Summary
Att förstå de cellulära och molekylära mekanismer för återendotelisation efter arteriell denudation skadan är av största vikt för att förhindra trombos och restenos av artärer. Här beskriver vi ett protokoll för reproducerbar arteriell denudation skada den infrarenala bukaortan. Förfarandet har utvecklats för att undersöka de bakomliggande mekanismer som reglerar endothelial regeneration med hjälp av musmodeller.
Abstract
Perkutan kärl insatser jämnt resultera i arteriella denudation skador som senare leder till trombos och restenos. Dessa komplikationer kan tillskrivas försämringar i återendotelisation inom sårkanterna. Men de cellulära och molekylära mekanismer för återendotelisation återstår att fastställa. Medan flera djurmodeller för att studera återendotelisation efter artär denudation är tillgängliga, är få utförs i mus på grund av kirurgiska begränsningar. Detta undergräver möjligheten att utnyttja transgena muslinjer och undersöka bidraget från specifika gener till processen för re-endotelialisering. Här presenterar vi en steg-för-steg-protokoll för att skapa en mycket reproducerbar musmodell av arteriell denudation skada i infrarenala bukaortan med hjälp av extern kärlkläm. Immunocytokemisk färgning av skadade artärer för fibrinogen och β-catenin visar exponeringen av en pro-trombotisk yta end gränsen till intakt endotel, respektive. Den metod som presenteras här har fördelen av hastighet, utmärkt totala överlevnaden, och relativt teknisk enkelhet, vilket skapar en unik praktiskt verktyg för att införa arteriell denudation skada i transgena musmodeller. Med användning av denna metod, kan utredarna klarlägga mekanismerna för återendotelisation under normala eller patologiska tillstånd.
Introduction
Trombos och restenos allvarliga tidiga och sena komplikationer hos patienter som genomgår perkutan kärl ingripanden, såsom endovaskulär ballongvidgning och stent 1,2. Flera strategier har använts för att ta itu med dessa komplikationer, särskilt dubbel trombocythämmande behandling och läkemedelsavgivande stentar. Emellertid har lite fokus lagts på den bakomliggande orsaken till trombos och restenos, nämligen förlusten av endotelceller täckning (blottläggning). Denudation skada är en oundviklig konsekvens av interventionella procedurer på grund av mekaniskt trauma till blodkärlsväggen. Denna mekaniska trauma kan leda till skador och avlägsnande av skydds endotelskiktet och exponering av basalmembranet och glatt muskulatur till cirkulerande blod tre. Förlusten av endotel-celler i dessa områden skapar en pro-trombotisk och proinflammatorisk miljö som inte bara befrämjar vidhäftning av trombocyter och efterföljande trombos, men enLSO stimulerar migration och proliferation av vaskulära glatta muskelceller resulterar i neointimal förtjockning och restenos 4. Dessa komplikationer, och tillhörande behandlingar leda till betydande morbiditet, framför allt återkommande ischemisk sjukdom och blödningar som påverkar människors hälsa.
Återendotelisation av blottlagda skada från sårkanterna är av avgörande betydelse för att förhindra trombos och restenos 5. Obduktion resultat och djurmodeller har i praktiken visat reducerade skattesatser av trombos med täckning av stent struts 6,7. Läkemedelsavgivande stentar, utformats för att minska andelen restenos genom att hämma glatt muskulatur proliferation och neointimal hyperplasi, leda till betydande försämringar i arteriell återendotelisation och ökande andelen sena trombos 3. Tyvärr förstå mekanismerna för återendotelisation har varit en långsam process, till stor del begränsas av bristen på apenliga djurmodeller 8.
Flera djurmodeller för att förstå rollerna av endotelceller och vaskulära glatta muskelceller efter arteriell skada har skapats 7,9,10. Råttan halspulsådern ballongskada modell är bäst karaktäriseras och har använts för att studera effekterna av blottläggning skada på brutto, cell- och molekylär nivå 11. Ändå är en mycket reproducerbar musmodell av arteriell denudation skada med utmärkta överlevnad saknas och mycket som behövs för att dra fördel av flera transgena linjer som finns för att bättre belysa vaskulär förnyelse i flera inställningar.
Detta manuskript presenterar en musmodell av arteriell denudation skada som är reproducerbar och enkel att utföra. Tillvägagångssättet har visat minimal morbiditet och mortalitet i flera transgena linjerna. På grund av den breda antal genetiskt modifierade muslinjer, kan denna modell användas för attklarlägga de molekylära mekanismerna bakom återendotelisation efter blottläggning skada.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
OBS: Detta protokoll har godkänts av kommittén Animal Research vid University of California i Los Angeles.
1. preoperativ förberedelse och anestesi
- Var noga med att följa steril teknik under hela förfarandet.
- Sterilisera alla kirurgiska leveranser med hjälp av en ångautoklav.
- Slå på uppvärmd gnagare kirurgisk plattform innan anestetika så att det kan värmas upp till lämplig temperatur (37 ° C) och placera under stereomikroskop för visualisering under kirurgiska ingrepp.
- Placera musen i anestesi induktion kammare och inducera med 4% isofluran med en flödeshastighet av 1 l / min.
- Noggrant övervaka andningsfrekvens och trampdynan hudfärg mus under induktion.
- Efter att sakta av andningsfrekvens, ta bort musen från induktionskammare och placera på värmas pad för kirurgisk beredning med ansiktet i separat noskonen och underhåll isofluran koncentration av 2,5%.
- Utför tå nypa för att bedöma lämpligheten av narkosmedel.
- Applicera oftalmisk salva för att hornhinnorna och administrera preoperativ karprofen (5 mg / kg) subkutant.
- Placera mus liggande och använda Clippers att ta bort hår från buken.
- Förbered operationsområdet med tre alternerande skurar av povidon jod och 70% isopropylalkohol tillämpas med steril gasbinda kuddar.
- Placera musen på rygg på uppvärmd gnagare kirurgisk plattform med ansiktet i noskonen och säkra alla extremiteter och noggrant läge mus så att buken är synlig med stereomikroskop.
- Placera sterila, häftplåster längs varje kant av det beredda kirurgiska området.
- Titrera Isoflurankoncentration att upprätthålla tillräcklig anestesi under operation med bibehållen spontana andetag.
2. infrarenala aortaKläm
- Gör en 3 cm incision ner mittlinjen av buken med hjälp av en skalpell, med start approximately 0,5 cm sämre till xiphoid processen.
- Försiktigt dra huden med pincett och dissekera huden från bukväggen med fina sax för att klippa den fina bindväv.
- Applicera 0,05-0,1 ml 0,5% bupivakain till muskeln väggen och göra en 2 cm snitt i bukväggen för att exponera bukorganen.
- Om blödning uppstår längs bukväggen, tryck lätt med en bomullspinne.
- Lyft försiktigt tarmarna med hjälp av saltdränkta bomullspinne applikatorer.
OBS: Var noga med att undvika trubbigt trauma till jejunala och ileum artärer och plats på en varm, steril saltlösning indränkt gasbinda svamp utanför bukhålan.- Täck tarmarna med en annan varm, steril saltlösning indränkt gasbinda svamp för att undvika fuktförlust.
- Placera en upprullningsdonet lateralize rektum och exponera retroperitoneum.
- Placera små gasbinda kuddar som behövs för visualisering av retroperitoneum hålla reda på det nummer som används.
- På nivån av den undre polen av den högra njuren, vassa dissekera pincett för att göra en retroperitonotomy lateralt till aorta.
OBS: Var noga med att inte skada den nedre hålvenen eller omgivande fartyg.- Rakt på sak dissekera retroperitoneal vävnad utanför aortan vara noga med att inte perforera nedre hålvenen eller omgivande kärl.
- Placera den vaskulära klämman över aorta under minst 1 min, eller annan angiven tid, och verifiera ocklusion genom att visuellt observera avsaknaden av pulsatilitet i distala aorta.
- Ta bort den vaskulära klämman och kontrollera hemostas. Hemostas uppnås och garanteras när ingen aktiv extravasering av blod ses.
- Bekräfta extravasering genom att tillsätta 0,5 ml koksaltlösning i bukhålan och bedöma om saltlösning blir allt blod färgade. Om detta är fallet, tryck lätt med användning av saltlösning-indränkt applikator under 1 min för att säkerställahemostas.
- Ta bort eventuella gasbinda kuddar placerade för att underlätta visualisering av retroperitoneum och ersätta tarmar in situ i buken.
- Skölj bukhålan med hjälp av förvärmd steril saltlösning.
3. Avslutande av Laparotomi och hud
- Stäng bukväggen muskellagret med hjälp av en 5-0 flätad, absorber enda kör sutur.
- Nära huden med 1-3 droppar polymer lim och därefter med sår klipp när limmet är inställd.
4. Återvinning och bedömning Postoperativ
- Överför musen till en återhämtning bur på en värmedyna med mat och vatten på golvet i buren.
- Noga övervaka musen för tecken på andnöd. Administrera karprofen (5 mg / kg) dagligen under 48 h postoperativt per institutionens riktlinjer.
- Lämna inte ett djur utan tillsyn tills den har återfått tillräcklig medvetenhet för att upprätthålla sternala recumBency.
- Återgå musen till en normal bur med mat och vatten.
- Skicka inte tillbaka ett djur som har opererats för sällskap med andra djur tills återhämtat sig helt.
- Bedöm sår på en daglig basis för sårruptur och ta bort klippen på postoperativ dag 14.
5. Aorta Dissektion och färgning
- Välj möss för offer baserat på den specifika tidpunkten av intresse efter blottläggning skada.
- Offra möss via isofluran inandning och omedelbart injicera 5 mg metakolin klorid för att orsaka vaskulär glatt muskulatur.
- Vid bekräftelse av död genom andnings upphörande, brist på hornhinnereflex och brist på rörelse, BEGJUTA med 4% paraformaldehyd i fosfatbuffrad saltlösning vid ett perfusionstryck av 100 mm Hg via den vänstra hjärtkammare under 10 min.
- Använd en dissekera stereomikroskop att noggrant separera intakta bukaorta frånde omgivande vävnaderna.
- Transekt aortan rostralt till njurartärerna och kaudalt höftbifurkationen och öppnas via en längsgående snitt längs den dorsala ytan.
- Stift aortan platt på en 35 mm silikonbelagda skålen med den luminala sidan upp för fixering för inte mindre än 2 h men inte mer än 12 h. Därefter kan vävnaden antingen inbäddad för sektionering eller användas i en face hel-mount immuncytokemi.
- Mount färgade artärer med luminala sidan mot täck på objektglas för konfokalmikroskopi.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Åttiofem möss har genomgått överlevnad kirurgisk teknik som beskrivs i denna rapport för infrarenala abdominal aortic kläm. Den totala överlevnaden var 85,9%. Operativa komplikationer inkluderade intestinal blödning och stora kärl perforering, vilket resulterade i 5,9% respektive 3,5% dödlighet (tabell 1). Efter återhämtning från anestesi, möss gå normalt och visar inga tecken på ischemisk skada till de underlägsna lemmar. Ingen viktförlust eller brist på aptit noterades.
Figurerna 1A och 1B visar bilder av den infrarenala bukaortan följande laparotomi och retroperitoneal dissektion i stereomikroskop utan (A) och med (B) aortakläm. Såsom visas är det viktigt att klämma aorta bredd i sin helhet för att säkerställa blottläggning längs bredden av aorta. Vår protokoll funnit att använda skarp kurva Schwartz Micro Serreböter med käftbredd på 1,75 mm och "stark" klämma tryck producerat den största sammanhängande sår över hela bredden av aorta med minimal kläm tid. Emellertid har andra klämmor testas på flera ocklusion tidsintervall med varierande storlekar skada (Figur 1C). Återstoden av de framlagda resultaten producerades med användning av ovan nämnda klämman.
Histologisk utvärdering av aorta visar fullständig denudation av endotelbeklädnaden med måttlig skada på underliggande glatta muskelceller skikt såsom visas av H & E-färgning. Denudation av endotelet inträffar vid både 10 sek och 10 min, om än i olika grad (Figur 2). Att bestämma den optimala aortakläm tidsintervall som krävs för fullständig arteriell denudation, möss genomgick fastspänning för 10 sek, 1 min och 10 min och var omedelbart offrades för analys såsom beskrivits i ovanstående protokoll. Det ären av denudation ökade med ökande kläm timings (Figur 3). Vid 10 sek, en ofullständig och ojämn denudation skada på ungefär 0,75 mm 2 identifierades genom fläckvis fibrinogen färgning, där fibrinogen fungerar som en markör för blottläggning skada. Tio minuter från aortakläm producerade en helt blottad endotel yta på cirka 1,2 mm 2, men denna tid av kläm ansågs hög risk för ischemi och reperfusionsskada. Som sådan, vi anses en min av aortakläm tillräcklig, vilket gav en 0,88 mm 2-område av denudation i genomsnitt att resultera i nästan fullständig arteriell denudation skada utan tecken på ischemisk skada.
Omfattningen av denudation skada med 1 min av aortakläm är extremt reproducerbar, vilket ger en 600 | j, m diameter och 0,88 mm 2 yta på denudation (figur 3 och 4). Deintensitet fibrinogen färgningen är tillräcklig för att identifiera den ursprungliga skadan vid senare tidpunkter. Figur 4 visar fibrinogen färgning av tre möss som genomgick en min av aortakläm 24 timmar före avlivning, vilket skapar en mycket reproducerbar skada. Mätning av fibrinogen färgning 24 h efter skada av sex artärer är ungefär 0,81 mm 2 (figur 5A), statistiskt liknande den 0,88 mm 2 skada noteras omedelbart efter skada (p = 0,14). Jämfört med oskadade endoteliet, såret marginalen 24 h efter skada shower som migrerar endotelceller med överliggande fibrinogen färgning, märkning återendotelisation i denudation skada (figur 5B). I genomsnitt, komplett återendotelisation av 0,88 mm 2 denudation skada tog ungefär 3 dagar. Men denna metod kan anpassas ytterligare för att producera ännu större denudation skador. Kläm flera gånger, varderaunder 1 minut, från rostralt till kaudalt längs den infrarenala aortan producerade en 3,7 mm 2 denudation skada. Även om detta tillvägagångssätt också skadestånd tunica media, har vi aldrig observerat dissektion av bukaorta som ett resultat av klämskada.
Detta protokoll visar att infrarenala abdominal aortakläm kan säkert genomföras i en musmodell i syfte att skapa en arteriell denudation skada och mäta endotel förnyelse.
Figur 1:. Isolerad infrarenala bukaortan Isolerad infrarenala bukaortan visas utan (A) och med (B) en vaskulär klämma. Flera klämmor av olika längd och klämma press styrka användes för att välja en som erbjuder konsekvent skada (C). Schwartz Micro Serrefine (pil) producerade den största sammanhängande sår. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 2: Effektivitet av avlägsnande av endotelet H & E-färgning av en infrarenal abdominal aorta avsnitt i en icke-skadad mus (A) och efter 10 sek (B) och 10 min av aortakläm (C).. Vaskulär kläm helt denudes endotelskiktet, såsom kan verifieras genom frånvaro av kärnor färgning. Också förlust av glatta muskelceller kärnor visar skador på tunica media. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3:. Förhållandet mellan Clamp Time to Wound Längd infrarenala abdominal aortakläm utfördes under 10 sek, 1 min och 10 min. Omedelbart efter skada, var immunocytokemi utfördes en face för en skenoperation och dessa tidpunkter som visas (A) och vid högre upplösning (B). Fibrinogen (i lila) identifierar området av skada. β-catenin (i rött) identifierar endothelial gränser. Asterisken (*) markerar den klämapplikationsområdet. Frånvaro av β-catenin betecknar brist på endotelceller i området för skada. (C) använder fibrinogen färgning som en markör för denudation skada område för att visa att öka klämtiden ökar denudation område (n = 2 för varje tidpunkt). Felstaplar representerar standardavvikelse. Klicka here för att se en större version av denna siffra.
Figur 4:. Identifiering av skada området Tjugofyra timmar efter aortakläm för en minut, aorta dissekerades och skär för att exponera tunica intima. Efter fixering i 4% paraformaldehyd var immunocytokemi utfördes en face. Fibrinogen (i lila) identifierar området av skada (A). Högre förstoring av sårkanten (B) och inom såret (C) visas. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 5: Reproducerbarhet av blottläggningSkada och identifiering av Re-endotelialisering. Tjugofyra timmar efter skada, var aorta dissekerades som anges och genomgick immuncytokemi en face. Med hjälp av fibrinogen som en markör för denudation skada, är en mycket reproducerbar skada observerades i (A) med en genomsnittlig denudation område av 0,81 mm 2 (n = 6). Bilder med högre upplösning visar att sårkanten uppvisar fibrinogen-färgning och migrerar endotelceller (pilar, lila missfärgning) (B) jämfört med oskadade endoteliet (C). Felstaplar representerar standardavvikelse. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Tabell 1:. Operativ och postoperativ Dödlighet Totalt 85 möss underwent överlevnad infrafrenal abdominal aortakläm med en överlevnadsgrad på 85,9%. Åtta möss (9,4%) inte överleva operationen på grund av intestinal blödning eller stora kärl perforering. Fyra möss dog postoperativt.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Arteriell denudation skada på grund av perkutan ingripanden, såsom ballongvidgning och stentning vaskulär resulterar i början och slutet av vaskulär trombos och restenos och bidrar till återkommande ischemiska händelser 3,12. Intressant nog har kirurgisk vaskulär kläm också varit inblandad som en orsak till arteriell denudation, att utvidga omfattningen av problemet till patienter som genomgår någon vaskulär procedur, om perkutan eller öppen 13. Även nedsatt återendotelisation är en ganska erkänd orsak till trombos och restenos, har de molekylära mekanismerna kring återendotelisation varit svårt att klarlägga. Djurmodeller har blivit en nödvändighet för att få ytterligare förståelse av återendotelisation efter arteriell denudation skada.
Befintliga djurmodeller för att studera de cellulära och molekylära effekterna av arteriell blottläggning skada inkluderar de hos svin, kanin och gnagare 7,9-11. gnagare models används ofta innefattar råtta halspulsådern ballongskada modell, datormöss med kabel skademodell, och råtta och mus ligering modeller 14,15. Medan råttan halspulsådern ballongskada modell är bäst karaktäriseras och mest använda, har halsskada förfaranden som beskrivits av Lindner i möss breddat möjligheterna att använda transgena stammar 16,17. Genetiskt modifierade musmodeller minskade förekomsten av potentiella off-mål effekter och specificitet frågor i samband med farmakologiska hämmare, och kan tillåta vävnadsspecifika och villkorlig ablation av specifika delar av intresse. Ändå är halsskador hos mus extremt utmanande och svår att utföra.
Den murina arteriell denudation modell av den infrarenala bukaortan beskrivs här är relativt lätt att applicera och möjliggör studier av återendotelisation av en stor kaliber artär in vivo. Operationer uppvisade en godtagbar surlevnad hastighet av 85,9%. Lindad längd är beroende av klämkäftdimension, styrka av klämpressen, och längden på tid den vaskulära klämman ockludera kärlet. Denna modell använder en 10 x 1,75 mm käken dimension och "stark" klämma tryck under 1 minut för att framställa en 0,88 mm 2 denudation skada som är mycket reproducerbar. Variationen i sår längd observerades med olika käft dimensioner och längd kärlocklusion. Dessutom kan området för denudation expanderas genom att i serie kläm den infrarenala bukaortan från rostralt till kaudalt. Som sådan har den här modellen mångsidighet i denudation skada storlek som kan manipuleras för att passa en studie syftar.
För att bedöma omfattningen av skadan och endotelceller stängning priser efter skada, var immunocytokemi utförs vid olika tidpunkter med antikroppar mot β-catenin att identifiera endotelceller cellkontakter eller ERG att identifiera endotelceller cellkärnor och fibrinogen att identifiera tHan skadade området. Som återendotelisation inträffade, var fibrinogen-färgning används för att identifiera den ursprungliga skadan i jämförelse med omfattningen av återendotelisation. Medan stark färgning av fibrinogen signifikant försvagad efter återväxt av endotelet, kvarstår tillräcklig intensitet för att identifiera den ursprungliga skadan även efter åtminstone 4 dagar efter operationen.
Denna modell är inte utan begränsningar. Som med alla djurmodell kräver mus kirurgi god kirurgisk teknik och innebär en inlärningskurva. Möss kan snabbt ge vika för fartyg perforering om dissektion inte utförs med omsorg, som ibland är omöjligt att kontrollera. De vanligaste orsakerna till operativa döds ingår tarm blödning och stora kärl perforering, på 5,9% och 3,5%, respektive. Men med noggrann dissektion, är blödningar sällsynt och blodförlust kan oftast hållas till under 0,1 ml i vår erfarenhet. Dessutom tillräcklig dissektion av aorta och korrekt klämmaplacering är en integrerad del av en reproducerbar skada. När man läser distal aorta pulsatilitet kan användas för att bekräfta fullständig aorta ocklusion, ta bort alla retroperitoneal vävnad vidhäftande till aorta är avgörande för att få en ren, oavbruten sår. Som tidigare nämnts, är skador på tunica media noterade med detta förfarande av aortakläm. Emellertid är mediala glattmuskel död en välkänd följd av långvarig eller kronisk vaskulär expansion på grund av stentimplantation, och resulterar i efterföljande neointimal hyperplasi 18. Medial skador i vår modell inte verkar ha patologiska följdsjukdomar, som vi har ingen postoperativ död och dessa möss har överlevt upp till 2 månader efter operationen.
Vi presenterar en mångsidig musmodell av arteriell denudation skada den infrarenala bukaortan som är reproducerbar med god överlevnad. Denna modell fyller ett behov för att studera arteriell skada med en mångfald av transgena musmodeller. adoption of denna murinmodell kan användas för att belysa de molekylära mekanismerna för återendotelisation vid normala och patologiska tillstånd.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har ingenting att lämna ut.
Acknowledgments
Detta arbete har finansierats med bidrag från Eli och Edythe Broad Center of regenerativ medicin och stamcellsforskning vid UCLA träningsprogram till ASS och AIM, Philip J. Whitcome gemenskap till AIM, och National Institutes of Health (HL130290) till MLIA.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Zeiss Discovery.V12 Stereomicroscope | Zeiss | 495037-9904-000 | |
| Rodent Heated Surgical Platform | Protech International | RES4000 | Heated platform for body temperature maintenance with nosecone for anesthestic maintenance and on which surgical procedure is performed |
| Isoflurane | Henry Schein | 50033 | 4% Induction; 2.5% Maintenance |
| Isoflurane Vaporizer | Summit Medical Equipment | 470062 | |
| Stryker T/Pump Warm Water Recirculator | Kent Scientific | TP-700 | |
| Artifical Tears Lubricant Opthalmic Ointment | Akorn Animal Health | 17478-162-35 | |
| Carprieve (Carprofen) | Norbrook Laboratories | NDC 55529-131-01 | |
| Oster™ A5 Professional Animal Clipper | M.Schneider & Sons Inc. | 78005010 | Use with animal clipper size 40 |
| Adjustable Wire Retractor | Fine Science Tools | 17004-05 | |
| Schwartz Micro Serrefines - Sharp Bend | Fine Science Tools | 18052-03 | |
| Surgical Instruments | Fine Science Tools | sharp dissecting forceps, blunt forceps, fine scissors, spring scissors, hemostat | |
| 0.5% Marcaine | Hospira | 0409-1610-50 | |
| 5-0 Suture, Vicryl | Fisher Scientific | NC0189890 | tapered needle |
| Vetbond | Fisher Scientific | NC0304169 | |
| Falcon® 35 mm Not TC-Treated Easy-Grip Style Bacteriological Petri Dish | Corning | 351008 | |
| Sylgard 184 Silicone Elastomer Kit | Dow Corning | 3097358-1004 | |
| Dissecting pins | Fisher Scientific | NC9681411 |
References
- Farooq, V., Gogas, B. D., Serruys, P. W. Restenosis: delineating the numerous causes of drug-eluting stent restenosis. Circ Cardiovasc Interv. 4, 195-205 (2011).
- Tada, T., et al. Risk of stent thrombosis among bare-metal stents, first-generation drug-eluting stents, and second-generation drug-eluting stents: results from a registry of 18,334 patients. JACC Cardiovasc Interv. 6, 1267-1274 (2013).
- Otsuka, F., et al. The importance of the endothelium in atherothrombosis and coronary stenting. Nat Rev Cardiol. 9, 439-453 (2012).
- Kipshidze, N., et al. Role of the endothelium in modulating neointimal formation: vasculoprotective approaches to attenuate restenosis after percutaneous coronary interventions. J Am Coll Cardiol. 44, 733-739 (2004).
- Finn, A. V., et al. Pathological correlates of late drug-eluting stent thrombosis: strut coverage as a marker of endothelialization. Circulation. 115, 2435-2441 (2007).
- Joner, M., et al. Pathology of drug-eluting stents in humans: delayed healing and late thrombotic risk. J Am Coll Cardiol. 48, 193-202 (2006).
- Joner, M., et al. Endothelial cell recovery between comparator polymer-based drug-eluting stents. J Am Coll Cardiol. 52, 333-342 (2008).
- McDonald, A. I., Iruela-Arispe, M. L. Healing arterial ulcers: Endothelial lining regeneration upon vascular denudation injury. Vascul Pharmacol. 72, 9-15 (2015).
- Fingerle, J., Tina Au, Y. P., Clowes, A. W., Reidy, M. A. Intimal Lesion Formation in Rat Carotid Arteries after Endothelial Denudation in Absence of Medial Injury. Arteriosclerosis. 10, 1082-1087 (1990).
- Granada, J. F., et al. Vascular response to zotarolimus-coated balloons in injured superficial femoral arteries of the familial hypercholesterolemic Swine. Circ Cardiovasc Interv. 4, 447-455 (2011).
- Tulis, D. A. Rat carotid artery balloon injury model. Methods Mol Med. 139, 1-30 (2007).
- Bavry, A. A., Bhatt, D. L. Appropriate use of drug-eluting stents: balancing the reduction in restenosis with the concern of late thrombosis. Lancet (London, England). 371, 2134-2143 (2008).
- Gucu, A., et al. Effects of temporary vascular occluder poloxamer 407 Gel on the endothelium. J Cardiothorac Surg. 8, (2013).
- Holt, A. W., Tulis, D. A. Experimental Rat and Mouse Carotid Artery Surgery: Injury & Remodeling Studies. ISRN Minim Invasive Surg. 2013, (2013).
- Nam, D., et al. Partial carotid ligation is a model of acutely induced disturbed flow, leading to rapid endothelial dysfunction and atherosclerosis. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 297, 1535-1543 (2009).
- Lindner, V., Fingler, J., Reidy, M. A. Mouse Model of Arterial Injury. Circ Res. 73, 792-796 (1993).
- Kumar, A., Lindner, V. Remodeling with neointima formation in the mouse carotid artery after cessation of blood flow. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 17, 2238-2244 (1997).
- Hehrlein, C., Weinschenk, I., Metz, J. Long period of balloon inflation and the implantation of stents potentiate smooth muscle cell death. Possible role of chronic vascular injury in restenosis. Int J Cardiovasc Intervent. 2, 21-26 (1999).
