Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Medicine
Click here for the English version

Medicine

פיתוח מודל ישיר מכסת-זול עבור הערכת pulpal ריפוי פצע גיבוש מתקנת הדנטין של עכברים

Published: January 12, 2017 doi: 10.3791/54973
Automatic Translation
1, 1, 1, 1, 1,2, 1,2, 1,2,3, 1,2
1The Shapiro Family Laboratory of Viral Oncology and Aging Research, The UCLA School of Dentistry, 2UCLA Jonsson Comprehensive Cancer Center, 3David Geffen School of Medicine at UCLA

Summary

אנו מתארים שיטת צעד אחרת צעד ביצוע עיסה ישירה מכסה על שיני עכברים להערכת ריפוי פצע pulpal והיווצרות הדנטין מתקן in vivo.

Protocol

עכברים נרכשו מ ג'קסון מעבדה ולעטוף ביבר חינם לפתוגן בחטיבת UCLA לרפואת בעלי חי מעבדה (DLAM). הניסויים בוצעו על פי ההנחיות מוסדיות המאושרות מן ועדת המחקר החי של הקנצלר (ARC # 2016-037).

1. עכבר הרדמה

  1. השתמש בן שמונה שבועות הנקבה C57 / BL6 עכברים (n = 3).
  2. להרדים את העכברים באמצעות קטמין (80-120 מ"ג / ק"ג של משקל העכבר) / xylazine (5 מ"ג / ק"ג של משקל העכבר) פתרונות ולנהל intraperitoneally (IP) במינון של 10 מ"ל / ק"ג.
  3. הכן קטמין (80 - 120 מ"ג / ק"ג) / xylazine (5 מ"ג / ק"ג) פתרונות ולנהלם intraperitoneally (IP) במינון של 10 מ"ל / ק"ג.
  4. ודא עכברים בהרדמה מלאה על ידי ביצוע קמצוץ הבוהן.

נוהל 2. מכסה-זולה

  1. מניחים את בעל הפה בפה של העכבר.
  2. אבטח את בעל פה על השולחן כך שהואהמודעה פונה כלפי מעלה.
  3. מניח את המיקרוסקופ (10X) על גבי הפה כך טוחן לסתי הראשונה הוא גלוי לחלוטין.
  4. באמצעות ¼ הסיבוב ספחת בתוך ידית במהירות גבוהה ב 200,000 סל"ד, הוצא את חלק האמייל של השן באמצע עד עיסת גלוי דרך הדנטין השקוף. אין לחשוף את העיסה עם הספחת.
  5. כשאתה משתמש בקובץ-K endodontic 15 # (בקוטר של 150 מיקרומטר), לנקב דרך הדנטין ולחשוף את העיסה.
    הערה: טיפול מיוחד צריכה להילקח כך פסול הדנטין לא לקבל דחף לתוך העיסה. זה יכול להימנע על ידי החלפה של קובץ K רבעונים ואז מושך את K-להגיש החוצה.
  6. מערבבים עם MTA סטרילי H 2 O על פי הוראות היצרן. לספק ומקום MTA על העיסה החשופה עם קצה Explorer. השתמש הצד האחורי של נקודת נייר (קנס) לארוז את MTA לתוך העיסה נחשפה על ידי הקשה עדינה. מן הצד הקהה של נקודת נייר שטוח ולכן מאפשרעבור העיבוי התקין של MTA לתוך העיסה החשופה.
  7. Etch השן במשך 15 שניות על ידי הנחת etchant חומצה זרחתית 35% שבו זה פשוט מכסה את השן. קח טיפול מיוחד כדי להגביל את המיקום של etchant, מכיוון שהוא עלול לגרום לגירוי רקמות חניכיים.
    הערה: etchant מגיע מזרק משמש לחספס את משטחי השן כך דבקים שיניים יכול לזרום לתווך מליטה micromechanical על השן. כי הם צמיגים, זה יכול להיות עצמאי על ידי החלת כמויות קטנות ישירות על גבי השן.
  8. השתמש יניקה שלילית בלחץ להסיר את etchant. השתמש גלול כותנה, כי הוא שרוי קל באות O H 2 להסיר את שאריות etchant. חזור על שלב זה עד etchant נמחק לחלוטין מן השן.
  9. באמצעות מטלית אוויר דחוס, לייבש את השן בעדינות.
  10. החל דבקי השיניים באמצעות הישבן של נקודת נייר.
  11. הפוך את שכבת דבק דקה באמצעות אוויר דחוס עבור 3 s.
  12. Cיור דבקי השיניים במשך 20 שניות באמצעות יחידת אור-ריפוי.
  13. מניחים את מרוכבים flowable בכמויות קטנות על השן והוא היה אטום עם MTA. השתמש בקצה של החוקר לזרום המשולב לתוך חריצי השן.
  14. לרפא את מרוכבים עבור 30 s באמצעות יחידת-ריפוי אור לפלמר אותו. ודא מרוכבים הוא נרפא לחלוטין וקשה באמצעות הסייר.

3. Post-op Care

  1. נהל carprofen (5 מ"ג / קילו) תת עורי (SC) מייד לאחר הליך מכסה-העיסה.
  2. מניח את העכברים על כרית חימום בהספק נמוך כדי לשמור על החיות חמות לפני שהם מתעוררים.
  3. החזר את עכברי הביבר לדיור.

רכש רקמות 4.

  1. לאחר 5 - 6 שבועות, להרדים את העכברים על ידי נקע בצוואר הרחם תחת תנאי הרדמה מלאה עם isoflurane.
  2. מוציאים בזהירות את maxilla והוצא אותו מבסיס הגולגולת והכניס אותו לתוך צינור 50 מ"ל. תקן את entirmaxilla דואר המכיל את שני שן העיסה-כתרי שן הסגורה והפתוחה הנגדית paraformaldehyde 4% ב- ​​PBS, pH 7.4, ב 4 מעלות צלזיוס למשך הלילה, ולאחר מכן לאחסן אותו בתמיסת אתנול 70%.
    הערה: Paraformaldehyde הוא רעיל ומסרטן. Paraformaldehyde השימוש הנכון צריך להיות במעקב כפי שמתואר נהלי עבודה סטנדרטיים (SOP).
  3. סרוק את maxillae העכבר באמצעות סריקת μCT. להבטחת maxillae במהלך הסריקה, לעטוף את דגימות עם גזה ספוגה 70% אתנול ו למקם אותם בצינור תרבית תאים של 15 מ"ל.

5. סריקה μCT

  1. הכן את הדגימות לסריקת μCT. בקצרה, לעטוף את דגימות עם גזה ספוגה 70% אתנול ו לאבטח אותם בתוך שפופרת חרוטי תרבית תאים הגנרית של 15 מ"ל. הר הצינור לבמת סריקת μCT, כפי שמתואר בהוראות היצרן.
  2. הגדר את מקור רנטגן כדי זרם של 145 מיקרו-אמפר, מתח של 55 KVP ופעם חשיפת 200 ms.
  3. בצע רכישת התמונה עם סורק μCT ברזולוציה 20 מיקרומטר עם מסנן 0.5 מ"מ אל.
  4. לשחזר את התמונה ולדמיין אותו 11.
  5. לאחר הסריקה μCT ההתקנה, הפעל decalcification עם 5% EDTA ו -4 סוכרוז% ב PBS (pH 7.4) במשך 2 שבועות.

עיבוד רקמות 6. מכתים

  1. להטביע רקמות decalcified פרפין. לפני ההטבעה, חתוך את maxilla על ידי ביצוע חתך sagittal מייד קדמית הטוחן הראשונה. בעוד הטבעה, מקם המשטח הזה כלפי מטה, כך החתך לאורך של הטוחנת הראשונה הוא משטח החיתוך.
  2. באמצעות microtome, להכין 5 שקופיות מיקרומטר בעובי. האזורים המגבילים עיסת בדרך כלל בקנה אחד עם distopalatal (DP) השורש, אשר ניתן להשתמש בהם כנקודת ציון. לקבוע את האזור המדויק של עניין על ידי בחינת היסטולוגיה במיקרוסקופ אור השוואת תמונות μCT.
  3. עבור H & E מכתימה, deparaffinize ו רעננותם שקופיות עם קסילן (2x) ואתנול בדילול סדרתי (100% EtOH 2x, 95% EtOH 2x, ו -70% EtOH 1x).
  4. יש לשטוף את השקופיות במים זורמים מהברז.
  5. הכתם עם פתרון Hematoxylin עבור 2.5 דקות ולשטוף עם מי ברז.
  6. טובלים את השקופיות אתנול 95% דקות 1.
  7. כתם עם פתרון Eosin דקות 1 ולשטוף במים ברז.
  8. מייבשים עם אתנול בדילול סדרתי (70% EtOH 1x, 95% EtOH 2x, ו -100% EtOH 3x) קסילן (3x).
  9. הר שקופיות עם פתרון הרכבה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

הנה, הראינו את שלב-אחר-צעד נהלים לבצע עיסת מכסת על השיניים עכברים. אחד ההיבטים המרכזיים של עיסת מכסה בעכברים הוא לקבל את המנגנון המתאים. בהקשר זה, שיש מיקרוסקופ עם הגדלה כוח 10X חיוני (איור 1 א). כדי ליצור הכנת Class-I-כמו השן, השתמשנו בר ¼-סיבוב במאבק ידית במהירות גבוהה חשמלית ב 200,000 סל"ד (איור 1B). לחלופין, כל מנועי החיפוש האחרים, כולל אלה שמשתמשים אוויר דחוס, שניתן להשתמש בהם כדי להכין שן.

באיור 2 א-2E, צעדים נציג לביצוע מכסת עיסת מוצגים. הכנת Class-I-כמו שהוצגה (תרשים 2B). בגלל תרסיס מים עשוי להטביע העכברים במהלך ההליך, השימוש בו אינו מומלץ. מסיבה זו, חשוב להכין את השן עם עדינה intermittent מלטפת כדי למנוע התחממות יתר. שימוש אוויר דחוס מומלץ גם לספק אפקטי קירור. תוך חשיפת העיסה עם קובץ שורש, לנקוט זהירות לא לדחוף את פסולת הדנטין לתוך העיסה, מכיוון שהדבר עלול להפריע פרשנות נתונים במבנה הדנטין מתקן (איור 2 ג). זה יכול להימנע על ידי שימוש באוויר הדחוס. באופן דומה, MTA צריך להיות ממוקם על העיסה החשופה מבלי לדחוף רחוק מדי לתוך העיסה. מיקום MTA יכול להיות מושגת על ידי שימוש הישבן של נקודת נייר בתנועות קשות עדינות (איור 2 ד). בעקבות מיקום MTA, השן יש לנקות באמצעות H 2 O-ספוג כדורי צמר גפן כדי להסיר כל MTA שנותרו החריצים, שעלול להפריע את הכריכה של מרוכבים על השן. בשיטות המקובלות של שיקום מרוכבים משמשים, כולל תחריט משטחי השן, תחול מליטה עם דבקים, והצבת וריפוי מרוכבים flowable (2E איור).

שישה שבועות לאחר מכסת עיסה, העכברים נבצרו, ואת המבט מלמעלה צולם לאשר כי מרוכבים היו עדיין שלמים (איור 3 א). μCT סריקה הראתה מיתון משמעותי של שטח pulpal בקבוצה הכתירה העיסה (איור 3 ב), דבר המצביע על כך הדנטין מתקן הוקם בשנת העיסה. דגימות רקמות decalcified היו נתוני צביעת H & E לבחון נוסף היסטולוגית ההיווצרות של הדנטין מתקן in vivo. בקבוצת הביקורת, שכבות odontoblastic (OB) ניכרו בולט מסביב לקצוות של הדנטין (איור 4 א - 4C). לעומת זאת, בקבוצת מכסה-העיסה הייתה כמויות משמעותיות של הדנטין מתקן (RD) נוצר במרחב pulpal (האיור 4D - 4F). מעניין לציין, כי בחינה מדוקדקת יותר העלתה כי הדנטין המתקן (RD) הציג מאפיין טיפוסי של הדנטין (למשל, s קווי triated המייצג tubules dentinal, חץ אדום), כמו גם זה של העצם (למשל, osteocytes המייצג אוסטאובלסטים לכוד, ראשי חץ שחור). כשאנחנו מוכתמים עבור הדנטין מטריקס חלבון 1 (DMP1), סמן לבידול odontogenic 12, מצאנו עלייה משמעותית ביטוי DMP1 התקוע במוך השן הכתירה העיסה בהשוואה לזו של השן לא האטומה (איור 5 א ו 5 ב) , המציין כי הדנטין מתקן הוקם בתוך העיסה.

איור 1
איור 1: התקנת הציוד עבור הנוהל הזול המגביל. (א) מיקרוסקופ (10X) המאפשר הדמיה השן העכבר. (ב) הידית במהירות גבוהה ומנוע המנוע החשמלי להכנת תכשיר לי מח' לחשוף את העיסה.= "_ Blank"> לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
איור 2: שלבי נציג בנוהל התקרה. (א) שן Unprepared על הטוחנת הראשונה לסתי בעכבר. (ב) הסרת אמייל ראשונית שהתקבלה בעזרת רבע סיבוב הספחת. (ג) חשיפה זולה באמצעות קובץ השורש. (ד) MTA מיקום העיסה החשופה. (ה) מיקום שיקום Composite על השן. הבר מייצג 500 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 3
איור 3: הצגה קלינית μCT Scanninגרם של השן זולה-סגורה ופתוחה בעכברים. (א) סגרים לאור העכבר maxillae על השן הכתירה עיסה (משמאל) שן לא אטום (מימין). (ב) תמונות μCT חתך של maxillae. הבר מייצג 500 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 4
איור 4: עדויות היסטולוגית של גיבוש מתקנת הדנטין in vivo. (AC) H & E מכתים של הטוחנת הראשונה לסתי לא אטומה ב לעכבר 100X, 200X, ו 400X. (DE) H & E מכתים של הטוחנת הראשונה לסתי הכתירה העיסה ב לעכבר 100X, 200X, ו 400X. הבר מייצג 100 מיקרומטר (OB = odontoblast שכבות; RD = הדנטין המתקן; ראשי חץ שחור =osteocytes; חץ אדום = tubules dentinal). אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 5
איור 5: immunohistochemical מכתים של DMP1. (א) מכתים DMP1 של הטוחנת הראשונה לסתי לא אטומה ב לעכבר 400X. (ב) מכתים DMP1 של הטוחנת הראשונה לסתי הכתירה העיסה ב לעכבר 400X. הבר מייצג 100 מיקרומטר. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

נכון לעכשיו, ישנם מספר דגמים ניסיוניים שונים זמינים כדי לאמת את השפעות in vivo של חומרים דנטליים, פיגומים, או גורמי גדילה על בידול odontogenic של תאי גזע עיסת שיניים (DPSCs) 13. מודלים אלה כוללים בהשתלה עצמית אקטופי של DPSCs לתוך איבר, כגון הקפסולה כליות, או השתלה תת עורית של DPSCs לעכברים בעלי דיכוי חיסוני עם פיגומים 14,15. עם זאת, שיטות אלו מוגבלים כי אפקט odontogenic שלהם על DPSCs לא מבוצע בסביבה עיסת orthotopic. מצד השני, השתלת orthotopic לתוך נהלי עיסה או עיסה-מכסה על שן משמשת בעלי חיים גדולים יותר 16,17. למרות המודלים אלה הם בעלי ערך בהערכת פוטנציאל odontogenic בסביבת orthotopic, השימוש במודלים אלה הוא תצפית בעיקר בטבע, מתן תובנה מכניסטית מוגבלת על ריפוי פצע עיסה והיווצרות הדנטין מתקן. במאמר זה, אנו מציגים שיטה מפורטת לביצוע עיסה-מכסה בעכברים. הליך צעד-אחר-שלב זה כולל הרדמת העכברים, הכנת Class-I-כמו החלל, צבת חומרי מכסה-העיסה, קצירת maxillae, ניתוח עם μCT לסרוק, והערכת דגימות רקמה ליצירת דנטין מתקן. העיסה-מכסת עכבר המודל שלנו יהיה משמעותי חוקר את המנגנונים מולקולריים היסוד של ריפוי פצע pulpal in vivo בהקשר של הדנטין מתקן, בכך שהיא מאפשרת את השימוש של עכברים מהונדסים או נוק אאוט, אשר זמינים באופן נרחב בקהילת החקר.

מחקרים שנעשו לאחרונה הראו מודלים העכבר כמה שבו היווצרות הדנטין נצפתה 18,19. סאיטו et al. נוצר הכנת Class-I-כמו ללא חשיפת עיסה, אשר ממגרת מתקן ריאקציוני, לא, היווצרות הדנטין. שניהם הדנטין ריאקציונרים הדנטין המתקן מסווגים דנטין שלישוני, המהווה בעקבות גירוי חיצוני על השן. עם זאת, בניגוד הדנטין ריאקציוני, אשר נוצר על ידי odontoblasts הקיים, הדנטין מתקן הוא נוצר על ידי תאי odontoblast הדמוי, כגון DPSCs, כאשר העיסה הופכת חשופה שכבות odontoblastic נפרצות 20. לכן, הוא אינו מייצג הליך עיסת המגבילים בפועל במרפאה. במחקר אחר, ionomer הזכוכית שמש מכסה את חשיפת עיסת 19. עם זאת, מחקר קליני הראה כי ionomer הזכוכית מושרה דלקת כרונית, אך לא מתקנת הדנטין 21. בהקשר זה, במודל של עכברי עיסת מגבילים שלנו טוב יותר מייצג את הליך עיסת מגבילים בפועל בחולים.

ראוי לציין כי כאשר אנו קוצרים עכברים לאחר יותר מ -6 שבועות, היווצרות הדנטין מתקן התרחשה ברחבי החדר עיסת ואת טיפולי שורש (איור 4). תצפית כזו היא די צפויה, כפי שציפינו היווצרות הדנטין מתקן על יוניction בין חומר העיסה-מכסה ואת העיסה. עם זאת, מינרליזציה חזק של העיסה הוא ציין גם במסגרות קליניות, במיוחד בחולים צעירים יחסית 22. מכיוון שבועות בן 8 העכברים השתמשו במחקר זה נחשבים "מבוגרים צעירים" 23, קיים סיכוי לפיו עכברים אלה עדיין שומרים על פוטנציאל odontogenic משמעותי. לכן, זה יהיה כדאי לבחון את השפעות ההזדקנות של היווצרות הדנטין המתקן בעכברים.

הבדיקות היסטולוגית שלנו גילו כי, למרות הדנטין מתקן הוקם בבירור שן העיסה הכתירה, היו מאפיינים של שתי היווצרות הדנטין ועצמות, כפי שמעיד בנוכחות tubules dentinal (חץ אדום) osteocytes (ראשי חץ שחור) המתקן הדנטין (איור 5). תצפיות כאלה מראים כי היווצרות הדנטין המתקן עשוי להיגרם באופן מקומי על ידי המתגוררים תאי גזע עיסת שיניים odontoblast דמוי, כמו גם infiltratinבתאי גזע mesenchymal גרם מן העצם שמסביב.

בהשוואה לתאים מייצר דנטין, לא מצאנו תאים-resorbing הדנטין בתוך העיסה, כפי שנקבע על ידי phosphatase חומצת tartrate עמיד (TRAP) מכתים (מידע לא מוצג). ואכן, דלקת pulpal או periapical גורמת להיווצרות osteoclast על משטחי העצם סביב השן, אבל לא על המשטחים הדנטין בשל מנגנונים כמו-עדיין-ידוע 24. מן הראוי לציין כי היה תיחום ברור בין דנטין הקיימים דנטין המתקן החדש שנוצר (איור 4). מחקר קודם דגי תופעה דומה; כאשר שן מופק בנוכחות בביספוספונטים או נוגדן אנטי RANKL, הן של אשר מעכבים את הפונקציות של osteoclasts, היו demarcations הברורה בין עצם שבשבת קיים עצם ארוג שהוקם זה עתה 25. רעיון זה אף מאשש בהעדר תאים-resorbing הדנטין העיסה. באופן קולקטיבי, במודל של העכברים הוקם שלנו היה provide הזדמנויות ייחודיות לבחון את מנגנוני ריפוי עיסת פצע והיווצרות הדנטין מתקן in vivo.

ישן מגבלה למודל עכבר מכסה-העיסה. באיפור גנטי בין בני אדם ועכברים הם שונים באופן ברור. את הגנום המלא כבר רצף בבני אדם ועכברים, ויש על הדמיון 85% באזורי המקודדים חלבונים בין עכברים ובני אדם 26,27. בקנה אחד עם הרעיון הזה, הוצע כי ממצאים הקשורים עיסת מכסה בחיות לא בהכרח משקפים את אלו בבני האדם 28. עם זאת, במודלים של בעלי חיים נמצאים בשימוש נרחב בקהילת חקר לשחזר מחלות אדם in vivo, כגון דלקת הנגרמת קולגן עבור דלקת מפרקים שגרונית 29, איבוד העצם הנגרמת ovariactomy לאוסטאופורוזיס 30, lipopolysaccharide (LPS) הממשל הלם מערכתי 31, ו ליגטורה מיקום עבור חניכיים 32. ככזה, mou מגביל העיסהse המודל יהיה חיוני כדי לבחון את המנגנונים המולקולריים של ריפוי עיסת פצע והיווצרות הדנטין מתקן in vivo. עם זאת, בדיוק כמו במודלים של בעלי חיים אחרים, פרשנות ואימות הממצאים ממודל עכבר מכסה-העיסה יש להעריך בזהירות.

לסיכום, המחקר הנוכחי מדגים עיסה מוצלחת מכסה בעכברים. בניגוד למודלים אחרים ידועים, במודל של עכברי עיסה-מכסת זו יספק כלי מחקר רב ערך בתחום התחדשות עיסת היווצרות הדנטין מתקן משום שהיא מספקת: 1) הזדמנות לנצל זני עכבר מהונדסים גנטי הנפוצה על מנת להבהיר את המנגנונים בבית ברמה המולקולרית ו -2) דרך יעילה מבחינה כלכלית כדי להשיג תוצאות מובהקות סטטיסטית על ידי הגדלת גודל מדגם. מחקרים נוספים ממתינים, כוללים כימות אובייקטיבי של היווצרות הדנטין מתקן in vivo, תופעות תלויות גיל היווצרות הדנטין מתקן, evaluation של חומרים-מכסת עיסת זמין קליני, ואימות של גורמים מולקולריים נדרשים עבור לריפוי תקין pulpal פצע התחדשות הדנטין מתקן.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

מחקר זה מומן על ידי R01DE023348 (RHK) מ NIDCR / NIH ואת מענק מחקר הפקולטה (RHK) מהמועצה למחקר של הסנאט האקדמי של חטיבת לוס אנג'לס של אוניברסיטת קליפורניה.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
BM-LED stereo microscope MEIJI Techno Microscope 
Optima MCX-LED  Bien Air Dental 1700588-001 Electic motor engine
isoflurane Henry schein animal health NDC 11695-0500-2
1/4 round bur Brasseler 001092T0
Endodontic K-file Roydent 98947
ProRoot MTA Dentsply PROROOT5W MTA
Paper point Henry schein 100-3941
Ultra-Etch Ultradent product Inc. Phosphoric acid etchant
OptiBond SoloPlus Kerr 29669 Adhesives
Coltolux LED Coltene/whaledent Inc. C7970100115 Curing light unit
Characterization tint Bisco T-14012 Flowable composite
Skyscan Breuker 1275 uCT scanner
Microm Thermo HM355S Microtome
Hematoxyline-1 Thermo Scientific 7221
Eosin-Y Thermo Scientific 7111
Cytoseal 60 Thermo Scientific 8310-16 Mounting solution

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Dye, B., Thornton-Evans, G., Li, X., Iafolla, T. Dental caries and tooth loss in adults in the United States, 2011-2012. NCHS Data Brief. (197), 197 (2015).
  2. Bagramian, R. A., Garcia-Godoy, F., Volpe, A. R. The global increase in dental caries. A pending public health crisis. Am J Dent. 22 (1), 3-8 (2009).
  3. Koliniotou-Koumpia, E., Tziafas, D. Pulpal responses following direct pulp capping of healthy dog teeth with dentine adhesive systems. J Dent. 33 (8), 639-647 (2005).
  4. Tarim, B., Hafez, A. A., Cox, C. F. Pulpal response to a resin-modified glass-ionomer material on nonexposed and exposed monkey pulps. Quintessence Int. 29 (8), 535-542 (1998).
  5. Tziafa, C., Koliniotou-Koumpia, E., Papadimitriou, S., Tziafas, D. Dentinogenic responses after direct pulp capping of miniature swine teeth with Biodentine. J Endod. 40 (12), 1967-1971 (2014).
  6. Dammaschke, T., Stratmann, U., Fischer, R. J., Sagheri, D., Schafer, E. A histologic investigation of direct pulp capping in rodents with dentin adhesives and calcium hydroxide. Quintessence Int. 41 (4), 62-71 (2010).
  7. Jegat, N., Septier, D., Veis, A., Poliard, A., Goldberg, M. Short-term effects of amelogenin gene splice products A+4 and A-4 implanted in the exposed rat molar pulp. Head Face Med. 3, 40 (2007).
  8. Paterson, R. C., Radford, J. R., Watts, A. The response of the rat molar pulp of two proprietary calcium hydroxide preparations. Br Dent J. 151 (6), 184-186 (1981).
  9. Sela, J., Ulmansky, M. Reaction of normal and inflamed dental pulp to Calxyl and zinc oxide and eugenol in rats. Oral Surg Oral Med Oral Pathol. 30 (3), 425-430 (1970).
  10. Maurice, C. G., Schour, I. Experimental cavity preparations in the molar of the rat. J Dent Res. 34 (3), 429-434 (1955).
  11. Skyscan, N. V. NRecon user manual. , Available from: http://bruker-microct.com/next/NReconUserGuide.pdf (2011).
  12. Sohn, S., et al. The Role of ORAI1 in the Odontogenic Differentiation of Human Dental Pulp Stem Cells. J Dent Res. 94 (11), 1560-1567 (2015).
  13. Kim, S., Shin, S. J., Song, Y., Kim, E. In Vivo Experiments with Dental Pulp Stem Cells for Pulp-Dentin Complex Regeneration. Mediators Inflamm. 2015, 409347 (2015).
  14. Gronthos, S., Mankani, M., Brahim, J., Robey, P. G., Shi, S. Postnatal human dental pulp stem cells (DPSCs) in vitro and in vivo. Proc Natl Acad Sci U S A. 97 (25), 13625-13630 (2000).
  15. Yu, J., et al. Odontogenic capability: bone marrow stromal stem cells versus dental pulp stem cells. Biol Cell. 99 (8), 465-474 (2007).
  16. Zhu, X., et al. Transplantation of dental pulp stem cells and platelet-rich plasma for pulp regeneration. J Endod. 38 (12), 1604-1609 (2012).
  17. Iohara, K., et al. Dentin regeneration by dental pulp stem cell therapy with recombinant human bone morphogenetic protein 2. J Dent Res. 83 (8), 590-595 (2004).
  18. Saito, K., Nakatomi, M., Ida-Yonemochi, H., Ohshima, H. Osteopontin Is Essential for Type I Collagen Secretion in Reparative Dentin. J Dent Res. , (2016).
  19. Hunter, D. J., et al. Wnt Acts as a Pro-Survival Signal to Enhance Dentin Regeneration. J Bone Miner Res. , (2015).
  20. Goldberg, M., Kulkarni, A. B., Young, M., Boskey, A. Dentin: structure, composition and mineralization. Front Biosci (Elite Ed). 3, 711-735 (2011).
  21. Nascimento, A. B., Fontana, U. F., Teixeira, H. M., Costa, C. A. Biocompatibility of a resin-modified glass-ionomer cement applied as pulp capping in human teeth). Am J Dent. 13 (1), 28-34 (2000).
  22. Bogen, G., Kim, J. S., Bakland, L. K. Direct pulp capping with mineral trioxide aggregate: an observational study. J Am Dent Assoc. 139 (3), 305-315 (2008).
  23. Miller, R. A., Nadon, N. L. Principles of animal use for gerontological research. J Gerontol A Biol Sci Med Sci. 55 (3), 117-123 (2000).
  24. Shah, A., Song, M., Cao, Y., Kang, M. K., Kim, R. H. Osteoclasts are absent in pulpal and periapical inflammatory lesions. J Dent Res. 95, 1503 (2016).
  25. Williams, D. W., et al. Impaired bone resorption and woven bone formation are associated with development of osteonecrosis of the jaw-like lesions by bisphosphonate and anti-receptor activator of NF-kappaB ligand antibody in mice). Am J Pathol. 184 (11), 3084-3093 (2014).
  26. McPherson, J. D., et al. A physical map of the human genome. Nature. 409 (6822), 934-941 (2001).
  27. Gregory, S. G., et al. A physical map of the mouse genome. Nature. 418 (6899), 743-750 (2002).
  28. Hilton, T. J. Keys to clinical success with pulp capping: a review of the literature. Oper Dent. 34 (5), 615-625 (2009).
  29. Holmdahl, R., Bockermann, R., Backlund, J., Yamada, H. The molecular pathogenesis of collagen-induced arthritis in mice--a model for rheumatoid arthritis. Ageing Res Rev. 1 (1), 135-147 (2002).
  30. Kalu, D. N., Chen, C. Ovariectomized murine model of postmenopausal calcium malabsorption. J Bone Miner Res. 14 (4), 593-601 (1999).
  31. Yokochi, T. A new experimental murine model for lipopolysaccharide-mediated lethal shock with lung injury. Innate Immun. 18 (2), 364-370 (2012).
  32. Abe, T., Hajishengallis, G. Optimization of the ligature-induced periodontitis model in mice. J Immunol Methods. 394 (1-2), 49-54 (2013).

Tags

רפואה גיליון 119 ביולוגיה תאית הרגנרציה זולה ריפוי פצעים מכסה זולה הדנטין מתקנת טומוגרפיה מיקרו-מחושבת מודל עכבר אגרגטים trioxide מינרליים
פיתוח מודל ישיר מכסת-זול עבור הערכת pulpal ריפוי פצע גיבוש מתקנת הדנטין של עכברים
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Song, M., Kim, S., Kim, T., Park,… More

Song, M., Kim, S., Kim, T., Park, S., Shin, K. H., Kang, M., Park, N. H., Kim, R. Development of a Direct Pulp-capping Model for the Evaluation of Pulpal Wound Healing and Reparative Dentin Formation in Mice. J. Vis. Exp. (119), e54973, doi:10.3791/54973 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter