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Medicine

Hypoparathyroid चूहे बनाने के लिए दो तकनीक: Parathyroidectomy GFP ग्रंथियों और डिप्थीरिया विष की मध्यस्थता पैराथाइरॉइड पृथक का उपयोग

Published: March 14, 2017 doi: 10.3791/55010

Introduction

1880 1 में मानव में और Sandstrom द्वारा कई अन्य प्रजातियों में parathyroid ग्रंथियों के पहले व्यवस्थित वर्णन है, मानव शरीर विज्ञान और रोग के लिए इस छोटे से अंत: स्रावी अंग के महत्व को समझने के बाद से लगातार सुधार हुआ है। Parathyroid ग्रंथियों पैराथायराइड हार्मोन (PTH), कैल्शियम चयापचय के प्रिंसिपल नियामक छिपाना। PTH भी फॉस्फेट homeostasis और हड्डी कारोबार 1, 2 के लिए एक महत्वपूर्ण हार्मोन है। गर्दन की सर्जरी के दौरान आकस्मिक हटाने या parathyroids की क्षति hypoparathyroidism का सबसे आम कारण, एक बीमारी कम रक्त कैल्शियम, कम PTH, और ऊंचा फास्फोरस 1 के द्वारा होती है।

बेहतर अध्ययन करने के लिए और परीक्षण hypoparathyroidism उपन्यास चिकित्सा, विश्वसनीय और आसानी से सुलभ माउस मॉडल के लिए आवश्यक हैं हासिल कर ली। चूहे व्यापक रूप से अनुसंधान के क्षेत्र में उपयोग किया जाता है क्योंकि आनुवंशिक उपकरणों की एक विस्तृत विविधता एक हैंइस प्रजाति विवो में परिष्कृत यंत्रवत अध्ययनों की अनुमति देने में vailable। हालांकि, जबकि शल्य parathyroidectomy (PTX) चूहों 2, 3, 4, 5, और बड़े स्तनधारियों 6, 7, 8 में इस्तेमाल किया जा सकता है, यह तकनीकी रूप से ग्रंथियों के छोटे आकार और उनके चर शारीरिक वितरण की वजह से चूहों में बहुत ही चुनौतीपूर्ण है 9। इसलिए, Thyro-parathyroidectomy (TPTX) आम तौर पर चूहों, जिसमें थायराइड और parathyroid ग्रंथियों एक साथ 10 को हटा रहे हैं में किया जाता है। हालांकि, कम थायराइड हार्मोन के स्तर प्रयोगों में एक संभावित confounder, इस मॉडल उलझी हैं। इसके अलावा, थायराइड ग्रंथि के भीतर सी कोशिकाओं है, जो कैल्सीटोनिन, कृन्तकों में एक हार्मोन कैल्शियम homeostasis में महत्वपूर्ण है, का उत्पादन भी वीं के हटाने पर खो रहे हैंyroids 11।

Hypoparathyroidism के कई आनुवंशिक माउस मॉडल मौजूद हैं, जो PTH-अशक्त माउस 12, GCM2 अशक्त माउस 13, और कैल्शियम संवेदन रिसेप्टर (CaSR) 14, 15 में एक सक्रिय उत्परिवर्तन के साथ Nuf माउस शामिल हैं। हालांकि, इन आनुवंशिक दोषों को पहले से ही भ्रूण के विकास के दौरान मौजूद हैं, और parathyroids के समारोह इसलिए पहले से ही embryogenesis दौरान बिगड़ा हुआ है। इस तरह के कंकाल के रूप में अंगों के विकास को प्रभावित कर सकते हैं। यह जो बीमारी के बाद के जीवन में प्राप्त postsurgical hypoparathyroidism के साथ रोगियों के साथ विरोधाभासों। इसके अलावा, इन माउस मॉडल में से कुछ जल्दी मारक और प्रजनन क्षमता में कमी है, जो आगे उनके उपयोग 12, 13, 14 पेचीदा दिखा रहे हैं।

हम दो नए माउस मीटर विकसितका अधिग्रहण hypoparathyroidism के लिए odels। आनुवंशिक रूप से इंजीनियर है कि चूहों व्यक्त GFP विशेष parathyroids में थायराइड ग्रंथि को हटाने के बिना parathyroid ग्रंथियों आसानी से शल्य हटाने के लिए पहचान करने की अनुमति देता का उपयोग करना। इस माउस PTH-CRE माउस, जो रोजा mTmG माउस के साथ 5.5 केबी PTH प्रमोटर 16 के नियंत्रण में Cre recombinase व्यक्त पार करके तैयार की गई थी। जिसके परिणामस्वरूप PTHcre; mTmG चूहों parathyroid कोशिकाओं में विशेष रूप से हरी फ्लोरोसेंट प्रोटीन व्यक्त करते हैं। दूसरी माउस मॉडल ही PTH-CRE, एक बंद कैसेट parathyroids में विशेष रूप से डिप्थीरिया विष रिसेप्टर की अभिव्यक्ति है, जिसके परिणामस्वरूप inducible डीटीआर माउस से दूर करने के लिए, इस समय का उपयोग करता है। डीटी के प्रणालीगत प्रशासन parathyroid कोशिकाओं को नष्ट कर, प्रतिपादन जानवरों सर्जरी के बिना hypoparathyroid।

दो माउस इस अध्ययन में प्रस्तुत मॉडलों तीन महीने अवलोकन पेरी में एक स्थिर hypocalcemic phenotype प्रदर्शितआयुध डिपो। प्रक्रियाओं का प्रदर्शन करने के लिए आसान कर रहे हैं, फेनोटाइप प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, और hypoparathyroid चूहों एक उच्च जीवित रहने की दर 17 दिखा रहे हैं।

Protocol

इस अध्ययन में संस्थागत पशु की देखभाल और उपयोग समिति (IACUC) मैसाचुसेट्स जनरल अस्पताल के द्वारा अनुमोदित किया गया है। शुरुआत से पहले इस जानवर अध्ययन के लिए उपयुक्त संस्थागत अनुमोदन प्राप्त करते हैं। कुछ तकनीकों स्थानीय IACUC आवश्यकताओं के अनुसार समायोजित किया जा करने के लिए हो सकता है।

1. GFP-PTX चूहे

  1. 10 सप्ताह आगे संभोग के लिए वर्ष - 8 पर PTHcre + चूहों और रोजा-mTmG चूहों प्राप्त करते हैं।
  2. C57BL / 6 पृष्ठभूमि के साथ चूहों प्राप्त करने के लिए 6 पीढ़ियों के लिए C57BL / 6 चूहों के साथ; PTHcre + (FVB पृष्ठभूमि मिश्रित 129) चूहों बैकक्रॉस।
  3. Inbreed PTHcre + चूहों PTHcre + + / चूहों 17 प्राप्त करने के लिए।
    ध्यान दें: जीनोटाइपिंग प्रदर्शन, पूंछ की नोक से डीएनए निकालने और पीसीआर के लिए इसका इस्तेमाल करने के लिए। पीसीआर प्राइमरों Heterozygosity और PTHcre transgene की homozygosity के लिए जाँच करने के लिए इस प्रकार हैं: आगे प्राइमर ए, CCTGTCAAGGATGTGGAAGA, किताब एक रिवर्स ', TCAGATCACACCACACAGCA, चorward प्राइमर बी, CAGTTGTCTTTAGTTTACTCAGCATCAG, किताब बी ', GATAATCGCGAACATCTTCAGGTT 17 रिवर्स।
  4. क्रॉस PTHcre + + / 16 रोजा-mTmG चूहों 18 के साथ चूहों। छुड़ाना PTHcre; mTmG पिल्ले जब 4 सप्ताह पुरानी।
  5. 0.6 मिलीग्राम / जी शरीर के वजन पर tribromoethanol के आईपी इंजेक्शन (Avertin) द्वारा mTmG चूहों, या इस तरह के ketamine / xylazine के रूप में अन्य एजेंटों, 10 सप्ताह पुरानी PTHcre - 8 anesthetize। buprenorphine 0.1 मिलीग्राम / किलो सुप्रीम कोर्ट हर 12 घंटे में एक अनुमोदित प्रोटोकॉल के अनुसार सर्जरी के बाद 48 घंटे के लिए एक एनाल्जेसिक के रूप में प्रयोग करें। पैर की अंगुली चुटकी वापसी पलटा या अन्य तरीकों से संज्ञाहरण की उचित गहराई सुनिश्चित करें। लापरवाह स्थिति में पशु रखें।
  6. दिलवाएँ और त्वचा शेविंग ब्लेड एकल बढ़त का उपयोग करके उदर गर्दन क्षेत्र तैयार करते हैं। एक povidone आयोडीन एंटीसेप्टिक पैड के साथ मुंडा त्वचा कीटाणुरहित।
  7. बाँझ सर्जिकल पर्दे के साथ पशु कवर शल्य साइट के प्रदूषण को कम करने और autoclaved माइक का उपयोग करनेशल्य चिकित्सा की प्रक्रिया के लिए rosurgical उपकरणों।
  8. एक शल्य छुरी के साथ त्वचा में 2 सेमी अनुदैर्ध्य चीरा कट। प्रावरणी काटना और घुमावदार दाँतेदार संदंश के साथ कुंद विच्छेदन से कंधा मिलाकर करने के लिए लार ग्रंथियों धक्का।
  9. हैलोजन के प्रकाश और एक 4 का उपयोग कर विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत - 5x बढ़ाई, कट और अलग तेज संदंश युक्तियों का उपयोग paratracheal मांसपेशियों और श्वासनली बेनकाब।
  10. श्वासनली के बगल में स्थित दाएं और बाएं लोब के साथ थायरॉयड ग्रंथि को पहचानें।
  11. फ्लोरोसेंट रोशनी करने के लिए प्रकाश स्रोत स्विच और दो हरी-fluorescing parathyroid ग्रंथियों कल्पना।
    नोट: आमतौर पर, दो parathyroid ग्रंथियों पर या थायरॉयड ग्रंथि की सतह के पास स्थित हैं, लेकिन कभी कभी, वे आगे दूर स्थित हैं।
  12. ध्यान से शल्य चिकित्सा संदंश और कैंची का उपयोग कर हरे parathyroid ग्रंथियों को हटा दें। रक्तस्तम्भन के लिए बाँझ धुंध का प्रयोग करें और ध्यान से यह सुनिश्चित करने के लिए कि सभी हरी ऊतक हटा दिया गया है श्वासनली के साथ की जाँच करें। बाधित सीवन 6-0 polyglactin 910 टांके का उपयोग करके paratracheal मांसपेशियों को बंद करें। 6-0 polyglactin 910 टांके का उपयोग कर Halsted सिवनी से त्वचा चीरा बंद करें।
  13. वैकल्पिक: द्रव को बदलने के लिए चूहों के लिए 10 μL / जी शरीर के वजन बाँझ सामान्य 0.9% सोडियम क्लोराइड समाधान इंजेक्षन।
  14. शरीर के तापमान को वसूली के लिए एक गर्म इनक्यूबेटर (37 डिग्री सेल्सियस) पर एक अलग पिंजरे में postsurgical जानवरों रखें। एक बार जब चूहों जाग और लेटा हुआ स्थिति में हैं, पिंजरे मंजिल पर कुछ जिलेटिन भोजन के साथ गोली चाउ और पानी डाल दिया।
  15. 2 घंटा की postsurgical अवलोकन अवधि के बाद, जानवरों की सुविधा के लिए वापसी माउस और postsurgical देखभाल के लिए स्थानीय आवश्यकताओं का पालन करें।
  16. 3 दिन parathyroidectomy के बाद, 10 μL पूंछ रक्त प्राप्त करने और इस तरह के रक्त गैस सिस्टम CA ++ / पीएच विश्लेषक के रूप में एक विश्लेषक का उपयोग आयनित सीए ++ रक्त को मापने। रक्त में सफल parathyroidectomy परिणाम आयनित सीए ++ बराबर या दिखावा संचालित चुनाव की तुलना में कम -2SDtrol चूहों (एन = 30 के हमारे प्रयोगों में 1.20 mmol / एल)।

2. PTH-सीआरई-आई डी टी आर चूहे

  1. प्राप्त PTHcre + और डीटीआर FL / FL 8 पर चूहों - 10 सप्ताह संभोग के लिए वर्ष।
  2. C57BL / 6 पृष्ठभूमि के साथ चूहों प्राप्त करने के लिए 6 पीढ़ियों के लिए C57BL / 6 चूहों के साथ; PTHcre चूहों (FVB पृष्ठभूमि मिश्रित 129) बैकक्रॉस।
  3. PTHcre + (C57BL / 6 पृष्ठभूमि) चूहों PTHcre + + / चूहों 17 प्राप्त करने के लिए Inbreed।
    नोट: जीनोटाइपिंग प्रदर्शन करने के लिए, चूहों पूंछ सुझावों से डीएनए निकाला और पीसीआर के लिए इस्तेमाल किया गया था। जीनोटाइपिंग प्राइमर: आगे प्राइमर ए, CCTGTCAAGGATGTGGAAGA, किताब एक रिवर्स ', TCAGATCACACCACACAGCA, आगे प्राइमर बी, CAGTTGTCTTTAGTTTACTCAGCATCAG, किताब बी रिवर्स', GATAATCGCGAACATCTTCAGGTT 17।
  4. डीटीआर के साथ दोस्त PTHcre + + / चूहों 16 सीए / FL चूहों 19 PTHcre-आई डी टी आर चूहों प्राप्त करने के लिए।
  5. diphtheri गिराए द्वारा डीटी समाधान तैयार0.5 माइक्रोग्राम / एमएल की एकाग्रता के लिए बाँझ खारा के साथ एक विष पाउडर। -80 डिग्री सेल्सियस पर बाँझ फिल्टर, और दुकान aliquots।
  6. इंजेक्शन के प्रयोग के लिए 10 सप्ताह पुरानी PTHcre-आई डी टी आर चूहों - 8 चुनें। कमरे के तापमान पर पिघलना डीटी विभाज्य, intraperitoneally 5 माइक्रोग्राम / किग्रा (10 μL / छ) जानवर का वजन पर डीटी प्रशासन। अधिक से अधिक दक्षता और कम से कम विषाक्तता के लिए, डीटी प्रशासन एक 3 दिन के अंतराल में 17 2 इंजेक्शन की कुल के लिए दोहराया है।
  7. 3 दिन दूसरे इंजेक्शन के बाद, प्रत्येक PTHcre-आई डी टी आर / PTHcre-आई डी टी आर-mTmG माउस से 10 μL पूंछ रक्त लेने के लिए और रक्त सीए ++ एक रक्त गैस सिस्टम CA ++ / पीएच विश्लेषक का उपयोग को मापने।
    नोट: हम रक्त के साथ चूहों आयनित सीए ++ से कम 1.18 mmol / hypoparathyroid चूहों के रूप में एल, जो वाहन इंजेक्शन नियंत्रण चूहों (एन = 22) का मतलब है नीचे 2SD के बराबर होती है परिभाषित करते हैं।

Representative Results

Parathyroid ग्रंथियों के स्थान

सबसे पहले, हम 54 PTHcre-mTmG चूहों के parathyroid ग्रंथियों के वितरण के रूप में फ्लोरोसेंट विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे देखा दर्ज की गई। 74% (40/54) चूहों दो हरी parathyroid ग्रंथियों (चित्रा 1 ए, सी, ई), 26% (14/54) चूहों एक अतिरिक्त तीसरे parathyroid ग्रंथि (चित्रा 1 बी, डी, एफ) था। एक भी ग्रंथि या तीन से अधिक ग्रंथियों के साथ कोई माउस मनाया गया। आमतौर पर, parathyroid ग्रंथियों थायरॉयड ग्रंथि (58%, 71/122 के बेहतर सीमा के पास स्थित थे, चित्रा 1 ए (1,2), बी (1,2), सी (2), डी (1,2), ई (2), एफ (3))। 27% (33/122) ग्रंथियों थायरॉयड ग्रंथि के अवर सीमा के पास स्थित थे (चित्रा 1 सी (1), डी (3), एफ (1)), और 13% (16/122) टी से दूर स्थित थेhyroid ग्रंथि (चित्रा 1 बी (3), ई (1), एफ (2))। हमारा निष्कर्ष के साथ संगत कर रहे हैं और parathyroid ग्रंथियों 20 के स्थानों को बदलती के पिछले निष्कर्ष का विस्तार।

GFP-PTX चूहे

त्वचा चीरा बंद करने के लिए संज्ञाहरण से पूरे सर्जरी माउस के अनुसार लगभग 20 मिनट लग गए। एक 3 महीने की अवधि में अवलोकन postsurgical चूहों के जीवित रहने की दर 96.3% (53/55) था। 92.4% (49/53) GFP-PTX चूहों आयनित कैल्शियम का स्तर है कि थे दिखावा संचालित नियंत्रण चूहों या कम का मतलब नीचे 2 एसडी प्रदर्शन किया। GFP-PTX चूहों (hypocalcemia, कम PTH और ऊंचा सीरम फॉस्फेट) में hypoparathyroid phenotype के 3 महीने के पूरे अवलोकन समय के लिए स्थिर था। महत्वपूर्ण बात है, थायराइड समारोह 3 महीने सर्जरी (टीएसएच के बाद दिखावा संचालित जानवरों से अलग नहीं था = 42 ± 24 बनाम 30 ± 15 म्यू / एल, पी = 0.171, टी -4 = 3.0 ± 0.6 बनाम 3.1 ± 0.9 माइक्रोग्राम / डीएल, पी = 0.707 (चित्रा 2)।

PTH-सीआरई-आई डी टी आर चूहे

डीटी इंजेक्शन PTH-CRE-आई डी टी आर चूहों विकसित hypoparathyroidism (निम्न रक्त आयनित कैल्शियम, फास्फोरस ऊंचा रक्त, और अनुपयुक्त कम सामान्य PTH स्तर)। हम पहले से सूचित किया है कि कुछ PTH सकारात्मक कोशिकाओं डिप्थीरिया विष द्वारा पृथक से बचने, मध्यम श्रेणी घूम PTH और इसलिए इन चूहों 17 के कुछ मामूली phenotype समझा।

GFP-PTX चूहे और PTH-सीआरई-आई डी टी आर चूहे में hypoparathyroidism

रक्त सीए की महत्वपूर्ण कटौती ++ और सीरम PTH स्तर 3 दिनों सर्जरी के बाद GFP-PTX चूहों में मनाया गया दिखावा संचालित चूहों में पाए स्तर (सीए ++ = 1.05 ± 0.40 बनाम की तुलना में, (चित्रा 3 ए, से अनुमति (संदर्भ # 17 के साथ reprinted))। 3 दिन के अंतराल, एक खुराक और आहार के डीटी के कम से कम राशि का उपयोग करने के लिए अधिक से अधिक hypoparathyroid phenotype देने के लिए अनुकूलित पर 5 माइक्रोग्राम / किलो डीटी के 2 इंजेक्शन के बाद, डीटी इंजेक्शन PTH-सीआरई-आई डी टी आर चूहों महत्वपूर्ण hypocalcemia और कम PTH से पता चला है की तुलना वाहन नियंत्रण चूहों, जो 90 दिनों के अवलोकन की अवधि में कायम (सीए ++ = 1.10 ± 0.07 mmol / एल बनाम 1.26 ± 0.05 mmol / एल, पी <0.05; PTH = 218 ± 156 स्नातकोत्तर / एमएल बनाम 572 ± 164 पीजी / एमएल, पी <0.05) (चित्रा 3 बी, से (संदर्भ # 17 अनुमति के साथ reprinted))।

