Introduction
Miyokard infarktüsü (Mİ) dünya çapında ölüm ve sakatlık önde gelen nedenidir. Koroner kalp hastalığı ana nedenidir; MI böyle tıkanıklığı koroner olaylara ardışık iskemi kaynaklanır. reperfüzyon ilk 6 saat içinde gerçekleştirilen olmadığında, iskemi geri dönüşü olmayan miyokard nekrozu neden olur. Hastalarda, MI karakterizasyonu klinik bulgular, elektrokardiyografi, biyomarkerlerin, ekokardiyografi, MR görüntüleme plazma seviyelerinin değerlendirilmesi dahil olmak üzere farklı tanı araçları, dayanır ve histolojik 1 analizleri. Akut ve kronik MI koroner oklüzyon zaman miyokard nekrozu göreli zamanlamasına göre yaralanma iki farklı aşamalarında olarak sınıflandırılır. ilk 7 günü içinde ortaya çıkan akut faz, kardiyomiyositlerin kaybı, detaylı enflamasyon ve fibroblastların alımı ile ilişkilidir. kardiyak doku ve bir yara oluşması iyileşmesi ile karakterize edilen bir alt-akut faz, meydana1 ila 4-6 haftadır. enfarktüs, ventrikül duvar incelmesi ve ventrikül dilatasyon Genişleme kronik faz karakterize eder. Sol ventrikül geniş biçimlenme giderek şiddetli kalp yetmezliği 2 sonuçlanır.
Kalıcı sol ön inen arter (LAD) ligasyonu ile uyarılan MI kronik miyokard infarktüsü standart kemirgen modeli temsil eder. Koroner bağ taklit koroner oklüzyon. infarkt büyüklüğü ligasyonu sitede bağlıdır. Bir kemirgen modelinde miyokard iskemik hasar Karakterizasyonu klasik gibi troponin olarak biyobelirteç plazma seviyelerini, kullanılarak yapılır I ve T 3, ekokardiyografi, MR ve histoloji 4,5. Biyomarker seviyeleri Kardiyomiyosit ölüm yaygınlığı ile ilişkilidir. Ekokardiyografi, bölgesel duvar hareket bozukluğu kaynaklanan sol ventrikül fonksiyon bozukluğu değerlendirir. MRI veya yüksek çözünürlüklü olarak eklenmesi, non-invaziv görüntüleme teknikleri, içindeekokardiyografi, duvar hareketi azalma değerlendirilmesine olanak azaltılmış perfüzyon ve canlı miyokard ve duvar incelme ile yara alanının hacmi. LV boyutları infarkt doğru değerlendirilmesine izin verir. Son olarak, canlı ve ölü miyokardın miktar hasat kalplerin histolojik bölümlerde özel boyalar kullanılarak otopsi yapılmış ve enfarktüs boyutunu (IS) doğrulanmasını sağlar edilebilir. Bir diğer önemli özelliği enfarktüs genişleme indeksi (EI) 6 değerlendirilmesidir. EI ilk 3 gün içinde transmural enfarktüs ve başlar ilişkilidir. EI duvar kalınlığı artan bir şekildeki azalma, sol ventrikül boşluğu boyutunda bir artış ve AG şeklinde buna bağlı olarak değişiklikler ile karakterizedir.
yeni tedavilerin terapötik etkinliğini değerlendirmek için - özellikle rejeneratif stratejiler hücreler, matrisler dayalı ve kemirgenlerde MI gen teslimi-doğru bir değerlendirme büyük önem taşımaktadır.papiller kas düzeyinde elde edilen tek bir kesitte ölçülen zaman, IS boyutu LAD ligasyon aşağıdaki enfarktüs gelişme var büyük değişkenlik nedeniyle önyargılı olabilir; tepe infarkt sonra occulted olabilir. Önemli olarak, tespit MI boyutuna daha doğru metodolojiler fareler 7-9 ya da sıçanlar 10 için tarif edilmiştir. Bununla birlikte, IS doğru LV biçimlenme ya da yeniden terapötik uyarılan azalmalar (veya önleme yollarını) ölçmek için yeterli değildir. Gerçekten de, genel olarak kalbin kesitleri üzerinde belirlenen toplam LV hacminin bir yüzdesi olarak ifade edilir. Bu yöntem, akut MI için geçerli olmasına karşın, yeniden sırasında meydana gelen AG duvarının incelmesi 11,12 değerlendirdi altında kalır. infarkt ve yapısal değişikliklerin tam bir morfometrik ölçümü gibi endokardiyal ve epikardiyal uzunluk ve çaplarda yanı sıra enfarktüs ve sağlıklı alanlar gibi çeşitli parametreler, ölçmek gerekir. Biz bir metodolojik yakl tarifoach doğru kronik sıçan modelinde MI ve yenileme değerlendirmek.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm hayvanlar Hayvan Bakım Dair Avrupa Sözleşmesi uyarınca insancıl bakıma aldı. Cerrahi işlemler İsviçre Federal Veterinerlik Dairesi, İsviçre tarafından onaylanan Devlet Veterinerlik Ofisi, Fribourg, izin aldıktan sonra İsviçre Hayvanları Koruma Kanunu uyarınca yapıldı.
1. Kalp Hasat
NOT: Tüm cerrahi girişimler izofluran anestezi altında yapıldı. Çabaları hayvan acı azaltmak için yapılmıştır. Özel olarak, bütün hayvanlar 0.1 mg / kg buprenorfin ön anestezi deri altı enjeksiyonu yapıldı. Miyokard enfarktüsü inducting için cerrahi protokol daha önce başka bir yerde 13 tarif edilmiştir.
- Anestezi (entübe hayvan,% 2,5 izofluran, pençe tutam refleks ile teyit uygun anestezi) altında myocardially enfarkte hayvan üzerinde bir sternotomi gerçekleştirin.
- Daha sonra kasları cilt kesme ve hayvansal açıncerrahi makas ile. sol ve sağ kaburga kesin ve ardından göğüs çıkarın.
- Bir önceki ameliyatı (LAD ligasyonu) sonra kalan yapışıklıklar çıkarın. aort kesin ve kalp kaldırmak. (PBS içinde) 1 M KCl doku yerleştirin ve daha sonra PBS ile yıkayın.
2. Doku Hazırlanması
- akrilik sıçan kalp matris içinde uzunlamasına infarkt kalbi koyun. 1 saat boyunca -20 ° C'de saklayın.
- Bir çapraz olan bir traş makinesi bıçak kullanılarak matris içinde doğrudan kalp kesin. Her dilim sağlamak 2 mm kalınlığında. (Remodeling seviyesine göre) her kalp için 7 slaytlar - yaklaşık 5 Cut Bu sistematik örnekleme denir.
- Bu aşamada, 2,3,5-triphenyltetrazolium klorür (TTC) boyama performans (kalp dilimleri tabanına-to-apeks yönünü tutmak) isteğe bağlıdır.
- 37 ° C'de 50 dakika boyunca PBS içinde% 1 TTC inkübe edin. 1 saat 20 dakika süreyle% 4 paraformaldehid (PFA) içinde inkübe edin. betwee bölümleri koymakn 2 mm pullarla iki cam plakalar ve 15X büyütmede bir kamera ile birleştiğinde stereolojik mikroskobu ile fotoğraf çekmek.
DİKKAT! Paraformaldehit toksiktir.
- 37 ° C'de 50 dakika boyunca PBS içinde% 1 TTC inkübe edin. 1 saat 20 dakika süreyle% 4 paraformaldehid (PFA) içinde inkübe edin. betwee bölümleri koymakn 2 mm pullarla iki cam plakalar ve 15X büyütmede bir kamera ile birleştiğinde stereolojik mikroskobu ile fotoğraf çekmek.
- Slayt dondurma (1. seçenek)
- (Kalıbın alt aşağı bölümün apeks odaklı tarafını yerleştirin) yönünü korumak cryotomy için orta (optimum kesme sıcaklığı, OKT) montaj bir plastik kalıp (10 x 10 x 5 mm) her slayt koyun. 15 dakika - 10 soğutma sıvı azot altında 2-metilbütan buharları ile blokları dondurun. Son olarak, -80 ° C de doku saklayın.
- Paraffinization (2. isteğe bağlı)
- 24 saat süreyle% 4 PFA sonra her kasetleri gömme slayt (aşağı kasetin altındaki bölümünün apeks odaklı yan koyarak yönünü korumak) ve yerleştirin. Bir doku işlemci makine gecede koy.
- 2 saat boyunca, etanol% 70 içinde inkübe edin. Ethan içinde inkübe2 saat boyunca 95% ol. 3 saat% 100 etanol içinde inkübe edin. 4 saat ksilol içinde inkübe edin. 5 saat (bir fırın içinde 60 ° C 'de erimiş) parafin içinde inkübe edin. Son olarak, parafin her kalp slayt gömerek blok yapmak.
- 24 saat süreyle% 4 PFA sonra her kasetleri gömme slayt (aşağı kasetin altındaki bölümünün apeks odaklı yan koyarak yönünü korumak) ve yerleştirin. Bir doku işlemci makine gecede koy.
3. Masson-Goldner Trikrom Boyası
- (: 5 mikron kalınlığında) ya da -18 ° C'ye ayarlanmış bir kriyostat ile Ekim bloklardan (kalınlığı: 7 mikron) manuel mikrotom ile parafin bloklardan doku bölümleri yapın.
- Masson-Goldner ile - (slayt başına 4 enine kesitleri 3) trikrom boyama (bkz) her sıçan için her kalp kısmından bir slayt Leke.
NOT: parafin kesitler için bu adımdan başlayın.- bir fırın içinde 60 ° C 'de slaytlar eritin. davlumbaz altında, 10 dakika her biri için iki kez ksilol onları deparaffinize. 3 dakika her biri için% 100 etanol,% 95 etanol,% 70 etanol ve distile suda rehidrate.
Not: cryosection bu aşama Başlangıçs. - Bouin çözümü gecede bunları düzeltmek. 15 dakika - Sonra, 10 musluk suyu ile durulayın. damıtılmış su içinde çalkalanır. 3 dakika boyunca Mayer hematoksilin bunları inkübe edin.
- slaytları çıkarın ve 5 dakika için damıtılmış su içinde bırakın. Daha sonra, 5 dakika boyunca asit Fuchsin-Ponceau bunları inkübe edin. 1 dakika için% 1 asetik asit ile durulayın.
- Daha sonra, 1 dakika için fosfomolibdik asit Orange G inkübe. 1 dakika süre ile% 1 asetik asit ile durulayın, 10 dakika boyunca hafif bir yeşil boya bunları tasarlamak ve 1 dakika süre ile% 1 asetik asit içinde çalkalanır.
- % 70 etanol (30 sn),% 95 etanol (30 sn), ve% 100 etanol (5 dakika) bunları kurutmak. , Doku kesitlerinde bir reçineli montaj orta bir damla koymak lamelleri ile onları karşılamak ve kurumaya bırakın.
- bir fırın içinde 60 ° C 'de slaytlar eritin. davlumbaz altında, 10 dakika her biri için iki kez ksilol onları deparaffinize. 3 dakika her biri için% 100 etanol,% 95 etanol,% 70 etanol ve distile suda rehidrate.
4. Enfarktüs Boyut Analizi
- Bir kamera ile birleştiğinde bir stereomikroskopta (15X büyütme) her slayttan bir görüntü kazanır. Aynı ayarıyla bir cetvel fotoğrafs.
- enfarktüs, septum kalınlığı, sol ventrikül (LV) oyuğu alanı, infarkt alanı ve kullanma LV doku alanının ortasında skar kalınlığını ölçmek için görüntü analiz yazılımı kullanın.
- Cetvel resmi (Şekil 1A) ile ölçeği ayarlayın.
- Daha sonra Set Dönüşüm Faktörü seçin Ölçümleri tıklayın. Kalibrasyon çubuğunda bir çizgi çizin. Sağ resmin üzerine tıklayın ve Bitiş kalibrasyon tıklayın. Bar değerini not alın ve sonra Tamam 'ı tıklatın.
- Lekeli kalp resmi (Şekil 1B) den LV seçin. Birden bölüm aracını kullanın. LV noktası-by-point seçin ve ardından sağ tıklayın Kopyala / Yapıştır her yerde.
- Tek parça ölçüm aracını kullanarak skar ve septum kalınlığı ölçmek (Şekil 1C
- Otomatik LV boşluğu, infarkt tespit ve LV alanları RGB modunda (Şekil 1D) otomatik alan ölçümü aracını kullanarak.
- aracını tıklayın. Etkinleştirin Sadece Sınırlar ve RGB modunda bitişik. Son olarak, bunu tespit etmek ilgi alanı içinde tıklatın. Gerekirse, hassas aletler kullanın.
- Cetvel resmi (Şekil 1A) ile ölçeği ayarlayın.
- AG alanına infarkt alanı oranı olarak enfarktüs boyutunu hesaplayın.
- aşağıdaki gibi genişleme endeksi hesaplayın: [LV boşluğu alanı / bütün LV alanı] / [enfarktüs kalınlığı / septum kalınlığı], LV boşluğu ve LV doku alanlarında hem dahil bütün LV alanı ile.
- Sonunda şöyle, her kalp için bir "ortalama" hesaplamak: [infarkt slaytlar genişleme endeksinin ortalama] * [infarkt slaytlar sayısı slaytlar / toplam sayısı].
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Altı hafta sonra, LAD ligasyonu, kalpler Lewis sıçanlarında hasat edildi. 2 mm doku kesitleri tepesinden tabanına elde edilmiştir. Bir TTC boyama işlemi beyaz görünen infarkt alanı, ve kırmızı görünen sağlıklı miyokard, (Şekil 2) görselleştirmek için yapıldı. LAD ligasyonu sitede bağlı olarak, enfarktüs boyutu değişir. Büyük MI için transmural infarktlar taban (Şekil 2A) için tepesinden gözlendi. Daha küçük infarktlar kalp (Şekil 2B) orta bölümüne apeks görünür beyaz infarkt doku sundu. Küçük olmayan transmural infarkt için, fibrotik doku tepesi (Şekil 2C) için sadece bir ya da iki bölüm izlendi.
Her bir kalp dilim İnce 5 um'lik kesitler kesilmiş ve Mason-Goldner trikrom ile lekelenmiştir. Kalbin bütün kesit resimleri vardıBir stereomikroskop altında edinilen (Şekil 3). Sağlıklı dokular yeşil, kırmızı ve bağ dokusu ortaya çıktı. Her rengin Ayrımı kolayca bir görüntü analiz yazılımı ile yapılabilir.
Enfarktüs ve septum, sol ventrikül kavite alanı ve LV toplam alanın kalınlıkları ölçüldü ve EI (Tablo 1) hesaplamak için hesaplanmıştır. EI her bölüm için hesaplandı. Kalp boyutuna bağlı olarak, bölümlerin sayısı her kalp için 5 ile 7 arasında değişiyordu, EI her bölümünden EI bir ortalamasıdır. EI 0'dan 0.278 için değiştirilebilir ve% 58 CV ile, miyokard infarktüsünün geniş bir yelpazede ortaya koydu. Buna karşılık, LV enfarktüs yüzdesinin ortalaması% 54 (Tablo 1) 'in bir CV ile, 0 ile 0.241 edilmesi için değiştirilebilir. EI ve enfarktüs yüzdesi anlamlı korelasyon; parametrik olmayan Spearman analizi korelasyon katsayısı r-va sağlanan0.491 arasında Lue (p = 0.005) (Şekil 4A). Böyle 0.11 ve 0.13 olarak yakın EI değerleri için, enfarktüs yüzdesi 5,8% 24.1 ile değişmiştir.
Kalp fonksiyonu anestezi hayvanlar üzerinde 6 hafta sonrası LAD ligasyonu yüksek çözünürlüklü ekokardiyografi ile değerlendirildi ve önceki kalp hasat kez gerçekleştirildi. histolojik ölçümü hesaplanan EI EF ile korelasyon göstermektedir. Bir parametrik olmayan Spearman analizi -0,709 (p = 0.005) (Şekil 4B) bir r-değer sağladı.
Görüntü Analiz Yazılımı Kullanımı Şekil 1. Adım-adım Çizim. Otomatik renk sınırlandırılması ve uzunluk ölçümleri birkaç adım dahil. A. Kalibrasyon: görüntünün ölçeği kuruldu. Bir resimCetvel kalp bölümü aynı koşullarda alındı. Cetvelin uzunluğu ölçek dönüştürme faktörü tanımlamak için kutlandı. milimetre piksel dönüşüm yapıldı. B. LV seçimi: Sağ ventrikül yazılım seçim aracını kullanarak resmin dışında kesildi. C. LV duvar ve septum kalınlığı ölçümü: Tek ölçüm aracı mesafeleri ölçmek için kullanıldı. Ölçek çubukları 3 mm göstermektedir. D. Otomatik alan ölçümü: Otomatik renk sınırlandırılması RGB modunda yapıldı. Otomatik seçimi otomatik seçim modunu seçtikten sonra yapıldı. Renk dayalı seçim değiştirilebilir; Araştırmacı seçilen yeşil doku görsel kontrolünü gerçekleştirilen ve artan veya gerektiği gibi seçili bölgeyi azalmıştır. Ölçek çubukları 3 mm göstermektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız. 
Şekil 2. Kalp Bölümleri TTC ile Vitray. tam kalp 2 mm'lik kesitler TTC ile boyandı. Sağlıklı miyokard beyaz, kırmızı ve fibrotik dokuların ortaya çıktı. Farklı infarkt boyutları ile üç kupa sunulmaktadır. A: büyük transmural enfarktüsü, B, orta enfarktüsü, ve C: Küçük enfarktüs. Ölçek çubukları 3 mm göstermektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Masson-Goldner Trikrom ile Vitray Şekil 3. Kalp Bölümleri. 5 mikron bölümleri 6 hafta sonrası LAD ligasyonu elde edilen her kalp bölümünden kesildi. stained bölümler bir stereo mikroskop altında yerleştirilmiştir. Tam bölümlerin Resimleri 15X büyütme ile elde edilmiştir. papiller kasların (geri ok) seviyesinde elde edilen temsili resim, yeşil, kırmızı ve fibrotik dokuların sağlıklı miyokard gösterir. resim görüntü analiz yazılımı ile otomatik renk sınırlandırmasını yanı sıra enfarktüs ve septum kalınlığı ölçüldü hangi siteyi (siyah çizgiler) göstermektedir. Ölçek çubukları 3 mm göstermektedir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
Genişleme Endeksi (EI) ve İnfarkt İlgili Yüzdesi Arasındaki Şekil 4. Korelasyon (A) ya da (EF) (B) LV. lineer regresyon (siyah çizgi) ve% 95 Confidence aralıkları (noktalı çizgiler) temsil edilmektedir. parametrik olmayan Spearman r-değeri bildirilmiştir. A: (p = 0.003, r = 0.567) enfarktüs ve EI yüzdesi anlamlı korelasyon. enfarktüs genişleme indeksi (EI) [LV kavite alanı / Bütün LV alan] / [enfarktüs kalınlığı / septum kalınlığı] olarak hesaplanmıştır. Bütün LV alan kombine LV boşluğu ve LV doku alanı olarak ölçüldü. enfarktüs yüzdesi LV doku alanı / infarkt doku alanı olarak hesaplandı. B: fonksiyon anlamlı EI ile ilişkili yüksek çözünürlüklü ekokardiyografi 6 hafta sonrası LAD ligasyonu değerlendirildi. Her iki parametre arasında anlamlı korelasyon (r = -0,709; p = 0,005). Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.
tablo1: Masson Goldner lekeli Kalp Bölümler üzerinde ölçülen parametreler.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Protokol çerçevesinde kritik adımlar
Fibrotik doku doğru hasat kalp ve görüntünün sistematik örnekleme yöntemiyle kronik MI sıçan modelinde değerlendirilebilir tabandan tepeye doğru edilen trichromatic lekeli histolojik kesitlerin analiz eder. Iki adım başarılı protokol uygulanması için özellikle önemlidir. İlk olarak, kalp hasat için KCI kullanımı kalp kası rahat bir halde muhafaza edilmesini sağlar. Bu aşama, farklı kalplerinden infarkt boyutlarının karşılaştırılması için önemlidir. İkincisi, Bouin solüsyonu bölümün gecede tespit parlak trikrom boyama elde etmek önemlidir.
Değişiklikler ve Sorun Giderme
boyanma olmaması bu tür azaltılmış inkübasyon süresi olarak Bouin solüsyonu, bölümün sabitlenmesi sırasında zorluklar nedeniyle olabilir ya da Bouin çözüm süresi dolmuş olabilir. TTC lekeleme isteğe bağlıdır ve coul olanhızlı ama olmayan niceliksel şekilde enfarktüs boyutunu görselleştirmek için kullanılabilir d. TTC önce OCT veya parafin ya dahil aynı kalp için yapılabilir olduğunu not etmek önemlidir.
Tekniğin Sınırlamalar
Mevcut yaklaşım bir parafine gömülmüş ve cryo-korunmuş kalp bölümleri arasında seçim yapmak ve immün için kullanılabilir izin verir. Bununla birlikte, tam kalp kesitli olmak zorundadır, ve doku, protein ve gen ekspresyonu analizi için Western blot ya da RT-PCR gibi, daha fazla analiz için kullanılamaz.
Mevcut / Alternatif Yöntemler Göre Tekniği Önemi
ölçümü prosedürleri ve özellikle olduğundan, analiz bölme sayısı güvenilir bir miktar çok önemlidir elde etmek için gerekli bölümlerin az sayıda tanımlayan araştırmalar arasında geniş ölçüde değişebilir. Takagawa et ark. 1 mm aralıkları kullanılarak bir fare bütün kalbi 8 bölümden - 9 güvenilirlik 6 minimum kalp dilim numarası ile maksimize edilir olduğunu göstermiştir. Mevcut protokolde, 5-2 mm kalınlığında bölümlendirilmeleri yaparken tüm sıçan kalbinin 7 kesitler elde edilmiştir. Ayrıca, 2 mm'lik kesitler TTC lekelemesi için standart ve sık kullanılan bir boyutu vardır. Buna ek olarak, sistemik numune uygulamak kolaydır ve tüm kalbin nitelenebilmesine olanak veren periyodik yönünü göstermektedir.
2 mm'lik dilimler her kaynaktan, 5-um kesitler kesildi ve boyandı. Her 5 mikron bölümü için, septum kalınlığı, skar kalınlığı ve uzunluğu, toplam skar alanı, toplam LV alanı ve LV kavite alanı ölçümü yapıldı ve her bir parametrenin ortalama hayvan başına hesaplandı. Biz otomatik renk algılama ve değerlendirme hem de doğruluğunu geliştirmek için oldukça 2 mm bölümden TTC boyama daha ince kesit Masson-Goldner boyama kullanılanarasında uzunlukları. Gerçekten de, TTC lekelemesi çok kronik aşaması için daha risk 8,14 altında olan bir alanın saptanması için erken faz veya iskemik reperfüzyon modelleri çoğunlukla ilginçtir.
MI bağ sitesi bağlı olarak değişebilir, LAD ligasyonu indükledi. sunulan Kronik enfarktüs modelinde, ligasyon boyutu kasıtlı her hayvan için modifiye ve enfarktüs boyutu ve biçimlenme çeşitli koşullar için sonuçlar 6 hafta sonra mevcut idi. Buna göre, hesaplanan EI miyokard infarktüsünün geniş bir yelpazede ortaya çıktı ve EF ile ilişkili kalp fonksiyonunda gözlenen fark destekledi. Enfarktüslü segmentin detaylı incelme meydana geldiğinde, infarkt alanı büyük ölçüde transmural fibroz halinde azaltıldı. Bu durumda, (IV bir yüzdesi olarak ifade edilir), tüm LV göre enfarkt doku alanı hesaplanarak enfarkt boyutunu tanımlayan zayıf enfarktüs boyutunu değerlendirmek olacaktır. C eksikliğiduvar incelme yokluğunda bulunan bir enfarktüs infarkt fazla tahmin ediyorum iken temsil edilen remodeling kaynaklı LV dilatasyonu ve enfarktüs LV duvarının aşırı incelmesi için onsideration% 95 güven dışındaki değerlere göre, infarkt hafife olabilir Aralık. Bu eksiklik EI hesaplama yoluyla elimine edilebilir.
LV şekil değişimi olumlu EI ve duvar incelme 15, 16 ile ilişkili olduğu gösterilmiştir. EI LV fonksiyonu bir belirleyicisi olmasına rağmen, ekokardiyografi vurgulamak önemlidir ve histolojik analizler sırasıyla fonksiyonel ve doku düzeyinde miyokard enfarktüs değerlendirmek için tamamlayıcı yöntemlerdir. Ekokardiyografi uzunlamasına çalışma sağlar ve histolojik gibi duvar kalınlığı olarak LV morfolojisinin ek miktarının izin temel uç nokta deneyleri, temin analiz eder.
Kıç gelecekteki uygulamalar veya Tarifier bu Tekniği Mastering
Kronik MI değerlendirirken tüm kalp sistemik örnekleme ve EI hesaplanması özel ilgi. Buna ek olarak, bu yöntem, tedavi etkinliğinin değerlendirilmesi için uygun olacaktır, örneğin hücresi- ve gibi yeni tedaviler, özellikle de enfarktüs boyutunu ve yenileme azaltmayı amaçlayan tedavi matris bazlı. son nokta histolojik enfarktüs boyutu öncesi ve tedavi sonrası karşılaştırılması engel analizleri olarak enfarktüs genişleme güvenilir ölçümü, işlenmemiş ve işlenmiş hayvanlar arasındaki karşılaştırmalar için büyük önem taşımaktadır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Acrylic rat heart matrix 2 mm | 72-5015 | Harvard Appartus | |
| Inspira advanced volume controlled ventilator | Harvard Apparatus | 557058 | |
| Catheter Insyte 14 G | BD | 381267 | |
| O.C.T | BDHA361603E | VWR | |
| TTC | T8877-10G | Sigma Aldrich | |
| Mayer hematoxylin | MHS32-1L | Sigma Aldrich | |
| Acid Fuchsin CI 42685 |
F8129-50G | Sigma Aldrich | |
| Ponceau Xylidin CI 16150 |
P2395-25G | Sigma Aldrich | |
| Orange G CI 16230 |
O3756-100G | Sigma Aldrich | |
| Light green CI 42095 |
L5382-25G | Sigma Aldrich | |
| KCl | P9333-500G | Sigma Aldrich | |
| Xylol | 10315083 | HoneyWell | |
| Ethanol absolute | 10303990 | HoneyWell | |
| 2-methylbutane | M32631-1L | Sigma Aldrich | |
| Stereogical microscope | SM2800 | Nikon | |
| Formaldehyde | 99340 | Reactolab | |
| Embedding cassette | K113.1 | Carl Roth | |
| Bersoft Image measurement Software | Bersoft.com | Licensed software |
References
- Amsterdam, E. A., et al. AHA/ACC Guideline for the Management of Patients with Non-ST-Elevation Acute Coronary Syndromes: a report of the American College of Cardiology/American Heart Association Task Force on Practice Guidelines. J Am Coll Cardiol. 64, e139-e228 (2014).
- Konstam, M. A., Kramer, D. G., Patel, A. R., Maron, M. S., Udelson, J. E. Left ventricular remodeling in heart failure: current concepts in clinical significance and assessment. JACC Cardiovasc Imaging. 4, 98-108 (2011).
- Frobert, A., et al. Prognostic Value of Troponin I for Infarct Size to Improve Preclinical Myocardial Infarction Small Animal Models. Front Physiol. 6, 353 (2015).
- Redfors, B., Shao, Y., Omerovic, E. Myocardial infarct size and area at risk assessment in mice. Exp Clin Cardiol. 17, 268-272 (2012).
- Guex, A. G., et al. Plasma-functionalized electrospun matrix for biograft development and cardiac function stabilization. Acta Biomater. 10, 2996-3006 (2014).
- Landa, N., et al. Effect of injectable alginate implant on cardiac remodeling and function after recent and old infarcts in rat. Circulation. 117, 1388-1396 (2008).
- Valente, M., et al. Optimized heart sampling and systematic evaluation of cardiac therapies inmouse models of ischemic injury: Assessment of cardiacremodeling and semi-automated quantification of myocardial infarctsize. Curr. Protoc. Mouse Biol. 5, 359-391 (2015).
- Csonka, C., et al. Measurement of myocardial infarct size in preclinical studies. J. Pharmacol. Toxicol. Methods. 61, 163-170 (2010).
- Zornoff, L. A., Paiva, S. A., Minicucci, M. F., Spadaro, J. Experimental myocardium infarction in rats: Analysis of the model. Arq. Bras Cardiol. 93, 434-440 (2009).
- Lichtenauer, M., et al. Myocardial infarct size measurement using geometric angle calculation. Eur J Clin Invest. 44, 160-167 (2014).
- Lutgens, E., et al. Chronic myocardial infarction in the mouse: cardiac structural and functional changes. Cardiovasc Res. 41, 586-593 (1999).
- Frobert, A., Valentin, J., Cook, S., Lopes-Vicente, L., Giraud, M. N. Cell-based therapy for heart failure in rat: double thoracotomy for myocardial infarction and epicardial implantation of cells and biomatrix. J Vis Exp. , e51390 (2014).
- Takagawa, J., et al. Myocardial infarct size measurement in the mouse chronic infarction model: comparison of area- and length-based approaches. J Appl Physiol (1985). 102, 2104-2111 (2007).
- Fishbein, M. C., et al. Early phase acute myocardial infarct size quantification: validation of the triphenyl tetrazolium chloride tissue enzyme staining technique. Am Heart J. 101, 593-600 (1981).
- Weisman, H. F., Bush, D. E., Mannisi, J. A., Weisfeldt, M. L., Healy, B. Cellular mechanisms of myocardial infarct expansion. Circulation. 78, 186-201 (1988).
- Mannisi, J. A., Weisman, H. F., Bush, D. E., Dudeck, P., Healy, B. Steroid administration after myocardial infarction promotes early infarct expansion. A study in the rat. J Clin Invest. 79, 1431-1439 (1987).
