Summary
We beschrijven een stap voor stap methode om direct pulp aftopping op muizen tanden voor de evaluatie van pulpa wondgenezing en vorming herstellende dentine in vivo.
Protocol
Muizen werden gekocht bij Jackson Laboratory en bewaard in een pathogeen-vrij vivarium in het UCLA afdeling Laboratory Animal Medicine (DLAM). De experimenten werden uitgevoerd volgens de goedgekeurde institutionele richtlijnen van het Comité van de kanselier's Animal Research (ARC # 2016-037).
1. Mouse verdoving
- Met acht weken oude vrouwelijke C57 / BL6 muizen (n = 3).
- Verdoven de muizen middels ketamine (80-120 mg / kg muis gewicht) / xylazine (5 mg / kg muis gewicht) oplossingen en beheren intraperitoneaal (ip) bij een dosis van 10 mL / kg.
- Bereid ketamine (80-120 mg / kg) / xylazine (5 mg / kg) en oplossingen dienen ze intraperitoneaal (ip) bij een dosis van 10 mL / kg.
- Controleer of de muizen volledig verdoofd door het uitvoeren van een teen knijpen.
2.-Pulp aftopping Procedure
- Plaats de mond houder in de mond van de muis.
- Zet de mond houder op de tafel, zodat de hijadvertentie is naar boven gericht.
- Plaats de microscoop (10X) bovenop de mond zodat de eerste bovenkaak molaar volledig zichtbaar.
- Met de ¼-ronde boor in een high-speed handstuk bij 200.000 rpm, verwijdert het glazuur gedeelte van de tand in het midden totdat de pulp zichtbaar door de transparante dentine. Laat de pulp met de boor niet bloot.
- Met behulp van een # 15 endodontic K-bestand (met een diameter van 150 micrometer), perforeren door de dentine en bloot de pulp.
LET OP: Speciale aandacht moet worden genomen, zodat de dentine afval niet wordt geduwd in de pulp. Dit kan vermeden worden door rotatie van de K-bestand kwartaal plaatsen en de K-bestand out. - MTA mengen met steriel H2O volgens de instructies van de fabrikant. Lever en plaats de MTA op de blootgestelde pulp met de punt van de onderzoeker. Gebruik de achterkant van het papier punt (fijn) aan de MTA te verpakken in de blootgestelde pulp door zachtjes te tikken. Hoe dikker zijde van het papier punt is vlak en daarom laatvoor een goede condensatie van de MTA in de blootliggende pulp.
- Etsen tand gedurende 15 s door het plaatsen van het 35% fosforzuur etsmiddel waar het alleen betrekking op de tand. Wees extra voorzichtig om de plaatsing van het etsmiddel te beperken, zoals het tandvlees weefsels kunnen irriteren.
Opmerking: Het etsmiddel wordt geleverd in een injectiespuit en wordt gebruikt om de tanden te ruwen zodat adhesieven in kan stromen naar micromechanische binding mediëren op de tand. Omdat ze viskeus, kan het onafhankelijk door toepassing van kleine hoeveelheden direct op de tand. - Gebruik negatieve druk zuigkracht aan het etsmiddel te verwijderen. Gebruik een wattenstaafje dat licht is doordrenkt met H 2 O om de resten van het etsmiddel te verwijderen. Herhaal deze stap tot het etsmiddel volledig van de tand wordt verwijderd.
- Met behulp van een perslucht stofdoek, voorzichtig droog de tand.
- Breng de dentale hechtmiddelen via de achterzijde van het papier punt.
- Maak de kleeflaag dunne met behulp van perslucht voor 3 s.
- Cure de tandheelkundige kleefstoffen voor 20 s met behulp van de uitharding-light unit.
- Plaats de vloeibare composiet in kleine hoeveelheden op de tand die werd afgesloten met MTA. Gebruik de punt van de verkenner op de samengestelde stromen in de tand groeven.
- Genezen van de composiet gedurende 30 seconden met behulp van een licht uitharden unit te polymeriseren. Bevestigen dat de samengestelde volledig is uitgehard en hard met behulp van de verkenner.
3. Post-op Care
- Dien carprofen (5 mg / kg) subcutaan (sc) onmiddellijk na de capping-pulp procedure.
- Leg de muizen op een verwarmingselement op laag vermogen om de dieren warm te houden voordat ze wakker worden.
- Zet de muizen om het terrarium voor huisvesting.
4. Tissue Procurement
- Na 5-6 weken, euthanaseren de muizen door cervicale dislocatie onder een volledige narcose staat met isofluraan.
- Verwijder voorzichtig de bovenkaak uit de basis van de schedel en zet het in een 50-mL buis. Bevestig de entire maxilla dat zowel de pulp bedekte tanden en de contralaterale uncapped tand in 4% paraformaldehyde in PBS, pH 7,4 bevat, bij 4 ° C overnacht, en bewaar vervolgens in een 70% ethanoloplossing.
LET OP: Paraformaldehyde is giftig en kankerverwekkend. Het juiste gebruik paraformaldehyde moeten worden gecontroleerd zoals beschreven in de standaard operationele procedures (SOP). - Scan de muis maxillae met behulp van de μCT scan. Om de maxillae te beveiligen tijdens het scannen, wikkel de monsters met een gaasje doordrenkt met 70% ethanol en plaats ze in de 15-mL celcultuur buis.
5. μCT Scanning
- Bereid de monsters voor μCT scannen. In het kort, wikkel de monsters met een gaasje doordrenkt met 70% ethanol en zet ze in een algemene 15-mL celkweek conische buis. Monteer de slang op de μCT scannende platform, zoals beschreven in de instructies van de fabrikant.
- Stel de röntgenbron om een stroom van 145 uA, een spanning van 55 kVp en een belichtingstijd van 200 ms.
- Voer beeldacquisitie met de μCT scanner op een 20-um-resolutie en met een 0,5 mm Al filter.
- Reconstrueren van het beeld en visualiseren 11.
- Zodra de μCT scan is voltooid, start ontkalking met 5% EDTA en 4% sucrose in PBS (pH 7,4) gedurende 2 weken.
6. Weefsel bewerken en kleuring
- Insluiten de ontkalkt weefsels in paraffine. Voor het inbedden, trim de bovenkaak door het maken van een sagittale snede onmiddellijk anterior naar de eerste kies. Terwijl inbedden plaatst dit oppervlak omlaag, zodat de langsdoorsnede van de eerste molaar is het snijoppervlak.
- Met behulp van de microtoom, voor te bereiden 5 urn dikke dia's. De pulp capping gebieden meestal samen met de distopalatal (DP) wortel, die kan worden gebruikt als een mijlpaal. Bepaal het precieze gebied van belang door onderzoek van de histologie onder de lichtmicroscoop en het vergelijken van de μCT beelden.
- Voor H & E kleuring, deparaffinize en hydrateren de glaasjes met xyleen (2 x) en serieel verdunde ethanol (100% EtOH 2x, 95% EtOH 2x en 70% EtOH 1x).
- Spoel de dia's met stromend water.
- Vlek met Hematoxylin oplossing voor 2,5 minuten en spoel af met leidingwater.
- Dompel de glaasjes in 95% ethanol gedurende 1 minuut.
- Vlek met Eosine oplossing voor 1 min en spoel af met leidingwater.
- Dehydrateren met serieel verdunde ethanol (70% EtOH 1x, 95% EtOH 2x en 3x 100% EtOH) en xyleen (3x).
- Monteer de dia's met montage-oplossing.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Hier toonden we de procedures stap-voor-stap om pulp uit te voeren aftopping op muizen tanden. Een van de belangrijkste aspecten van de pulp aftopping in muizen is om de juiste apparatuur hebben. In dit verband heeft de microscoop met 10x vermogenvergroting essentieel (Figuur 1A). Een klasse-I-achtige preparaat in de tand maken, gebruikten we een ¼-round burr in een elektrische hoge snelheid handstuk bij 200.000 rpm (Figuur 1B). Alternatief andere motoren, ook die perslucht, kan worden gebruikt om een tand te bereiden.
In Figuur 2A-2E zijn representatief stappen voor het uitvoeren pulp capping getoond. De klasse-I-achtige preparaat werd uitgevoerd (Figuur 2B). Omdat een waternevel de muizen in de loop van de procedure kan verdrinken, is het gebruik ervan niet aanbevolen. Daarom is het essentieel om de tand te bereiden met zachte en intermittent slagen om oververhitting te voorkomen. Het gebruik van samengeperste lucht wordt ook aanbevolen om koeling effecten. Terwijl de pulp bloot een endodontische bestand loopt gevaar niet dentin vuil duwen in de pulp, omdat dit kan interfereren met de interpretatie van gegevens in herstellende dentine vorming (figuur 2C). Dit kan worden voorkomen door de perslucht. Evenzo moet de MTA op de blootgestelde pulp worden gebracht zonder duwen te ver in de pulp. MTA plaatsing kan worden bereikt door de achterzijde van het papier station voorzichtig tikken bewegingen (figuur 2D). Na plaatsing MTA, moeten de tanden worden gereinigd met H 2 O doordrenkte katoenen pilletje om de resterende MTA verwijderen in de groeven, die kunnen interfereren met de binding van de samenstelling op de tand. Conventionele methoden van composiet restauratie worden gebruikt, met inbegrip van het etsen van de tand oppervlakken, priming en binding met lijm en het plaatsen en het uitharden van het vloeibare composieten (Figuur 2E).
Zes weken na pulp capping werden de muizen geoogst, en het bovenaanzicht werd gefotografeerd te bevestigen dat de samenstelling nog intact was (figuur 3A). μCT scanning significante recessie pulpale ruimte in de pulp-capped groep (figuur 3B), wat suggereert dat herstellende dentine werd gevormd in de pulp. De ontkalkt weefsel monsters werden onderworpen aan H & E kleuring verder te onderzoeken histologisch de vorming van herstellende dentine in vivo. In de controlegroep, odontoblastic lagen (OB) waren duidelijk zichtbaar aan de randen van de dentine (Figuur 4A - 4C). In tegenstelling, de pulp capping groep had aanzienlijke hoeveelheden herstellende dentine (RD) gevormd in de pulpa ruimte (Figuur 4D - 4F). Interessant is dat een nader onderzoek is gebleken dat herstellende dentine (RD) vertoonde een typisch kenmerk van de dentine (bv, s triated lijnen die dentinetubuli, rode pijl), evenals die van het bot (bijvoorbeeld osteocyten die gevangen osteoblasten, zwarte pijlpunten). Toen we gekleurd voor dentine Matrix Protein 1 (DMP1), een marker voor odontogene differentiatie 12, vonden we een significante toename DMP1 expressie in de pulp van de pulp bedekte tanden in vergelijking met die van de afgetopte tand (figuur 5A en 5B) , wat aangeeft dat herstellende dentine werd gevormd binnen de pulp.
Figuur 1: De Apparatuur Setup voor de Pulp-aftopping procedure. (A) Een microscoop (10X) voor het visualiseren van de muis tand. (B) De hoge snelheid handstuk en de elektromotor motor voor het bereiden van een klasse I preparaat aan de pulp bloot.= "_ Blank"> Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 2: Representatieve stappen in de procedure Afdekken. (A) Unprepared tand op de eerste molaar in een muis. (B) Eerste glazuur verwijderen met behulp van de kwart-ronde boor. (C) blootstelling Pulp met behulp van de endodontische bestand. (D) MTA plaatsing in de belichte pulp. (E) Composite restauratie plaatsing op de tand. De balk geeft 500 pm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 3: Klinische Presentatie en μCT Scanning van de Pulp-bedekte en Ongelimiteerde Tooth in Muizen. (A) Occlusaal Gezien de muis maxillae de pulp bedekte tanden (links) en afgetopte tand (rechts). (B) De cross-sectionele μCT beelden van de maxillae. De balk geeft 500 pm. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 4: histologisch bewijs van Reparative Dentin Formatie In Vivo. (AC) H & E kleuring van de afgetopte eerste molaar in een muis bij 100X, 200X en 400X. (DE) H & E kleuring van de pulp bedekte eerste molaar in de muis van 100X, 200X en 400X. De balk geeft 100 micrometer (OB = odontoblast lagen; RD = herstellende dentine; zwarte pijlpunten =osteocyten; rode pijl = dentinekanaaltjes). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Figuur 5: immunohistochemische kleuring van DMP1. (A) DMP1 kleuring van de afgetopte eerste molaar in een muis bij 400X. (B) DMP1 kleuring van de pulp-bedekte eerste molaar in een muis bij 400X. De balk geeft 100 micrometer. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Momenteel zijn er verschillende experimentele modellen voor de in vivo effecten van tandheelkundige materialen, scaffolds of groeifactoren op odontogene differentiatie van dentale pulp stamcellen (DPSC's) 13 te valideren. Deze modellen omvatten ectopische autologe transplantatie van DPSC's in een orgaan, zoals de renale capsule of subcutane transplantatie van DPSC in immuungecompromitteerde muizen met steigers 14,15. Echter, deze methoden beperkt hun odontogene effect op DPSC's niet wordt uitgevoerd in orthotope pulp milieu. Anderzijds, orthotope transplantatie in de procedures pulp of pulp-capping op een tand worden toegepast in grotere dieren 16,17. Hoewel deze modellen zijn waardevol voor het beoordelen odontogene potentieel in de orthotope milieu, het gebruik van deze modellen is grotendeels observatie van aard, waardoor beperkte mechanistische inzichten over pulp wondgenezing en herstellende vorming van dentine. In deze paper presenteren we een gedetailleerde methode om pulp-capping presteren in muizen. Deze stap-voor-stap procedure omvat verlamming de muizen, bereiden van de klasse-I-achtige holte plaatsen van de pulp capping materialen, het oogsten van de maxillae analyseren de μCT scan- en evaluatie weefselmonsters voor herstellende dentine formatie. Onze pulp capping muismodel zijn van belang bij het onderzoek naar de fundamentele moleculaire mechanismen van pulpa wondgenezing in vivo in het kader van herstellende dentine doordat het gebruik van transgene of knockout muizen, die op grote schaal in de onderzoeksgemeenschap bent.
Recente studies toonden verschillende muismodellen waarin dentine vorming werd waargenomen 18,19. Saito et al. creëerde een klasse-I-achtige preparaat zonder blootstelling pulp, die reactionaire, niet herstellende, dentine vorming stimuleert. Zowel reactionair dentine en herstellende dentine worden geclassificeerd als tertiaire dentine, Welke vormen na externe stimulatie aan de tand. Anders dan reactionair dentine, die wordt gevormd door bestaande odontoblasten, herstellende dentine wordt gevormd door odontoblast-achtige cellen, zoals DPSC's, als de pulp wordt blootgesteld en de odontoblastic lagen worden geschonden 20. Daarom is het niet een feitelijke procedure-pulp aftopping in de kliniek te vertegenwoordigen. In een ander onderzoek werd glasionomeer gebruikt om de pulp blootstelling 19 cap. Echter, een klinische studie toonde aan dat de glasionomeer geïnduceerde chronische ontsteking, maar niet herstellende dentine 21. In dit opzicht is onze-pulp aftopping muismodel beter vertegenwoordigt de feitelijke procedure-pulp aftopping bij patiënten.
Het is opmerkelijk dat wanneer we na meer dan 6 weken geoogst muizen, herstellende dentine vorming opgetreden gehele pulpakamer en de wortelkanalen (figuur 4). Een dergelijke observatie is nogal onverwacht, zoals we verwacht herstellende dentine formatie op de junictie tussen de pulp afdekkend materiaal en de pulp. Echter potente mineralisatie van de pulp ook waargenomen in klinische settings, vooral bij relatief jonge patiënten 22. Omdat de 8 weken oude muizen die in deze studie worden beschouwd als "jonge volwassenen" 23, een mogelijkheid bestaat waarbij deze muizen nog aanzienlijk potentieel odontogene haven. Daarom zou het nuttig zijn om de effecten van veroudering herstellende dentine vorming bij muizen onderzocht.
De histologische onderzoek onthulde dat hoewel herstellende dentine duidelijk werd gevormd in de pulp bedekte tanden, er kenmerken van zowel dentine en botvorming was, zoals blijkt uit de aanwezigheid van dentinekanaaltjes (rode pijl) en osteocyten (zwarte pijlen) in het herstelproces dentine (Figuur 5). Dergelijke waarnemingen suggereren dat herstellende vorming dentine kan worden geïnduceerd door ter plaatse verblijven odontoblast-achtige dentale pulp stamcellen, evenals infiltrating mesenchymale stamcellen uit het omringende bot.
Vergeleken met de dentine-vormende cellen, we geen dentine-resorberende cellen die in de pulp, zoals bepaald door tartraat-resistent zuur fosfatase (TRAP) kleuring (gegevens niet getoond). Inderdaad, pulpa en periapicale ontsteking induceert osteoclastvorming met been oppervlakken rond de tand, maar niet op het dentine oppervlakken als gevolg van nog onbekende mechanismen 24. Van de nota, was er een duidelijke afbakening tussen de bestaande dentine en de nieuw gevormde herstellende dentine (figuur 4). Een eerdere studie toonde een gelijkaardig fenomeen; wanneer een tand in aanwezigheid van bisfosfonaat of anti-RANKL antilichaam, beide remmen de functie van osteoclasten wordt gewonnen, waren er duidelijke grenzen tussen bestaande lamellair bot en nieuw gevormde verweven bot 25. Dit idee ondersteunt verder de afwezigheid van dentine-resorbeerbare cellen in de pulp. Gezamenlijk onze gevestigde muismodel zouden provide unieke mogelijkheden om de mechanismen van pulp wondgenezing en herstellende vorming van dentine in vivo te onderzoeken.
Er is een beperking aan de pulp capping muismodel. Genetische makeups tussen mensen en muizen zijn duidelijk verschillend. De volledige genoom is gesequenced bij mensen en muizen, en is ongeveer 85% overeenkomst in de eiwit-coderende gebieden tussen muizen en mensen 26,27. In lijn met deze gedachte, werd gesuggereerd dat de bevindingen met betrekking tot pulp aftopping bij dieren niet noodzakelijk overeen met die bij de mens 28. Toch zijn diermodellen op grote schaal gebruikt in het onderzoek gemeenschap om ziekten bij de mens in vivo, zoals collageen-geïnduceerde artritis voor reumatoïde artritis 29-ovariactomy geïnduceerde botverlies voor osteoporose 30, lipopolysaccharide (LPS) administratie voor systemische shock 31 en ligatuur recapituleren plaatsing voor periodontitis 32. Als zodanig, de pulp capping mouse model is essentieel om de moleculaire mechanismen van pulp wondgenezing en vorming herstellende dentine in vivo te onderzoeken. Toch, net als andere dierlijke modellen, interpretatie en validatie van de bevindingen uit de pulp-capping muismodel moet zorgvuldig worden geëvalueerd.
Samenvattend, de huidige studie toont succesvolle pulp afdekkend muizen. In tegenstelling tot andere bekende modellen, zal deze pulp capping muismodel een waardevol onderzoeksinstrument in het gebied van pulp regeneratie en herstellende dentine vorming omdat het bieden: 1) de mogelijkheid om op grote schaal beschikbaar genetisch gemanipuleerde muizenstammen de onderliggende mechanismen op te helderen benutten moleculair niveau en 2) een economisch efficiënte manier om statistisch significante resultaten te verkrijgen door het verhogen van steekproeven. Verdere studies af te wachten, met inbegrip van objectieve kwantificering van herstellende dentine vorming in vivo, leeftijdsafhankelijke effecten van herstellende dentine formatie, evaluatie van klinisch beschikbare pulp afdekken materialen en validatie van moleculaire determinanten die nodig zijn voor een goede pulpa wondgenezing en herstellende dentine regeneratie.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
Deze studie werd ondersteund door R01DE023348 (RHK) van NIDCR / NIH en de Faculteit Research Grant (RHK) van de Raad voor onderzoek van de Academische Senaat van de afdeling Los Angeles van de Universiteit van Californië.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| BM-LED stereo microscope | MEIJI Techno | Microscope | |
| Optima MCX-LED | Bien Air Dental | 1700588-001 | Electic motor engine |
| isoflurane | Henry schein animal health | NDC 11695-0500-2 | |
| 1/4 round bur | Brasseler | 001092T0 | |
| Endodontic K-file | Roydent | 98947 | |
| ProRoot MTA | Dentsply | PROROOT5W | MTA |
| Paper point | Henry schein | 100-3941 | |
| Ultra-Etch | Ultradent product Inc. | Phosphoric acid etchant | |
| OptiBond SoloPlus | Kerr | 29669 | Adhesives |
| Coltolux LED | Coltene/whaledent Inc. | C7970100115 | Curing light unit |
| Characterization tint | Bisco | T-14012 | Flowable composite |
| Skyscan | Breuker | 1275 | uCT scanner |
| Microm | Thermo | HM355S | Microtome |
| Hematoxyline-1 | Thermo Scientific | 7221 | |
| Eosin-Y | Thermo Scientific | 7111 | |
| Cytoseal 60 | Thermo Scientific | 8310-16 | Mounting solution |
References
- Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012. NCHS Data Brief. (197), 197 (2015).
- Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. The global increase in dental caries. A pending public health crisis. Am J Dent. 22 (1), 3-8 (2009).
- Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems. J Dent. 33 (8), 639-647 (2005).
- Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps. Quintessence Int. 29 (8), 535-542 (1998).
- Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine. J Endod. 40 (12), 1967-1971 (2014).
- Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide. Quintessence Int. 41 (4), 62-71 (2010).
- Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp. Head Face Med. 3, 40 (2007).
- Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations. Br Dent J. 151 (6), 184-186 (1981).
- Sela, J., Ulmansky, M. Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30 (3), 425-430 (1970).
- Maurice, C. G., Schour, I. Experimental cavity preparations in the molar of the rat. J Dent Res. 34 (3), 429-434 (1955).
- Skyscan, N. V. NRecon user manual. , Available from: http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf (2011).
- Sohn, S., et al. The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells. J Dent Res. 94 (11), 1560-1567 (2015).
- Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration. Mediators Inflamm. 2015, 409347 (2015).
- Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (25), 13625-13630 (2000).
- Yu, J., et al. Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells. Biol Cell. 99 (8), 465-474 (2007).
- Zhu, X., et al. Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration. J Endod. 38 (12), 1604-1609 (2012).
- Iohara, K., et al. Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2. J Dent Res. 83 (8), 590-595 (2004).
- Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin. J Dent Res. , (2016).
- Hunter, D. J., et al. Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration. J Bone Miner Res. , (2015).
- Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. Dentin: structure, composition and mineralization. Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).
- Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth). Am J Dent. 13 (1), 28-34 (2000).
- Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study. J Am Dent Assoc. 139 (3), 305-315 (2008).
- Miller, R. A., Nadon, N. L. Principles of animal use for gerontological research. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55 (3), 117-123 (2000).
- Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions. J Dent Res. 95, 1503 (2016).
- Williams, D. W., et al. Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice). Am J Pathol. 184 (11), 3084-3093 (2014).
- McPherson, J. D., et al. A physical map of the human genome. Nature. 409 (6822), 934-941 (2001).
- Gregory, S. G., et al. A physical map of the mouse genome. Nature. 418 (6899), 743-750 (2002).
- Hilton, T. J. Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature. Oper Dent. 34 (5), 615-625 (2009).
- Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis. Ageing Res Rev. 1 (1), 135-147 (2002).
- Kalu, D. N., Chen, C. Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption. J Bone Miner Res. 14 (4), 593-601 (1999).
- Yokochi, T. A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury. Innate Immun. 18 (2), 364-370 (2012).
- Abe, T., Hajishengallis, G. Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice. J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).
