikt. Vänta tills djuren helt återställd innan han återvände dem till en bur med andra djur.
  18. Upprepa subkutana saltlösning volymsubstitution efter ca 12 timmar, som beskrivs i steg 1,16.
  19. Applicera alltid smärtlindring via sondmatning eller direkt i munhålan efter operationen (t.ex. paracetamol (10 mg / ml) eller andra icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel).
  20. Kolla Djurens varje dag efter operationen, och alltid ge mosad djurmat på golvet i en petriskål att äta enkel och för att undvika kritisk viktminskning efter kirurgi.
    OBS: Intravital mikroskopi kan utföras på den första dagen efter hjärn fönster beredning.
  21. Applicera isoflurananestesi och fixera djuret i en huvudhållare. Öppna huden suturen och rengör fönstret med bomullspinnar och steril saltlösning. Efter 24 h, bör den kraniala fönstret fyllas med cerebrospinalvätska vid den tidpunkt, vilket möjliggör avbildning. Utför avbildning med hjälp av etablerade mikroskope protokoll 18.

2. Distal MCAo

OBS! MCAo bör utföras ca 5 d efter CW beredning. Detta minimerar störningar från immunreaktionen som orsakas av CW preparatet med stroke-inducerade immunreaktion.

"Src =" / filer / ftp_upload / 54701 / 54701fig1.jpg "/>
Figur 1. Översikt över Distal MCAo. A. Detta är en bra översikt om fartygen före op. B. fartyg efter första bipolär kontakt. C. Fartygen efter andra bipolär kontakt. D. översikt över de fartyg som är helt stängda nu. E. Slut översikt med lägre förstoring. Klicka här för att se en större version av denna siffra.

  1. Bedöva möss med användning av en anestesimask och ett lämpligt bedövningsmedel regim, i samråd med veterinärpersonal (t.ex. induktion med 1,5-2% isofluran och underhåll med 1,0-1,5% isofluran i 2/3 N2O och 1/3 O2 via en förångare).
  2. Raka och ta bort hår och desinficera huden och omgivande päls med ett lämpligt medel (t.ex. 70% etanol), och torka efteråt.
  3. Bibehålla kroppstemperaturen hos mössen vid 36,5 ° C ± 0,5 ° C under operation. En återkopplingskontrollerad värmedyna, upphettas enligt den rektala temperaturen av musen, rekommenderas starkt.
  4. Placera djuret i den laterala positionen. Fäst näsan i anestesi masken och justera isofluran koncentration till 1,0-1,5%.
  5. Applicera våt salva (dexpantenol) till båda ögonen.
  6. Använd hudsnittet gjorts för CW beredningen.
  7. Försiktigt separera huden och identifiera tids muskeln nedanför.
  8. Justera energin för den högfrekventa generatorn (5-7 W) och använda den bipolära läget.
  9. Använd elektrokoagulering pincett och försiktigt bort tids muskler från skallen, skapar en muskel klaff, utan helt ta bort muskeln.
  10. Identifiera MCA under den genomskinliga skallen i rostralt delen av tidsområdet, rygg till retro-orbital sinus. Om MCA bifurkation inte kan identifieras, försöka identifiera fartyget mest rostralt.
  11. Tunna skallen över MCA gren med en Microdrill under kontinuerlig bevattning för att undvika värmeskador.
  12. Lyft benet med kanyler och ta bort den med microforceps.
  13. Minska energin i högfrekventa generatorn till 3-5 W.
  14. Närma artären uppifrån och försiktigt röra den med de bipolära tången på båda sidor utan att lyfta fartyget.
  15. Koagulera artären proximalt och distalt till kärlet bifurkation.
  16. Vänta 30 sekunder, och sedan på artären försiktigt för att säkerställa att blodflödet permanent avbrytas. Upprepa elektrokoagulering om en rekanalise observeras.
  17. Fäst tids muskeln med 1 eller 2 maskor på muskeln insättning för att täcka bendefekten, om möjligt.
  18. Sutur såret och placera djuret i den uppvärmda återhämtning rutan. I allmänhet, djur återhämtning snabbt efter flyktig Anesthesia.
  19. För volymsubstitution, tillämpa 0,5 ml steril koksaltlösning subkutant, som beskrivs i steg 1,16.
  20. Efter operation, att djuren att stanna i den uppvärmda återhämtning buren i 90 minuter. Vänta tills djuren är medvetna innan du lämnar dem utan uppsikt. Bara tillbaka dem till en bur med andra djur när de återhämtat sig helt.
  21. Upprepa volymsubstitution, som förklaras i steg 1,16 efter 12 timmar.
  22. Tillämpa postoperativ analgesi via dricksvattnet (t.ex. paracetamol (10 mg / ml) eller andra icke-steroida antiinflammatoriska läkemedel).
  23. Kontrollera det medicinska tillståndet hos djuren varje dag efter operationen. Ge mosad djurmat i en petriskål på golvet för att förenkla äta och för att minimera postoperativ viktminskning.

3. Sham Behandling

  1. Utför alla förfaranden identiskt med steg 1 och 2, som beskrivits ovan, inklusive CW förberedelse-utom inte koagulerar den exponerade mitten cerebral arriet.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Tidslinjen och representativa resultat visas i figurerna 2 och 3. Hjärn fönster förberedelse, med en liten hjärn fönster i sidled till sinus sagittalis superior (Figur 2 B, C, D) resulterar i en mycket låg dödlighet och sjuklighet när de utförs av en erfaren kirurg. Alla de 10 djur överlevde, och alla kronisk CW kan användas för hög bildkvalitet, även 28 dagar efter operationen. Det var inga problem med sårinfektioner eller andra komplikationer.

På grund av den korta exponeringen för flyktiga anestesi och endast mindre hjärnskada, ca 10 - 15 min efter distal MCAo och överföring till den uppvärmda återhämtning buren, alla djur var vaken, fritt rörliga i återhämtningen buren, och interagera med syskon. I allmänhet, är dödligheten av den distala MCAo modellen mindre än 5% och främst sker som ett resultat av vaskulär ig skada och efterföljande blödning under MCAo kirurgi. Dödligheten under 28 dagar långa observationsperioden efter distal MCAo förekommer endast mycket sällan. Morfologiskt kan skada bedömas med hjälp av histologi eller MRI (Figur 3 A, B). Dessutom MRI mätningar ger möjlighet att bedöma skadan volym och progression i ett längsgående sätt. En MRI utförs 24 timmar efter ischemi visar tydligt den ischemiska skadan finns under kronisk CW, medan efter skenkirurgi, ingen skadade kortikal vävnad som finns (Figur 3A). MRI resultat visar tydligt den strikta begränsningen av lesionen till cortex, vilket skonar striatum, i motsats till den filamentösa MCAo-modell (figur 3B). Den laterala kronisk CW förberedelse möjliggör långsiktig visualisering av kortikala kärl och mikrocirkulation av epi-fluorescensmikroskopi (figur 3C, övre delen) och subkortikala områden med två-foton mikroskopi (Figure 3C, nedre delen). Vidare är det möjligt att bild molekylära vägar och cell-till-cell-interaktioner med fluorescensmärkta celler eller autofluorescens mätningar, såsom fluorescenslivstid avbildning. Såsom visas i fig 3D, orsakar den distala MCAo modell höggradigt reproducerbara ischemiska lesioner. När det infarktvolymen, förväntar vi oss en standardavvikelse under 15% i en enda uppsättning operationer. Som nämnts ovan, i motsats till modeller av proximal MCAo, dödligheten är ganska låg för den distala modell 5. Med hjälp av sekventiell MRI, skada, volym, och ödem progression efter fokal cerebral ischemi kan bedömas. MR vid 24 timmar och 96 timmar efter permanent distal MCAo visade ingen signifikant progression av T2 hyperintensities.

figur 2
Figur 2: Kronisk Kraniell fönster Förberedelse. (A) representant tidslinje. <strong> (B) Märkning området där kraniotomi sker i sidled till den temporala muskeln, medial till sinus sagittalis superior, och rygg till bregma. (C) Brain ytan efter en kraniotomi, med ett intakt dura skikt och täckglaset på plats; cirkeln visar var det ischemiska området efter distal MCAo. (D) Färdig kronisk hjärn fönster med fast täckglaset, redo för upprepad avbildning i flera veckor (b = bregma, tm = tids muskel, SSS = sinus sagittalis superior, Ai = arean av ischemi). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Figur 3
Figur 3: Kombination av Lateral kronisk CW och Distal MCAo eller Sham kirurgi. (A) Den MRI utfördes 24 h efter sham kirurgi inte visar någon skadade kortikal vävnad. (B) Den MRI utfördes 24 h efter ischemi visar tydligt den ischemiska skadan (*) placerad under den kroniska CW. (C) Intravital epi-fluorescens avbildning (övre delen) och två-photon avbildning (nedre delen) i kortikala kärl. (D) infarktvolymen bedöms via MRI vid 24 timmar och 96 timmar efter ischemi visar en genomsnittlig lesion volym av 13,16 2,3 mm 3 vid 24 timmar och 12,2 1,9 mm 3 vid 96 timmar. Varje punkt representerar ett individuellt djur (n = 10 djur per grupp, medelvärde ± SEM). Klicka här för att se en större version av denna siffra.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Stroke är en av de främsta orsakerna till långvarig funktionsnedsättning och död över hela världen en. Utöver akut behandling, undersöka nya metoder och mekanismer för att påskynda och förbättra återhämtningen efter stroke är fortfarande ett utmärkt medicinsk mål 7. Experimentella strokeforskare använder ofta gnagarmodeller av fokal cerebral ischemi. I själva verket, modeller inducerar övergående eller permanent MCAo efterlikna en av de vanligaste typerna av fokal cerebral ischemi hos patienter 4. Förutom proximal ocklusion av MCA, är glöd modell för kirurgisk ocklusion av distala MCAo förmodligen den mest använda modellen i experimentell stroke forskning 5,19. Här beskriver vi den grundläggande tekniken permanent distal MCAo kombineras med en lateral CW, vilket ger möjlighet för längs intravital mikroskopi hos möss. Hög reproducerbarhet av skada volym, samt mycket låga dödstal, i synnerhet när det gäller att studera långsiktiga resultat, are de viktigaste fördelarna med denna musmodell. I denna kortikala stroke modell, kan blodkärl i slagområdet och peri-infarktregionen visualiseras via kronisk CW. Med användning av en multi-fluorescens epifluorescence videomicroscopic systemet, blodflödesdynamiken och den dynamiska rekrytering av cirkulerande celler kan visualiseras. Blodkärl visualiseras genom användning av fluorescensmärkta makromolekyler, såsom dextraner eller albumin. Celler kan märkas antingen genom fluorescerande färgämnen eller genom genetiska modeller, såsom benmärgs chimärer med GFP-positiva djur. Vidare, för att studera cell till cell interaktioner och dynamiken i extravaskulära celler, kan en två-foton laserskanning konfokalmikroskop tillämpas. Avbildning upp till 250 | j, m under den kortikala ytan kan utföras. Återigen, är blodkärl färgades med användning av fluorescensmärkta makromolekyler, och celler märks genetiskt (t.ex. genom att använda transgena GFP-nestin mus).

Hjärn fönsterkirurgi utförs via en kraniotomi utan att öppna dura. En stor fallgrop är att oavsiktligt skada durala skiktet och cortex under när du öppnar skallen med Microdrill. Därför kräver denna teknik viss teknisk kompetens för att undvika skador på dura och cortex, som framkallar en immunreaktion och påverkar mikroskopi resultat. Alternativt, är en potentiell förtunnas-skalle modell begränsad av mindre tillförlitliga mikroskopi kvalitet på grund av den återstående skalle, särskilt på lång sikt. Ofta är repetitiva skalle gallring nödvändigt, medan det i CW-modellen, varar fönstret kvalitet i flera månader, tills skallen återväxt eller dural förtjockning påverkar bildkvalitet 14,20. En modulering av denna modell med en förtunnad-skalle preparat skulle vara möjligt. Den durala skiktet bör överlåtas på hjärnan för att undvika skada eller excitation av cortex. Endast om en direkt applicering på det ischemiska området är önskvärt i en experimentell modell kan dura återflyttas försiktigt och utan att skada några brygg ådror.

I motsats till modeller som kombinerar en CW och inducerar riktad kärlocklusion via bestrålning av cirkulerande fotosensibilisatorer, vilket leder till endast mycket små ischemiska skador, de distala kortex modellen härmar majoriteten av mänskliga slag som finns i den kortikala MCA territorium 13. För att undvika störningar med en övergående inflammatorisk reaktion orsakad av CW förberedelser, bör fönstret beredas flera dagar innan distal MCAo kirurgi.

Ett antal tester för att bedöma funktionella samt beteendeaspekter hos gnagare är tillgängliga (t.ex. gånganalys, rotarod testet, pol test limborttagning testet, trappa testet, öppna fälttest, och Morris water maze) 21. I alla dessa tester, möss utsattes för MCAo utföra mindre framgångsrikt än kontrolldjuren med avseende på kortsiktiga och medel sikt resultat. Men när det gäller bedömningen avlångsiktiga resultat, måste det erkännas att känsligheten hos funktionella tester är mycket begränsad när det gäller distal MCAo, liksom mild proximal MCAo 19,21-23.

Distal MCAo, som utförs av välutbildade kirurger, kan induceras inom mindre än 20 minuter och kan producera mycket reproducerbara ischemiska skador. Kräver dock reproducerbarhet en grundlig kontroll av confounders. Skillnader i kirurgisk teknik kan leda till skillnader i infarktstorlek 24. Olika musstammar kan visa en annan stroke resultatet på grund av variationer i cerebral vaskulär anatomi mellan stammar. Dessutom, eftersom kroppstemperaturen påverkar neuronal skada och mottaglighet för ischemi, med hypotermi som leder till mindre skador och hypertermi till mer allvarliga brister 25,26, temperaturkontroll och underhåll är mycket relevant i den här modellen, liksom i andra ischemi modeller 27. I allmänhet, fysiologiska parametrar, såsom blod pressure och blodgaser, är viktiga confounders av utfall och måste kontrolleras för 28. Dessutom är valet av narkosmedel mycket viktigt, eftersom vissa medel kan utöva direkta neuroprotektiva effekter eller agerar indirekt via vasoaktiva egenskaper 29. Därför bör exponering för anestesi standardiseras och hållas så kort som möjligt. Slutligen, bostadsförhållanden, liksom användningen av anrikning kan påverka stroke utfall såväl, och därför bör standardiseras och beskrivs i forskningsrapporter 30. För att producera relevanta prekliniska resultat för utveckling av nya behandlingsmetoder, standardisering, kvalitetskontroll och rapportering är av yttersta vikt 31.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Binocular surgical microscope Zeiss Stemi 2000 C
Light source for microscope Zeiss CL 6000 LED
Heating pad with rectal probe FST 21061-10
Stereotactic frame Kopf Model 930
Anaethesia system for isoflurane Draeger
Isoflurane Abott
Dumont forceps #5 FST 11251-10
Dumont forceps #7 FST 11271-30
Bipolar Forceps Erbe 20195-501
Bipolar Forceps  Erbe                              20195-022
Microdrill FST                              18000-17         
Needle holder FST 12010-14
5-0 silk suture Feuerstein, Suprama
7-0 silk suture Feuerstein,Suprama
8-0 silk suture Feuerstein, Suprama
Veterinary Recovery Chamber Peco Services V1200

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Mukherjee, D., Patil, C. G. Epidemiology and the global burden of stroke. World Neurosurg. 76 (6), Suppl 85-90 (2011).
  2. Ebinger, M., Prüss, H., et al. Effect of the use of ambulance-based thrombolysis on time to thrombolysis in acute ischemic stroke: a randomized clinical trial. JAMA. 311 (16), 1622-1631 (2014).
  3. Ebinger, M., Lindenlaub, S., et al. Prehospital thrombolysis: a manual from Berlin. J vis Exp. (81), e50534 (2013).
  4. Bogousslavsky, J., Van Melle, G., Regli, F. The Lausanne Stroke Registry: analysis of 1,000 consecutive patients with first stroke. Stroke. 19 (9), 1083-1092 (1988).
  5. Engel, O., Kolodziej, S., Dirnagl, U., Prinz, V. Modeling stroke in mice - middle cerebral artery occlusion with the filament model. J Vis Exp. (47), (2011).
  6. Donnan, G. A., Fisher, M., Macleod, M., Davis, S. M. Stroke. Lancet. 371 (9624), 1612-1623 (2008).
  7. Meairs, S., Wahlgren, N., et al. Stroke research priorities for the next decade--A representative view of the European scientific community. Cerebrovasc Dis. 22 (2-3), 75-82 (2006).
  8. Rosamond, W., Flegal, K., et al. Heart disease and stroke statistics--2007 update: a report from the American Heart Association Statistics Committee and Stroke Statistics Subcommittee. Circulation. 115 (5), 69-171 (2007).
  9. Moskowitz, M. A., Lo, E. H., Iadecola, C. The science of stroke: mechanisms in search of treatments. Neuron. 67 (2), 181-198 (2010).
  10. Dirnagl, U., Iadecola, C., Moskowitz, M. A. Pathobiology of ischaemic stroke: an integrated view. Trends Neurosci. 22 (9), 391-397 (1999).
  11. Dirnagl, U., Endres, M. Found in Translation: Preclinical Stroke Research Predicts Human Pathophysiology, Clinical Phenotypes, and Therapeutic Outcomes. Stroke. , (2014).
  12. Prinz, V., Hetzer, A. -M., et al. MRI heralds secondary nigral lesion after brain ischemia in mice: a secondary time window for neuroprotection. J Cereb Blood Flow Metab. , (2015).
  13. Shih, A. Y., Mateo, C., Drew, P. J., Tsai, P. S., Kleinfeld, D. A polished and reinforced thinned-skull window for long-term imaging of the mouse brain. J Vis Exp. (61), (2012).
  14. Holtmaat, A., Bonhoeffer, T., et al. Long-term, high-resolution imaging in the mouse neocortex through a chronic cranial window. Nat Protoc. 4 (8), 1128-1144 (2009).
  15. Iadecola, C., Dirnagl, U. The microcircualtion--fantastic voyage: introduction. Stroke. 44 (6), Suppl 1 83 (2013).
  16. Blinder, P., Tsai, P. S., Kaufhold, J. P., Knutsen, P. M., Suhl, H., Kleinfeld, D. The cortical angiome: an interconnected vascular network with noncolumnar patterns of blood flow. Nat Neurosc. 16 (7), 889-897 (2013).
  17. Shih, A. Y., Driscoll, J. D., Drew, P. J., Nishimura, N., Schaffer, C. B., Kleinfeld, D. Two-photon microscopy as a tool to study blood flow and neurovascular coupling in the rodent brain. J Cereb Blood Flow Metab. 32 (7), 1277-1309 (2012).
  18. Cabrales, P., Carvalho, L. J. M. Intravital microscopy of the mouse brain microcirculation using a closed cranial window. J Vis Exp. (45), (2010).
  19. Rosell, A., Agin, V., et al. Distal occlusion of the middle cerebral artery in mice: are we ready to assess long-term functional outcome. Transl Stroke Res. 4 (3), 297-307 (2013).
  20. Dorand, R. D., Barkauskas, D. S., Evans, T. A., Petrosiute, A., Huang, A. Y. Comparison of intravital thinned skull and cranial window approaches to study CNS immunobiology in the mouse cortex. Intravital. 3 (2), (2014).
  21. Balkaya, M., et al. Assessing post-stroke behavior in mouse models of focal ischemia. J Cereb Blood Flow Metab. 33 (3), 330-338 (2013).
  22. Balkaya, M., Kröber, J., Gertz, K., Peruzzaro, S., Endres, M. Characterization of long-term functional outcome in a murine model of mild brain ischemia. J Neurosci Methods. 213 (2), 179-187 (2013).
  23. Freret, T., Bouet, V., et al. Behavioral deficits after distal focal cerebral ischemia in mice: Usefulness of adhesive removal test. Beh Neurosci. 123 (1), 224-230 (2009).
  24. Liu, S., Zhen, G., Meloni, B. P., Campbell, K., Winn, H. R. RODENT STROKE MODEL GUIDELINES FOR PRECLINICAL STROKE TRIALS (1ST EDITION). J Exp Stroke Trans Med. 2 (2), 2-27 (2009).
  25. Florian, B., Vintilescu, R., et al. Long-term hypothermia reduces infarct volume in aged rats after focal ischemia. Neurosci Lett. 438 (2), 180-185 (2008).
  26. Noor, R., Wang, C. X., Shuaib, A. Effects of hyperthermia on infarct volume in focal embolic model of cerebral ischemia in rats. Neurosci Lett. 349 (2), 130-132 (2003).
  27. Barber, P. A., Hoyte, L., Colbourne, F., Buchan, A. M. Temperature-regulated model of focal ischemia in the mouse: a study with histopathological and behavioral outcomes. Stroke. 35 (7), 1720-1725 (2004).
  28. Shin, H. K., Nishimura, M., et al. Mild induced hypertension improves blood flow and oxygen metabolism in transient focal cerebral ischemia. Stroke. 39 (5), 1548-1555 (2008).
  29. Kapinya, K. J., Prass, K., Dirnagl, U. Isoflurane induced prolonged protection against cerebral ischemia in mice: a redox sensitive mechanism. Neuroreport. 13 (11), 1431-1435 (2002).
  30. Gertz, K., Priller, J., et al. Physical activity improves long-term stroke outcome via endothelial nitric oxide synthase-dependent augmentation of neovascularization and cerebral blood flow. Circ Res. 99 (10), 1132-1140 (2006).
  31. Dirnagl, U. Bench to bedside: the quest for quality in experimental stroke research. J Cereb Blood Flow Metab. 26 (12), 1465-1478 (2006).

Tags

Neurovetenskap cerebral ischemi stroke distal kortex hjärn fönster intravital mikroskopi två-foton mikroskopi
Lateral Kronisk Kraniell fönster Framställning Aktiverar<em&gt; In Vivo</em&gt; Observation Efter Distal Middle Cerebral artärocklusion hos möss
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bayerl, S. H., Nieminen-Kelhä,More

Bayerl, S. H., Nieminen-Kelhä, M., Broggini, T., Vajkoczy, P., Prinz, V. Lateral Chronic Cranial Window Preparation Enables In Vivo Observation Following Distal Middle Cerebral Artery Occlusion in Mice. J. Vis. Exp. (118), e54701, doi:10.3791/54701 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter