Introduction
Myocardinfarct (MI) is een belangrijke oorzaak van overlijden en invaliditeit wereldwijd. Coronaire hartziekten is de belangrijkste oorzaak; MI het gevolg is van ischemie opeenvolgende coronaire gebeurtenissen, zoals occlusie. Wanneer reperfusie niet binnen de eerste 6 uur wordt uitgevoerd, ischemie veroorzaakt onomkeerbare myocardiale necrose. Bij patiënten, de karakterisering van MI berust op verschillende diagnostische instrumenten, met inbegrip van de klinische symptomen, elektrocardiografie, evaluatie van de plasma niveaus van biomarkers, echocardiografie, MRI, en histologische analyses 1. Acute en chronische MI worden als twee verschillende fasen van de schade van het tijdstip van de myocardiale necrose in verhouding tot de tijd van de coronaire occlusie. De acute fase die gedurende de eerste 7 dagen, wordt het verloren gaan van cardiomyocyten, uitgebreide ontsteking en de rekrutering van fibroblasten. De sub-acute fase, gekenmerkt door de genezing van hartweefsel en de vorming van een litteken, treedttussen 1 en 4 - 6 weken. Uitbreiding van het infarct, ventrikel wand dunner, en ventrikel dilatatie karakteriseren de chronische fase. Uitgebreide herinrichting van de linker hartkamer geleidelijk leidt tot ernstig hartfalen 2.
MI geïnduceerd door permanente linker anterior afdalende arterie (LAD) geeft ligatie standaard knaagdiermodel van chronische myocardiaal infarct. De coronaire ligatuur bootst de coronaire occlusie. De grootte van het infarct afhankelijk van de plaats van de ligatuur. Karakterisering van ischemische verwonding in een knaagdier model is klassiek uitgevoerd met behulp van biomarker plasma niveaus, zoals troponine I en T 3, echocardiografie, MRI en histologie 4,5. Biomarker niveaus zijn gecorreleerd met de mate van cardiomyocyten dood. Echocardiografie beoordeelt de linker ventrikel functie impairment die door de regionale wandbeweging afwijkingen. Bovendien, niet-invasieve beeldvormingstechnieken, zoals MRI of hoge resolutieechocardiografie, laat de beoordeling van de vermindering van de wandbeweging, het volume van het litteken met verminderde perfusie en levensvatbaar myocardium en de wandverdunning. LV bouwvorm maken een nauwkeurige beoordeling van infarctgrootte. Tenslotte kan de kwantificering van levensvatbare en dode myocardium worden uitgevoerd postmortem gebruikmaking van specifieke vlekken van histologische secties van geoogste hart en maakt controle van de infarctgrootte (IS). Een ander belangrijk kenmerk is de evaluatie van het infarct expansie-index (EI) 6. De EI wordt geassocieerd met de transmurale infarct en begint binnen de eerste 3 dagen. De EI wordt gekenmerkt door een geleidelijke vermindering van de wanddikte, een verhoging van de LV holtegrootte, en veranderingen in LV vorm.
Om de therapeutische werkzaamheid van nieuwe behandelingen te evalueren - in het bijzonder, de regeneratieve strategieën op basis van cellen, matrices en genafgifte-nauwkeurige vaststelling van de MI bij knaagdieren is van het allergrootste belang.Gemeten over een dwarsdoorsnede verkrijgen op de papillaire spier niveau, kan de grootte is vertekend door de grote variabiliteit in infarct ontwikkeling bestaat na LAD ligatie; de apex infarct kan dan worden afgedekt. Belangrijk is dat nauwkeuriger methodologieën bepaald MI maat beschreven voor muizen of ratten 7-9 10. Toch is onvoldoende is om nauwkeurig te kwantificeren LV remodeling of therapeutisch geïnduceerde reducties (of ziektes te voorkomen) van de verbouwing. Inderdaad, wordt gewoonlijk uitgedrukt als percentage van de totale LV volume beoordeeld op dwarsdoorsneden van het hart. Hoewel deze methode geldt voor acuut MI, het dunner worden van de LV wand optreedt tijdens verbouwing blijft onder geëvalueerd 11,12. Een volledige morfometrische kwantificatie van infarctgrootte en structurele veranderingen moeten verschillende parameters, zoals endocardiale en epicardiale lengtes en diameters, en infarct en gezonde gebieden te kwantificeren. We beschrijven een methodologisch ca.oach om nauwkeurig te beoordelen MI en verbouwing in een chronische rat model.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle dieren kregen humane zorg in overeenstemming met het Europees Verdrag voor de Animal Care. Chirurgische ingrepen werden uitgevoerd in overeenstemming met de Zwitserse wet Animal Protection na het verkrijgen van toestemming van de Staat Veterinair Bureau, Fribourg, door het Zwitserse Federaal Veterinair Bureau, Zwitserland goedgekeurd.
