שיטה מבוססת חוק ארכימדס של קביעת רמות שומן Published: November 1, 2016 doi: 10.3791/54744

DOI

Automatic Translation

• English (Original)
• العربية (Arabic)
• 中文 (Chinese)
• dansk (Danish)
• Nederlands (Dutch)
• français (French)
• Deutsch (German)
• עברית (Hebrew)
• हिंदी (Hindi)
• italiano (Italian)
• 日本語 (Japanese)
• 한국어 (Korean)
• norsk (Norwegian)
• português (Portugese)
• русский (Russian)
• español (Spanish)
• svenska (Swedish)
• Türkçe (Turkish)

Kelsey E. Hazegh¹, Tânia Reis¹

¹Department of Medicine, Division of Endocrinology, Metabolism, and Diabetes, University of Colorado Anschutz Medical Campus

Summary

כאן אנו מציגים שיטה למדידת רמות שומן האורגניזם ב instar השלישי (L3) בשלב הזחל של תסיסנית. שיטה זו מנצלת את הצפיפות נמוכה יחסית של רקמת שומן להבדיל בין זחלים עם ממאגרי שומן שונים. ניתוח מבוסס ציפה הוא כלי רב ערך עבור לסינון מהיר, לשחזור, וחסכוני.

Introduction

תסיסנית שימש במשך יותר ממאה שנה בחקר הגנטיקה שאלות ביולוגיות בסיסיות אחרות. בעשורים האחרונים, זה הפך להיות ברור כי תסיסנית הוא כלי רב עוצמה בחקר מחלות אנושיות רבות. כמו 70 - 80% של גנים הקשורים למחלות בבני אדם יש ortholog זבוב מזוהה ^{1 - 4,} תסיסנית מספקת מערכת לתרגום פשוט עדיין שבה כדי לחקור מחלות מורכבות. מטבוליזם בפרט הרוויח ממחקר כזה. לא רק הגנטיקה של מטבוליזם נשמרת היטב בין זבובים ובני אדם, אך האורגנים הרלבנטיים סוגי תאים הם גם מאוד דומים ^2,5. לדוגמא, את השומן בגוף של חנויות הזבוב הוא triacylglycerides (TAG) וגליקוגן, פונקציות דומות לאלה שבוצעו בכבד יונקי שומן לבן רקמות ^6. שימוש תסיסנית כמודל שמנת אדם בהרבה השתפר הבנתנו השומניםחילוף החומרים ואת הגנטיקה של ההשמנה ^7. בשלב הזחל של פיתוח שימושי במיוחד ללימוד הפרדה של חומרים מזינים אחסון או ניצול כפי שהוא מוקדש אכילה לבין האחסון של אנרגיה כדי לשמש במהלך pupariation.

נכון לעכשיו, יש הרבה שיטות כמותיות שונות של קביעת רמות אחסון שומן תסיסנית. השיטה הנפוצה ביותר היא assay colorimetric המצמיד (CCA) ^8,9. CCA פותח לקביעת רמות TAG בסרום אדם ופועל על ההנחה כי גליצרול ששוחרר עמוד השדרה של טריגליצרידים יעברו כמה תגובות, בסופו של דבר וכתוצאה מכך תגובת חיזור מצמידי יצירת מוצר בצבע. ספיגה של אורכי גל מסוימים של אור נמדדה אז כדי לקבוע את הסכום הראשוני של הווה גליצרול. עם זאת, גליצרול יכול להיות משוחרר גם ובי-diacylglycerides בנוסף TAG ולכן לא יכול להיות מדד מדויק של יםtored השומן בגוף ^9. יתר על כן, פיגמנט עין של זבובים בוגרים כתושים יכול להפריע כמה קריאות ספיגות ומסבכי תוצאות ^9,10. לכן, CCA חייב להיות מלווה ומאומתים על ידי כרומטוגרפיה בשכבה דקה (TLC), המאפשר הפרדה של רוב המשפחות השומנים שניתן ונרשמת על ידי צפיפות ^10,11. עם זאת, כמה שיעורי שומנים כמו סטרולים לא ניתן לנתח וצריכים לכמת בצורה שונה ^12. ספקטרומטריית מסה (MS) היא דרך מדויקת לכמת את כל סוגי ליפידים סלולריים גדולים ^12,13. עם זאת, הליכי שומני החילוץ צורכים לנתח ידי MS הם גם זמן רב (רוב הלקיחה כמעט יום שלם) ויקר. כאן אנו מציגים שיטה חלופית במהירות ובזול לקבוע רמות שומן האורגניזם ב זחלי L3 של תסיסנית.

השיטה המוצגת להלן מנצלת את ההבדל בצפיפות בין רקמת שומן ורקמה רזה. fa יונקיםיש t רקמות בצפיפות של כ 0.9 גר '/ מ"ל ¹⁴ תוך שרירי השלד כמו צפיפות של 1.06 גרם / מ"ל ^15. הבדל זה הוא שבעלי חיים עם חנויות גבוהות יותר של שומן יהיו צפיפות נמוכה יותר מחיות עם חנויות נמוכות יותר של שומן, אשר תאפשרנה להם לצוף טוב יותר בתמיסה של צפיפות קבועה. מאפיין זה מאפשר הקרנה מהירה מאוד של מספר רב של בעלי חיים בעת היותו גם זול ולא פולשנית. ניתוח מבוסס חוק ארכימדס נעשה שימוש הוא כדי לאשר את פנוטיפים של שינוי רגולטורים ידועים של רמות שומן, כמו גם לזהות רגולטורים גנטיים הנוירולוגי חדשים של השמנה ^16,17.

Protocol

1. איסוף ביצים מפני זבובים עם גנוטיפים של ריבית

הערה: צלבים אידיאליים המורכבים של 150 זבובי בתולה ולפחות 75 גברים. אוספי צילומים צריכים להיות מורכבים של 200 זבובים לפחות.

1. כן צלחות ענבים.
   1. להוסיף אגר 37.5 גרם ל -1.5 מים מזוקקים L בבקבוק 4 L.
   2. מים / אגר חיטוי לערבב למשך 50 דקות ב 121 מעלות צלזיוס (250 פרנהייט).
   3. בעוד מים / לערבב אגר הוא מעוקר, להוסיף סוכרוז 50 גרם מיץ ענבים 500 מ"ל ומערבבים עם בר ומערבבים בצלחת ומערבבים מחומם עד להמסה סוכרוז.
   4. מכבים את האש וממשיכים לבחוש כדי לקרר את התערובת מיץ ענבים / סוכרוז אל מתחת ל -70 מעלות צלזיוס. בדוק את הטמפרטורה הפנימית עם מדחום אלכוהול.
   5. להוסיף 3 גרם תסיסנית סוכן אנטי פטרייתי (למשל, Tegosept) לחמם מיץ ענבים / תערובת סוכרוז ומערבבים לפזר.
   6. כאשר מים / תערובת אגרה הוא מתוך החיטוי, לאפשר את הבקבוק כדי לקרר למגע ידי מתערבל מדי פעם.
   7. השתמש פיפטה סרולוגיות להוסיף 8 - 10 מ"ל של תערובת הענבים את המכסה של צלחת פטרי קטנה (35 x 10 מ"מ בסגנון). אפשר התערובת להכתיר גבוהה יותר מאשר גובה הקירות המכסים כדי ליצור צורה קמורה.
   8. אפשר צלחות ענבים להתקרר במשך 2 שעות בטמפרטורת החדר ולאחר מכן לאחסן בכלי אטום על 4 מעלות צלזיוס.
2. הכן להדביק שמרים.
   1. הוסף 6 מ"ל פתרון חיץ פוספט (PBS) ל -4 שמרים יבשים פעילים חי g בתוך שפופרת 50 מ"ל חרוטי ומערבבים במרית עד שהתערובת חלקה.
   2. שמרים חנות ולהדביק ב 4 ºC.
3. להוסיף מנה קטנה (כ 1/8 כפית) של רסק שמרים לאמצע צלחת ענבים. להחליק כל קצוות גסים עם מרית.
4. מניחים צלחות ענבים באינקובטור עד שהם הגיעו לטמפרטורת הסביבה.
5. עבר זבובי עניין לתוך צלחת ענבי תא מורכב ביצה ומניח wלהדביק שמרים ה- i מול פנימה על גבי. צלחת ענבי סרט לתא אוסף ביצה כדי להימנע מהמצב שבו הצליח לנשור. הקפד לכתוב מידע גנוטיפ ותאריך חשוב על החלק התחתון של צלחת ענבים.
6. להעמיד על הקצה את תא אוסף ביצה לאפשר הזבובים להטיל ביצים על צלחת ענבים.
7. מניחים קופסה או לכסות על תאי אוסף ביצה ומניחים אותם באינקובטור ב 25 ºC.
8. אפשר זבובים להטיל ביצים עבור 4 - 6 שעות.
9. בסופו של אוסף ידי לקיחת צלחת ענבים מתוך החדר אוסף ביצה והעברת הזבובים בחזרה לתוך בקבוק מזונם. השתמש מרית לנגב את רסק שמרים עודף מהצלחת הענבים. צלחת ענבי חנות בצלחת פטרי גדולה בתוך חממת humidified ב 25 ºC עבור ~ 24 שעות.

העברת 2. זחלי מזון הניסיון

1. להכין אוכל ניסיוני.
   הערה: מתכון אוכל זה מבוסס על מתכון מרכז מניות Bloomington ^18. שינויים חשוביםכוללים העלאת כמות השמרים כדי לייעל את הערך התזונתי של המזון לפי הערכת עיתוי של נדודי במה (בין 112 - 120 שעות לאחר איסוף הביצים ב 25 ºC). בעוד שמצאנו המתכון הזה אידיאלי עבור הבריאות וההתפתחות של זחלי הניסוי שלנו, כל מתכון אוכל כיול נתון מקובל עם בקרות חיוביות ושליליות, דוגמאות של ורשומי צעד 3.10.
   1. מדוד 1,600 מ"ל מים מזוקקים.
   2. מערבבים 134 גרם קמח תירס, 10.6 גרם תסיסנית אגר Type II, ואת חלק מהמים (~ 500 מ"ל) בכוס L 1. ערבבו 2 דקות עם מערבל יד ממונע.
   3. מערבבים 70 גרם שמרים יבשים פעילים חי, 18.4 גרם קמח סויה, 84.8 גרם תמצית מאלט, וחלק מהמים (~ 500 מ"ל) ב 1 אחר כוס L. ערבבו 2 דקות עם מערבל יד ממונע.
   4. מערבולת כל כוס ויוצקים לתוך בקבוק 4 L. השתמש שאריות מים כדי לשטוף את הכוסות ולהוסיף לתוך הבקבוק.
   5. מדוד סירופ תירס בהיר 140 מ"ל ולהוסיף את הבקבוק, ומערבבים על ידי מתערבל. </ Li>
   6. חיטוי במשך 50 דקות ב 121 מעלות צלזיוס (250 פרנהייט) בסביבה הנוזלית.
   7. לאחר מעוקר, לשפוך מזון לתוך מבחנה 4 L להתקרר. עזרה בתהליך הקירור על ידי מיזוג עם מיקסר יד ממונע.
   8. לאחר הבקבוק מתקרר מספיק לגעת, להוסיף 8.8 מ"ל חומצה propionic ו -16.8 מ"ל תסיסנית אנטי פטרייתי פתרון סוכן / אתנול. לערבב היטב. (בצע פתרון סוכן אנטי פטרייתי תסיסנית על ידי הוספת 380 גרם תסיסנית אנטי פטרייתי סוכן עד 1 L 200 אתנול הוכחה ערבוב על צלחת חמה עד שהיא נמסה, מוודא הפתרון אינו עולה על 70 מעלות צלזיוס.)
   9. יוצקים מזון לתוך צלוחיות עד שהאוכל הוא כ 1 ס"מ עמוק להתקרר ב RT במשך 2 - 3 שעות. חבר צלוחיות בחנות באינקובטור ב 25 ºC. השתמשו בהם במשך השבוע.
2. לצלול מרית מספר פעמים לתוך השכבה העליונה של בקבוקון מזון להבקיע אותו. זה יעזור הזחלים להתחפר ולהאכיל.
3. 22 - 24 שעות לאחר איסוף ביצים ישהסתיים, להשתמש במכחול קטן כדי לאסוף 50 instar הראשונים (L1) זחלים באותו הגודל למידע. מניח זחלים במזון הניסיוני. נקה את המכחול על מעבדה לנגב ולהבטיח שאין זחלים הנותרים על המכחול לפני שאתה ממשיך גנוטיפ אחר.
4. מניחים בקבוקון של הזחלים באינקובטור ב 25 ºC ולאפשר לפתח.

3. לקבוע רמות שומן זחלים

1. הכינו פתרונות.
   1. כן 1 L 10x מניית PBS.
      1. להוסיף 80 גרם NaCl, 2 גרם KCl, 14.4 גרם Na ₂ HPO _4, ו -2.4 גרם KH ₂ PO ₄ כדי 800 מ"ל מים בכוס L 2 המכיל בר ומערבבים. מערבבים ללא חום עד שכל המלחים משולבים. תביא pH ל -7.4. הגבר את עוצמת 1 ליטר עם מים.
   2. כן 2 L 1x PBS. הוספת 200 מ"ל פתרון 10x PBS המניות 1,800 מ"ל מים.
   3. להשתמש במלאי זה של 1x PBS לעשות 20% w / v סוכרוז.
2. הסר את הבקבוקון של זחלים מןחממה אחת יש 20 - 40 זחלים פסעו במעלה הצדדים של הבקבוקון (בדרך כלל ביום החמישי לאחר אוספי ביצה). רשמו את התאריך והשעה של assay, כמו גם את מספר נודד הזחלים.
3. הכן פתרון ניסיוני על ידי הוספת 11.5 מ"ל PBS ו -9 מ"ל סוכרוז 20% צינור חרוטי 50 מ"ל.
4. הוסף 20% סוכרוז הבקבוקון עד 0.5 - 1 ס"מ מהחלק העליון של המכל.
5. להשתמש במרית לעורר את השכבה העליונה בעדינות מזון הזחלים בחינם שעדיין מתחפרים האוכל. כל הזחלים יעלו אל פני השטח של הפתרון סוכרוז.
6. שימוש במלקחיים להעביר את הזחלים בעדינים לתוך ריכוז סוכרוז הראשוני משלבים 3.3.
7. להשתמש במרית לעורר הזחלים בעדינות בפתרון זה.
8. כיסוי או צינור חרוטי להעמיד על הקצה כמה פעמים כדי לערבב הפתרון ביסודיות.
9. Uncap צינור החרוטים ו מערבולת ליצור מערבולת עדינה.
10. אפשר הזחלים להתיישב, או צף העליון של פתרון או סיnking לתחתית. חכה 2 - 5 דקות עבור הזחלים להתיישב.
    הערה: אם יש עדיין זחלים שאינם בהחלט גם צפו או שוקע, להרים קו להשתמש כנקודת חיתוך לתייג את הזחלים כמילת מצוף או משקולת. החל אותה אמת מידה זו לכל גנוטיפים. אנו משתמשים הזווית בתחתית צינור החרוטים כמו זחלים שלנו ¹⁷ מוטצית גבול. ADP או Sir2 ניתן להשתמש כביקורת חיובית lsd2 ¹⁹ מוטציות עשויות לשמש כביקורת שלילית לכיול של assay.
11. רשום את מספר הזחלים צף ואת ריכוז מסוים נבדק.
12. הוסף 1 מ"ל סוכרוז 20% לפתרון ניסיוני להגדיל צפיפות שלה.
13. חזור על שלבים 3.7 כדי 3.10. רשום את מספר זחלים צפו והריכוז החדש הזה.
14. המשך הצעדים 3.12 ו 3.13 עד לפחות 95% של הזחלים הם צפים.
15. שימוש במלקחיים כדי לאסוף את כל הזחלים לתוך צלחת לנתיחה מלאה PBS.
16. obsזחלי erve תחת מיקרוסקופ הערה אם יש זחלים קטנים,-גלמים מראש, גלמים, או הבדלים אחרים בין גנוטיפים.
    הערה: באופן אידיאלי, כל הזחלים אמורים להופיע הומוגנית ובאותו השלב ההתפתחותי. ראינו רק מדידות שומן עקביות בתנאים אלה.
17. רשום את מספר הזחלים הכולל.
18. בעזרת מלקחיים, להעביר 10 זחלים למעבדה לנגב להתייבש. לייבל צינור microcentrifuge ומניח 10 זחלים בצינור.
19. פלאש להקפיא את הזחלים בחנקן נוזלי. אחסן את הצינור ב -20 ºC.

Representative Results

איור 1 מייצג דוגמא כיצד assay מבוסס הציפה יכול לזהות הן ממאגרי השומן גבוהים ונמוכים זחלי מניפולציות גנטיות. איור 1A מראה כי עירור או השתקה של קבוצת משנה מסוימת של נוירונים (E347) במוח זחל הגורם נמוך וגבוה שומן חנויות בהתאמה. שליטת הרקע הגנטית הזהה שמשה בשני המקרים. איור 1B מספק דוגמא לאופן פנוטיפ זה שהשיג assay הצפיפות מקבל תימוכי מיצוי שומנים ניטראליים וכימות ידי GCMS.

פונקציה באיור 1. העצבית באזורים ספציפיים של המוח הזחל הוא הכרחי ומספיק תקנה השומן בגוף. פעילות עצבית בקו E347-GAL4 המצוין הושתקה על ידי ביטוי יתר של שי ^DNאו מופעל על ידי ביטוי יתר של NB, כמצוין הפאנלים, והשפעות על השומן בגוף הוערכו. (א) אחוז צף הזחלים בשיווי משקל בפתרונות צפיפות שונה. חמישים זחלים נבדקו לכל לשכפל ביולוגי, n = 7 - 9 ביולוגים משכפל לכל גנוטיפ (B) אחוזי שומן (ליפידים ניטראלי סך כולל triacylglycerides פוספוליפידים מחולק לפי משקל גוף), כפי שהיא נמדדת על ידי GCMS ^17,20 (n = 8).. קווים או סורגים כחולים מייצגים GAL4-בלבד (ללא כטב"מ) חיות חצו כדי w ¹¹¹⁸ כדי לשלוט על השפעות של רקע גנטי. ערכי P מייצגים תוצאות מבחני t זנב השני. **** P <0.0001, *** P = 0.0001 כדי 0.001, ** P = 0.001 כדי 0.01, * P = 0.01 כדי 0.05. ברים שגיאים להראות SEM. דמות זו שונתה ^16. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Discussion

ישנם מספר רב של טכניקות אשר פותחו כדי למדוד את רמות השומנים ^{8 - 10.} עם זאת, כל אחת משיטות אלה מגיעה עם כמה חסרונות עיקריים שמטופלות על ידי assay מבוססי הציפה שתוארו לעיל. ראשית, assay זה הוא מהיר מאוד. בדיקת מפל ריכוזים מלא לוקחת לא יותר מ 30 - 60 דקות. זהו שיפור עצום על רוב הטכניקות הנמצאות בשימוש כיום. לדוגמה, quantitation השומנים ידי MS לוקח 7 - 9 שעות לבודד את השומנים ועוד כמה שעות לנתח אותם. זוהי הרתעה חזקה בעת ביצוע מסך על מספר רב של בעלי חיים. באמצעות מדידת פנוטיפ ציפה מהירה, אפשר להתמקד במהירות על גנוטיפים שיש להם את הפנוטיפ של עניין. שנית, assay הצפיפות דורש ריאגנטים משותפים יחיד כגון מלחים (עבור PBS) וסוכרוז. זה עושה את זה הרבה יותר קל וזול להקרין מספר רב של זחלים או במהירות לבדוק בגנוטיפ מעניין. לבסוף, אני בפרוטוקול זהזה לא פולשנית ואת הזחלים הם עדיין בחיים בסוף. זה מאפשר ניסויים נוספים שיבוצעו על החיות כגון quantitation שומנים ספציפי או תעתיק או ניתוח חלבון. בנוסף, זחלים התאוששו יורשו להמשיך מגדילה לבגרות.

יתרון נוסף של שיטה זו על פני אחרים הוא גדל רגיש לשינויים קטנים ברמות שומן אוכלוסייה. על ידי ביצוע מפל ריכוזים כולו על אוכלוסייה של 50 זחלים, משמרות קלה ברמות שומן האוכלוסייה יזוהו על ידי שינוי ריכוזי ביניים, למרות הריכוז שבו הזחלים להתחיל צף והם ריחפו לגמרי לא יכול להיות שונה יותר שולטת . תזוזה קטנה זו באוכלוסייה לא יכול להיות מזוהה תמיד בשיטות quantitation שומן אחרים כפי שהם דורשים קבוצה גדולה של הזחלים לנתח. את assay הצפיפות ומצד שני חוקר יחידים בתוך האוכלוסייה וכתוצאה מכך יכול לזהות הESE שינויים או משמרות קטנים בחלוקת האוכלוסייה הכללית.

כמו טכניקה זו מסתמכת על צפיפות של הפתרון לייצר תוצאות אמינות, חשוב מאוד כי PBS ופתרונות סוכרוז נעשים באופן עקבי. מצאנו כי מתכונים שונים PBS לייצר הבדלים בצפיפות פתרון, מה שהוביל לתוצאות שונות. אנו משתמשים המתכון שתואר לעיל עבור תוצאות עקביות. יתר על כן, מה שהופך את סוכרוז 20% מאותה אצווה של PBS 1x חשוב מפני שהוא גורם באותה צפיפות פתרון רקע. אם שני הפתרונים נעשו בנפרד, שינויים קלים בצפיפות PBS יכולים להביא משתנה צפיפות נוספת מעבר התוספת של סוכרוז בקבוקון חרוטי ניסיוני. לבסוף, אידוי יכולה להיות בעיה, כי לאורך זמן הפתרונות וריכוזה יותר עם התאדות המים. לכן חשוב כובע הבקבוקים בחוזקה לסדר את הפתרון כל שבוע כך הניסיוןפתרונות להישאר עקביים.

בין הצעדים המפורטים לעיל, ישנם מספר צעדים קריטיים שאם שינה, עלול לגרום תוצאות לא מדויקות על ידי assay הציפה. ראשית, חשוב כי הזחלים מועברים לתוך בקבוקון המזון הניסיוני להיות בנים אותו הגיל. העברת זחלים כי משתנים בגודלם תגרום זחלים בשלבי התפתחותיים שונים בעת assay הציפה מתבצעת. פרוטוקול זה פותח כדי לקבוע שינויים ברמות שומן נדודי זחלי L3 ולא יעבוד במדויק עבור L3 מוקדם או-גלמים מראש או מאוחר יותר. יש זחלי instar שלישיים מוקדם נטייה לצוף עצמאי של רמות שומן תוך-גלמים מראש וכיור גלמים אפילו הריכוזים הגבוהים ביותר בשימוש. מסיבה זו, בעידן של זחלי L1 עבירה הוא קריטי. בדומה לכך, הנקודה שבה הבקבוקון נלקח לבצע את assay הציפה חשובה. מהטעמים התפתחותי העיתוי אותה כאמור לעיל, צלוחיות צריך לקחת רק כאשר 20 -40 זחלים נודדים על מנת להבטיח מדידות צפיפות מדויקות. בנוסף, מספר L1 הועבר יכול להשפיע על התוצאות, כמו גם. הצלוחיות הרחבות בשימוש בפרוטוקול זה לאפשר 50 זחלים לאכול ללא תחרות במהלך פיתוח. מספר גדול בהרבה של זחלים מועבר מזה יגרום תחרות למזון עשוי להשפיע על כמות השומן מאוחסנת עצמאית של גנוטיפ.

ייתכנו גנוטיפים עם רמות שומן כזה גבוהים מאוד כי רוב או כל הזחלים יצופו בריכוז הראשון. במקרה זה, הפרוטוקול ניתן לשנות על ידי הפחתת הריכוז של הפתרון מתחיל על מנת לקבל ספקטרום מלא של התפלגות צפיפות אוכלוסייה. מנגד, גנוטיפ ספציפי יכול להיות כל כך רזה כי אין זחל שצף סוכרוז הראשוני. במקרה זה, את השלבים הראשוניים עשויים להיות מושמטים וריכוז מוצא גבוה בשימוש. assay זה הוא מאוד גמיש ויכול להיות שונה עדיף להתאים למגוון רחב של רמות שומן.אנו ממליצים על השימוש שולט כגון חיות סוג הבר מתאימות (נשלטו על רקע גנטי), בקרות חיוביות (מוטציות שומן הוקם, כגון ADP או Sir2 ^17), בקרות שליליות (מוטציות רזה שפורסמו כגון lsd2 ^19). שימוש נאות של פרוטוקול זה יאפשר הקרנת עתיד של אוספים לקבוע רגולטורים חדשים של חילוף חומרים ובעלי נטייה להשמנה. יתר על כן, פרוטוקול זה מספק דרך קלה עבור חוקרים בכל תחום לבחון האם המניפולציה של עניין הגנטית שלהם גורמת לשינוי רמות שומן, ללא צורך פרוטוקולים מורכבים או ציוד יקר. פרוטוקול זה יעזור להבהיר את מערכת היחסים המורכבת בין גנטיקה להשמנה.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bacto Agar	VWR	214030
Welch's Original 100% Grape Juice
Sucrose	Fisher	S512
Tegosept	Genesee Scientific	20-259
Ethanol			200 proof
Baker's yeast	Fleichmann's
Yellow Corn Meal	Quaker		Enriched degerminated
Drosophila Agar Type II	Apex	66-104
Soy Flour	ADM Specialty Ingredients	062-100
Malt Extract	Breiss	5748
Light Corn Syrup	Karo
Propionic Acid	VWR	U330-09
Sodium chloride	Fisher	50147491
Potassium phosphate monobasic	Sigma	P5655-100G
Sodium phosphate anhydrous	Fisher	S3933
Potassium chloride	Fisher	P330-500
35 x 10 mm petri plate	Fisher	08-757-100A
50 ml Conical	Fisher	50-869-569