Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

تطوير نموذج متوجا اللب مباشرة لتقييم اللب الجروح وتشكيل إصلاحي العاج في الفئران

Published: January 12, 2017 doi: 10.3791/54973
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1,2, 1,2, 1,2,3, 1,2
1The Shapiro Family Laboratory of Viral Oncology and Aging Research, The UCLA School of Dentistry, 2UCLA Jonsson Comprehensive Cancer Center, 3David Geffen School of Medicine at UCLA

Summary

نحن تصف طريقة خطوة بخطوة لأداء اللب المباشر متوجا على أسنان الفئران لتقييم التئام الجروح اللبي وتشكيل العاج الترميمي في الجسم الحي.

Protocol

تم شراء الفئران من مختبر جاكسون والاحتفاظ بها في الحظيرة خالية من مسببات الأمراض في شعبة جامعة كاليفورنيا في مختبر الطب الحيواني (DLAM). وأجريت التجارب وفقا للمبادئ التوجيهية المؤسسية وافقت لجنة البحوث الحيوانية المستشار (ARC # 2016-037).

1. ماوس التخدير

  1. استخدام البالغ من العمر ثمانية أسابيع الإناث الفئران C57 / BL6 (ن = 3).
  2. تخدير الفئران باستخدام الكيتامين (80-120 ملغم / كغم من وزن الفأر) / زيلازين حلول (5 ملغم / كغم من وزن الفأر) وإدارة البريتونى (الملكية الفكرية) بجرعة 10 مل / كغ.
  3. إعداد الكيتامين (80-120 ملغ / كلغ) / زيلازين (5 ملغ / كلغ) الحلول وإدارتها داخل الصفاق (IP) بجرعة 10 مل / كغ.
  4. تأكد من أن الفئران هي تخدير كامل عن طريق إجراء قرصة أخمص قدميه.

2. إجراء متوجا اللب

  1. وضع صاحب الفم في فم الفأر.
  2. تأمين حامل الفم على الطاولة بحيث يكون هويواجه إعلان التصاعدي.
  3. وضع المجهر (10X) على الجزء العلوي من الفم حتى أن أول ضرس الفك العلوي مرئيا بالكامل.
  4. باستخدام ¼ الجولة بر في قبضة عالية السرعة في 200،000 دورة في الدقيقة، وإزالة جزء المينا للأسنان في منتصف حتى اللب مرئيا من خلال عاج شفاف. لا تعرض اللب مع بر.
  5. باستخدام رقم 15 اللبية K-ملف (قطر 150 ميكرون)، خرم من خلال العاج وفضح اللب.
    ملاحظة: عناية خاصة يجب أن تؤخذ بحيث لا يحصل دفع الحطام العاج الى اللب. ويمكن تجنب ذلك عن طريق تدوير ملف K ثلاثة أشهر ثم سحب K-ملف خارج.
  6. مزيج MTA مع H 2 O معقمة وفقا لتعليمات الشركة الصانعة. تسليم ووضع MTA على اللب يتعرض مع طرف المستكشف. استخدام الجانب الخلفي من نقطة ورقة (غرامة) لحزمة MTA الى اللب كشفها بواسطة التنصت لطيف. الجانب سمكا من نقطة ورقة مسطحة، وبالتالي يسمحلالتكثيف السليم للMTA الى اللب عرضة للخطر.
  7. حفر السن عن 15 ثانية عن طريق وضع 35٪ منمش حمض الفوسفوريك حيث أنها تغطي فقط السن. عناية خاصة للحد من موضع منمش، لأنها قد تهيج أنسجة اللثة.
    ملاحظة: منمش يأتي في حقنة وتستخدم لتخشين أسطح الأسنان بحيث اللاصقة الأسنان يمكن أن تتدفق في التوسط الترابط الميكرو ميكانيكية على الأسنان. لأنها لزجة، ويمكن أن يكون من خلال تطبيق كميات صغيرة مباشرة على الأسنان مكتفية ذاتيا.
  8. استخدام الشفط السلبي لضغوط لإزالة منمش. استخدام بيليه القطن المشبع باستخفاف مع H 2 O لإزالة المخلفات من منمش. كرر هذه الخطوة حتى تتم إزالة منمش تماما من الأسنان.
  9. باستخدام خرقة الهواء المضغوط، يجف بلطف الأسنان.
  10. تطبيق المواد اللاصقة الأسنان باستخدام مساعدات من نقطة ورقة.
  11. جعل طبقة لاصقة رقيقة باستخدام الهواء المضغوط لمدة 3 ق.
  12. Cلدى عودتهم من المواد اللاصقة الأسنان لمدة 20 ق باستخدام وحدة المعالجة الخفيفة.
  13. وضع مركب flowable بكميات صغيرة على الأسنان الذي توج مع MTA. استخدام غيض من المستكشف في التدفق المركب في الأخاديد الأسنان.
  14. علاج مركب لمدة 30 ثانية باستخدام وحدة خفيفة علاج لبلمرة ذلك. تأكد من أن مركب يتم الشفاء الكامل والثابت باستخدام المستكشف.