1. Heart Oogsten
LET OP: Alle chirurgische ingrepen werden uitgevoerd onder isofluraananesthesie. De inspanningen werden gedaan om het lijden van dieren te verminderen. In het bijzonder kregen alle dieren een subcutane injectie van 0,1 mg / kg buprenorfine pre-anesthesie. De chirurgische protocol voor het induceren myocardinfarct eerder elders 13 beschreven.
- Voer een sternotomie op een myocardially infarct dier onder narcose (geïntubeerd dier, 2,5% isofluraan, goede anesthesie bevestigd door poot snuifje reflex).
- Open het dier door het snijden van de huid en de spierenmet chirurgische schaar. Snij de ribben aan de linker- en rechterzijde, en verwijder vervolgens de borst.
- Verwijder de verklevingen resteert na de eerdere operatie (LAD ligatie). Snijd de aorta en verwijder het hart. Doe het materiaal in 1 M KCl (in PBS), en vervolgens wassen met PBS.
2. Tissue Voorbereiding
- Zet het infarct hart in de lengte in een acryl rattehart matrix. Bewaren bij -20 ° C gedurende 1 uur.
- Snijd het hart direct in de matrix met behulp van een scheermesje met een transversale. Zorg ervoor dat elk segment is 2 mm dik. Snij ongeveer 5-7 dia's voor elk hart (op basis van de verbouwing-niveau); dit heet een systematische bemonstering.
- Bij deze stap het uitvoeren van de 2,3,5-trifenyltetrazoliumchloride (TTC) kleuring optioneel (houd de oriëntatie van de hartcoupes base-to-apex).
- Incubeer in 1% TTC in PBS gedurende 50 minuten bij 37 ° C. Incubeer in 4% paraformaldehyde (PFA) gedurende 20 min tot 1 uur. Leg de secties between twee glasplaten met een 2-mm spacers en foto's maken met een stereologische microscoop in combinatie met een camera op 15X vergroting.
VOORZICHTIGHEID! Paraformaldehyde is giftig.
- Incubeer in 1% TTC in PBS gedurende 50 minuten bij 37 ° C. Incubeer in 4% paraformaldehyde (PFA) gedurende 20 min tot 1 uur. Leg de secties between twee glasplaten met een 2-mm spacers en foto's maken met een stereologische microscoop in combinatie met een camera op 15X vergroting.
- Slide bevriezing (1e optie)
- Plaats elke dia in een plastic mold (10 x 10 x 5 mm) met montage medium voor Cryotomie (optimale snijtemperatuur OCT), handhaven de oriëntatie (plaats de apex gerichte zijde van het gedeelte neer op de bodem van de vorm). Bevriezing van de blokken met 2-methylbutaan dampen onder vloeibare stikstof koeling gedurende 10 - 15 min. Tenslotte worden opgeslagen weefsel bij -80 ° C.
- Paraffinization (2e optie)
- Plaats elke dia in inbedden cassettes (handhaven van de oriëntatie door het plaatsen van de top-georiënteerde zijde van het gedeelte neer op de bodem van de cassette) en in 4% PFA gedurende 24 uur. Zet het in een tissue processor machine 's nachts.
- Incubeer in ethanol 70% voor 2 uur. Incubate in Ethanol 95% voor 2 uur. Incubeer in ethanol 100% voor 3 uur. Incubeer in xyleen gedurende 4 uur. Incubeer in paraffine (gesmolten bij 60 ° C in een oven) gedurende 5 uur. Tot slot, zorg blokken door het inbedden van elk hart dia in paraffine.
- Plaats elke dia in inbedden cassettes (handhaven van de oriëntatie door het plaatsen van de top-georiënteerde zijde van het gedeelte neer op de bodem van de cassette) en in 4% PFA gedurende 24 uur. Zet het in een tissue processor machine 's nachts.
3. Masson-Goldner trichroomkleuring
- Voeg weefselsecties uit paraffineblokken met een handmatige microtoom (dikte: 5 pm) of oktober blokken met een cryostaat ingesteld op -18 ° C (dikte: 7 urn).
- Vlek één dia uit elk hart gedeelte voor elke rat (3-4 transversale secties per slide) met Masson-Goldner trichroomkleuring (zie bijlage).
LET OP: Start van deze stap voor de paraffine secties.- Smelt de objectglaasjes bij 60 ° C in een oven. Onder een zuurkast, deparaffinize ze in xyleen tweemaal gedurende 10 min elk. Rehydrateren ze in 100% ethanol, 95% ethanol, 70% ethanol en gedestilleerd water gedurende 3 min elk.
LET OP: Start van deze stap voor de cryosecties. - Ze op te lossen in Bouin oplossing 's nachts. Dan, spoel ze onder stromend leidingwater gedurende 10 - 15 min. Spoel ze in gedestilleerd water. Incubeer ze in hematoxyline Mayer voor 3 minuten.
- Verwijder de dia's en laat ze in gedestilleerd water gedurende 5 minuten. Dan, incubeer ze in zuur fuchsine-Ponceau gedurende 5 min. Spoel ze in 1% azijnzuur gedurende 1 min.
- Vervolgens incubeer ze in fosfomolybdeenzuur Orange G gedurende 1 min. Spoel ze in 1% azijnzuur gedurende 1 min, incubeer ze in licht groene kleurstof gedurende 10 min en spoel ze in 1% azijnzuur gedurende 1 min.
- Dehydrateren ze in 70% ethanol (30 seconden), 95% ethanol (30 sec), en 100% ethanol (5 min). Doe een druppel van een harsachtige montage medium op het weefsel secties, bedek ze met dekglaasjes, en laat ze drogen.
- Smelt de objectglaasjes bij 60 ° C in een oven. Onder een zuurkast, deparaffinize ze in xyleen tweemaal gedurende 10 min elk. Rehydrateren ze in 100% ethanol, 95% ethanol, 70% ethanol en gedestilleerd water gedurende 3 min elk.
4. infarctgrootte Analyse
- Verwerven één beeld uit elke dia een stereomicroscoop (vergroting 15X) gekoppeld met een camera. Fotografeer een liniaal met dezelfde instellings.
- Met beeldanalyse software om het litteken dikte in het midden van het infarct, het septum dikte, de linker ventrikel (LV) holte gebied, het infarctgebied en het weefselgebied LV behulp meten.
- Zet de schaal met de liniaal afbeelding (Figuur 1A).
- Klik op Metingen selecteer vervolgens Set Conversion Factor. Trek een lijn op de kalibratie bar. Klik met de rechtermuisknop op de foto en klik op End kalibratie. Let op de bar waarde, en klik op OK.
- Selecteer de LV van de gebrandschilderde hart afbeelding (Figuur 1B). Gebruik het hulpprogramma Meerdere segment. Selecteer de LV point-by-point, en dan klik met de rechtermuisknop Copy / Paste overal.
- Meet het litteken en het septum dikte met behulp van de enkel segment meetinstrument (figuur 1C
- Detecteert automatisch de LV holte, infarct, en LV gebieden met behulp van de automatische gebied meetinstrument in de RGB-modus (figuur 1D).
- Klik op het gereedschap. Activeer Alleen Borders en Aaneengesloten in de RGB-modus. Ten slotte, klikt u in het gebied van belang om het te ontdekken. Gebruik indien nodig precisie-instrumenten.
- Zet de schaal met de liniaal afbeelding (Figuur 1A).
- Bereken de infarctgrootte als de verhouding van de infarct zone van de LV gebied.
- Bereken de expansie-index als volgt: [LV holte gebied / LV hele gebied] / [infarct dikte / septum dikte], met het hele gebied met inbegrip van LV zowel de LV holte en LV weefsel gebieden.
- Bereken tenslotte een "gemiddelde" voor elk hart als volgt: [gemiddelde van de expansie-index van het infarct dia's] * [Aantal infarct slides / Totaal aantal dia's].
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Zes weken na de LAD ligatie werden geoogst harten van Lewis ratten. 2-mm coupes werden verkregen uit de top naar de basis. Een TTC kleuring procedure werd uitgevoerd om de infarct zone, die in wit wordt weergegeven, en de gezonde myocardium, die rood weergegeven (figuur 2) te visualiseren. Afhankelijk van de plaats van ligatie van de LAD, de infarctgrootte varieert. Voor grote MI, werden transmurale infarcten waargenomen vanuit apex tot basis (Figuur 2A). Kleinere infarcten gepresenteerd witte infarct weefsel zichtbaar vanaf de top naar het middelste gedeelte van het hart (Figuur 2B). Voor kleine, niet-transmurale infarcten werd fibrotisch weefsel waargenomen op slechts één of twee delen van de top (figuur 2C).
Dunne 5-um secties van elk hart plakje werden gesneden en gekleurd met Masson-Goldner trichroom. Afbeeldingen van de gehele dwarsdoorsnede van het hart warenverkregen onder een stereomicroscoop (figuur 3). Gezonde weefsels verscheen in het rood en het bindweefsel in het groen. Discriminatie tussen elke kleur kan gemakkelijk worden uitgevoerd met een beeldanalyse software.
De dikte van het infarct en het septum, de LV holte stippellijn de totale oppervlakte LV gemeten en berekend aan de EI (tabel 1) te berekenen. De EI werd berekend voor elke sectie. Afhankelijk van de grootte van het hart, het aantal secties varieerde van 5 tot 7. Voor elk hart, de EI is een gemiddelde van de EI van elke sectie. De EI varieerde 0-,278 en bleek een groot aantal myocardiale infarcten, met een CV van 58%. Ter vergelijking, het gemiddelde van het percentage infarct van LV varieerde 0-,241, met een CV van 54% (tabel 1). De EI en het percentage infarct significant gecorreleerd; een niet-parametrische Spearman analyse leverde een correlatiecoëfficiënt r-value van 0,491 (p = 0,005) (Figuur 4A). Nauwe EI waarden zoals 0,11 en 0,13, het percentage infarct varieerde 5,8-24,1%.
Hartfunctie werd beoordeeld door een hoge resolutie echocardiografie 6 weken na de LAD ligatie op verdoofde dieren en werd ooit uitgevoerd voorafgaand aan het hart oogsten. De EI berekend uit histologische kwantificatie correleerde significant met de EF. Een niet-parametrische Spearman analyse gaf een r-waarde van -0,709 (p = 0,005) (figuur 4B).
Figuur 1. Stap-voor-stap Illustratie van het gebruik van de Image Analysis Software. Automatische kleur afbakening en de lengte metingen onder meer de verschillende stappen. A. Calibration: De schaal van het beeld werd opgericht. Een foto vaneen liniaal werd genomen in dezelfde staat als het hart sectie. De lengte van de liniaal is gemarkeerd om de omvang omzettingsfactor definiëren. Conversie van pixel tot millimeters werd uitgevoerd. B. LV selectie: De rechter hartkamer werd gesneden uit het beeld met behulp van de selectie-instrument van de software. C. LV muur en septum dikte meting: De single meetinstrument werd gebruikt om afstanden te kwantificeren. De omvang balken geven 3 mm. D. Automatische gebied kwantificering: automatische kleur afbakening werd uitgevoerd in de RGB-modus. Auto-selectie werd uitgevoerd na het selecteren van de auto-selectie mode. -Kleur gebaseerde selectie kan worden gewijzigd; de onderzoeker uitgevoerde visuele controle van geselecteerde groene weefsel en verhoogde of verlaagde het geselecteerde gebied nodig. De omvang balken geven 3 mm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken. 
Figuur 2. Hart secties gekleurd met TTC. 2-mm passages in het volledige hart werden gekleurd met TTC. Gezonde myocard verscheen in rood en fibrotische weefsels in het wit. Drie harten met verschillende infarct grootte worden gepresenteerd. A: grote transmurale infarct, B: medium infarct, en C: klein infarct. De omvang balken geven 3 mm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3. Hart secties gekleurd met Masson-Goldner Trichrome. 5-um secties werden gesneden uit elke hart sectie verkregen 6 weken na de LAD ligatie. Stained secties werden onder een stereomicroscoop geplaatst. Afbeeldingen van de volledige secties werden verkregen met 15x vergroting. Het representatief beeld, verkregen op het niveau van de papillaire spieren (pijl terug), toont gezonde myocardium in rood en fibrotische weefsels groen. Het beeld illustreert de automatische kleur begrenzing met de beeldanalyse software, en de plaats waar het infarct en septum dikte gemeten (zwarte lijnen). De omvang balken geven 3 mm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4. Correlatie tussen de Expansion Index (EI) en het percentage van het infarct verwant aan LV (A) of de ejectiefractie (EF) (B). De lineaire regressie (zwarte lijn) en 95% Confidenvu intervallen (stippellijnen) zijn vertegenwoordigd. De niet-parametrische Spearman r-waarde gerapporteerd. A: Het percentage infarct en EI significant gecorreleerd (r = 0,567; p = 0,003). Het infarct expansie-index (EI) werd berekend als [LV holte gebied / LV hele gebied] / [infarct dikte / septum dikte]. Het hele LV gebied werd gemeten als de gecombineerde LV holte en LV weefsel omgeving. Het percentage van het infarct werd berekend als LV weefselgebied / infarct weefselgebied. B: De functie beoordeeld op 6 weken na de LAD ligatie met een hoge resolutie echocardiografie significant gecorreleerd met EI. Beide parameters waren significant gecorreleerd (r = -0,709, p = 0,005). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Tafel1: Parameters Gemeten op Masson Goldner-gekleurde Heart afdelingen.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Kritische stappen in het protocol
Fibrotisch weefsel kan nauwkeurig worden bepaald in een chronische MI rat model met behulp van een systematische bemonstering van de geoogste hart en het imago analyses van trichromatische-gekleurde histologische secties verkregen van basis tot apex. Twee stappen zijn vooral van belang voor een succesvolle implementatie protocol. Ten eerste, het gebruik van KCl voor hart oogsten kan de hartspier in een ontspannen toestand worden gehandhaafd. Deze stap is belangrijk voor vergelijkingen van infarct dimensies uit verschillende hart. Ten tweede, de nachtelijke fixering van de sectie in Bouin oplossing is kritisch voor helder trichroomkleuring verkrijgen.
Wijzigingen en problemen oplossen
Afwezigheid van kleuring kan ten gevolge van moeilijkheden tijdens het fixeren van de sectie in Bouin oplossing, zoals verminderde incubatietijd of vervallen Bouin oplossingen. De TTC kleuring is optioneel en could worden gebruikt om de infarctgrootte te visualiseren in een snelle, maar niet kwantitatief. Het is belangrijk op te merken dat TTC kan worden uitgevoerd voor hetzelfde hart vóór de opname in hetzij oktober of petroleum.
Beperkingen van de Techniek
De onderhavige benadering maakt het mogelijk te kiezen tussen paraffine en cryo-geconserveerd hart secties en kan worden gebruikt voor immunokleuring. Niettemin volledige hart moet worden doorgesneden, en het weefsel kan niet worden gebruikt voor verdere analyse, zoals western blot of RT-PCR voor eiwitten en genexpressie analyses.
Betekenis van de techniek met betrekking tot bestaande / Alternative Methods
Omdat de kwantificering procedures en met name het aantal geanalyseerde secties variëren sterk tussen onderzoeken, het minimaal vereiste aantal onderdelen nodig voor het verkrijgen van een betrouwbare kwantificatie van het grootste belang. Takagawa et al. 9 aangetoond dat betrouwbaarheid gemaximaliseerd met een minimale hart segmentnummer van 6-8 delen van het gehele hart van een muis met behulp van 1 mm intervallen. In het huidige protocol, 5 - 7 werden delen van het hele rat hart verkregen bij het uitvoeren van 2 mm dik snijden. Voorts 2 mm secties zijn standaard en veel gebruikte maat voor TTC kleuring. Bovendien, de systemische bemonstering is eenvoudig aan te brengen en geeft periodiek aspect dat karakterisering van het gehele hart toelaat.
Van elk van de 2-mm schijven werden 5-um secties gesneden en gekleurd. Voor elke 5-um sectie, kwantificering van de septum dikte, litteken dikte en lengte, de totale litteken oppervlakte, de totale oppervlakte LV en LV holte gebied werden uitgevoerd, en het gemiddelde van elke parameter werd berekend per dier. We gebruikten Masson-Goldner kleuring van dunne secties plaats TTC kleuring van 2 mm secties om de nauwkeurigheid van zowel de automatische kleurdetectie en betere evaluatielengtes. Inderdaad, TTC kleuring is vooral interessant voor de vroege-fase of ischemische reperfusie modellen voor de detectie van het risicogebied 8,14 in plaats van voor de chronische fase.
MI geïnduceerde uit LAD ligatie kan variëren afhankelijk van de ligatuur terrein. In de gepresenteerde chronische infarct model, werd de ligatie grootte opzettelijk aangepast voor elk dier, en de resultaten voor de verschillende voorwaarden van de grootte van het infarct en remodeling aanwezig is na 6 weken waren. Dienovereenkomstig, de berekende EI onthulde een uitgebreide lijst van myocardiale infarcten en ondersteund het geconstateerde verschil in hartfunctie gecorreleerd met EF. Wanneer uitgebreide verdunning van het infarct segment plaatsvond, werd het gebied van het infarct sterk verminderd bij transmurale fibrose. In deze toestand, waarin de infarctgrootte door het berekenen van het gebied van het littekenweefsel op basis van het geheel LV (uitgedrukt als percentage van de LV) zou zwak evalueren van de omvang van het infarct. Het gebrek aan consideration voor remodeling geïnduceerde LV dilatatie en extreme verdunning van het infarct LV wand kan de infarctgrootte onderschatten, terwijl een infarct in de afwezigheid van wandverdunning zou overschatten de infarctgrootte, zoals weergegeven door de waarden buiten het vertrouwen 95% interval. Deze tekortkoming kan worden weggenomen door een berekening van de EI.
Aangetoond is dat de LV vormverandering positief gecorreleerd met de EI en wandverdunning 15, 16. Hoewel EI voorspeller van LV functie kan worden, is het belangrijk te benadrukken dat echocardiografie en histologische analyses complementair methoden om de myocardiale infarct beoordeeld op de functionele en weefselniveau, respectievelijk. Echocardiografie laat longitudinaal onderzoek en histologische analyses bieden fundamentele eindpunt assays die aanvullende kwantificatie van LV morfologie mogelijk, zoals wanddikte.
Toekomstige toepassingen of richtingen achterdeker Mastering deze techniek
De systematische bemonstering van het hele hart en de berekening van de EI zijn van bijzonder belang bij de beoordeling van chronische MI. Bovendien zal deze werkwijze geschikt voor de evaluatie van de werkzaamheid van de behandeling, met name voor nieuwe behandelingen, zoals cel- en matrix-gebaseerde behandelingen die gericht zijn op het verminderen van infarctgrootte en hermodellering. Betrouwbare kwantificering van infarctexpansie van het grootste belang voor vergelijkingen tussen behandelde en niet-behandelde dieren als eindpunt histologische analyses beletsel voor de vergelijking van infarctgrootte voor- en nabehandeling.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acrylic rat heart matrix 2 mm | 72-5015 | Harvard Appartus | |
| Inspira advanced volume controlled ventilator | Harvard Apparatus | 557058 | |
| Catheter Insyte 14 G | BD | 381267 | |
| O.C.T | BDHA361603E | VWR | |
| TTC | T8877-10G | Sigma Aldrich | |
| Mayer hematoxylin | MHS32-1L | Sigma Aldrich | |
| Acid Fuchsin CI 42685 |
F8129-50G | Sigma Aldrich | |
| Ponceau Xylidin CI 16150 |
P2395-25G | Sigma Aldrich | |
| Orange G CI 16230 |
O3756-100G | Sigma Aldrich | |
| Light green CI 42095 |
L5382-25G | Sigma Aldrich | |
| KCl | P9333-500G | Sigma Aldrich | |
| Xylol | 10315083 | HoneyWell | |
| Ethanol absolute | 10303990 | HoneyWell | |
| 2-methylbutane | M32631-1L | Sigma Aldrich | |
| Stereogical microscope | SM2800 | Nikon | |
| Formaldehyde | 99340 | Reactolab | |
| Embedding cassette | K113.1 | Carl Roth | |
| Bersoft Image measurement Software | Bersoft.com | Licensed software |
References
- Amsterdam, E. A., et al. AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).
- Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment. JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).
- Frobert, A., et al. Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models. Front Physiol. 6, 353 (2015).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).
- Guex, A. G., et al. Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization. Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).
- Landa, N., et al. Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat. Circulation. 117, 1388-1396 (2008).
- Valente, M., et al. Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize. Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).
- Csonka, C., et al. Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).
- Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model. Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).
- Lichtenauer, M., et al. Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation. Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).
- Lutgens, E., et al. Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes. Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).
- Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix. J Vis Exp. , e51390 (2014).
- Takagawa, J., et al. Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches. J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).
- Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. Am Heart J. 101, 593-600 (1981).
- Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion. Circulation. 78, 186-201 (1988).
- Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat. J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).
