Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Biochemistry

मात्रात्मक Transcriptome विश्लेषण में उपयोग के लिए बीज से उच्च शुद्ध शाही सेना के अलगाव के लिए एक कारगर तरीका

Published: January 11, 2017 doi: 10.3791/55008

Introduction

पौधों के बीज, जो अगली पीढ़ी को जन्म दे पैदा करते हैं। बीज इस तरह के तेल, कार्बोहाइड्रेट और प्रोटीन, पोस्ट-germinative विकास के लिए के रूप में भंडारण के भंडार की बड़ी मात्रा में जमा है। मनुष्य के भोजन और पशु चारा के स्रोत के रूप में बीज भंडारण भंडार का उपयोग, और इस तरह के संयंत्र के बीज दुनिया भर में खाद्य कार्बनिक पदार्थ के प्रमुख आपूर्तिकर्ताओं में से एक हैं। बीज की पैदावार बढ़ाने संयंत्र विज्ञान के क्षेत्र में एक महत्वपूर्ण चुनौती है।

चूंकि बीज भंडारण भंडार भोजन और औद्योगिक माल के व्यावसायिक रूप से मूल्यवान स्रोत हैं, आणविक इन भंडार के चयापचय के विनियमन अंतर्निहित तंत्र में व्यापक रूप से 1-6 जांच की गई है। इसके अलावा इन तंत्र elucidating फसलों में बीज की पैदावार बढ़ाने के लिए उपयोगी हो जाएगा। बीज निषेचन के बाद संयंत्र के अंडाशय में विकसित करने, और वे विकास के चरणों 1,6,7 की एक श्रृंखला के माध्यम से परिपक्व। आगे आणविक तंत्र अंतर्निहित बीज विकास को समझने की आवश्यकता है विस्तृत, बीज के विकास की एक श्रृंखला से सटीक जीन की अभिव्यक्ति प्रोफाइल उत्पादन किया जाना है। हालांकि, तेल, प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट, और polyphenols संयंत्र के बीज में की उच्च मात्रा में यह अत्यधिक शुद्ध शाही सेना है, जो जीन अभिव्यक्ति की सटीक प्रोफाइलिंग को अलग अलग करने के लिए कठिन बनाते हैं।

यहाँ, हम तेल, प्रोटीन, और polyphenols के बड़ी मात्रा युक्त तिलहन से शाही सेना अलगाव के लिए एक कारगर तरीका परिचय। इस विधि का प्रयोग, शोधकर्ताओं ने अत्यधिक शुद्ध शाही सेना तैयार करने के लिए सक्षम हो जाएगा। इस तरह की शाही सेना को विकसित करने और परिपक्व तिलहन में बीज भंडारण भंडार का चयापचय विनियमन को नियंत्रित महत्वपूर्ण जीनों में परिवर्तन ट्रांसक्रिप्शनल की निगरानी के लिए उपयोगी हो जाएगा।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

संयंत्र के बीज से कुल शाही सेना के निष्कर्षण 1.

  1. बफर सेट, स्पिन स्तंभों, 1.5 और 2.0 एमएल polypropylene ट्यूब, और nuclease मुक्त 1.5 एमएल polypropylene ट्यूबों तैयार।
  2. 1% (w / v) आणविक जीव विज्ञान ग्रेड polyvinylpyrrolidone (इसके बाद पीवीपी के रूप में) आरएनए निष्कर्षण और भंवर सख्ती के लिए lysis बफर सेल में जोड़े। 25 डिग्री सेल्सियस पर 20 मिनट के लिए सेते पूरी तरह से भंग करने के लिए। 20 मिनट ऊष्मायन के बाद, बुलबुले के गठन को रोकने के लिए उल्टा ट्यूब मोड़ से धीरे बफर मिश्रण। उपयोग करने से पहले कमरे के तापमान (15-25 डिग्री सेल्सियस) पर स्टोर।
  3. बर्फ पर 1.5 एमएल polypropylene ट्यूब में Arabidopsis thaliana पौधों और जगह से हार्वेस्ट फल। एल्यूमिनियम प्लेट पर प्लेस फल 4 डिग्री सेल्सियस पर रखा और एक स्टीरियो माइक्रोस्कोप के तहत फल से बीज अलग।
    1. पृथक बीज (लगभग 200 बीज) 1.5 एमएल polypropylene ट्यूबों कि बर्फ पर एक एल्यूमीनियम रैक में संग्रहित किया गया है में रखें और तुरंत तरल एन में ट्यूबों की जगहitrogen।
  4. तरल नाइट्रोजन से ट्यूबों निकालें और बर्फ पर एल्यूमीनियम रैक करने के लिए उन्हें वापस। 4 डिग्री सेल्सियस पर 1,000 XG पर 1 मिनट के लिए पीवीपी और सेंट्रीफ्यूज युक्त 1% बफर के 100 μL जोड़ें।
  5. 60 एस के लिए एक मोटर-चक्की का उपयोग करते समय बर्फ पर एल्यूमीनियम रैक में ट्यूब रखते हुए एक स्टेनलेस स्टील के मूसल के साथ नमूना homogenize।
  6. , 1% पीवीपी युक्त बफर के 550 μL जोड़े ट्यूब उल्टा मोड़ से बफर धीरे मिश्रण, और 25 डिग्री सेल्सियस पर 10 मिनट के लिए सेते हैं।
  7. 25 डिग्री सेल्सियस पर 8000 XG पर 5 मिनट और हस्तांतरण सतह पर तैरनेवाला के 550 μL एक नया 1.5 एमएल polypropylene ट्यूब करने के लिए अपकेंद्रित्र।
  8. 25 डिग्री सेल्सियस पर 10,000 XG पर 5 मिनट और हस्तांतरण सतह पर तैरनेवाला के 450 μL एक नया 1.5 एमएल polypropylene ट्यूब करने के लिए अपकेंद्रित्र।
  9. आरएनए निकासी के लिए सेल lysate के रूप में सतह पर तैरनेवाला का प्रयोग करें। इसके बाद, प्रक्रिया व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट में निर्माता के निर्देशों में वर्णित का पालन करें।
  10. eluteआरएनए क्षालन बफर की एक न्यूनतम मात्रा का उपयोग निम्न स्तर टेप की अभिव्यक्ति पैटर्न की निगरानी के लिए शाही सेना के एक पर्याप्त उच्च एकाग्रता सुनिश्चित करने के लिए। एक डीप फ्रीजर में शाही सेना स्टोर जब तक इस्तेमाल किया।

2. शाही सेना गुणवत्ता का सत्यापन

  1. कुल शाही सेना गला लें, कोमल दोहन द्वारा मिश्रण है, और बर्फ पर एक एल्यूमीनियम रैक में ट्यूब जगह।
  2. आरएनए एकाग्रता, A260 / A280 अनुपात, और A260 / A230 अनुपात को मापने के लिए एक microvolume स्पेक्ट्रोफोटोमीटर का उपयोग।
  3. 70 एनजी / μL के अंतिम एकाग्रता के लिए RNase मुक्त पानी में कुल शाही सेना पतला।

3. बीज से कुल शाही सेना के रिवर्स प्रतिलेखन

  1. वाणिज्यिक किट से कुल शाही सेना और बफर सेट गला लें। कोमल दोहन के बाद बर्फ पर किट से एंजाइमों रखें। nuclease मुक्त 0.2 एमएल polypropylene ट्यूबों तैयार।
  2. कुल शाही सेना के 5 μL, 1 oligo के μL डीटी प्राइमर (50 माइक्रोन) के और 1 रैंडम की माइक्रोन के 6-मेर (50 माइक्रोन) के 0.2 एमएल polypropy में जोड़ेबर्फ पर lene ट्यूब।
  3. 37 डिग्री सेल्सियस पर 15 मिनट के लिए सेते हैं और बर्फ पर जगह है।
  4. इसके बाद, प्रक्रिया रिवर्स प्रतिलेखन पीसीआर किट में निर्माता के निर्देशों में वर्णित का पालन करें।
  5. बर्फ पर रिवर्स प्रतिलेखन उत्पादों उपयोग करने से पहले रखें।

4. मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर विश्लेषण

  1. निर्माता प्रोटोकॉल का उपयोग करने के लक्ष्य जीन दृश्यों को शरण देने plasmids का निर्माण।
  2. 100-500,000 प्रतियां / मानक घटता के लिए डीएनए टेम्पलेट्स के लिए μL करने के लिए सांद्रता समायोजित करें।
  3. आसुत जल के साथ: सीडीएनए समाधान (100 1) पतला।
  4. पतला सीडीएनए समाधान के 2 μL और मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर किट से मास्टर मिश्रण करने के लिए मानक घटता के लिए plasmids जोड़ें।
  5. 30 एस के लिए 95 डिग्री सेल्सियस और फिर 5 एस के लिए 95 डिग्री सेल्सियस पर 40 चक्र और 35 एस के लिए 60 डिग्री सेल्सियस: निम्नलिखित साइकिल चालन की स्थिति का उपयोग वास्तविक समय पीसीआर सेट करें।
  6. आदमी के अनुसार प्रतिलिपि संख्या का विश्लेषणवास्तविक समय पीसीआर प्रणाली के लिए ufacturer के निर्देशों।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

हम पहले पीवीपी का इष्टतम एकाग्रता Arabidopsis परिपक्व बीज का उपयोग कर जांच की। कुल शाही सेना प्रोटोकॉल सेल 0%, 0.25%, 0.5%, 1.0% या 2.0% पीवीपी युक्त बफर का उपयोग कर ऊपर वर्णित के अनुसार लगभग 1000 बीज से पृथक किया गया। Homogenization और centrifugation के बाद, जबकि तेल की परत और बीज मलबे (चित्रा 1 ए) से परहेज सतह पर तैरनेवाला एकत्र किया गया था।

आकृति 1
चित्रा 1: सेल बफर में इष्टतम polyvinylpyrrolidone एकाग्रता का आकलन। कुल शाही सेना सेल पीवीपी के विभिन्न सांद्रता वाले बफर के साथ निकाला गया था। (ए) homogenization और centrifugation के बाद बीज की एक तस्वीर। (ख) प्रत्येक नमूने के लिए तरंग दैर्ध्य absorbance के रेखांकन संकेत कर रहे हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

मात्रा और पृथक RNAs की पवित्रता तरंग दैर्ध्य absorbance का ग्राफ (चित्रा 1 बी), जिसमें पता चला कि 1.0% पीवीपी बीज से शुद्ध शाही सेना की बड़ी मात्रा को अलग-थलग करने का सबसे प्रभावी एकाग्रता था से अनुमान लगाया गया था।

विकासशील बीज एक stereomicroscope (आंकड़े 2A, 2 बी) के तहत बर्फ पर पूर्व ठंडा एल्यूमिनियम प्लेट पर Arabidopsis thaliana फल से अलग थे। बीज बर्फ पर एक एल्यूमीनियम रैक (आंकड़े -2 सी, 2 डी) पर एक स्टेनलेस स्टील के मूसल और एक ट्यूब में मोटर-चक्की के साथ homogenized थे।

2.jpg "/>
चित्रा 2: अलगाव और Arabidopsis thaliana के बीज के विकास के homogenization। विकासशील बीज एक stereomicroscope (ए) के तहत एक ठंडा एल्यूमिनियम प्लेट पर फलों से अलग कर रहे हैं। अंडप डंडी (बी) से खुली हैं, और विकासशील बीज एकत्र कर रहे हैं। बीज सेल 1% से युक्त (डब्ल्यू / वी) polyvinylpyrrolidone एक एल्यूमीनियम रैक बर्फ (डी) पर ठंडा में ट्यूबों में एक स्टेनलेस स्टील के मूसल (सी) का उपयोग बफर में homogenized रहे हैं। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

कुल शाही सेना फूल (इसके बाद DAF के रूप में) हमारे नव विकसित विधि या पारंपरिक विधि का उपयोग करने के बाद 4, 8, और 12 दिनों में बीज से पृथक किया गया। सांद्रता, A260 / A280 अनुपात, और A260 /200 बीज से अलग शाही सेना के A230 अनुपात की तालिका 1 में दिखाया जाता है।

तरीका DAF आरएनए एकाग्रता A260 / A280 A260 / A230
परम्परागत 4 72.4 ± 7.4 1.90 ± 0.02 2.27 ± 0.06
8 10.8 ± 3.0 1.50 ± 0.08 1.40 ± 0.17
12 4.9 ± 1.7 1.57 ± 0.10 0.76 ± 0.18
नया 4 63.7 ± 2.6 2.10 ± 0.08 2.29 ± 0.03
8 46.3 ± 4.9 2.15 ± 0.05 2.23 ± 0.09
12 41.77; 3.1 2.09 ± 0.04 2.17 ± 0.07

तालिका 1: Arabidopsis बीज से अलग शाही सेना की सांद्रता, A260 / A280 अनुपात, और A260 / A230 अनुपात। कुल शाही सेना 4, 8 में लगभग 200 बीज (190 से 206 के लिए बीज) से अलग किया गया था, और 12 DAF पारंपरिक विधि या हमारे नव विकसित विधि का उपयोग। शाही सेना सांद्रता, A260 / A280 अनुपात, और A260 / A230 अनुपात में मापा गया। मान तीन स्वतंत्र प्रयोगों का मतलब ± एसडी प्रतिनिधित्व करते हैं।

परिणाम हमारे विधि हमें सक्षम है कि 8 और 12 DAF बीज से उच्च शुद्ध शाही सेना को अलग करने के लिए दिखा। कुल शाही सेना सीडीएनए रिवर्स लिखित गया था, और सीडीएनए समाधान 100 गुना पतला थे। WRI1 की प्रतिलिपि संख्या (झुर्रियों 1: AT3G54320), SDP1 (चीनी DEPENDENT1: AT5G04040) 7 </ sup>, और EIF3K (यूकेरियोटिक अनुवाद दीक्षा कारक 3K: AT4G33250) एक आंतरिक नियंत्रण के रूप में 8 मापा गया, और टेप के रिश्तेदार मात्रा में मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर का विश्लेषण करती है (चित्रा 3) द्वारा अनुमान लगाया गया था।

चित्र तीन
चित्रा 3: के विकास के बीज में निम्न स्तर के टेप की मात्रा। कुल शाही सेना हमारे विधि का उपयोग 4, 8, 12 और DAF बीज से निकाला गया था, और सीडीएनए समाधान तैयार थे। WRI1 (ए) और SDP1 (बी) के टेप के रिश्तेदार मात्रा में मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर द्वारा मापा गया। EIF3K एक आंतरिक नियंत्रण के रूप में इस्तेमाल किया गया था। मूल्यों मतलब तीन स्वतंत्र प्रयोगों के एसडी प्रतिनिधित्व करते हैं। DAF; फूल के बाद दिन। वह यहां क्लिक करेंयह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए कर रहे हैं।

हालांकि WRI1 और SDP1 टेप की मात्रा के विकास के बीज में अपेक्षाकृत कम हैं, यह विभिन्न विकासात्मक चरणों में बीज के बीच अभिव्यक्ति परिवर्तन का पता लगाने के लिए संभव था। कि हमारे विधि अन्य तिलहनों में उपयोग किया जा सकता है सत्यापित करने के लिए, कुल शाही सेना ब्रेसिका napus और ग्लाइसिन मैक्स के परिपक्व बीज से पृथक किया गया। शाही सेना सांद्रता, A260 / A280 अनुपात, और A260 / A230 अनुपात की तालिका 2 में दिखाया जाता है।

तरीका पौधा आरएनए एकाग्रता A260 / A280 A260 / A230
परम्परागत बी napus 7.7 ± 0.8 1.5 ± 0.12 0.75 ± 0.11
जी मैक्स 1.61 ± 0.06 0.69 ± 0.09
नया बी napus 143.2 ± 19.0 2.17 ± 0.03 2.23 ± 0.13
जी मैक्स 152.3 ± 4.4 2.17 ± 0.02 2.30 ± 0.02

तालिका 2: शाही सेना की सांद्रता, A260 / A280 अनुपात, और A260 / A230 अनुपात के ब्रेसिका napus और ग्लाइसिन मैक्स के परिपक्व बीज से अलग किया। कुल शाही सेना ब्रेसिका napus और ग्लाइसिन मैक्स बीज पारंपरिक विधि या हमारे नव विकसित विधि का उपयोग कर के लगभग 100 मिलीग्राम से पृथक किया गया। बीज पहले से कुचल दिया और मोटे तौर पर एक मोर्टार और मूसल तरल नाइट्रोजन में ठंडा साथ homogenized थे। शाही सेना सांद्रता, A260 / A280 अनुपात, और A260 / A230 अनुपात में मापा गया। मान तीन स्वतंत्र प्रयोगों का मतलब ± एसडी प्रतिनिधित्व करते हैं।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

जीन की अभिव्यक्ति प्रोफाइल प्लांट फिजियोलॉजी के बारे में हमारी समझ के लिए योगदान; इसलिए, विशिष्ट शाही सेना अलगाव तरीकों प्रत्येक नमूना हालत 9-12 के लिए विकसित किया गया है। हम प्रक्रियाओं है कि बीज से शाही सेना अलगाव के दौरान हिचकते और पाया कि शाही सेना सिलिका झिल्ली के लिए बाध्य गंभीर रूप से हिचकते थे की जांच की। तेल, प्रोटीन, और polyphenols की बड़ी मात्रा में शाही सेना के अलगाव को रोकती हैं। हम शाही सेना निकासी की प्रक्रिया संशोधित आरएनए सिलिका झिल्ली के लिए बाध्य करने की प्रक्रिया से पहले एक सेल समाधान के साथ इन यौगिकों को हटाने के लिए। महत्वपूर्ण संशोधनों (चरणों को 1.7, 1.8) 1% पीवीपी (कदम 1.2) और centrifuged सेल समाधान से सतह पर तैरनेवाला के संग्रह के अलावा भी शामिल थे। 1% पीवीपी के अलावा के उद्देश्य polyphenols दूर करने के लिए है। हम का उपयोग करने के लिए पीवीपी के सबसे प्रभावी एकाग्रता की जांच की और पुष्टि की है कि 1% पीवीपी इस प्रक्रिया के लिए सबसे प्रभावी एकाग्रता है। centrifuged सेल समाधान से सतह पर तैरनेवाला इकट्ठा करने का उद्देश्यतेल और प्रोटीन को हटाने के लिए है। सतह पर तैरनेवाला सतह पर तैरनेवाला में एक तेल की परत और ट्यूब में गोली बनाए रखने से बचने के लिए सावधानी से एकत्र किया जाना चाहिए। इन दो सरल संशोधनों काफी वसूली, A260 / A280 अनुपात, और बीच में बीज और विकास की देर चरणों (1 टेबल) से पृथक शाही सेना की A260 / A230 अनुपात में सुधार हुआ।

हमारे विधि है, जो मानक प्रोटोकॉल का एक सरल संशोधन का प्रतिनिधित्व करता है, आरएनए अलगाव के लिए व्यावसायिक रूप से उपलब्ध किट का उपयोग करता है। इस प्रकार, हमारे विधि लिथियम क्लोराइड का उपयोग इस तरह फिनोल के क्लोरोफॉर्म निष्कर्षण और इथेनॉल के रूप में बोझिल अतिरिक्त चरणों के लिए आवश्यकता के बिना बीज से अत्यधिक शुद्ध शाही सेना को अलग-थलग करने के लिए व्यावहारिक है। हमारे विधि, भी परिपक्व रेपसीड और सोयाबीन के बीज (तालिका 2) के साथ प्रयोग के लिए प्रभावी है यह दर्शाता है कि संशोधनों के तेल और प्रोटीन युक्त फसल के बीज के लिए अच्छी तरह से काम करते हैं। 4 DAF बीज (1 टेबल) और युवा जड़ से शाही सेना वसूली दरएस, पत्तियों और उपजी हमारे विधि का उपयोग कर, यह दर्शाता है कि हमारे विधि के ऊतकों है कि तेल और प्रोटीन में गरीब हैं से शाही सेना अलगाव के लिए उपयुक्त नहीं है कम थे। इसलिए, विधि केवल युक्त तेल, प्रोटीन, और इस तरह के बीज और फल के रूप में polyphenols, ऊतकों से शाही सेना के अलगाव के लिए फायदेमंद है।

कुल मिलाकर, हमारे विधि आरएनए शुद्धि के लिए फिनोल, क्लोरोफॉर्म, या अतिरिक्त प्रक्रियाओं के उपयोग के बिना संयंत्र के बीज से अत्यधिक शुद्ध शाही सेना को प्राप्त करने के लिए उपयुक्त है। इस विधि के बीज में जीन अभिव्यक्ति की अधिक सटीक प्रोफाइलिंग की सुविधा होगी।

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

हम कार्यात्मक जीनोमिक्स सुविधा और Spectrography और Bioimaging सुविधा, NIBB कोर अनुसंधान सुविधाओं, और मॉडल संयंत्र अनुसंधान सुविधा, NIBB जैवसंसाधन केंद्र के कर्मचारियों को धन्यवाद।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
RNeasy Plant Mini Kit QIAGEN 74904
polyvinylpyrrolidone Sigma-Aldrich P5288-100G
HOMOGENIZER S-303 AS ONE 1-1133-02
NanoDrop Lite Thermo Scientific ND-NDL-US-CAN
PrimeScript RT reagent Kit (Perfect Real Time) TAKARA RR037A
KAPA SYBR Fast qPCR kit Kapa biosystems KK4601

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Hills, M. J. Control of storage-product synthesis in seeds. Curr Opin Plant Biol. 7 (3), 302-308 (2004).
  2. Li-Beisson, Y., et al. Acyl-lipid metabolism. Arabidopsis Book. 11, e0161 (2013).
  3. Bates, P. D., Stymne, S., Ohlrogge, J. Biochemical pathways in seed oil synthesis. Curr Opin Plant Biol. 16 (3), 358-364 (2013).
  4. Santos-Mendoza, M., et al. Deciphering gene regulatory networks that control seed development and maturation in Arabidopsis. Plant J. 54 (4), 608-620 (2008).
  5. Durrett, T. P., Benning, C., Ohlrogge, J. Plant triacylglycerols as feedstocks for the production of biofuels. Plant J. 54 (4), 593-607 (2008).
  6. Kanai, M., et al. The Plastidic DEAD-box RNA helicase 22, HS3, is essential for plastid functions both in seed development and in seedling growth. Plant Cell Physiol. 54 (9), 1431-1440 (2013).
  7. Kanai, M., et al. Extension of oil biosynthesis during the mid-phase of seed development enhances oil content in Arabidopsis seeds. Plant Biotechnol J. 14 (5), 1241-1250 (2016).
  8. Dekkers, B. J., et al. Identification of reference genes for RT-qPCR expression analysis in Arabidopsis and tomato seeds. Plant Cell Physiol. 53 (1), 28-37 (2012).
  9. Salzman, R. A., et al. An improved RNA isolation method for plant tissues containing high levels of phenolic compounds or carbohydrates. Plant Mol Biol Rep. 17 (1), 11-17 (1999).
  10. Vicient, C. M., Delseny, M. Isolation of total RNA from Arabidopsis thaliana seeds. Anal Biochem. 268 (2), 412-413 (1999).
  11. Wang, G. F., et al. Isolation of high quality RNA from cereal seeds containing high levels of starch. Phytochem Analysis. 23 (2), 159-163 (2012).
  12. Birtic, S., Kranner, I. Isolation of high-quality RNA from polyphenol-, polysaccharide- and lipid-rich seeds. Phytochem Analysis. 17 (3), 144-148 (2006).

Tags

जैव रसायन अंक 119 बीज संयंत्र आरएनए अलगाव मात्रात्मक वास्तविक समय पीसीआर,
मात्रात्मक Transcriptome विश्लेषण में उपयोग के लिए बीज से उच्च शुद्ध शाही सेना के अलगाव के लिए एक कारगर तरीका
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Kanai, M., Mano, S., Nishimura, M.More

Kanai, M., Mano, S., Nishimura, M. An Efficient Method for the Isolation of Highly Purified RNA from Seeds for Use in Quantitative Transcriptome Analysis. J. Vis. Exp. (119), e55008, doi:10.3791/55008 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter