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JoVE Journal Developmental Biology
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Developmental Biology

Construindo Modelos de Elementos Finitos para investigar Zebrafish Jaw Biomecânica

Published: December 3, 2016 doi: 10.3791/54811
Automatic Translation
1, 1, 2, 1
1Physiology, Pharmacology and Neuroscience, University of Bristol, 2Earth Sciences, University of Bristol

Introduction

Modelagem de elemento finito (FE) é uma técnica de engenharia que podem computacionalmente calcular e mapear a magnitude ea localização das cepas que actuam sobre uma estrutura 1. O modelo consiste na estrutura 3D, representado por uma malha de "elementos finitos", e o resultado final da análise é governada por uma série de factores, incluindo a estrutura e o número de elementos na malha, a magnitude e a localização da mecânica cargas e as propriedades do material. As propriedades dos materiais descrevem certos aspectos do comportamento de um material em um determinado tipo de carga; O módulo de Young (E) descreve a elasticidade do material, enquanto que o coeficiente de Poisson descreve o decréscimo proporcional na largura de um material para o seu comprimento, quando uma amostra é alongada. modelagem FE pode ser utilizado para calcular uma variedade de variáveis, incluindo o deslocamento, tensão, pressão e agir pressão sobre o modelo, tendo em conta os dados de entrada originais sobre a estrutura '; S forma, localização e magnitude das cargas e as propriedades dos materiais específicos.

Modelagem FE é amplamente utilizado em engenharia 2 e cada vez mais para ortopédicos 3 e paleontológicos aplicações 4. No desenvolvimento de forças biomecânicas são conhecidos por actuarem como um estímulo em muitas células para activar respostas celulares 5-8 e é útil para prever a ambas as posições relativas e as magnitudes de estímulos mecânicos no desenvolvimento de sistemas de órgãos, no entanto, actualmente modelagem Fe tem sido pouco usado para o desenvolvimento do peixe-zebra.

Tanto a cartilagem e osso foram mostrados para ser materiais mechanosensitive. Por exemplo, a compressão in vitro tem sido encontrado para activar vias condrogénicas, enquanto que a tensão foi demonstrado ser necessário para a formação óssea 9. FE análise (FEA) tem sido explorada para modelar estirpes agindo em amostras biológicas, incluindo aqueles que agem em elementos esqueléticos durante óssea formação 10. Outras aplicações incluem a sua utilização de desenvolvimento para prever a forma de uma junta depois de ter sido exposto a forças biomecânicas teóricos 11,12 e para mostrar o padrão de estirpes presentes durante a morfogénese do joelho pintainho articulação 8.

Este protocolo destina-se a compartilhar a experiência de geração de superfícies em 3 dimensões, malhas e modelos de elementos finitos a partir de imagens confocal, com vista a compreender a mecânica de tecidos em desenvolvimento. Nós também mostram formas de validar os modelos FE embora a captura de informações deslocamento da articulação reais in vivo. Enquanto que utilizar a mandíbula peixe-zebra como um exemplar as mesmas técnicas podem ser utilizadas em qualquer pequeno sistema biológico para o qual a informação sobre a estrutura 3D do sistema músculo-esquelético pode ser obtido por imagem confocal ou multifotônica.

Protocol

Todos os passos dentro do protocolo de seguir a Universidade de cuidados com os animais de Bristol e diretrizes de bem-estar e os do UK Home Office.

1. Visualização de Musculoskeletal anatomia

NOTA: Para visualizar a forma dos elementos esqueléticos, para quantificar muscular e para identificar o posicionamento exato dos anexos musculares, imunocoloração (seção 1.1) peixes na idade apropriada para a miosina esquelético (que revela muscular) e colágeno tipo II (para visualizar cartilagem). Alternativamente, visualizar a anatomia do músculo-esquelético usando linhas repórter fluorescentes transgênicos, como o colágeno repórter a1 COL2A1: mCherry 13,14 para visualizar a cartilagem eo lento miosina de cadeia pesada smyhc repórter: GFP 15 para visualizar a posição de anexos musculares (ponto 1.2).

linhas alternativas que marcam cartilagem e músculo poderia funcionar igualmente bem.

  1. fluorescente Immunostaining
    1. Fix larva em excesso de paraformaldeído a 4% (PFA) em solução salina tamponada com fosfato (PBS) durante 1 h. Lavar em PBS com 0,1% de Tween 20 (PBT) e desidratar em 50% de metanol (MeOH) em PBT e MeOH a 100% durante 5 min, respectivamente.
      Cuidado: PFA é tóxico e deve ser tratado de acordo com a folha de segurança material.
      NOTA: Larva podem ser armazenados em 100% de MeOH até ser necessário.
    2. Reidratar larva em 50% de MeOH em PBT durante 5 min. Lavar em PBT durante 5 min.
    3. Permeabilizar larva em 0,25% de tripsina em PBT em gelo durante 5-6 minutos. Lavar em 4x PBT durante 5 minutos cada.
    4. Bloquear para 2-3 horas em soro 5% em PBT.
    5. Incubar larva na diluição recomendada de coelho anti-colagénio do tipo 2 e de ratinho anti-miosina anticorpos no soro a 5% em PBT durante 1 h à temperatura ambiente ou durante a noite a 4 ° C.
      NOTA: O intervalo de diluição recomendada é normalmente na folha de dados de anticorpos. Escolha anticorpos que são dirigidos contra espécies diferentes entre si e que também são difealugar ao tecido.
    6. Lave 6x larva por 15 minutos em PBT.
    7. Bloquear durante 1-2 horas em soro 5% em PBT.
    8. Incubar em anticorpos secundários no escuro. Use marcado por fluorescência anti-rato (550) e anti-coelho (488) anticorpos secundários para uma diluição adequada em 5% de soro e PBT para o anticorpo específico.
    9. Lavar 6X por 10 minutos cada em PBT e imagem em um microscópio confocal 10X mais rapidamente possível.
  2. Imagiologia Musculoskeletal Geometry
    1. Montar as larvas ventrally em uma lamela em agarose morna 0,3-0,5% de baixo ponto de fusão (LMP) em solução de Danieau 16.
      NOTA: peixes transgénicos terá de ser sedado em 0,02% MS222 (tricaina metanossulfonato, pH 7) antes da montagem e durante o exame.
    2. Dê uma pilha de imagens confocal da região de interesse usando a lente objetiva de 10X eo zoom digital de cerca de 2,5 vezes. Preparação de imagens do canal verde e vermelho usando a 488 nm e 561 nm lasers respectivamente. Imagem com uma resolução de 512 x 512 com um intervalo entre os planos z de 1,3 mm e 3 médias de linha. A pilha resultante irá compreender de cerca de 100 fatias z.
    3. Exportar os dados como uma série tiff. Projecções máximas dos elementos do músculo e da cartilagem a partir de uma larva de peixe-zebra 5dpf são mostrados na Figura 1.

2. Gerar uma superfície 3D

  1. Escolha um conjunto de dados representativo para cada ponto de tempo em 3, 4 e 5 dpf (escolha após a visualização de múltiplas amostras).
  2. Abrir 3-dimensional pilha tiff e selecione todos os canais de software de análise. Clique direito sobre o canal de cartilagem e selecione filtro de imagem e suavização: Gaussian (Figura 2B).
  3. Em vista do projeto com o botão direito na imagem filtrada e selecione 'segmentação de imagem "e depois" editar nova etiqueta'. Criar um novo rótulo para cada material, ou seja, cartilagem e jonto. Selecione a região de cartilagem da imagem (Figura 2C, sinal branco, esboço roxo) com a ferramenta varinha mágica. Use a ferramenta pincel para remover o ruído dos contornos.
    NOTA: Se usando a ferramenta varinha mágica, clique em "Todos os slices '.
  4. Selecione a região em conjunto com a ferramenta pincel e atribuir a um componente de articulação (Figura 2C, contorno azul)
  5. várias fatias suaves ao mesmo tempo, selecionando a segmentação no menu superior e etiquetas lisas. Botão direito do mouse na imagem e selecione gerar superfície para produzir uma superfície 3D rendem do componente (Figura 2D).
  6. Clique na superfície e salvar os dados como um arquivo hmascii para importação para software articulada.

3. Cálculo das Forças músculo a ser utilizado no modelo FE

  1. Contar o número de fibras musculares de imagens confocal de smyhc: GFP peixes-zebra transgénicos (Figura 1A, seta, 1C) e medir a diameter das fibras para calcular a área de secção transversal (πr 2).
  2. Identificar força por unidade de área adequado músculo a partir da literatura. A força muscular máxima gerada por unidade de área para os músculos esqueléticos de peixe-zebra larval (40 nN / ^ m 2) foram utilizados 17.
  3. Calcular as forças para cada grupo muscular anatómica multiplicando o número de fibras e a sua área pela força por unidade de área. Ver Tabela 1.

4. Gerando uma Malha

  1. Importar o modelo 3D gerado na secção 2 (acima) para um pacote de software capaz de gerar uma malha de elementos finitos.
  2. Gerar A2d malha da cartilagem e superfícies articulares, utilizando a ferramenta envoltório do psiquiatra no menu 2D. Escolha um tamanho de elemento apropriado.
    Nota: Use um tamanho de elemento entre 1,5-2,5. Se necessário, gerar um intervalo de superfície 2D diferente tamanho malhas para realizar a otimização da malha 3D (Seção 4.4).
  3. Efectuar controlos de qualidade malha encontradas embaixo dos 2D> Ferramentas> Verificar elementos "painel para verificar se há elementos duplicados, inserções e penetrações na malha. Corrigir ângulos diedros usando a guia utilidade em árvore do modelo.
  4. Gerar uma malha 3D a partir das malhas de superfície 2D de diferentes tamanho do elemento utilizando o subpainel 3D> Tetramesh.
    NOTA: Comparar os resultados de diferentes tamanhos de malha e selecione o modelo FE com a malhagem menor que converge após novas simulações e não compromete definição de recurso. O exemplo na Figura 3 contém 1,5 milhões de elementos tetraédricos para as cartilagens de maxilas inferiores e tinha um tamanho de elemento de 2D de 2,0.
  5. Transformar a malha de modo modelo de mandíbula é escalar como por pilha confocal utilizando a geometria> Distância subpainel.
    NOTA: Certifique-se a cartilagem e componentes comuns são conectados no modelo através da exportação de um modelo mesclado ou usando laços.

5. Elementos Finitos Model Construção

  1. Usando software comercial de elementos finitos (FE), criar um modelo de FE. Usando o músculo e da cartilagem 3D marcado pilhas confocal gerados na secção 1, como um guia, atribuir nós que correspondem aos pontos de fixação do músculo. Criar um vector de entre dois nós que representam a origem e a inserção de cada um dos músculos (Figura 3).
  2. Criar um coletor de carga do tipo "história" para aplicar um 'load C' para cada músculo. Especificar a magnitude em newtons (calculado no passo 3.3) e atribuir o vector associado. A Figura 3 mostra os pontos de fixação para o mandibulae adutor (AM), hyoideus transferidor (PH) e intermandibularis (IM).
    NOTA: Para estes músculos da mandíbula, força contráctil máxima é distribuído entre a origem e a inserção de modo a que apenas 50% de cada carga é aplicada em cada local.
  3. Atribuir propriedades do material isotrópico elásticas adequadas conforme determinado pela literatura. Módulo de Young para a cartilagemeo interzona neste modelo foram de 1,1 MPa e 0,25 MPa, respectivamente, e razão de Poisson foi de 0,25 tanto para 18,19.
  4. Criar um coletor de carga do tipo 'limite' para aplicar restrições iniciais do modelo. Vá até a aba Análise> Restrições e no subpainel criar, escolher os nós no modelo que deseja restringir. Selecione os graus de liberdade (DOF) que o movimento limite do modelo para a melhor aproximação da sua área natural de movimento.
    NOTA: O modelo da Figura 3 foi constrangido em todos os eixos de movimento (DOF: 1, 2, 3 representam X, Y e Z, respectivamente) no ceratohyal para o ancorar no espaço a um ponto médio no modelo e na eixo y e Z no ponto em que o palatoquadrate liga ao resto do crânio peixe-zebra (Figura 3, Tabela 1). O modelo deve ser limitado em todas as três DOF ​​em um nó menos.
  5. Criar uma "etapa Load ', para cada tipo de movimento que pretende simulcomeu (ou seja, a abertura, fechamento), sob o menu de análise e selecione todas as cargas relevantes (feitas na Seção 5.2) e as restrições (feito na Seção 5.4) para simular o movimento. Selecione 'Static' a partir do menu drop-down quando ela aparece.
  6. modelo de exportação, incluindo os de malha, cargas, restrições e propriedades do material em um formato de arquivo adequado, neste caso formato ".INP".
  7. modelo de carga em software de análise de FE. Criar e executar um trabalho para o modelo utilizando o módulo de Job.
  8. Analisar a saída para o stress, tensão, deslocamento, etc. encontrada na guia resultados e menu de visualização (Figura 4 e 5).

6. Validação de Jaw Deformação / Deslocamento Distâncias

  1. Escolha 3-6 Tg (Col2a1aBAC: mCherry) peixes-zebra transgénicos.
  2. Levemente anestesiar as larvas com 0,02% MS222 até que eles deixam de responder ao toque, mas seu coração ainda está batendo.
  3. monteas larvas lateralmente (enquanto anestesiado) em lamelas em tépida agarose LMP 1% (composta em solução de Danieau).
  4. Remova a agarose em torno da cabeça e mandíbula com fórceps.
  5. Lave solução fresca de Danieau (sem MS222) sobre a cabeça da larva para remover a anestesia utilizando uma pipeta Pasteur até movimentos normais da boca retomada.
  6. Use um software de captura de filme para tirar de campo brilhante vídeos em alta velocidade de movimentos da boca. Tome filmes de cerca de um minuto de duração na taxa de quadros mais alta, ou suficiente para gravar vários ciclos de abertura da mandíbula.
  7. Escolha quadros que mostram a mandíbula aberta para o seu deslocamento máximo. Medir a distância entre a ponta anterior da cartilagem de Meckel e a maxila superior (ponta da placa etmóide) em uM.
  8. Calcular o deslocamento médio de larvas de peixes múltipla.
  9. Extrai dados de deslocamento a partir do modelo. Use o deslocamento médio calculado em 6,8 a verificar o comportamento de deslocamento do modelo (

Representative Results

Imunocoloração para o músculo (Figura 1A) e da cartilagem (Figura 1B) ou imagiologia de repórteres transgénicos (Figura 1C) permite que a estrutura 3D da mandíbula para ser visualizado, juntamente com a massa muscular associada. Por imagem com uma resolução elevada, foi possível construir um modelo que capta tanto a forma tridimensional da maxila (Figura 2) e a localização e colocação de cargas (Figura 3). Utilizando em deslocamentos vivo pode ser visto através de captura de vídeo de alta velocidade (Figura 4) verificou-se que a amplitude de movimento no modelo foi dentro de um intervalo realista.

Os modelos FE uma vez a corrida pode ser usado para exibir uma variedade de dados, tais como estresse (Figura 5A), mínimo e deformação principal máxima (Figura 5B - K). Estes resultados são três-dim ensional modo que o modelo pode ser ampliado para ver padrões finos de detalhes (Figura 5E, 5I) rodado para obter pontos de vista relevantes (Figura 5F, 5G, 5J 5K) e digitalmente seccionados (Figura 5E ', 5E' ', 5I', 5I '') para mostrar como os padrões de tensão, deformação ou alteração da pressão ao longo do modelo. Também é possível extrair dados quantitativos a partir do modelo (não representado). Ao verificar o modelo e utilizando as mais precisas as propriedades do material, cargas e malha forma o modelo FE pode ser usado para explorar a melhor estimativa do ambiente mecânico que está sendo experimentado pelas células durante essa janela de desenvolvimento. Os resultados do modelo pode ser directamente comparada com alterações no comportamento celular e a expressão do gene 20.

re 1 "src =" / files / ftp_upload / 54811 / 54811fig1.jpg "/>
Figura 1:. Imagens representativas dos elementos músculo-esqueléticas da mandíbula peixe-zebra em 5 dpf pilhas confocal representativos da mandíbula inferior de larvas 5dpf tudo mostrado com anterior ao início (A) imunocoloração para A4.1025 que mancha toda a miosina esquelético (B) imunocoloração para colágeno Tipo II que marca toda a cartilagem (C) Stack a partir de uma larva viva expressar os repórteres COL2A1 transgênicos: muscular lenta GFP (verde): mCherry cartilagem (vermelho) e smyhc marcação. IA: intermandibularis anterior, PH: transferidor hyoideus, AM: mandibulae adutor, HI: hyoideus inferior, HI: hyoideus superior, CH: sternohyoideus, MC: cartilagem de Meckel, PQ: Palatoquadrate, CH:. Ceratohyal Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

"Fo: manter-together.within-page =" 1 "> Figura 2
Figura 2: Geração de uma superfície 3D a partir de dados confocal Imagens que mostram a transição de dados confocal em uma superfície 3D para o maxilar inferior do peixe-zebra com maior ampliação da região conjunta.. (A) os dados confocal Raw; (B) do conjunto de dados após a aplicação de um filtro de Gauss; (C) esboço filtrada; Superfície (D) 3D. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 3
Figura 3: malhas representativos mostrando as limitações e vetores de força malhas representativos para uma larva 5 dpf para (A) de fecho e boca.(B) a abertura da boca. Pontos brancos denotar lugares em que o modelo é restritas e em que as dimensões (por exemplo, X e Y ou X, Y e Z). linhas brancas denotam posições musculares, com o vetor de força muscular indicado por setas brancas. Red mostra cartilagem e amarelo da Interzone. Este valor foi modificado a partir do material suplementar publicado anteriormente em Brunt et al. 15. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Figura 4
Figura 4:. Os testes de sensibilidade FE-modelo simulando o deslocamento da mandíbula no peixe-zebra 5dpf para a cartilagem diferente e Interzone módulos de Young. Mandíbula deslocamento (aberto para fechado em um) está marcado na mandíbula; gravados utilizando a tecla de cor. Cada modelo (A - G) tem uma combinação diferente de cartilagem (C = 1,1, 3,1, ou 6,1 MPa) ou interzona (i = de 0,25, 0,5, 0,75, 1 ou propriedades MPa). Seta preta horizontal destaca o valor do deslocamento da mandíbula na ponta da cartilagem de Meckel (representado pela seta preta vertical). M e N alambiques de vídeos de 5 dpf larvas mostrando mínimos, ou seja, mandíbula fechada (M) e máxima, ou seja, mandíbula totalmente aberta (N) com os dois sobrepostos (o) - linha branca em o representa o deslocamento (de 43 m). Neste caso em relação propriedades de cartilagem de 1,1 com um interzona de 0,25 (A) melhor jogo, os deslocamentos visto em peixes vivos (O). Painéis AL desta figura foram previamente publicados em Brunt et al. 15. Por favor clique aqui para ver uma vers maioresion desta figura.

Figura 5
Figura 5: Os dados representativos dos modelos FE simulação FE-modelo de todos os músculos aplicados de 5 dpf larva (A - C).. (A) Von Mises (EMaxmin) (B) tensão mínima Principal (E Min. P, μɛ) (C) deformação principal máxima (E máx. P., μɛ). simulação FE-modelo de cepas máximas e mínimas principais durante a abertura da mandíbula. (D - K): deformação principal máxima (. E Max P., μɛ) em (D) vista mandíbula ventral e (E) visão conjunta ventral (E) mostra a localização das zonas proximal-distal através da cartilagem de Meckel conjunta eo interzona em (e ') e (e' '), respectivamente. (F): de lateralmandíbula vista. (G): Vista lateral da junta. (H - K): tensão mínima Principal (. E Min P, μɛ) em (H) vista mandíbula ventral e (I) ventral visão conjunta. (I) mostra a localização das secções proximal-distal por meio de cartilagem articular de Meckel e INTERZONE em (I ') e (I' '), respectivamente, (J): vista lateral da mandíbula. (K): Vista lateral da junta. Este número foi publicado anteriormente em Brunt et al. 15. Por favor clique aqui para ver uma versão maior desta figura.

Número de fibras musculares Área da fibra muscular (? M 2) área grupo muscular (mm2) Força (N)
5 dpf intermandibularis anterior 5 23,8 119 4.76e-6
5 dpf transferidor hyoideus 6 23,8 142,8 5.71e-6
5 dpf adutor mandibulae 9 23,8 214,2 8.57e-6

Tabela 1: Quantificação muscular. Calculado forças muscular médio para o Intermandibularis anterior, Adutor mandibulae e transferidor Hyoideus a 5 dpf usando 40 nN / mm 2 (valor por unidade de área tirado de referência 17). (Lorga et al., 2011) (n = 3).

Discussion

Modelos de elementos finitos tenha sido utilizado para relacionar as áreas de elementos esqueléticos que estão sob tensão com aqueles submetidos a formação de osso 10, bem como para mapear as áreas sob tensão durante a ossificação endocondral e morfogénese conjunta 8,12,21. Outros estudos também têm sido capazes de aplicar modelos de crescimento teóricas para replicar as alterações durante o desenvolvimento conjunto 11,12. Aqui nós mostramos o protocolo para a construção de modelos FE para um sistema relativamente simples, a mandíbula zebrafish 20. Ao contrário dos métodos alternativos de recolha de imagens RAW para os modelos FE, como a tomografia computadorizada 22, imagem confocal de linhas transgénicas ou peixe-zebra histoquímica permite múltiplos tecidos a serem estudados. Pode, por conseguinte, proporcionará informação directa sobre os pontos de fixação do músculo em relação à cartilagem. Entre os modelos de vertebrados peixe-zebra são particularmente passíveis de manipulação genética e farmacológica. A geração de modelos FE para peixe-zebracartilagem craniofacial agora abre-se a possibilidade de um estudo mais aprofundado da interação entre biomecânica e genética na morfogênese conjunta.

Há um número de etapas críticas para o processo de criação de um modelo de FEC; a primeira é a geração de uma representação tridimensional precisa do sistema. Isso exige de imagem com resolução alta o suficiente para definir claramente as fronteiras. Note-se que, mesmo com imagens de alta resolução para fazer uma boa superfície que se pode ter para suavizar algumas regiões. Outro passo fundamental é definir o posicionamento correto da carga e as restrições corretas. Um modelo insuficientemente restrita irá falhar para resolver e colocação incorrecta das cargas irá causar movimento anormal.

Alguns processamento dos dados em bruto (Figura 2) é necessária como uma superfície gerada a partir dos dados brutos seria difícil de malha (Figura 2B). Nós filtrada a dados utilizando um filtro gaussiano (Figura 2C

É importante lembrar que sempre existem limitações para um modelo hipotético e umssumptions feitas nos modelos FE. Quando apenas modelar um ou um pequeno número de amostras é essencial para garantir que uma amostra representativa é escolhida como não são susceptíveis de ser pequenas variações entre indivíduos. Uma vez que apenas alguns dos elementos da maxila e os músculos foram incluídos, o modelo é uma versão simplificada do sistema músculo-esquelético craniofacial peixe-zebra. Portanto, as restrições tiveram de ser posicionada para explicar onde os elementos da mandíbula modelados iria se conectar com o resto do crânio e o modelo foi artificialmente restrita no centro de corrigi-lo no "espaço". Esta restrição artificial não teve impacto sobre a interpretação a partir dos modelos como o ceratohyal em si não foi analisada. A inclusão de mais da estrutura craniofacial, especialmente outros músculos abertura da mandíbula, como os sternohyals e sua cartilagem anexo 23, poderia ter acrescentado ao modelo, mas as limitações incluem a capacidade de modelos maiores para ser executado no software Finite Element.

s = "jove_content"> Outra limitação é que não temos modelada inserção do ligamento, embora isto poderia ser alcançado através da inserção de molas 8. Uma outra suposição feita neste caso foi que o modelo iria se comportar de forma linear. As magnitudes das tensões nos modelos eram comparáveis aos dos modelos publicados e aplicado a células in vitro 10,24, estirpes com estando abaixo de 3500 e -5000 μɛ acima para além de pontos de restrição e de ligação do músculo. Portanto, as estirpes com as regiões relevantes do modelo foram consideradas dentro de um intervalo aceitável para um modelo linear. Cartilagem não se comportam como um material inteiramente linear e foi previamente modelado como um material poroelástico, que permitiu a análise do comportamento de fluido no modelo 25. Espalhando os pontos de fixação muscular entre um conjunto de nós locais iria distribuir as forças de pico e representar com mais precisão a inserção do músculo para determinados músculos.

ent "> O uso de FE permite uma avaliação das tensões e pressões que actuam sobre uma estrutura. Como uma técnica que é frequentemente usado em muitas disciplinas biociências incluindo ortopedia, paleontologia e, mais recentemente, biologia do desenvolvimento. Aqui nós descrevemos como construir FE para o peixe-zebra mandíbula inferior. no futuro desses modelos poderia ser alargado a olhar para toda a mandíbula, incluindo o paladar. técnicas similares poderiam ser usados ​​para modelar a biomecânica da coluna vertebral em peixes, que até à data têm sido quase sempre estudadas por meio cinemáticas.

Disclosures

Os autores não têm nada para revelar.

Alguns dados nas Figuras 3-5 foi reproduzido a partir J.Biomech, 48 (12), Brunt et al., Modelagem de elementos finitos prevê mudanças na forma conjunta e comportamento celular devido à perda de tensão muscular no desenvolvimento da mandíbula, 3112-22. de 2015, com a permissão de Elsevier 15.

Acknowledgments

LHB foi financiado pelo programa celular PhD Wellcome Trust dinâmico; KAR foi financiado pela subvenção de projecto MRC MR / L002566 / 1 (atribuído a EJR e CLH) e CLH foi financiado pela áruk concessão 19479. Também gostaríamos de agradecer a facilidade Wolfson BioImaging para o conselho de imagem.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Coll2 Abcam ab34712 Type II collagen antibody - stains all cartilage
A4.1025 / MF20 Developmental studies hybridoma bank A4.1025 Skeletal mysoin antibody - marks all skeletal muscle 
Low melt agarose Sigma  A9414-5G For mounting zebrafish
MS222 (Ethyl 3-aminobenzoate methanesulfonate ) Sigma E10521-10G To make anesthetic
Trypsin Fisher T/3760/48 sample permeablilisation
Dylight 488 Mouse IgG Thermofisher 35502 Secondary antibody
Dylight 550 Rabbit IgG Thermofisher  84541 Secondary antibody
SP8/SP5 or SPE confocal Leica  For imaging 
LAS Leica capture software Leica Imaging software
Aviso (version 7.0.0) FEI Visualization Science Group 3D image analysis software (Section 2)
Hypermesh part of the Hyperworks package (version 10) Altair Engineering FE model generating software (Section 4-5)
Abaqus (version 6.14) SIMULIA FE analysis software (Section 5.7-5.8)

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

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Biologia do Desenvolvimento Edição 118 Zebrafish Biomecânica Strain Musculoskeletal Finite Element confocal morfologia morfogênese Joint
Construindo Modelos de Elementos Finitos para investigar Zebrafish Jaw Biomecânica
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Brunt, L. H., Roddy, K. A.,… More

Brunt, L. H., Roddy, K. A., Rayfield, E. J., Hammond, C. L. Building Finite Element Models to Investigate Zebrafish Jaw Biomechanics. J. Vis. Exp. (118), e54811, doi:10.3791/54811 (2016).

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