3. بعد المرجع الرعاية

  1. إدارة كاربروفين (5 ملغ / كلغ) تحت الجلد (SC) على الفور بعد العملية متوجا اللب.
  2. وضع الفئران على وسادة التدفئة على الطاقة المنخفضة للحفاظ على الحيوانات دافئة قبل أن يستيقظ.
  3. عودة الفئران إلى الحظيرة للسكن.

4. الأنسجة المشتريات

  1. بعد 5-6 أسابيع، الموت ببطء الفئران عن طريق التفكك عنق الرحم تحت التخدير حالة كاملة مع isoflurane.
  2. إزالة بعناية الفك العلوي من قاعدة الجمجمة ووضعها في أنبوب 50 مل. إصلاح entirالبريد الفك العلوي يحتوي على كل من الأسنان المغطاة اللب والأسنان لم يسبق لهم اللعب المقابل في 4٪ امتصاص العرق في برنامج تلفزيوني، ودرجة الحموضة 7.4، في 4 درجات مئوية خلال الليل، ومن ثم تخزينها في حل الإيثانول 70٪.
    ملاحظة: لامتصاص العرق غير سامة ومسرطنة. وينبغي رصد استخدام امتصاص العرق الصحيح على النحو المبين في إجراءات التشغيل القياسية (SOP).
  3. مسح لفك الماوس باستخدام الفحص μCT. لتأمين لفك خلال المسح الضوئي، والتفاف عينات بشاش غارقة مع 70٪ من الإيثانول ووضعها في أنبوب ثقافة الخلية 15 مل.

5. μCT الضوئي

  1. تحضير عينات للμCT المسح. لفترة وجيزة، والتفاف العينات بشاش غارقة مع 70٪ من الإيثانول وتأمينها في 15 مل أنبوب مخروطي ثقافة الخلية عام. تركيب أنبوب على خشبة المسرح المسح μCT، على النحو المبين في تعليمات الشركة الصانعة.
  2. تعيين مصدر الأشعة السينية إلى تيار 145 أمبير، والجهد من 55 KVP، ومدة التعرض من 200 مللي ثانية.
  3. أداء الحصول على الصور مع الماسح الضوئي μCT في قرار 20 ميكرون ومع آل مرشح 0.5 مم.
  4. إعادة بناء صورة وتصور ذلك (11).
  5. مرة واحدة الفحص μCT كاملة، بدء زوال الكلس مع 5٪ EDTA و 4٪ سكروز في برنامج تلفزيوني (الرقم الهيدروجيني 7.4) لمدة 2 أسابيع.

6. معالجة الأنسجة وتلطيخ

  1. تضمين الأنسجة decalcified في البارافين. قبل تضمين، وتقليم الفك العلوي عن طريق إجراء خفض السهمي الأمامي فورا إلى الرحى الأولى. في حين التضمين، ضع هذا السطح إلى الأسفل، بحيث المقطع الطولي للرحى الأول هو سطح القطع.
  2. باستخدام مبضع للفحص المجهري، وإعداد 5 ميكرون شرائح سميكة. وتتزامن هذه المناطق متوجا اللب عادة مع distopalatal (DP) الجذر، والتي يمكن استخدامها كمعلم. تحديد المنطقة التي تهم عن طريق فحص الأنسجة تحت المجهر الضوئي ومقارنة الصور μCT.
  3. لH & E تلطيخ، deparaffinize وترطيب الشرائح مع زيلين (2X) والايثانول المخفف متسلسل (100٪ ETOH 2X، 95٪ ETOH 2X، و 70٪ ETOH 1X).
  4. شطف الشرائح مع تشغيل ماء الصنبور.
  5. وصمة عار مع حل الهيماتوكسيلين لمدة 2.5 دقيقة ويشطف بماء الصنبور.
  6. تراجع الشرائح في الايثانول 95٪ لمدة 1 دقيقة.
  7. وصمة عار مع حل يوزين لمدة 1 دقيقة ويشطف بماء الصنبور.
  8. يذوى مع الإيثانول المخفف متسلسل (70٪ ETOH 1x، ل95٪ ETOH 2X، و 100٪ ETOH 3X) والزايلين (3X).
  9. جبل الشرائح مع تصاعد الحل.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

هنا، أظهرنا الإجراءات خطوة بخطوة لأداء اللب متوجا على أسنان الفئران. أحد الجوانب الرئيسية من اللب السد في الفئران هو أن يكون الجهاز مناسبا. في هذا الصدد، وجود مجهر مع التكبير السلطة 10X من الضروري (الشكل 1A). لإنشاء إعداد الفئة I-تشبه في السن، كنا لدغ ¼ جولة في سرعة عالية الكهربائية قبضة في 200،000 دورة في الدقيقة (الشكل 1B). بدلا من ذلك، أي محركات أخرى، بما في ذلك تلك التي تستخدم الهواء المضغوط، ويمكن استخدامها لإعداد الأسنان.

في الشكل 2A-2E، مبينة الخطوات تمثيلية لأداء اللب السد. تم تنفيذ إعداد-الدرجة الأولى مثل (الشكل 2B). لأن رذاذ الماء قد يغرق الفئران خلال هذا الإجراء، لا ينصح باستخدامه. لهذا السبب، فمن الضروري لتحضير الأسنان مع طيف وintermittent السكتات الدماغية لمنع ارتفاع درجة الحرارة. من المستحسن استخدام الهواء المضغوط أيضا لتوفير آثار التبريد. بينما تعرض اللب مع ملف اللبية، أخذ الحيطة والحذر على عدم دفع الحطام العاج الى اللب، لأن هذا قد تتداخل مع تفسير البيانات في تشكيل العاج الترميمي (الشكل 2C). ويمكن تجنب ذلك باستخدام الهواء المضغوط. وبالمثل، يجب وضع MTA على اللب يتعرض دون دفع بعيدا جدا في اللب. MTA وضع لا يمكن أن يتحقق عن طريق استخدام مساعدات من نقطة ورقة مع حركات الدق طيف (الشكل 2D). وبعد وضع MTA، يجب تنظيف الأسنان باستخدام H 2 كريات القطن يا غارقة لإزالة أي MTA المتبقية في الأخاديد، والتي قد تتداخل مع ربط المركب على الأسنان. وتستخدم الطرق التقليدية لاستعادة المركبة، بما في ذلك الحفر على أسطح الأسنان، فتيلة، وارتباط مع مواد لاصقة، ووضع وعلاج المركبة flowable (الشكل 2E).

بعد ستة أسابيع تغطية اللب، تم حصاد الفئران، وصورت وجهة نظر كبار للتأكد من أن المركبة كانت لا تزال على حالها (الشكل 3A). وأظهر المسح μCT الركود كبيرا من مساحة اللبي في المجموعة المغطاة اللب (الشكل 3B)، مما يوحي بأن عاج الترميمي تشكلت في اللب. أخضعت العينات الأنسجة decalcified إلى H & E تلطيخ لمواصلة دراسة تشريحيا تشكيل العاج الترميمي في الجسم الحي. في السيطرة على المجموعة، وكانت طبقات الأرومة السنية (OB) واضحة بشكل بارز حول حواف عاج (الشكل 4A - 4C). في المقابل، كانت جماعة متوجا اللب كميات كبيرة من العاج الترميمي (RD) التي تشكلت في الفضاء اللبي (الشكل 4D - 4F). ومن المثير للاهتمام، كشف فحص دقيق أن عاج الترميمي (RD) عرضت سمة نموذجية من عاج (على سبيل المثال، ق خطوط triated تمثل الأنابيب عاجية، السهم الأحمر)، وكذلك من العظام (على سبيل المثال، خلية عظمية تمثل بانيات المحاصرين، السهام السوداء). عندما كنا الملون للعاج مصفوفة البروتين 1 (DMP1)، علامة للتمايز سني المنشأ 12، وجدنا زيادة كبيرة في التعبير DMP1 في لب الأسنان المغطاة اللب عندما مقارنة بما كان عليه من الأسنان لم يسبق لهم اللعب (الشكل 5A و5B) ، مشيرا إلى أن عاج الترميمي تشكلت داخل اللب.

شكل 1
الشكل 1: إعداد المعدات اللازمة لإجراء لب-السد. (A) مجهر (10X) لتصور الأسنان الماوس. (ب) قبضة عالية السرعة والمحرك محرك كهربائي لإعداد إعداد الدرجة الأولى لفضح اللب.= "_ فارغة"> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الشكل 2: خطوات التمثيلية في إجراء السد. (A) الأسنان غير مستعد على الرحى الأولى العلوية في الماوس. (ب) إزالة المينا الأولية باستخدام مدار ربع بر. (ج) تعرض اللب باستخدام ملف اللبية. (D) MTA وضع في اللب عرضة للخطر. (E) مركب وضع ترميم الأسنان. ويمثل الشريط 500 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (3)
الشكل 3: عرض السريرية وμCT Scanninغرام من الأسنان توج اللب ولم يسبق لهم اللعب في الفئران. (أ) عرض الإطباق للفك العلوي الماوس على الأسنان المغطاة اللب (يسار) والأسنان لم يسبق لهم اللعب (يمين). (ب) الصور μCT مستعرضة للفك العلوي. ويمثل الشريط 500 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل (4)
الشكل 4: دليل النسيجي للإصلاحي العاج تشكيل في فيفو. (AC) H & E تلطيخ من لم يسبق لهم اللعب الرحى الأولى العلوية في الماوس في 100X، 200X، 400X و. تلطيخ (DE) H & E من الفك العلوي الضرس الأول المغطاة اللب في الماوس في 100X، 200X، 400X و. ويمثل الشريط 100 ميكرون (طبقات OB = مصورات العاج، RD = عاج الترميمي، السهام السوداء =خلية عظمية. السهم الأحمر = الأنابيب عاجية). الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الرقم 5
الرقم 5: المناعى تلطيخ من DMP1. (A) DMP1 تلطيخ من لم يسبق لهم اللعب الرحى الأولى العلوية في الماوس في 400X. (ب) تلطيخ DMP1 من الفك العلوي الضرس الأول المغطاة اللب في الماوس في 400X. ويمثل الشريط 100 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

حاليا، هناك العديد من النماذج التجريبية المختلفة المتاحة للتحقق من صحة الآثار في الجسم الحي من مواد طب الأسنان، السقالات، أو عوامل النمو على التفرقة سني المنشأ من الخلايا الجذعية لب الأسنان (DPSCs) 13. وتشمل هذه النماذج زرع خارج الرحم ذاتي من DPSCs إلى الجهاز، مثل كبسولة الكلى، أو زرع تحت الجلد في الفئران DPSCs المناعة مع السقالات 14،15. ومع ذلك، فإن هذه الأساليب محدودة في هذا الشأن سني المنشأ على DPSCs لا يتم تنفيذ في البيئة اللب مثلي. من ناحية أخرى، وتستخدم زرع مثلي الى اللب أو لب-السد الإجراءات على الأسنان في الحيوانات الكبيرة 16،17. على الرغم من أن هذه النماذج ذات قيمة في تقييم إمكانية سنية في البيئة مثلي، واستخدام تلك النماذج هو الرصدية إلى حد كبير في الطبيعة، وتقديم رؤى الآلية محدودة على الشفاء اللب الجرح وتشكيل العاج الترميمي. في هذه الورقة، ونحن نقدم وسيلة مفصلا لأداء اللب السد في الفئران. ويشمل هذا الإجراء خطوة بخطوة التخدير الفئران، وإعداد تجويف الدرجة الأولى مثل، وضع مواد السد اللب، وحصاد للفك وتحليل مع μCT مسح وتقييم عينات الأنسجة لتكوين عاج الترميمي. سيكون لدينا نموذج الفأر السد اللب يكون في استكشاف الآليات الجزيئية الأساسية لالتئام الجروح اللبي في الجسم الحي في سياق عاج الترميمي التي تمكن من استخدام الفئران المعدلة وراثيا أو خروج المغلوب، وهي متاحة على نطاق واسع في الأوساط البحثية.

أظهرت دراسات حديثة عدة نماذج الماوس التي لوحظ تشكيل العاج 18،19. سايتو وآخرون. خلق إعداد الفئة I-تشبه دون تعرض اللب، الذي يحفز الرجعي، لا ربرتيف، تشكيل العاج. وتصنف كل من عاج الرجعي وعاج الأسنان الترميمي كما عاج العالي، والتي تشكل التالية مؤثر خارجي على الأسنان. ولكن، خلافا عاج الرجعي، الذي يتكون من الخلايا المولدة للعاج القائمة، ويتم تشكيل العاج الترميمي من الخلايا مصورات العاج مثل، مثل DPSCs، عندما يصبح اللب يتعرض واختراق طبقات الأرومة السنية 20. وبالتالي، فإنه لا يمثل إجراء فعلي متوجا اللب في العيادة. وفي دراسة أخرى، تم استخدام الزجاج المتماثرات الشاردة للحد من التعرض لب 19. ومع ذلك، أظهرت دراسة سريرية أن متماثر شارد زجاجي يسببها التهاب مزمن، ولكن ليس عاج ربرتيف 21. في هذا الصدد، لدينا الفأر نموذج السد اللب أفضل يمثل الإجراء الفعلي متوجا اللب في المرضى.

ومن الجدير بالذكر أننا عندما تحصد الفئران بعد أكثر من 6 أسابيع، وقعت تشكيل العاج الترميمي في جميع أنحاء حجرة اللب وقنوات الجذور (الشكل 4). مثل هذه الملاحظة غير متوقعة إلى حد ما، كما توقعنا تشكيل العاج الترميمي في يونيوction بين المواد متوجا اللب واللب. ومع ذلك، لوحظ تمعدن قوية من اللب أيضا في المرافق الصحية، وبخاصة في المرضى صغار السن نسبيا (22). لأن فئران عمرها 8 أسابيع المستخدمة في هذه الدراسة تعتبر "الشباب" 23، وجود إمكانية بموجبها هذه الفئران لا تزال تؤوي إمكانية سنية كبيرة. ولذلك، سيكون من المفيد لدراسة آثار الشيخوخة من تشكيل العاج الترميمي في الفئران.

كشفت امتحاناتنا النسيجية أنه على الرغم من عاج الترميمي تشكلت بشكل واضح في الأسنان المغطاة اللب، وكانت هناك خصائص كل من العاج والعظم تشكيل، كما يتضح من وجود الأنابيب العاجية (السهم الأحمر) وخلية عظمية (السهام السوداء) في ربرتيف عاج (الشكل 5). وتشير هذه الملاحظات أن تشكيل العاج الترميمي يمكن أن يسببها المقيمين محليا مثل مصورات العاج الخلايا الجذعية لب الأسنان، وكذلك infiltratinز الخلايا الجذعية الوسيطة من العظام المحيطة بها.

مقارنة مع الخلايا المكونة للعاج، لم نعثر على أي خلايا resorbing عاج داخل اللب، على النحو الذي يحدده حمض الفوسفاتيز مقاومة طرطرات (TRAP) تلطيخ (لا تظهر البيانات). في الواقع، التهاب اللب أو ذروية يدفع تشكيل ناقضة العظم على أسطح العظم حول الأسنان، ولكن ليس على السطوح عاج بسبب تلك التي ينتظر المجهول آليات 24. من المذكرة، كان هناك تمييز واضح بين عاج القائمة وعاج الأسنان الترميمي شكلت حديثا (الشكل 4). أظهرت دراسة سابقة ظاهرة مماثلة؛ عندما يتم استخراج الأسنان في وجود البايفوسفونيت أو الأجسام المضادة لمكافحة RANKL، وكلاهما تحول دون وظائف الخلايا الآكلة، كان هناك ترسيم للحدود واضحة بين العظام رقائقي الحاليين والتي شكلت حديثا العظام المنسوجة 25. يدعم هذه الفكرة كذلك عدم وجود خلايا resorbing العاج في اللب. بشكل جماعي، سيكون لدينا نموذج الفأر أنشئت صrovide فرصا فريدة لدراسة آليات الشفاء اللب الجرح وتشكيل العاج الترميمي في الجسم الحي.

هناك قيود على نموذج الفأر السد اللب. الماكياج الوراثية بين البشر والفئران هي مختلفة بشكل واضح. وقد التسلسل الجينوم الكامل في البشر والفئران، وهناك حوالي 85٪ تشابه في مناطق تشفير البروتين بين الفئران والبشر 26،27. وتماشيا مع هذه الفكرة، واقترح أن النتائج المتعلقة اللب السد في الحيوانات لا تعكس بالضرورة آراء في البشر 28. ومع ذلك، يتم استخدام النماذج الحيوانية على نطاق واسع في الأوساط البحثية أن ألخص الأمراض البشرية في الجسم الحي، مثل التهاب المفاصل الناجم عن الكولاجين لالتهاب المفاصل الروماتويدي 29، الناجم عن ovariactomy فقدان العظام لترقق العظام 30، lipopolysaccharide في الإدارة (LPS) لصدمة النظامية 31، وضمد التنسيب لالتهاب اللثة 32. على هذا النحو، ومذكرة التفاهم متوجا اللبوحد ذاتها نموذج أمرا أساسيا لدراسة الآليات الجزيئية للشفاء اللب الجرح وتشكيل العاج الترميمي في الجسم الحي. ومع ذلك، تماما مثل النماذج الحيوانية الأخرى وتفسيرها والمصادقة على النتائج من نموذج الفأر السد اللب يجب أن يتم تقييم بعناية.

وباختصار، توضح الدراسة الحالية اللب نجاح السد في الفئران. على عكس النماذج الأخرى المعروفة، وهذا نموذج الفأر السد اللب توفر أداة بحث لا تقدر بثمن في مجال تجديد اللب وتشكيل العاج الترميمي لأنه على ما يلي: 1) فرصة للاستفادة على نطاق واسع سلالات الفئران المعدلة وراثيا لتوضيح الآليات الكامنة في المستوى الجزيئي و 2) وسيلة فعالة اقتصاديا للحصول على نتائج ذات دلالة إحصائية عن طريق زيادة حجم العينة. إجراء المزيد من الدراسات تنتظر، بما في ذلك تقدير موضوعي للتشكيل الاسنان الترميمي في الجسم الحي، والآثار التي تعتمد على سن تشكيل العاج الترميمي، evaluaنشوئها من المواد السد اللب المتاحة سريريا، والتحقق من المحددات الجزيئية التي مطلوبة من أجل السليم اللب التئام الجروح والترميمي تجديد العاج.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

وأيد هذه الدراسة من قبل R01DE023348 (RHK) من NIDCR / المعاهد الوطنية للصحة والبحوث غرانت كلية (RHK) من مجلس البحوث في مجلس الشيوخ الأكاديمي لقسم لوس انجليس في جامعة كاليفورنيا.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BM-LED stereo microscope MEIJI Techno Microscope 
Optima MCX-LED  Bien Air Dental 1700588-001 Electic motor engine
isoflurane Henry schein animal health NDC 11695-0500-2
1/4 round bur Brasseler 001092T0
Endodontic K-file Roydent 98947
ProRoot MTA Dentsply PROROOT5W MTA
Paper point Henry schein 100-3941
Ultra-Etch Ultradent product Inc. Phosphoric acid etchant
OptiBond SoloPlus Kerr 29669 Adhesives
Coltolux LED Coltene/whaledent Inc. C7970100115 Curing light unit
Characterization tint Bisco T-14012 Flowable composite
Skyscan Breuker 1275 uCT scanner
Microm Thermo HM355S Microtome
Hematoxyline-1 Thermo Scientific 7221
Eosin-Y Thermo Scientific 7111
Cytoseal 60 Thermo Scientific 8310-16 Mounting solution

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012. NCHS Data Brief. (197), 197 (2015).
  2. Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. The global increase in dental caries. A pending public health crisis. Am J Dent. 22 (1), 3-8 (2009).
  3. Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems. J Dent. 33 (8), 639-647 (2005).
  4. Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps. Quintessence Int. 29 (8), 535-542 (1998).
  5. Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine. J Endod. 40 (12), 1967-1971 (2014).
  6. Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide. Quintessence Int. 41 (4), 62-71 (2010).
  7. Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp. Head Face Med. 3, 40 (2007).
  8. Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations. Br Dent J. 151 (6), 184-186 (1981).
  9. Sela, J., Ulmansky, M. Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30 (3), 425-430 (1970).
  10. Maurice, C. G., Schour, I. Experimental cavity preparations in the molar of the rat. J Dent Res. 34 (3), 429-434 (1955).
  11. Skyscan, N. V. NRecon user manual. , Available from: http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf (2011).
  12. Sohn, S., et al. The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells. J Dent Res. 94 (11), 1560-1567 (2015).
  13. Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration. Mediators Inflamm. 2015, 409347 (2015).
  14. Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (25), 13625-13630 (2000).
  15. Yu, J., et al. Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells. Biol Cell. 99 (8), 465-474 (2007).
  16. Zhu, X., et al. Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration. J Endod. 38 (12), 1604-1609 (2012).
  17. Iohara, K., et al. Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2. J Dent Res. 83 (8), 590-595 (2004).
  18. Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin. J Dent Res. , (2016).
  19. Hunter, D. J., et al. Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration. J Bone Miner Res. , (2015).
  20. Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. Dentin: structure, composition and mineralization. Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).
  21. Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth). Am J Dent. 13 (1), 28-34 (2000).
  22. Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study. J Am Dent Assoc. 139 (3), 305-315 (2008).
  23. Miller, R. A., Nadon, N. L. Principles of animal use for gerontological research. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55 (3), 117-123 (2000).
  24. Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions. J Dent Res. 95, 1503 (2016).
  25. Williams, D. W., et al. Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice). Am J Pathol. 184 (11), 3084-3093 (2014).
  26. McPherson, J. D., et al. A physical map of the human genome. Nature. 409 (6822), 934-941 (2001).
  27. Gregory, S. G., et al. A physical map of the mouse genome. Nature. 418 (6899), 743-750 (2002).
  28. Hilton, T. J. Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature. Oper Dent. 34 (5), 615-625 (2009).
  29. Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis. Ageing Res Rev. 1 (1), 135-147 (2002).
  30. Kalu, D. N., Chen, C. Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption. J Bone Miner Res. 14 (4), 593-601 (1999).
  31. Yokochi, T. A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury. Innate Immun. 18 (2), 364-370 (2012).
  32. Abe, T., Hajishengallis, G. Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice. J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).

Tags

الطب، العدد 119، التجدد البيولوجيا اللب، واللب الجرح تضميد الجراح، واللب السد، عاج الترميمي، يحسب الصغرى التصوير المقطعي، نموذج الفأر، وحدات ثالث أكسيد المعدنية
تطوير نموذج متوجا اللب مباشرة لتقييم اللب الجروح وتشكيل إصلاحي العاج في الفئران
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Song, M., Kim, S., Kim, T., Park,… More

Song, M., Kim, S., Kim, T., Park, S., Shin, K. H., Kang, M., Park, N. H., Kim, R. Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice. J. Vis. Exp. (119), e54973, doi:10.3791/54973 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter