Introduction
احتشاء عضلة القلب (MI) هو السبب الرئيسي للوفاة والعجز في جميع أنحاء العالم. أمراض القلب التاجية هي السبب الرئيسي. MI ينتج عن نقص التروية التوالي للأحداث التاجية مثل انسداد. عندما لا يتم تنفيذ ضخه داخل ساعة 6 الأولى، نقص تروية عضلة القلب يدفع نخر لا رجعة فيه. في المرضى، وتوصيف MI يعتمد على أدوات التشخيص المختلفة، بما في ذلك العلامات السريرية، تخطيط القلب الكهربائي، وتقييم مستويات البلازما من المؤشرات الحيوية، وضربات القلب، والتصوير بالرنين المغناطيسي، والنسيجية ويحلل 1. تصنف MI الحادة والمزمنة كما مرحلتين المختلفة للإصابات وفقا لتوقيت نخر عضلة القلب بالنسبة للوقت انسداد الشريان التاجي. المرحلة الحادة، والتي تحدث خلال 7 أيام الأولى، ويرتبط مع فقدان الخلايا العضلية، والتهاب واسعة النطاق، وتجنيد الخلايا الليفية. المرحلة شبه الحادة، التي تتميز شفاء الأنسجة القلبية وتشكيل ندبة، يحدثبين 1 و 4-6 أسابيع. توسيع احتشاء، رقيق البطين الجدار، وتوسع البطين تميز المرحلة المزمنة. إعادة عرض واسعة من البطين الأيسر النتائج تدريجيا في فشل القلب الحاد 2.
MI الناجمة عن الدائمين الأمامي الأيسر النازل الشريان (LAD) ربط يمثل نموذج القوارض القياسية من احتشاء عضلة القلب المزمن. يقلد الربطة التاجية وانسداد الشريان التاجي. حجم احتشاء يعتمد على موقع ضمد. يتم إجراء توصيف الإصابة الدماغية عضلة القلب في نموذج القوارض كلاسيكي باستخدام مستويات البلازما العلامات البيولوجية، مثل تروبونين الأول وT 3، تخطيط صدى القلب، التصوير بالرنين المغناطيسي، والأنسجة 4،5. وترتبط مستويات المؤشرات الحيوية مع حد الموت cardiomyocyte. تخطيط صدى القلب يقيم الأيسر ضعف وظيفة البطين الناتجة عن تشوهات جدار الحركة الإقليمية. وبالإضافة إلى ذلك، وتقنيات التصوير غير الغازية، مثل التصوير بالرنين المغناطيسي أو عالية الدقةتخطيط صدى القلب، والسماح للتقييم الانخفاض في حركة الجدار، وحجم منطقة الندبة مع انخفاض التروية وعضلة القلب قابلة للحياة، وترقق الجدار. تسمح أبعاد LV تقييم دقيق لحجم احتشاء. وأخيرا، فإن تقدير حجم عضلة القلب قابلة للحياة ومات لا يمكن أن يؤديها بعد الوفاة باستخدام بقع محددة من المقاطع النسيجية من قلوب حصادها ويسمح التحقق من حجم احتشاء (IS). ميزة أخرى مهمة هي تقييم مؤشر التوسع احتشاء (EI) 6. ويرتبط EI مع احتشاء ويبدأ بطريق ضمن أول 3 أيام. يتميز EI من قبل التخفيض التدريجي في سمك الجدار، وزيادة في حجم تجويف LV، والتغيرات اللاحقة في شكل LV.
من أجل تقييم فعالية العلاج من العلاجات الجديدة - على وجه الخصوص، استراتيجيات التجدد على أساس الخلايا، المصفوفات، والجينات التسليم دقيقة تقييم MI في القوارض هو أمر بالغ الأهمية.عندما يقاس على شريحة واحدة حصلت على مستوى العضلات الحليمية، قد يكون متحيزا حجم ويرجع ذلك إلى التنوع الكبير الموجود في تطوير احتشاء التالية ربط الغلام، واحتشاء مهيمنة يمكن بعد ذلك تحجبها. الأهم من ذلك، وقد وصفت منهجيات أكثر دقة لتحديد حجم MI للفئران 7-9 أو الفئران 10. على الرغم من ذلك، هو غير كافية لتحديد بدقة LV إعادة عرض أو أدى إلى انخفاض علاجيا (أو المنع) من التجديد. في الواقع، هو ما يعبر عنه عادة كنسبة مئوية من إجمالي حجم LV المقررة على المقاطع العرضية للقلب. على الرغم من أن هذه الطريقة صالحة لMI الحاد، وترقق الجدار LV التي تحدث خلال إعادة عرض ما زال تحت تقييمها 11،12. تقدير كمي المورفولوجية كاملة من حجم احتشاء والتغيرات الهيكلية يجب تحديد حجم العديد من المعلمات، مثل أطوال شغافية والنخابية وبأقطار، فضلا عن احتشاء والمناطق الصحية. نحن تصف appr المنهجيoach إلى تقييم دقيق MI وإعادة عرض في نموذج الفئران المزمن.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
وتلقى جميع الحيوانات الرعاية الإنسانية في الامتثال للاتفاقية الأوروبية لرعاية الحيوان. تم إجراء العمليات الجراحية وفقا لقانون حماية الحيوان السويسري بعد الحصول على إذن من مكتب الدولة للطب البيطري، فريبورغ، التي وافق عليها المكتب الاتحادي السويسري البيطري، سويسرا.
حصاد 1. القلب
ملاحظة: تم تنفيذ جميع التدخلات الجراحية تحت التخدير الأيزوفلورين. وقد بذلت جهود لتقليل معاناة الحيوانات. على وجه الخصوص، تلقى جميع الحيوانات الحقن تحت الجلد من 0.1 ملغم / كغم البوبرينورفين قبل التخدير. بروتوكول الجراحية لضمهم احتشاء عضلة القلب وقد وصفت سابقا في أماكن أخرى (13).
- إجراء القص على حيوان محتشية myocardially تحت التخدير (حيوان تنبيب، 2.5٪ الأيزوفلورين والتخدير المناسبة أكد مخلب قرصة لا ارادي).
- فتح الحيوان عن طريق قطع الجلد ثم العضلاتمع مقص جراحي. قطع الأضلاع على اليسار واليمين، ثم قم بإزالة الصدر.
- إزالة التصاقات المتبقية بعد الجراحة السابقة (LAD ربط). قطع الشريان الأورطي وإزالة القلب. وضع الأنسجة في 1 م بوكل (في برنامج تلفزيوني)، ثم يغسل مع برنامج تلفزيوني.
2. الأنسجة التحضير
- وضع القلب محتشية طوليا في الاكريليك مصفوفة قلب فأر. يبقيه عند درجة حرارة -20 درجة مئوية لمدة 1 ساعة.
- قطع القلب مباشرة في المصفوفة باستخدام شفرة حلاقة مع مستعرضة. ضمان كل شريحة هو 2 مم. قطع ما يقرب من 5-7 شرائح لكل قلب (استنادا إلى مستوى إعادة)؛ وهذا ما يسمى أخذ العينات بطريقة منهجية.
- في هذه الخطوة، وأداء تلطيخ 2،3،5-triphenyltetrazolium كلوريد (TTC) هو اختياري (الحفاظ على التوجه للشرائح القلب قاعدة للقمة).
- احتضان في 1٪ عقاري في برنامج تلفزيوني لمدة 50 دقيقة عند 37 درجة مئوية. احتضان في 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) لمدة 20 دقيقة إلى 1 ساعة. وضع المقاطع بين هذا وذاكن لوحين من الزجاج مع الفواصل 2 ملم والتقاط الصور مع المجهر stereological إلى جانب وجود كاميرا في 15X التكبير.
الحذر! امتصاص العرق هي سامة.
- احتضان في 1٪ عقاري في برنامج تلفزيوني لمدة 50 دقيقة عند 37 درجة مئوية. احتضان في 4٪ بارافورمالدهيد (PFA) لمدة 20 دقيقة إلى 1 ساعة. وضع المقاطع بين هذا وذاكن لوحين من الزجاج مع الفواصل 2 ملم والتقاط الصور مع المجهر stereological إلى جانب وجود كاميرا في 15X التكبير.
- تجميد الشريحة (1 الخيار الواحد)
- وضع كل شريحة في قالب من البلاستيك (10 × 10 × 5 مم) مع تصاعد المتوسطة لcryotomy (أفضل درجة حرارة القطع، أكتوبر)، والحفاظ على التوجه (وضع الجانب الموجهة APEX-القسم أسفل على الجزء السفلي من القالب). تجميد الكتل مع الأبخرة 2-methylbutane تحت النيتروجين السائل لتبريد 10-15 دقيقة. وأخيرا، وتخزين الأنسجة عند -80 درجة مئوية.
- Paraffinization (2 الخيار الثاني)
- وضع كل شريحة في تضمين أشرطة (الحفاظ على التوجه عن طريق وضع الجانب الموجهة للقمة للقسم الأسفل على الجزء السفلي من الكاسيت) ثم في 4٪ PFA لمدة 24 ساعة. وضعها في جهاز معالج الأنسجة بين عشية وضحاها.
- احتضان في الايثانول 70٪ لمدة 2 ساعة. احتضان في إيثانرأ 95٪ لمدة 2 ساعة. احتضان في الإيثانول بنسبة 100٪ لمدة 3 ساعة. احتضان في زايلول لمدة 4 ساعة. احتضان في البارافين (المنصهر في 60 درجة مئوية في الفرن) لمدة 5 ساعة. وأخيرا، وجعل الكتل عن طريق دمج كل شريحة القلب في البارافين.
- وضع كل شريحة في تضمين أشرطة (الحفاظ على التوجه عن طريق وضع الجانب الموجهة للقمة للقسم الأسفل على الجزء السفلي من الكاسيت) ثم في 4٪ PFA لمدة 24 ساعة. وضعها في جهاز معالج الأنسجة بين عشية وضحاها.
3. ماسون-Goldner ثلاثي الألوان تلطيخ
- جعل أقسام الأنسجة من كتل البارافين مع مشراح اليدوي (سمك: 5 ميكرون) أو من كتل أكتوبر مع ناظم البرد المقرر أن -18 درجة مئوية (سمك: 7 ميكرون).
- وصمة عار شريحة واحدة من كل جزء القلب لكل الفئران (3-4 أقسام مستعرضة لكل شريحة) مع ماسون-Goldner ثلاثي الألوان تلطيخ (انظر المرفق).
ملاحظة: بدء من هذه الخطوة للأقسام البارافين.- تذوب الشرائح عند 60 درجة مئوية في الفرن. تحت غطاء الدخان، deparaffinize لهم في زايلول مرتين لمدة 10 دقيقة لكل منهما. ترطيب لهم في الإيثانول بنسبة 100٪، و 95٪ من الإيثانول و 70٪ من الإيثانول، والماء المقطر لمدة 3 دقائق لكل منهما.
ملاحظة: بدء من هذه الخطوة لcryosectionالصورة. - اصلاحها في بوين الحل بين عشية وضحاها. ثم، شطف لهم في ادارة مياه الصنبور ل10-15 دقيقة. شطف في الماء المقطر. احتضان لهم في الهيماتوكسيلين ماير لمدة 3 دقائق.
- إزالة الشرائح وتركهم في الماء المقطر لمدة 5 دقائق. ثم، احتضان لهم في الحامض بالفوكسين-الشقائقية لمدة 5 دقائق. شطف لهم في حامض الخليك 1٪ لمدة 1 دقيقة.
- بعد ذلك، احتضان لهم في حمض الفسفومولبديك أورانج G لمدة 1 دقيقة. شطف لهم في حامض الخليك 1٪ لمدة 1 دقيقة، احتضان لهم في صبغ الضوء الأخضر لمدة 10 دقيقة، وشطف لهم في حامض الخليك 1٪ لمدة 1 دقيقة.
- يذوى منهم في 70٪ من الإيثانول (30 ثانية)، و 95٪ من الإيثانول (30 ثانية)، والإيثانول٪ 100 (5 دقائق). وضع قطرة واحدة من وسط تصاعد راتنجية على أقسام الأنسجة، وغطاء لهم coverslips، والسماح لهم الجافة.
- تذوب الشرائح عند 60 درجة مئوية في الفرن. تحت غطاء الدخان، deparaffinize لهم في زايلول مرتين لمدة 10 دقيقة لكل منهما. ترطيب لهم في الإيثانول بنسبة 100٪، و 95٪ من الإيثانول و 70٪ من الإيثانول، والماء المقطر لمدة 3 دقائق لكل منهما.
4. عائق تحليل الحجم
- الحصول على صورة واحدة من كل شريحة على مجهر تشريحي (15X التكبير) إلى جانب وجود الكاميرا. تصوير الحاكم مع نفس الإعدادالصورة.
- استخدام صورة برامج التحليل لقياس سمك ندبة في منتصف احتشاء، وسماكة الحاجز، منطقة تجويف البطين الأيسر (LV)، ومنطقة احتشاء، ومنطقة الأنسجة LV استخدام.
- تعيين المقياس مع الصورة الحاكم (الشكل 1A).
- انقر على القياسات ثم حدد مجموعة معامل التحويل. رسم خط على شريط المعايرة. انقر بزر الماوس الأيمن على الصورة وانقر على معايرة النهاية. لاحظ القيمة شريط، ومن ثم انقر فوق موافق.
- حدد LV من الصورة القلب الملون (الشكل 1B). استخدام أداة شريحة متعددة. حدد LV نقطة بنقطة، وانقر ثم انقر بزر الماوس نسخ / لصق في أي مكان.
- قياس ندبة والحاجز سمك باستخدام أداة قياس قطعة واحدة (الشكل 1C
- كشف تلقائيا LV تجويف، احتشاء، والمناطق LV باستخدام أداة قياس مساحة التلقائي في وضع RGB (1D الشكل).
- انقر على الأداة. تفعيل فقط حدود و متجاورة في وضع RGB. وأخيرا، انقر داخل المنطقة من الفائدة لكشفها. إذا لزم الأمر، واستخدام الأدوات الدقيقة.
- تعيين المقياس مع الصورة الحاكم (الشكل 1A).
- حساب حجم احتشاء كنسبة من منطقة احتشاء إلى منطقة LV.
- حساب مؤشر التوسع على النحو التالي: [LV منطقة تجويف / كامل منطقة LV] / [سمك احتشاء / سماكة الحاجز]، مع منطقة LV بأكملها بما في ذلك كل من تجويف LV ومناطق الأنسجة LV.
- وأخيرا، وحساب "متوسط" لكل قلب على النحو التالي: [لمتوسط مؤشر توسع من الشرائح محتشية] * [عدد الشرائح محتشية / مجموع عدد من الشرائح].
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
ستة أسابيع بعد LAD ربط، تم حصاد قلوب من الفئران لويس. وقد تم الحصول على أقسام الأنسجة 2 ملم من قمة إلى القاعدة. تم تنفيذ إجراء تلطيخ TTC لتصور منطقة احتشاء، والذي يظهر باللون الأبيض، وعضلة القلب السليم، والذي يظهر باللون الأحمر (الشكل 2). اعتمادا على موقع الربط من الفتى، وحجم احتشاء يختلف. لMI كبير، لوحظت عوائق بطريق من قمة إلى قاعدة (الشكل 2A). قدمت عوائق أصغر الأنسجة محتشية البيضاء مرئية من قمة إلى منتصف القسم من القلب (الشكل 2B). لعوائق صغيرة غير بطريق، وقد لوحظ الأنسجة التليفية على أقسام واحد أو اثنين فقط من قمة (الشكل 2C).
قطعت رقيقة أقسام 5 ميكرومتر من كل شريحة القلب وملطخة ماسون-Goldner ثلاثي الألوان. وكانت الصور من المقطع العرضي كله من القلبالتي تحصل عليها بموجب مجهر تشريحي (الشكل 3). ظهرت الأنسجة السليمة في الأنسجة الحمراء والضامة باللون الأخضر. التمييز بين كل لون يمكن القيام بها بسهولة مع برنامج تحليل الصور.
تم قياس سمك من احتشاء والحاجز، ومنطقة تجويف LV والمساحة الإجمالية LV ويحسب لحساب المنظمة الدولية للتعليم (الجدول 1). تم احتساب EI لكل قسم. اعتمادا على حجم القلب، اختلف عدد من الأبواب من 5 إلى 7. بالنسبة لكل القلب، وEI هو متوسط EI من كل قسم. تباينت EI 0-،278 وكشفت عن وجود مجموعة واسعة من عوائق عضلة القلب، مع السيرة الذاتية من 58٪. في المقارنة، فإن متوسط نسبة احتشاء إلى LV تختلف 0-،241، مع السيرة الذاتية من 54٪ (الجدول 1). ارتبطت في الصناعات الاستخراجية ونسبة احتشاء بشكل كبير. قدم تحليلا سبيرمان غير حدودي معامل الارتباط R-زارة شؤون المحاربين القدامىLUE من 0.491 (ع = 0.005) (الشكل 4A). للقيم EI وثيقة، مثل 0.11 و 0.13، نسبة احتشاء تراوحت 5،8 حتي 24،1٪.
تم تقييم وظيفة القلب بنسبة عالية الدقة ضربات القلب في 6 أسابيع بعد LAD ربط على الحيوانات تخدير وأجريت مرة واحدة قبل الحصاد القلب. وEI تحسب من تقدير النسيجي المترابطة بشكل كبير مع EF. وقدم تحليل سبيرمان غير حدودي على قيمة ص من -0.709 (ع = 0.005) (الشكل 4B).
الشكل 1. الخطوة بخطوة رسم توضيحي لاستخدام البرامج تحليل الصور. شملت القياسات التلقائي ترسيم لون وطول عدة خطوات. ألف المعايرة: تم تعيين وحجم الصورة تصل. صورة لاتخذ الحاكم في نفس الحالة كما قسم القلب. تميزت طول المسطرة لتحديد عامل التحويل الحجم. تم إجراء التحويل من البيكسل إلى ملليمتر. اختيار ب LV: تم قطع البطين الأيمن من الصورة باستخدام أداة التحديد من البرنامج. جيم LV قياس الجدار والحاجز سمك: تم استخدام أداة قياس واحدة لقياس المسافات. وتشير القضبان نطاق 3 مم. D. التلقائي منطقة الكمي: تم تنفيذ ترسيم اللون التلقائي في وضع RGB. وقد أجريت لصناعة السيارات في اختيار بعد اختيار طريقة لصناعة السيارات في الاختيار. الاختيار على أساس اللون يمكن تعديلها. أجرى المحقق المراقبة البصرية من الأنسجة الخضراء المختارة ويزيد أو ينقص المنطقة المحددة حسب الضرورة. وتشير القضبان نطاق 3 مم. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم. 
الرقم أقسام 2. القلب ملطخة عقاري. كانت ملطخة أقسام 2 ملم من القلب الكامل مع TTC. ظهر عضلة القلب صحي في الأنسجة الحمراء ومتليفة باللون الأبيض. يتم عرض ثلاثة قلوب بأحجام مختلفة احتشاء. ج: احتشاء بطريق كبير، B: احتشاء المتوسط، وC: احتشاء صغير. وتشير القضبان نطاق 3 مم. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 3. أقسام القلب ملطخة ماسون-Goldner ثلاثي الألوان. قطعت أقسام 5 ميكرون من كل قسم القلب التي تم الحصول عليها 6 أسابيع بعد LAD ربط. ستاوضعت أقسام INED تحت مجهر تشريحي. وقد تم الحصول على الصور من المقاطع الكاملة مع 15X التكبير. الصورة التمثيلية، التي تم الحصول عليها على مستوى العضلات الحليمية (السهم إلى الخلف)، ويظهر عضلة القلب صحي في الأنسجة الحمراء ومتليفة باللون الأخضر. وتوضح الصورة تعيين اللون التلقائي مع برنامج تحليل الصور، وكذلك الموقع الذي تم قياس احتشاء والحاجز سمك (خطوط سوداء). وتشير القضبان نطاق 3 مم. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الرقم 4. العلاقة بين التوسع مؤشر (EI) والنسبة المئوية للعائق ذات لLV (A) أو جزء طرد (EF) (B). الانحدار الخطي (خط أسود) و 95٪ يثقوتمثل فترات الامتحانات التنافسية الوطنية (الخطوط المنقطة). وذكرت سبيرمان ص القيمة اللامعلمية. ج: إن نسبة احتشاء وEI ترتبط إلى حد كبير (ص = 0.567؛ P = 0.003). تم احتساب المؤشر التوسع احتشاء (EI) كما [LV منطقة تجويف / منطقة LV بأكملها] / [سمك احتشاء / سماكة الحاجز]. تم قياس مساحة LV بأسرها تجويف LV مجتمعة، ومنطقة الأنسجة LV. تم حساب النسبة المئوية للاحتشاء كمنطقة الأنسجة منطقة الأنسجة LV / احتشاء. ب: وظيفة تقييم في 6 أسابيع بعد LAD ربط باستخدام تخطيط صدى القلب عالية الدقة مرتبطة بشكل كبير مع EI. ارتبطت كل من المعلمات بشكل ملحوظ (ص = -0.709؛ ع = 0.005). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الطاولة1: معلمات تقاس على أقسام القلب الملون Goldner-ماسون.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
خطوات حاسمة في إطار بروتوكول
الأنسجة التليفية يمكن تقييمها بدقة في نموذج الفئران MI المزمن باستخدام أخذ العينات المنتظمة للقلب حصاد وصورة تحليلات أقسام النسيجية ثلاثي الألوان الملطخة تم الحصول عليها من قاعدة للقمة. خطوتين أهمية خاصة لتنفيذ بروتوكول ناجحة. أولا، استخدام بوكل لحصاد القلب يسمح للعضلة القلب ليتم الاحتفاظ في حالة استرخاء. هذه الخطوة مهمة لإجراء مقارنات ذات أبعاد احتشاء من قلوب مختلفة. ثانيا، تثبيت ليلة وضحاها من القسم في حل بوين أمر بالغ الأهمية للحصول مشرق تلوين ثلاثي الألوان.
التعديلات واستكشاف الأخطاء وإصلاحها
قد يكون غياب تلطيخ يرجع إلى صعوبات أثناء التثبيت من هذا القسم في حل بوين، مثل تخفيض فترة حضانة أو منتهية الصلاحية حلول بوين. تلطيخ TTC هو أمر اختياري وقد يزيد عدد الجياعد استخدامها لتصور حجم احتشاء في وسيلة سريعة ولكن غير الكمية. من المهم أن نلاحظ أن TTC لا يمكن أن يؤديها لنفس القلب قبل إدراجها في إما أكتوبر أو البارافين.
القيود المفروضة على تقنية
ويتيح النهج الحالي لاختيار واحد بين جزءا لا يتجزأ من البارافين والحفاظ البرد أقسام القلب ويمكن استخدامها لالمناعية. ومع ذلك، فإن قلب كامل لابد مقطوع، والأنسجة لا يمكن استخدامها لمزيد من التحليل، مثل لطخة غربية أو RT-PCR للبروتين والتعبير الجيني التحليلات.
أهمية تقنية مع الاحترام لالحالية / الطرق البديلة
لأن الإجراءات الكمي، وعلى وجه الخصوص، وعدد من أقسام تحليلها تختلف على نطاق واسع بين التحقيقات، وتحديد الحد الأدنى من عدد من الأقسام الضرورية للحصول على تقدير موثوق هو الهدف الأسمى. Takagawa هتي ال. 9 أثبتت أن الموثوقية إلى أقصى حد ممكن مع الحد الأدنى من القلب عدد شريحة من 6-8 أجزاء من القلب كله على فأرة الحاسوب باستخدام فترات 1 ملم. في هذا البروتوكول، 5 - تم الحصول على 7 قطاعات من قلب فأر كامل عند تنفيذ 2 ملم باجتزاء سميكة. وعلاوة على ذلك، القسمين 2 ملم هي المعيار وكثيرا ما تستخدم لحجم TTC تلطيخ. وبالإضافة إلى ذلك، وأخذ العينات النظامية بسيطة لتطبيق وتقدم جانبا الدوري الذي يسمح توصيف قلب كامل.
من كل شرائح 2 ملم، وقطعت أقسام 5 ميكرومتر وملطخة. لكل قسم 5 ميكرون، أجريت الكمي من سمك الحاجز، سمك ندبة وطول، ومجموع مساحة ندبة، ومجموع مساحة الوقف، ومنطقة تجويف LV، وتم حساب متوسط كل معلمة لكل حيوان. كنا ماسون-Goldner تلطيخ المقاطع رقيقة بدلا من TTC تلطيخ الواردة في الفقرتين 2 ملم لتحسين دقة كل من كشف اللون التلقائي والتقييممن أطوال. في الواقع، وتلطيخ TTC هي في معظمها مثيرة للاهتمام للمرحلة مبكرة أو نماذج ضخه الدماغية للكشف عن المنطقة في خطر 8،14، وليس من أجل المرحلة المزمنة.
MI الناجم من ربط الفتى قد تختلف اعتمادا على موقع رباط. في نموذج احتشاء مزمن المقدمة، تم تعديل حجم ربط عمدا لكل حيوان، وكانت النتائج لمختلف الظروف من حجم احتشاء وإعادة الحالي بعد 6 أسابيع. وفقا لذلك، كشفت EI المحسوب مجموعة واسعة من عوائق عضلة القلب ودعمت الفرق الذي لوحظ في وظيفة القلب المترابطة مع EF. عندما وقع رقيق واسعة من قطاع محتشية، منطقة احتشاء وقد تقلص إلى حد كبير في حالة التليف بطريق. في هذه الحالة، فإن تحديد حجم احتشاء عن طريق حساب مجال النسيج احتشاء في ما يتعلق LV بأكمله (كنسبة مئوية من LV) تقييم ضعيف مدى احتشاء. عدم وجود جonsideration لالناجم عن إعادة تمدد الوقف وترقق الشديد للجدار احتشاء LV قد نقلل من حجم احتشاء، في حين أن احتشاء الحالي في حالة عدم وجود ترقق الجدار من شأنه أن الإفراط في تقدير حجم احتشاء، ممثلا في القيم خارج الثقة 95٪ فترة. يمكن القضاء على هذا القصور من خلال حساب EI.
ولقد ثبت أن تغيير شكل LV يرتبط ارتباطا إيجابيا مع المنظمة الدولية للتعليم وترقق جدار 15 و 16. على الرغم من أن EI يمكن أن يكون مؤشرا لوظيفة LV، فمن المهم التأكيد على أن تخطيط صدى القلب والتحليلات النسيجية طرق متكاملة لتقييم احتشاء عضلة القلب على المستوى الوظيفي والأنسجة، على التوالي. تخطيط صدى القلب يسمح دراسة طولية، والنسيجية تحليلات توفير المقايسات نقطة النهاية الأساسية التي تسمح الكمي الإضافي من LV التشكل، مثل سمك الجدار.
التطبيقات المستقبلية أو الاتجاهات في الخلفإيه اتقان هذه التقنية
أخذ العينات المنتظمة للقلب كامل وحساب EI ذات أهمية خاصة عند تقييم MI المزمن. وبالإضافة إلى ذلك، فإن هذه الطريقة تكون مناسبة لتقييم فعالية العلاج، ولا سيما بالنسبة للعلاجات جديدة، مثل الخلوي والعلاجات التي تهدف إلى الحد من حجم احتشاء وإعادة عرض مصفوفة المستندة. تقدير موثوق به للتوسع احتشاء هو من أهمية قصوى لإجراء مقارنات بين الحيوانات غير المعالجة والمعالجة، كما تحليلات نقطة النهاية النسيجية يمنع المقارنة بين ما قبل احتشاء حجم وبعد العلاج.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acrylic rat heart matrix 2 mm | 72-5015 | Harvard Appartus | |
| Inspira advanced volume controlled ventilator | Harvard Apparatus | 557058 | |
| Catheter Insyte 14 G | BD | 381267 | |
| O.C.T | BDHA361603E | VWR | |
| TTC | T8877-10G | Sigma Aldrich | |
| Mayer hematoxylin | MHS32-1L | Sigma Aldrich | |
| Acid Fuchsin CI 42685 |
F8129-50G | Sigma Aldrich | |
| Ponceau Xylidin CI 16150 |
P2395-25G | Sigma Aldrich | |
| Orange G CI 16230 |
O3756-100G | Sigma Aldrich | |
| Light green CI 42095 |
L5382-25G | Sigma Aldrich | |
| KCl | P9333-500G | Sigma Aldrich | |
| Xylol | 10315083 | HoneyWell | |
| Ethanol absolute | 10303990 | HoneyWell | |
| 2-methylbutane | M32631-1L | Sigma Aldrich | |
| Stereogical microscope | SM2800 | Nikon | |
| Formaldehyde | 99340 | Reactolab | |
| Embedding cassette | K113.1 | Carl Roth | |
| Bersoft Image measurement Software | Bersoft.com | Licensed software |
References
- Amsterdam, E. A., et al. AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).
- Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment. JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).
- Frobert, A., et al. Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models. Front Physiol. 6, 353 (2015).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).
- Guex, A. G., et al. Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization. Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).
- Landa, N., et al. Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat. Circulation. 117, 1388-1396 (2008).
- Valente, M., et al. Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize. Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).
- Csonka, C., et al. Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).
- Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model. Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).
- Lichtenauer, M., et al. Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation. Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).
- Lutgens, E., et al. Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes. Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).
- Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix. J Vis Exp. , e51390 (2014).
- Takagawa, J., et al. Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches. J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).
- Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. Am Heart J. 101, 593-600 (1981).
- Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion. Circulation. 78, 186-201 (1988).
- Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat. J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).
