Summary
Burada üçüncü instar (L3) Drosophila melanogaster larva evresi içinde organizma yağ seviyelerini ölçmek için bir yöntem mevcut. Bu yöntem, değişmiş yağ mağazaları ile larva ayırt etmek için yağ dokusunun nispeten düşük yoğunluğa patlatır. Yüzdürme-tabanlı analiz, hızlı, tekrarlanabilir ve ekonomik tarama için değerli bir araçtır.
Introduction
Drosophila melanogaster genetik ve diğer temel biyolojik soruların çalışmada bir yüzyılı aşkın süredir kullanılmaktadır. Drosophila birçok insan hastalıklarının çalışmada güçlü bir araç olduğunu son birkaç on yıl içinde, bu netlik kazanmıştır. İnsan hastalıklarıyla bağlantılı genlerin% 80 bir tanımlanmış uçucu ortologu 1 etmek - - 70 de 4, Drosophila kompleks hastalıkların çalışma için basitleştirilmiş yapılmamış çevrilebilir bir sistem sağlar. Özellikle Metabolizma böyle çalışmaya yararlanmıştır. Sadece iyi uçar ve insanlar arasında korunmuş metabolizmanın genetik olarak, ama ilgili organ ve hücre tipleri, aynı zamanda 2,5 çok benzerdir. Örneğin, memeli karaciğer ve beyaz yağ dokusunda 6 yapılanlar hem triasilgliseridler (TAG) ve glikojen, fonksiyonlar benzer sinek mağazaların vücut yağ. Insan obezite için bir model olarak Drosophila kullanarak büyük ölçüde lipit anlayışımızı geliştirdimetabolizma ve obezite 7 genetiği. gelişme larva bu besleme adanmış ve enerji depolama pupariation sırasında kullanılmak üzere depolama veya kullanım besin ayrılmasını çalışmak için özellikle yararlıdır.
Şu anda, Drosophila yağ depolama düzeylerinin belirlenmesi birçok farklı sayısal yöntemler vardır. En yaygın olarak kullanılan yöntem birleştiğinde kolorimetrik (CCA) 8,9 olduğunu. CCA İnsan serumundaki TAG düzeylerinin belirlenmesi için geliştirilmiş ve sonunda renkli bir ürün üreten bir redoks-bağlanmış reaksiyonda elde edilen çeşitli reaksiyonlara tabi olacak trigliseritlerin omurgasından serbest gliserol öncül faaliyet göstermektedir. ışığının belirli dalga boyu Absorbans, gliserol mevcut başlangıç miktarını belirlemek için ölçülür. Bununla birlikte, gliserol da TAG ilave olarak mono- ve diasilgliseridler serbest bırakılabilir ve bu nedenle, S doğru bir göstergesi olabilirizlenmekte vücut yağ 9. Ayrıca, ezilmiş yetişkin sineklerin göz pigmenti bazı absorbans okumaları müdahale ve sonuçları 9,10 karmaşık hale getirebilir. Bu nedenle, CCA eşlik yoğunluk 10,11 nicelendirilebilir en lipit ailelerinin ayrılmasını sağlar, ince tabaka kromatografisi (TLC) ile doğrulanması gerekir. Ancak, steroller gibi bazı lipit sınıfları analiz edilemez ve farklı bir şekilde 12 sayısal olmalıdır. Kütle spektrometrisi (MS) önemli hücresel lipidlerin 12,13 bütün sınıfları ölçmek için doğru bir yöntemdir. Ancak, MS tarafından analiz için gerekli lipid çıkarma prosedürleri hem zaman alıcı (çoğu almayı neredeyse bir tam gün) ve yüksek maliyetlidir. Burada hızlı ve ucuza Drosophila melanogaster L3 larvaları organizma yağ düzeylerini belirlemek için alternatif bir yöntem mevcut.
Aşağıda sunulan yöntem yağ dokusu ve yağsız doku arasındaki yoğunluk farkı patlatır. memeli faT hücre 1.06 g / ml, 15 yoğunluğunda olarak, yaklaşık 0.9 g / ml 14 ise, iskelet kası bir yoğunluğa sahiptir. Bu fark, yağ yüksek mağaza hayvanlar onları sabit yoğunluklu bir çözelti içinde daha iyi bir yüzer sağlayacak yağ alt mağazalar, hayvanların daha düşük bir yoğunluğa sahip olacağı anlamına gelir. Bu özellik, pahalı olmayan ve invazif olmayan hem de olan Hayvanların büyük sayıda son derece hızlı taranması için izin verir. Yüzdürme tabanlı analiz yanı sıra obezitenin 16,17 yeni genetik ve nörolojik düzenleyiciler tanımlamak için yağ seviyelerinin bilinen düzenleyicileri değiştiren fenotipleri onaylamak için ikisi de kullanılır olmuştur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. İlgi Genotiplerinde ile Sineklerin Gelen Yumurta Toplama
NOT: İdeal haçlar 150 bakire sinek ve en az 75 erkek oluşur. Stok koleksiyonları en az 200 sinekler oluşmalıdır.
- üzüm tabak hazırlayın.
- 4 L'lik bir şişede 1.5 L damıtılmış su ile 37.5 g agar ekleyin.
- 121 ºC (250 ºF) 50 dakika süreyle otoklav su / agar karışımı.
- Su / agar karışımı otoklavlama iken, 500 mi üzüm suyu için 50 g sükroz ilave ve sükroz çözünene kadar ısıtılmış bir karıştırma plakası üzerinde bir karıştırma çubuğu ile karıştırıldı.
- Isı kapatın ve 70'in altında ºC üzüm suyu / sakaroz karışımı soğutmak için karıştırma devam edin. bir alkol termometre ile iç sıcaklığını kontrol edin.
- Üzüm suyu / sükroz karışımı ısınmaya bırakılmış ve çözünmesi için karıştırılmıştır (ör Tegosept) 3 g Drosophila anti-mantar maddesi ekleyin.
- su / Agar karışım otoklav dışında olduğunda, şişeyi bazen dönen irtibatta soğumaya bırakın.
- Küçük bir petri kabı (35 x 10 mm tarzı) kapak üzüm karışımı 10 ml - 8 eklemek için serolojik bir pipet kullanın. kapak duvarlarının yüksekliği dışbükey şekil oluşturmak için daha karışım yüksek taç izin verin.
- üzüm plakaları 4 ° C'de hava geçirmez bir kapta oda sıcaklığında 2 saat boyunca soğumaya ve daha sonra saklamanıza olanak sağlar.
- maya hamurunu hazırlayın.
- 50 ml konik bir tüp içinde 4 g canlı aktif kuru maya 6 ml fosfat tampon çözeltisi (PBS) ilave edin ve pürüzsüz hale gelene kadar bir spatül ile karıştırın.
- Mağaza maya 4 ° C'de yapıştırın.
- üzüm plakanın ortasına maya hamur küçük topak (yaklaşık 1/8 çay kaşığı) ekleyin. bir spatula ile herhangi bir pürüzlü kenarları pürüzsüz.
- onlar ortam sıcaklığına ulaşana kadar bir kuluçka üzüm tabak yerleştirin.
- bir yumurta toplama haznesi ve yer üzüm plaka w içine ilgi sinekler aktarınüstünde içe dönük i maya yapıştırın. Yumurta toplama haznesine bant üzüm plaka plaka dışarı düşmesine izin önlemek için. üzüm plaka altındaki önemli genotip ve tarih bilgilerini yazmak için emin olun.
- sinekler üzüm plaka üzerinde yumurtalarını bırakmak için izin yumurta toplama haznesini upend.
- Bir kutu yerleştirin veya yumurta toplama odaları üzerinde kapak ve 25 ºC bir kuluçka koyun.
- 6 saat - sinekler 4 yumurtalarını bırakmak için izin verin.
- Yumurta toplama odasının dışında üzüm plakasını alarak ve gıda onların şişenin içine geri sinekler aktararak toplama bitirin. üzüm plaka herhangi bir aşırı maya macunu temizlemek için bir spatula kullanın. 24 saat ~ 25 ° C'de, nemlendirilmiş bir kuluçka makinesi içinde daha büyük bir petri tabağına deposu üzüm plakası.
Deneysel Gıda 2. Aktarım Larvalar
- Deneysel yemek hazırlamak.
NOT: Bu yemek tarifi Bloomington stok merkezi tarifi 18 dayanmaktadır. önemli değişikliklersahne dolaşıp zamanlaması ile değerlendirilen gıda besin değerini optimize etmek için maya miktarı artmış içerir (112 arası - 120 saat 25 ° C'de yumurta toplandıktan sonra). sağlık ve deneysel larva gelişimi için bu tarifi doğru bulduk birlikte, herhangi bir gıda tarifi adım 3.10 listelenen örnekleri pozitif ve negatif kontroller, kabul edilebilir belirli bir kalibre edilmesidir.- 1.600 mL distile su ölçün.
- 134 g mısır unu, 10.6 gr Drosophila Agar tip II ve 1 L'lik bir beher içinde suyun bir kısmı (~ 500 mi) karıştırın. Motorlu bir el mikseri ile 2 dakika boyunca karıştırın.
- 70 g canlı aktif kuru maya, 18.4 g soya unu, 84.8 g malt özü, başka bir 1 L'lik bir kap içinde bir miktar su (~ 500 mi) karıştırın. Motorlu bir el mikseri ile 2 dakika boyunca karıştırın.
- her behere girdap ve 4 L'lik bir şişeye dökün. beher yıkayın ve balona eklemek için kalan su kullanın.
- döndürülerek karıştırılır, 140 ml hafif mısır şurubu ölçün ve balona ekleyin. </ Li>
- Sıvı ortamda 121 ºC (250 ºF) 50 dakika süreyle otoklav.
- Otoklavlamadan sonra, 4 L'lik bir beher içine gıda dökün ve soğumaya bırakın. motorlu el mikseri ile harmanlayarak soğutma sürecine yardımcı.
- Şişe dokunun kadar soğuduktan sonra, 8.8 ml propiyonik asit ve 16.8 ml Drosophila mantar önleyici madde / etanol çözeltisi ilave edilir. İyice karıştırın. (Çözelti 70 ° C'yi etmez emin, 380 g Drosophila mantar önleyici madde L 1-200 derece etanol eklenerek ve çözünene kadar sıcak bir plaka üzerinde karıştırıldı Drosophila mantar önleyici madde çözeltisi olun).
- Gıda, yaklaşık 1 inç derin kadar şişe içine yiyecek dökün ve 2 için oda sıcaklığında soğumaya bırakın - 3 saat. 25 ºC 'de bir kuluçka şişeleri ve mağaza takın. Bir hafta içinde kullanın.
- Bunu skor gıda flakon üst tabakası içine bir spatula birkaç kez dalma. Bu yuva ve beslemek için larva yardımcı olacaktır.
- 22-24 saat Yumurta toplama sahip sonrauçlu, aynı yaklaşık boyutu 50 birinci evre (L1) larvaları toplamak için küçük bir fırça kullanın. Deneysel Gıda larva yerleştirin. ve başka bir genotip devam etmeden önce fırça üzerinde kalan larvalar olmadığından emin mendil bir laboratuvar üzerinde fırça temizleyin.
- 25 ºC bir kuluçka larva flakon yerleştirin ve geliştirmeye olanak sağlar.
3. Larva Fat Düzeylerinin Belirlenmesi
- çözümler hazırlayın.
- 1 L 10x PBS stok hazırlayın.
- Bir karıştırma çubuğu ihtiva eden bir 2 L'lik bir kap içinde 800 ml suya 80 g NaCl, 2 g KCI, 14.4 g 2 Na HPO 4 ve 2,4 g KH 2 PO 4 ekleyin. Tüm tuzlar dahil kadar hiçbir ısı ile karıştırın. 7.4 pH değerini. su ile 1 L ses seviyesini artırmak.
- 2 L 1x PBS hazırlayın. 1800 ml su 200 ml 10 x PBS stok solüsyonu ekleyin.
- % 20 / h sakaroz w yapmak için 1x PBS bu stok kullanın.
- 1 L 10x PBS stok hazırlayın.
- gelen larvaların şişesini kaldır(Genellikle yumurta koleksiyonları beş gün sonra) flakonun tarafı yukarı dolaşıp 40 larva - inkübatör kez 20 vardır. Tarih ve saat tahlilinde hem de larvaları dolaşıp sayısını kaydeder.
- 50 ml konik bir tüp 11.5 ml PBS ve 9 ml% 20 sukroz eklenerek deney çözeltisi hazırlayın.
- Şişenin üst 1 inç - 0.5 olana kadar şişeye% 20 sukroz ekleyin.
- yavaşça hala gıda burrowing serbest larva gıda üst tabakası karıştırmaya bir spatula kullanın. Bütün larvalar sukroz çözeltisi yüzeyine yükselir.
- yavaşça adım 3,3 başlangıçtaki sakaroz konsantrasyonu larvaları aktarmak için forseps kullanabilir.
- nazikçe bu çözüm larvaları karıştırmak için bir spatula kullanın.
- konik tüp Cap ve iyice çözüm karıştırmak için birkaç kez upend.
- konik tüp kapağını açmak ve nazik bir vorteks oluşturmak için girdap.
- ya solüsyon veya si üstüne kayan, larva yerleşmek için izinalt yanaşma. Larvalar yerleşmek için 5 dakika - 2 bekleyin.
NOT: Her iki yüzen veya batan kesinlikle değil larva hala varsa, bir şamandıraya veya platin ya da larva etiketlemek için bir eşik noktası olarak kullanmak için bir hattı almak. tüm genotipleri, bu aynı kriter uygulayın. Biz 19 mutantları tahlilin kalibrasyonu için bir negatif kontrol olarak kullanılabilecek bir pozitif kontrol ve lsd2 olarak kullanılabilir eden sınır. ADP ya da SiR2 17 mutan larva olarak konik tüp altındaki açı kullanılır. - yüzen larva sayısı ve test spesifik konsantrasyon kaydedin.
- yoğunluğunu artırmak için deney solüsyonuna 1 mi,% 20 sükroz ekleyin.
- Tekrarlayın 3,10 3.7 adımları tekrarlayın. yüzen larva sayısı ve bu yeni konsantrasyon kaydedin.
- larvaların en az% 95 yüzen kadar adımları 3.12 ve 3.13 devam edin.
- PBS ile dolu bir diseksiyon çanak içine tüm larvaların toplamak için forseps kullanabilir.
- obsHerhangi bir küçük larva, pupa öncesi, pupa veya genotipler arasında başka bir fark olup olmadığını bir mikroskop ve not altında erve larvaları.
NOT: İdeal olarak, tüm larva homojen ve aynı gelişim aşamasında görünmelidir. Sadece bu koşullar altında uygun yağ ölçümleri gözlenmiştir. - larvaların toplam numarasını kaydedin.
- forseps kullanarak, kuru mendil, bir laboratuara 10 larva transferi. Bir ependorf tüp Etiket ve tüp içinde 10 larva yerleştirin.
- Sıvı nitrojen içinde larvaları dondurma. -20 ° C'de tüp saklayın.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Şekil 1 canlılık bazlı analiz genetik manipüle larva hem yüksek ve düşük yağ depolarını algılayabilir nasıl bir örnek temsil eder. Şekil 1A larva beyindeki nöronların belirli bir alt kümesi (E347) bu uyarma veya susturulması gösterir uyarır alt ve üst yağ sırasıyla saklar. Aynı genetik arka plan kontrolü her iki durumda da kullanılmıştır. 1B yoğunluk deneyi ile elde edilen bu fenotip GCMS ile nötral lipid çıkarma ve ölçümü pekiştirilmiştir nasıl bir örnek sağlar Şekil.
Larva Beyin Belirli Bölgelerde Şekil 1. nöronal Fonksiyonu Vücut Yağ Yönetmeliği için gerekli ve yeter. Belirtilen E347-GAL4 hattında nöronal aktivitenin Shi DN aşırı ifadesi ile susturulduPanel belirtilen ve vücut yağı üzerindeki etkileri değerlendirildi gibi veya NB aşırı ifadesi ile aktive. Farklı yoğunluk Çözeltilerin dengede larvaları kayan (A) yüzde. Elli larva biyolojik her tekrar incelenmiştir,, n = 7 - genotip başına 9 biyolojik çoğaltır GCMS 17,20 ile ölçülen (toplam nötr lipidler vücut ağırlığına bölünür triasilgliseridler ve fosfolipitler dahil olmak üzere), (B) yüzde vücut yağ (n = 8).. Mavi çizgiler veya çubuklar temsil GAL4 yalnızca (UAS) hayvanların genetik kökenli etkilerini kontrol etmek için 1118 w geçti. P değerleri iki kuyruklu t testleri sonuçlarını temsil etmektedir. **** P <0.0001, *** p = 0.001 0.0001 ** p = 0.001 0.01, * p = 0.05 0.01. Hata çubukları SEM'i göstermektedir. Bu rakam 16 modifiye edilmiştir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
10 - lipit düzeyleri 8 ölçmek için geliştirilmiş olan teknikler çok sayıda bulunmaktadır. Ancak, bu yöntemlerin her biri yukarıda özetlenen yüzdürme-bazlı deney ile ele bazı önemli dezavantajları ile birlikte geliyor. İlk olarak, bu deney, son derece hızlıdır. 60 dk - tam bir konsantrasyon gradyanı test fazla 30 sürer. Bu, şu anda kullanılmakta olan tekniklerin en çok büyük bir gelişmedir. bunları analiz etmek lipidler ve başka birkaç saat izole etmek için 9 saat - örneğin, MS ile lipit kantitatif 7 alır. Hayvanların çok sayıda bir ekran yaparken bu güçlü bir caydırıcı olduğunu. Hızlı bir yüzdürme fenotip ölçerek, bir hızla ilgi fenotip genotipleri odaklanabilirsiniz. İkinci olarak, yoğunluk deneyi gibi (PBS) tuzları ve sakroz gibi tek ortak reaktif gerektirir. Bu çok daha kolay ve daha ucuz larva çok sayıda taranması ya da hızlı ilginç bir genotip test etmek için yapar. Son olarak, bu Protokolnon-invaziv ve larva s sonunda hala hayatta. Bu ileri deneyler gibi belirli lipit kantitatif veya transkript ya da protein analizi gibi hayvanlar üzerinde yapılmasına olanak verir. Buna ek olarak, geri kazanılan larva yetişkinliğe büyümeye devam etmesine izin verebilir.
diğerlerine bu tekniğin bir diğer avantajı, bir popülasyonda yağ seviyelerinde küçük değişikliklere duyarlılık artar. 50 larva bir popülasyona bir bütün konsantrasyon gradyanı gerçekleştirerek nüfus yağ seviyelerinde hafif kaymalar konsantrasyonu en larva kayan başlar, ancak, ara konsantrasyonları bir değişimi ile tespit edilir ve tamamen kontrol grubuna göre farklı olamaz yüzdürülür . onlar analiz larvaların büyük bir grup gerektiren nüfusta Bu küçük kayma her zaman diğer yağ kantitatif yöntemlerle tespit edilemez. Öte yandan yoğunluk tahlil nüfus içindeki bireylerin sorguluyor ve dolayısıyla th belirleyebilirgenel nüfus dağılımında küçük değişiklikler veya vardiya ese.
Bu teknik, güvenilir sonuçlar elde etmek çözelti yoğunluğuna dayanır olarak, PBS ve sukroz solüsyonunun sürekli olarak yapılır son derece önemlidir. Farklı PBS tarifleri farklı sonuçlara yol açan, çözelti yoğunluğunda farklılıklara bulduk. Biz tutarlı sonuçlar için yukarıda özetlenen tarifi kullanabilirsiniz. Aynı plan çözümü yoğunluğu sonuçları Dahası, 1x PBS aynı partiden% 20 sakaroz yapma çok önemlidir. iki çözüm ayrı ayrı yapılmış olsaydı, PBS yoğunlukta küçük farklılıklar deneysel konik flakon sakaroz ilave dışında ek yoğunluk değişkeni getirebilir. zaman içinde çözeltiler su buharlaşması daha konsantre hale gelmesi nedeniyle, son olarak, buharlaşma, bir sorun olabilir. Sıkı şişe kapağı ve her hafta çözümü yeniden yapmak önemlidir deneysel böyleceçözümler tutarlı kalır.
Yukarıda özetlenen adımlar arasında, değişmiş ise, yüzerlik testi ile yanlış sonuçlara neden olabilir birkaç kritik adımlar vardır. İlk olarak, deney gıda şişeye aktarılır larva aynı yaşta olması önemlidir. boyutu değişir larvaları aktarma kaldırma deneyi gerçekleştirilir anda farklı gelişim aşamalarında larvaların neden olur. Bu protokol L3 larvaları dolaşıp yağ seviyelerindeki değişiklikleri belirlemek için geliştirilmiştir ve daha sonra erken L3 veya ön pupa veya için doğru çalışmaz. Erken üçüncü instar larvaları daha yüksek konsantrasyonlarda önceden pupa ve pupa lavabo kullanılan süre yağ düzeyleri, bağımsız bir yüzme eğilimine sahiptir. Bu nedenle, transfer L1 larvalarının yaşı kritiktir. Benzer şekilde, viyal kaldırma deneyi gerçekleştirmek için alındığı noktada önemlidir. Yukarıda belirtilen aynı gelişimsel zamanlama nedenlerden dolayı, şişeler sadece alınmalıdır zaman 20 -40 larva doğru yoğunluk ölçümleri sağlamak için dolaşıyoruz. Ayrıca, L1 sayısı da sonuçlarını etkileyebilir transfer. Bu protokolde kullanılan geniş şişeler 50 larva gelişimi sırasında rekabet olmadan yemek için izin verir. Bu daha transfer larvaların çok daha fazla sayıda gıda rekabet neden olur ve yağ miktarı genotipinden bağımsız depolanmış etkileyebilir.
larvaların çoğu veya tüm birinci konsantrasyonda yüzer gibi son derece yüksek yağ seviyelerine sahip genotip olabilir. Bu durumda, protokol nüfus yoğunluğu dağılımının bir yelpazede elde etmek için başlangıç çözeltisinin konsantrasyonu azaltarak değiştirilebilir. Diğer taraftan, özel bir genotip larvaya başlangıç sükroz yüzer şekilde yalın olabilir. Bu durumda, ilk adımlar çıkarılabilir ve daha yüksek bir başlangıç konsantrasyonu kullanılmıştır. Bu deney, çok esnek ve daha iyi yağ düzeyleri geniş uyacak şekilde değiştirilebilir.Biz (genetik arka plan için kontrollü) uygun vahşi tip hayvanlara, (örneğin ADP veya SIR2 17 olarak kurulan yağ mutantlar,) pozitif kontrol ve negatif kontrol (örneğin lsd2 19 olarak yayınlanmıştır yalın mutantlar) olarak kontrollerin kullanılmasını tavsiye ediyoruz. Bu protokolün uygun kullanımı koleksiyonları gelecek tarama metabolizması ve obezite yatkınlık yeni düzenleyicileri belirlemek için izin verecektir. Ayrıca, bu protokol ilgi genetik manipülasyon karmaşık protokoller veya pahalı ekipman için gerek kalmadan, yağ düzeylerinde bir değişikliğe neden olup olmadığını sınamak için herhangi bir alanda araştırmacılar için kolay bir yol sağlar. Bu protokol genetik ve obezite arasındaki karmaşık ilişkiyi açıklamak için yardımcı olacaktır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bacto Agar | VWR | 214030 | |
| Welch's Original 100% Grape Juice | |||
| Sucrose | Fisher | S512 | |
| Tegosept | Genesee Scientific | 20-259 | |
| Ethanol | 200 proof | ||
| Baker's yeast | Fleichmann's | ||
| Yellow Corn Meal | Quaker | Enriched degerminated | |
| Drosophila Agar Type II | Apex | 66-104 | |
| Soy Flour | ADM Specialty Ingredients | 062-100 | |
| Malt Extract | Breiss | 5748 | |
| Light Corn Syrup | Karo | ||
| Propionic Acid | VWR | U330-09 | |
| Sodium chloride | Fisher | 50147491 | |
| Potassium phosphate monobasic | Sigma | P5655-100G | |
| Sodium phosphate anhydrous | Fisher | S3933 | |
| Potassium chloride | Fisher | P330-500 | |
| 35 x 10 mm petri plate | Fisher | 08-757-100A | |
| 50 ml Conical | Fisher | 50-869-569 |
References
- Bier, E. Drosophila, the golden bug, emerges as a tool for human genetics. Nat Rev Genet. 6, 9-23 (2005).
- Liu, Z., Huang, X. Lipid metabolism in Drosophila development and disease Using Drosophila System to Study Lipid Metabolism Lipids Function in Drosophila Early Development. Acta Biochim Biophys Sin. 45 (1), 44-50 (2013).
- Ruden, D. M., Lu, X. Evolutionary conservation of metabolism explains howDrosophila nutrigenomics can help us understand human nutrigenomics. Genes Nutr. 1 (2), 75-84 (2006).
- Wolf, M. J., Rockman, H. A. Drosophila, genetic screens, and cardiac function. Circ. Res. 109, 794-806 (2011).
- Trinh, I., Boulianne, G. L. Modeling obesity and its associated disorders in Drosophila. Physiology (Bethesda). 28 (2), 117-124 (2013).
- Azeez, O. I., Meintjes, R., Chamunorwa, J. P. Fat body, fat pad and adipose tissues in invertebrates and vertebrates: the nexus. Lipids Health Dis. 13, 71 (2014).
- Dourlen, P., Sujkowski, A., Wessells, R., Mollereau, B. Fatty acid transport proteins in disease: New insights from invertebrate models. Prog. Lipid Res. 60, 30-40 (2015).
- Hildebrandt, A., Bickmeyer, I., Kühnlein, R. P. Reliable Drosophila body fat quantification by a coupled colorimetric assay. PLoS One. 6 (9), e23796 (2011).
- Tennessen, J. M., Barry, W. E., Cox, J., Thummel, C. S. Methods for studying metabolism in Drosophila. Methods. 68, 105-115 (2014).
- Al-Anzi, B., Zinn, K. Colorimetric measurement of triglycerides cannot provide an accurate measure of stored fat content in Drosophila. PLoS One. 5 (8), e12353 (2010).
- Thanh, N. T. K., Stevenson, G., Obatoml, D., Bach, P. Determination of Lipids in Animal Tissues by High-Performance Thin-Layer Chromatography with Densitometry. J. Planar Chromatogr. 13, 375-381 (2000).
- Borrull, A., Lopez-Martinez, G., Poblet, M., Cordero-Otero, R., Rozes, N. A simple method for the separation and quantification of neutral lipid species using GC-MS. Eur. J. Lipid Sci. Technol. 117, 274-280 (2015).
- Shui, G., et al. Toward one step analysis of cellular lipidomes using liquid chromatography coupled with mass spectrometry: application to Saccharomyces cerevisiae and Schizosaccharomyces pombe lipidomics. Mol. Biosyst. 6, 1008-1017 (2010).
- Farvid, M. S., Ng, T. W. K., Chan, D. C., Barrett, P. H. R., Watts, G. F. Association of adiponectin and resistin with adipose tissue compartments, insulin resistance and dyslipidaemia. Diabetes. Obes. Metab. 7 (4), 406-413 (2005).
- Urbanchek, M. G., Picken, E. B., Kalliainen, L. K., Kuzon, W. M. Specific force deficit in skeletal muscles of old rats is partially explained by the existence of denervated muscle fibers. J. Gerontol. A. Biol. Sci. Med. Sci. 56A (5), B191-B197 (2001).
- Mosher, J., et al. Coordination between Drosophila Arc1 and a specific population of brain neurons regulates organismal fat. Dev. Biol. 405 (2), 280-290 (2015).
- Reis, T., van Gilst, M. R., Hariharan, I. K. A buoyancy-based screen of drosophila larvae for fat- storage mutants reveals a role for Sir2 in coupling fat Storage to Nutrient Availability. PLoS Genet. 6 (11), e1001206 (2010).
- Current Bloomington Recipe for Drosophila Medium. , Bloomington Drosophila Stock Center at Indiana University. Available from: http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/bloomfood.htm (2014).
- Teixeira, L., Rabouille, C., Rørth, P., Ephrussi, A., Vanzo, N. F. Drosophila Perilipin/ADRP homologue Lsd2 regulates lipid metabolism. Mech. Dev. 120 (9), 1071-1081 (2003).
- Perez, C. L., Van Gilst, M. R. A 13C Isotope Labeling Strategy Reveals the Influence of Insulin Signaling on Lipogenesis in C. elegans. Cell Metab. 8, 266-274 (2008).
