Summary
Vi beskriver ett protokoll för att framkalla givande och nonrewarding erfarenheter i fruktflugor (Drosophila melanogaster) med frivilliga etanolkonsumtion som ett mått på förändringar i belöning tillstånd.
Abstract
Vi beskriver ett protokoll för mätning av etanolsjälvadministration i fruktflugor (Drosophila melanogaster) som ett mått på förändringar i belöning tillstånd. Vi visar ett enkelt sätt att utnyttja farten belöningssystem, ändra erfarenheter i samband med naturlig belöning, och använda frivilliga etanolkonsumtion som ett mått på förändringar i belöning tillstånd. Tillvägagångssättet fungerar som ett relevant verktyg för att studera nervceller och gener som spelar en roll i erfarenhets medierad förändringar av inre tillstånd. Protokollet består av två separata delar: utsätta flugor till givande och nonrewarding erfarenheter och analysera frivilliga etanolkonsumtion som ett mått på motivation att erhålla en läkemedels belöning. De två delarna kan användas oberoende för att inducera moduleringen av erfarenhet som ett första steg för ytterligare analyser nedströms eller som en fristående två valsmatningsanalys, respektive. Protokollet kräver inte en komplicerad installation och kan därför tillämpas i alla laboratory med grundläggande flyga kultur verktyg.
Introduction
Ändring av beteende som svar på erfarenhet tillåter djur att anpassa sitt beteende till förändringar i sin omgivning ett. Under denna process, djur integrera sina interna fysiologiska tillstånd med varierande förhållanden i den yttre miljön och därefter välja en åtgärd över varandra för att öka deras chanser att överleva och reproduktion. Belöningssystem utvecklats för att motivera beteenden som krävs för överlevnaden av individer och arter genom att förstärka beteenden som förbättrar omedelbar överlevnad, som att äta eller dricka, eller de som säkerställa långsiktig överlevnad, såsom sexuellt beteende eller ta hand om avkomman 2. Artificiella föreningar såsom droger påverkar också belöningssystem genom adjungerar nervbanor som förmedlar naturliga belöningar 2.
Under de senaste två decennierna, bananflugan Drosophila melanogaster har etablerats som en lovande modell för att studera Molecular och neuronala mekanismer som formar effekterna av etanol på beteendet 3,4.
Tidigare har vi identifierat en delmängd av peptiderga neuroner i flugor (NPF / NPF receptor (R) nervceller) som kopplar naturliga belöningar, såsom sexuell erfarenhet, motivation att erhålla läkemedels belöningar 5. NPF uttryck är känslig för både sexuella erfarenheter och drog belöningar, såsom etanol förgiftning. Förändringar i NPF uttrycksnivåer omvandlas till förändringar i etanol egen administration 5, där hög NPF minskar och låg NPF ökar föredrar att konsumera etanol. Aktivera NPF neuroner är givande för flugor, eftersom de visar stark preferens för en lukt parat med aktivering, vilket också återspeglas av minskad konsumtion etanol. Ännu viktigare, aktivering av NPF neuroner stör förmågan av flugor för att bilda ett positivt samband mellan etanol berusning och en lukt cue. Orsakssambandet mellan NPF / Rsystemet, belöning minne, och etanolkonsumtion tyder på att man kan använda etanol egen administration som ett mått på förändringar i belöning tillstånd 5.
I denna publikation visar vi en integrerad strategi för att utnyttja farten naturliga belöningssystemet och analysera förändringar i belöning stater. Tillvägagångssättet består av två separata delar, en utbildning protokoll för att manipulera naturliga belöningsrelaterade upplevelser, följt av en två-val kapillär feeder-analys (CAFE) för att bedöma etanolsjälvadministration som en uppskattning för förändringar i belöning tillstånd. CAFE-analysen är analogt med de två flask val analyser som används i studier på gnagare för läkemedelssjälvadministrering och har visat att återspegla vissa egenskaper hos beroendeliknande beteende i flugor 6.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Obs: Allmän översikt över experimentell design: Den experimentella designen inkluderar en anpassad protokoll för uppvaktning undertryckande 7-9 i vilka manliga flugor utsätts för givande och nonrewarding erfarenheter i 3 träningspass i följd under loppet av fyra d. Vid slutet av upplevelsen fasen flugorna testas i en två-val analys frivilligt etanolkonsumtion för 3-4 d. Protokollet häri innefattar flera förberedande steg, av vilka en del kan göras i förväg för att kunna användas i mer än ett experiment, medan andra bör ske i god tid före början av experimentet (tabell 1).
1. Förberedande steg
- Framställning av den kapillära matningssystemet
- Hetta upp en 27 G-nål och använda den för att punktera små hål längs en flaska (Figur 1).
- Skära flaskan plugg i halv (korsvis) med användning av ett rakblad. Mark fyra punkter på ytan av pluggen, vilket skapar en square form för att placera kapillära hållarna i. Använd en 18 G nål för att göra 4 hål genom pluggen (Figur 1b).
- Använd ett rakblad för att skära Bara mikro så att de stadigt kan hålla 5 mikroliter glas kapillärer, som tjänar som adaptrar.
- Sätt 4 kapillär adaptrar till de preparerade pluggar.
- Markera positionen för de 2 etanol- och två nonethanol innehållande kapillärer på kontakten.
Obs: Det rekommenderas att hålla positionerna för de 2 typer av kapillärer konsekvent i alla flaskor. Var uppmärksam på storleken på hålen, som stora hål tillåter flykt av flugor ur flaskorna. Dessutom rekommenderas det att använda mjukare sida av pluggen (vanligtvis motsatt den skurna sidan) som den sida som är vänd nedåt när de sätts i flaskan, som att skära kontakten skapar några små, lösa fibrer att flugorna kan trassla in . - Förbered ett stort antal flaskor och adaptrar som ska användas för det kapillära matningssystemet (CAFE)experiment som beskrivs i steg 2,3.
- Framställning av små glaslivsmedelsflaskor
- En dag innan samla flugorna (steg 1,4), ordna 200 glasflaskor på mikrocentrifugrör rack. Smält flyga mat (enligt majsmjöl melass receptet, se tabell of Materials) med en mikrovågsugn. Häll 2 ml av flyg mat i glasflaskor (försök att inte smeta maten på flaskan väggar). Låt maten hårdna, och täcka rören med plastfolie.
OBS: De glasampuller innehållande maten kan hållas vid 4 ° C under flera veckor. - På dagen av flygsamling, ta flaskorna ur kylskåpet och låt dem nå RT innan du använder dem för att hysa flugor.
OBS: Om livsmedels flaskor finns flera veckor gamla, se till att maten är fortfarande intakt och inte lossnat från flaskan, som flugor kan fastna i sprickorna mellan maten och glaset.
- En dag innan samla flugorna (steg 1,4), ordna 200 glasflaskor på mikrocentrifugrör rack. Smält flyga mat (enligt majsmjöl melass receptet, se tabell of Materials) med en mikrovågsugn. Häll 2 ml av flyg mat i glasflaskor (försök att inte smeta maten på flaskan väggar). Låt maten hårdna, och täcka rören med plastfolie.
- Göra lager mat lösning för kapillär matar analysen
- till prepare aktielivsmedelslösning (5% sackaros och 5% jästextrakt), lös 5,88 g jästextrakt och 5,88 g sackaros i 100 ml destillerat vatten.
OBS: Stamlösningen är mycket utsatta för kontaminering. Därför rekommenderas det att autoklaven den (121 ° C, 30 min, och utan torkning) och delprov den i 850 mikroliter arbetar portioner hållas vid 4 ° C tills vidare användning. Koncentrationen av ingredienserna i förrådslösningen är 5,88% och kommer att nå den slutliga koncentrationen på 5% efter tillsats av 15% etanol eller vatten (150 mikroliter i 850 mikroliter av färdiga livsmedel lösning) precis före dess användning i steg 2,3.
- till prepare aktielivsmedelslösning (5% sackaros och 5% jästextrakt), lös 5,88 g jästextrakt och 5,88 g sackaros i 100 ml destillerat vatten.
- Samla experimentella flugor
- Samla 200 naiva manliga flugor med hjälp av en CO 2 pad.
Obs: Använd någon lab stam som är relevant för den experimentella frågan. 250 flugor kan lätt samlas in från fem flaskor av flugor på deras eclosion plocka fas. När samla flugorna, ägna stor uppmärksamhet åt colvar god välj flugor som nyligen har eclosed (jungfru utseende flugor: ljusa flugor med mekonium fläck på buken). Experimentella flugor bör hållas individuellt i små glasflaskor som innehåller mat och åldras till 3-4 d gammal innan de används i experimentet. - Använd mjuka pluggar för att stänga flaskorna.
OBS: Samma mjuka pluggar kommer att vara mycket användbar för träningsfasen vid användning av mun strävan att sätta kvinnor i och ut ur flaskorna under upplevelsen fasen.
- Samla 200 naiva manliga flugor med hjälp av en CO 2 pad.
- Samla trainer flugor
OBS: Alla insamlade flugor bör hållas i ett 12 h / 12 h ljus / mörker inkubator vid 25 ° C och 70% relativ fuktighet (RH). Den 12 h / 12 h ljus / mörker-cykel kan ändras till en lämplig starttid.- Jungfru kvinnliga trainer flugor
- Samla 500 jungfru kvinnliga tränare flyger från en WT lager eller en virginator lager för användning som nyproducerade mottagliga honor. Håll kvinnliga flugor i grupper om 25 per vanlig storlek flaska mat, och allaow dem till ålder till 3-4 d gammal innan du använder dem i experimentet.
- Parat kvinnliga trainer flugor
- Samla 300 jungfru kvinnliga flugor från en WT lager eller en virginator lager genomgå parning före träningsfasen (steg 1.6.1).
OBS: Kvinnor flugor hålls i grupper om 10 honor per vanlig storlek flaska mat och åldras till 3-4 d gammal innan de används i experimentet.
- Samla 300 jungfru kvinnliga flugor från en WT lager eller en virginator lager genomgå parning före träningsfasen (steg 1.6.1).
- Manliga flugor används för att generera parade kvinnliga trainer flugor
- Samla 150 manliga flugor (inte nödvändigtvis oskuld).
OBS: Flugor hålls i grupper om 15 män per vanlig storlek flaska mat och åldras till 3-4 d gammal innan den paras med jungfru kvinnliga flugor att skapa parade tränare honor.
- Samla 150 manliga flugor (inte nödvändigtvis oskuld).
- Jungfru kvinnliga trainer flugor
- Generering parat kvinnlig trainer flugor
- För att generera Mated kvinnliga flugor för att användas som utbildare, par grupper om 10 jungfru kvinnliga flugor med 15 manliga flyger genom att bläddra en hane innehållande flaskan i en kvinno containing flaskan 16-18 timmar före träningsfasen (steg 2,1) 10.
OBS: Detta bör normalt ske kvällen före träningspasset. 1,5: 1 förhållande mellan män flyger till kvinnliga flugor försäkrar att alla honor ska paras. - På dagen för experimentet, separera de parade honor från hanarna genom att aspirera hanarna ur flaskan med hjälp av en mun sug. Gör detta precis innan början av varje träning dag.
- För att generera Mated kvinnliga flugor för att användas som utbildare, par grupper om 10 jungfru kvinnliga flugor med 15 manliga flyger genom att bläddra en hane innehållande flaskan i en kvinno containing flaskan 16-18 timmar före träningsfasen (steg 2,1) 10.
2. Experimentella Steps
- Ställa in erfarenhet fasen
- Starta experimentet så nära som möjligt till början av den lätta fasen i inkubatorn. Placera tränare kvinnor (både jungfru och parade) i beteendet kammaren.
OBS: Det rekommenderas att utföra experiment i ett beteende kammare eller någon avskild miljö som är tyst och satt till 25 ° C och 60-65% RH. Hålla luftfuktighet över 50% är mycket viktigt, eftersom uppvaktning ochfortplantningsbeteendes beroende av feromon avkänning, som är känd för att vara känslig för fukt.
- Starta experimentet så nära som möjligt till början av den lätta fasen i inkubatorn. Placera tränare kvinnor (både jungfru och parade) i beteendet kammaren.
- Utsätta manliga flugor till givande och nonrewarding erfarenheter
- Ordna glasflaskor som innehåller de enskilda manliga flugor på mikrocentrifugrör rack, placera flaskorna längs kanterna av racket.
OBS: Detta arrangemang gör det möjligt för försöksledaren att enkelt följa paren av flugor som genomgår parning utan att flaskorna ut ur racket. - Förbered (som beskrivs i steg 2.2.1) 2 grupper av 100 glasflaskor som innehåller enstaka manliga flugor på separata ställningar för män som genomgår givande och nonrewarding passande erfarenheter (dvs. avvisats och parat).
- Aspirera tränare kvinnor och lägga till dem i varje flaska innehåller de manliga flugor. Ställa in timern för en timme. Från och med den avvisade gruppen, lägga till en parad hona till varje flaska. Sedan gå vidare till män att paras och lägga till en jungfru hona till varje flaska.
- Titta på passande möten näraatt se till att män som interagerar med jungfru honor parar sig framgångsrikt inom den första timmen och att hannarna som interagerar med de tidigare parade honor inte para sig. Att övervaka avvisade kohorten under loppet av en timme, ställa in en andra timer för 15 minuter och titta på män var 15 min.
- Ansvarsfrihet hanarna från den förkastade kohorten som lyckats para sig och män från parad kohorten som inte hamnar parning i slutet av den första träningspasset.
- Avsluta första träningspasset genom att aspirera ut tidigare parade kvinnliga tränare i en vanlig flaska flyga mat, och hålla dem för nästa konditione session. Följ detta steg genom att försiktigt aspirera honorna från parade manliga gruppen.
- Låt flugorna vila i 1 h.
- Upprepa steg 2.2.3 - 2.2.7 två gånger.
- Upprepa träningen i steg 2.2.3 - 2.2.8 varje dag för tre mer d.
- Ordna glasflaskor som innehåller de enskilda manliga flugor på mikrocentrifugrör rack, placera flaskorna längs kanterna av racket.
- Inspelning konsumtion (CAFE)
- Vid slutet av den sista conditioning session (fjärde dagen), aspirera de enskilda män och gruppera dem i kapillär matarflaskor. Använd en mjuk plugg för att täcka kapillär matar flaskan samtidigt som du sätter flugorna, och ersätta det snabbt med färdiga kapillär matarkontakten efter alla flugor har satts in. Grupp 6 - 8 flugor från var och en av experimentgrupperna i en ampull, vilket skapar inte mindre än 8 ampuller per betingelse.
- Blöt kontakterna genom att försiktigt tillsätta 5 ml vatten till toppen av pluggen. Var försiktig när du lägger till vatten för att undvika spill i flaskorna. Lägga lika stor mängd vatten till varje flaska.
OBS: Detta steg görs för att minska avdunstning från kapillärerna. Därför är det upprepas varje dag för resten av experimentet. Beroende på den relativa fuktigheten kan följande dagar kräver mindre vatten som skall sättas till pluggarna. - Bered två separata matlösningar genom att tillsätta etanol eller vatten till aktie mat portioner för att skapa en slutlig koncentration av 15%.
- För att fylla CAPILLaries med två matlösningar, skapa 5 mikroliter flytande livsmedel droppar på en laboratoriefilmremsa och låt lösningen att fylla kapillär tills den når 5 mikroliter märket. Se till att använda tydliga änden av kapillären, vilket är nära till 5 mikroliter svart märke linje.
OBS: För att fylla flera kapillärer på en gång, är det möjligt att ansluta 6 - 8 kapillär adaptrar tillsammans och använda dem som en insats för att hålla kapillärerna. - Knacka kapillärerna försiktigt på paraffinremsan att placera maten lösning exakt på det svarta märket. Försegla kapillärerna genom doppning i slutet av varje kapillär i små droppar av mineralolja. Detta steg minimerar potentiell indunstning av mat lösning.
- Sätt i två etanolinnehållande kapillärer och två nonethanol innehåller kapillärer genom 4 adapters / hållare i kontakten tills de exponerade sidorna av kapillärerna kika knappt från det inre av flaskan (1 mm eller mindre från kontakten yta).
NOTERA:Att hålla öppnandet av kapillärer nära den våta pluggen minskar avdunstningen och ger enkel åtkomst till livsmedel, som flugor normalt sitter på propparna och klättra ner på den exponerade kapillär att mata. - Förutom flaskor som innehåller experimentella flugor, förbereda en falsk flaska utan flugor. Denna styrning tjänar till att bedöma naturlig avdunstning.
OBS: Försök att ha relativt lika placering av kapillär öppning jämfört med pluggar, eftersom skillnaderna kan leda till variabel avdunstning och vilseledande förbrukningsdata. Upprätthålla tillräcklig fuktighet under experimentet och placera kapilläröppningar så nära som möjligt till den våta plugg, som låg luftfuktighet och stora avstånd från den våta pluggen kan både leda till okontrollerad avdunstning. - Spela in det relativa läget av vätskan i var och en av kapillärerna med avseende på den svart märke linje i mm med användning av en linjal, och skriva dessa värden ner.
OBS: Om lösningen är placerad exakt vid den svarta line bör värdet lika med noll, och om det är över eller under, bör det vara positiva eller negativa värden, respektive. De initiala nivåer av vätskan ställa in referenspunkter för de slutliga O / N förbrukningsvärden. - Ställ flaskorna tillbaka i inkubatorn i 24 h. Byt kapillärerna vid en konstant tid under hela experimentet.
- Avlägsna kapillärerna försiktigt från flaskorna och mäta nivåerna av vätska med avseende på den svarta markeringslinjen.
- kontrollera vätskenivån i mock flaskan noggrant.
OBS: Om nivåerna sjunkit mer än 2 mm, betyder det att avdunstningen är hög och konsumtionsnivåerna inte är tillförlitliga. - Fukta pluggarna försiktigt med 2 ml vatten och sätt in en ny uppsättning av kapillärer, såsom anges i steg 2.3.3 - 2.3.10. Ställ flaskorna tillbaka i inkubatorn i 24 h.
- bestämning preferens
- Beräkna den totala förbrukningen av varje kapillär genom att subtrahera den slutliga nivån från den i:nitial nivå vid utgångspunkten.
- Kombinera värdena för båda kapillärerna med samma mat (dvs. nonethanol kapillärer separat från etanolinnehållande kapillärer).
- Beräkna etanol önskemål genom att subtrahera mängden som förbrukas från de icke-etanol kapillärer från den förbrukade mängden från etanolinnehållande kapillärer och dividera värdet av den totala förbrukningsvärden från alla kapillärerna i samma flaska.
- Genomsnitt preferens index för alla flaskor av samma experimentgrupp.
OBS: Nonethanol en (NE1), Nonethanol 2 (NE2), etanol 1 (E1), etanol två (E2), Total nonethanol (Total NE) = NE1 + NE2, Total etanol (Total E) = E1 + E2, Summa förbrukning (totalsumman) = Totalt NE + Total E, och etanol preferens index (PI)
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
FPreviously, Devineni et al. visade att när fruktflugor har möjlighet att välja att konsumera etanolinnehållande livsmedel, uppvisar de en stark preferens för etanolinnehållande mat över nonethanol innehållande mat 6. Här visas några representativa resultat vi fick när analys av medfödda etanol föredrar naiva manliga flugor som inte genomgå utbildningen protokollet.
Naiv Canton S manliga flugor samlades på eclosion åldern förrän fyra dagar gamla, och analyserades för deras medfödda preferens att konsumera etanol under loppet av fyra d (Figur 2). Analysera de belopp som konsumeras av etanol- och nonethanol innehållande lösningar visar att flyger uppvisar en robust preferens för att konsumera 15% etanol mat över nonethanol mat (Figur 2).
Med användning av motstående sexuellerfarenheter, har vi tidigare visat att manliga flugor som tilläts att para sig i grupper ( "parad-grupperade") display lägre etanol preferens än var för sig, inrymt hanar som förkastades av tidigare parade honor ( "avvisade isolerade"). Vi använde flera kontroller för att frånkoppla huset erfarenhet från parning relaterade erfarenhet och visade att differential preferens är resultatet av parning erfarenhet 5.
Användning av tränings protokoll som beskrivs här, genererade vi ensamma-parade och avvisade manliga flugor som genomgick liknande bostäder och parning regimer. Enda manliga Canton S flugor utsattes under loppet av fyra d till disparata parnings upplevelser. En kohort av män fick interagera och para sig med jungfru kvinnliga flugor (enda parad kohort), och den andra kohorten var utbildad med tidigare parade kvinnliga flugor (enda avvisade kohort). Efter träningsfasen, de enskilda män from de två kohorter grupperades (8 / flaska) och placerades i kapillär matarflaskor; deras frivilliga etanolkonsumtion registrerades för 4 d (figur 3A). Preferensen att konsumera etanol beräknades från förbrukningsdata med hjälp av formeln i steg 2,4 (figur 3B). Positiva värden indikerar preferens för etanolinnehållande livsmedel, och negativa värden indikerar motvilja mot etanolinnehållande livsmedel.
Föreliggande experiment stöder våra tidigare fynd, vilket tyder på att sexuella erfarenheter, och inte bostäder skick, modulerar etanolkonsumtion. Lyckad parning ökar interna belöningsnivåer, vilket i sin tur sänker etanolkonsumtion. Avslag, uppfattas som en brist på belöning, leda till en ökning av belöning-seeking beteende (figur 3B).
Figur 2. Ett exempel på medfödd preferens att konsumera Etanol. Naiva WT män grupperades i grupper om åtta män / flaska, och deras konsumtion av etanol- och nonethanol lösningar som innehåller registrerades under loppet av 96 timmar. Flugorna förbrukas en större mängd av 15% etanol containing mat (** P <0,01, *** p <0,001, två-vägs upprepade mätningar ANOVA med Bonferroni post-test, n = 8). Data som visas är medelvärdet + SEM eller menar - SEM. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
Figur 3. Opposing parning Erfarenheter mModulate Etanol Preferens. (A) Schematisk bild av den kombinerade protokoll. Enstaka jungfru WT män tillåts att para sig med jungfru honor eller utsätts för 3x 1h uppvaktning-suppression utbildningar (avbildad som "T") åtskilda med 1 timme vila (avbildade som "R"). Utbildning upprepas för 4 d. Vid slutet av varje dag, är flugorna placeras i inkubatorn (avbildad som "ON"). Efter 4 d av utbildning, var hanar placerades i flaskor där de kunde välja att mata frånkapillärer innehållande matlösningar med eller utan 15% etanol. (B) Single avvisade män uppvisade högre etanol preferens än enstaka parade män (** P <0,01, två-vägs upprepade-mätningar ANOVA med Bonferroni post-test, n = 9, jämförelser mellan behandlingsgrupperna över 3 d efter utgången av utbildning). Data som visas är medelvärdet + SEM eller menar - SEM. Klicka här för att se en större version av denna siffra.
| referenssektion | Anmärkningar |
| 1,1 | Kan användas i många experiment |
| 1,2 | Kan hållas i 4 ° C under flera veckor |
| 1,3 | Tänk på 4 ° C efter autoklav |
| 1,4 | Aged till 3-4 d innananvänds i experimentet |
| 1,5 | Detta steg bör ske kvällen före varje träningspass |
| 2,1 | Detta steg bör ske på morgonen varje träningspass |
| 2,2 | Upprepas i 3 träningspass i följd under loppet av fyra d |
| 2,3 | Dumpa pluggarna med vatten, mäta förbrukningen och ersätta kapillärer under loppet av fyra d |
| 2,4 | Detta steg sker varje gång innan du byter kapillärerna under två valsanalysen |
Tabell 1. En översikt av protokollet som visar ordning och flödestiden för de olika stegen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Vi tackar U. Heberlein och A. Devineni för långvariga diskussioner och teknisk rådgivning. Vi tackar också Shohat-Ophir lab medlemmar, A. Benzur, L. Kazaz och O. Shalom, för hjälpen med att demonstrera metoden. Särskild uppskattning går till Eliezer Costi för fastställande av flugan systemen i labbet. Detta arbete stöddes av Israel Science Foundation (384/14) och Marie Curie Karriär Integration Grants (CIG 631.127).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Polystyrene 25 x 95 mm Vials | FlyStuff | 32-109 | |
| narrow plastic vials flugs | FlyStuff | 42-102 | |
| Disposable Sterile Needle 18 G and 27 G | can be acquired by any company | 1.20 X 38 mm (18 G x 1 1/2") , 0.40 X 13 mm (27 G x 1/2") | |
| 10 x 75 mm Borosilicate Glass Disposable Culture Tubes | kimble chase | 73500-1075 | |
| calibrated pipets 5 μL | VWR | 53432-706 | color coded white to contain 5 μL |
| Mineral Oil | Sigma-Aldrich | M5904 | |
| Sucrose, Molecular Biology Grade | CALBIOCHEM | 573113 | |
| Yeast extract Powder for microbiology | can be acquired by any company | ||
| Ethanol | Sigma-Aldrich | 32221 | |
| standard pipette Tips (micro-pipetts) | ThermScientific | T114R-Q | volume: 0.1 - 20 μL (ultramicro) |
| IDENTI-PLUGS (Foam Tube Plugs) | Jaece | L800-A | fits opening 6 - 13 mm |
| IDENTI-PLUGS (Foam Tube Plugs) | Jaece | L800-D | fits opening 35 - 45 mm |
| virginator fly stock | bloomington drosophila stock center | #24638 | |
| Narrow Vials, Tray Pack (PS) | Genesee Scientific Corporation | # 32-109BR | |
| Drosophila Media Recipes and Methods | Bloomington Drosophila Stock Center | http://flystocks.bio.indiana.edu/Fly_Work/media-recipes/molassesfood.htm | |
| propionic acid | Sigma-Aldrich | P5561 | |
| phosphoric acid | Sigma-Aldrich | W290017 | |
| Methl 4-Hydroxybenzoate | Sigma-Aldrich | H3647 | |
| Agar Agar | can be acquired by any company | ||
| corn meal | can be acquired by any company | ||
| Grandma's molasses | B&G Foods, Inc | not indicated | |
| instant dry yeast | can be acquired by any company |
References
- Robinson, G. E., Fernald, R. D., Clayton, D. F. Genes and social behavior. Science. 322, 896-900 (2008).
- Koob, G. F. Neurobiological substrates for the dark side of compulsivity in addiction. Neuropharmacol. 56, Suppl 1 18-31 (2009).
- Kaun, K. R., Devineni, A. V., Heberlein, U. Drosophila melanogaster as a model to study drug addiction. Hum Genet. 131, 959-975 (2012).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. Addiction-like behavior in Drosophila. Commun Integr Biol. 3, 357-359 (2010).
- Shohat-Ophir, G., Kaun, K. R., Azanchi, R., Mohammed, H., Heberlein, U. Sexual deprivation increases ethanol intake in Drosophila. Science. 335, 1351-1355 (2012).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction. Curr Biol : CB. 19, 2126-2132 (2009).
- McBride, S. M., et al. Mushroom body ablation impairs short-term memory and long-term memory of courtship conditioning in Drosophila melanogaster. Neuron. 24, 967-977 (1999).
- Ejima, A., Smith, B. P., Lucas, C., Levine, J. D., Griffith, L. C. Sequential learning of pheromonal cues modulates memory consolidation in trainer-specific associative courtship conditioning. Curr Biol. 15, 194-206 (2005).
- Ejima, A., et al. Generalization of courtship learning in Drosophila is mediated by cis-vaccenyl acetate. Curr Biol. 17, 599-605 (2007).
- Keleman, K., Kruttner, S., Alenius, M., Dickson, B. J. Function of the Drosophila CPEB protein Orb2 in long-term courtship memory. Nat Neurosci. 10, 1587-1593 (2007).
- Kaun, K. R., Azanchi, R., Maung, Z., Hirsh, J., Heberlein, U. A Drosophila model for alcohol reward. Nat Neurosci. 14, 612-619 (2011).
- Xu, S., et al. The propensity for consuming ethanol in Drosophila requires rutabaga adenylyl cyclase expression within mushroom body neurons. Genes Brain Behav. 11, 727-739 (2012).
- Devineni, A. V., Heberlein, U. The evolution of Drosophila melanogaster as a model for alcohol research. Annu Rev Neurosci. 36, 121-138 (2013).
- Ro, J., Harvanek, Z. M., Pletcher, S. D. FLIC: high-throughput, continuous analysis of feeding behaviors in Drosophila. PloS one. 9, 101107 (2014).
- Itskov, P. M., et al. Automated monitoring and quantitative analysis of feeding behaviour in Drosophila. Nat Commun. 5, 4560 (2014).
- Yapici, N., Cohn, R., Schusterreiter, C., Ruta, V., Vosshall, L. B. A Taste Circuit that Regulates Ingestion by Integrating Food and Hunger Signals. Cell. 165, 715-729 (2016).
- Peru, Y. C., et al. Long-lasting, experience-dependent alcohol preference in Drosophila. Addict Biol. 19, 392-401 (2014).
- Dus, M., et al. Nutrient Sensor in the Brain Directs the Action of the Brain-Gut Axis in Drosophila. Neuron. 87, 139-151 (2015).
- Anderson, D. J., Adolphs, R. A framework for studying emotions across species. Cell. 157, 187-200 (2014).
- Gibson, W. T., et al. Behavioral responses to a repetitive visual threat stimulus express a persistent state of defensive arousal in Drosophila. Curr Biol. 25, 1401-1415 (2015).