आकृति 1
आकृति 1: (ए, सी, ई) या तीन (बी, डी, एफ) हरी parathyroid ग्रंथियों था। (एक सबसे parathyroid ग्रंथियों बेहतर सीमा के पास स्थित थे (1,2), बी (1,2), सी (2), डी (1,2), ई (2), एफ (3) या अवर सीमा के पास थायरॉयड ग्रंथि के (सी (1), डी (3), एफ (1))। दुर्लभ मामलों में, कुछ ectopically स्थित थे (बी (3), ई (1), एफ (2))। यहाँ के लिए क्लिक करें यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए।

चित्र 2
चित्रा 2: TSH और GFP-PTX चूहे की टी -4 स्तर। 3 महीने GFP-PTX के बाद, सीरम TSH और टी -4 measurem के लिए प्राप्त हुई थी दस्तावेजों। GFP-PTX चूहों TSH सांद्रता (42 ± 24 म्यू / एल) (ए) और टी -4 सांद्रता से पता चला है (3.0 ± 0.6 माइक्रोग्राम / डीएल) (बी) है कि नियंत्रण चूहों (टीएसएच = 30 ± 15 म्यू / एल, पी से अलग नहीं थे = 0.171, एन = 11, टी -4 = 3.1 ± 0.9, पी = 0.707, एन = 11)। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र तीन
चित्रा 3: रक्त सीए ++ और GFP-PTX चूहे में PTH स्तर और डीटी PTH-सीआरई-आई डी टी आर चूहे इंजेक्शन। दोनों GFP-PTX चूहों (ए) और डीटी PTH-सीआरई-आई डी टी आर चूहों (बी) स्थिर hypocalcemia प्रदर्शित इंजेक्शन और 3 महीने के अवलोकन की अवधि में PTH स्तर कम (एन = 6 - 8, *** पी <0.001) (फिर से मुद्रित संदर्भ # 17) से अनुमति के साथ।es / ftp_upload / 55010 / 55010fig3large.jpg "लक्ष्य =" _blank "> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

Discussion

हम parathyroid ग्रंथियों में GFP अभिव्यक्ति चुनिंदा साथ ट्रांसजेनिक चूहों का उपयोग GFP-निर्देशित parathyroidectomy की तकनीक का प्रदर्शन। PTHcre में; mTmG चूहों, डबल प्रतिदीप्ति (सीआरई व्यक्त कोशिकाओं और गैर-Cre में लाल टमाटर में हरी GFP कोशिकाओं में व्यक्त) हमें सक्षम स्पष्ट रूप से पहचान करने के लिए, और ठीक thyroids हटाने के बिना सभी parathyroid ग्रंथियों को हटाने के लिए। हम फ्लोरोसेंट लाल गैर parathyroid ऊतक पहचान करने की क्षमता के लिए डबल प्रतिदीप्ति mTmG चूहों का उपयोग पसंद करते हैं, हमारे प्रक्रिया भी अच्छी तरह से एक फ्लोरोसेंट जानवरों का उपयोग इस तरह टमाटर लाल (B6.Cg सीटी (रोजा) 26Sortm14 (के रूप में काम करना चाहिए कैग-tdTomato) Hze / जम्मू) माउस। प्रक्रिया, प्रदर्शन करने के लिए अपेक्षाकृत आसान है माउस प्रति के बारे में 20 मिनट की आवश्यकता है, और एक गंभीर और निरंतर hypoparathyroid phenotype में परिणाम है।

इसके अलावा, GFP पॉजिटिव parathyroid ग्रंथियों का एक अन्य लाभ न्यायपालिका parathyroid ग्रंथियों का पता लगाने में आसानी है। हमारे अध्ययन का प्रदर्शनबी -6 चूहों (चित्रा 1), जो आसानी से हरे रंग की रोशनी से हमारे माउस मॉडल में पता चला रहे हैं के बारे में एक तिमाही में parathyroids की mislocalization। Thyro-parathyroidectomy के विपरीत, हमारी तकनीक थायराइड हार्मोन रिप्लेसमेंट और कैल्सीटोनिन उत्पादक थायराइड सी कोशिकाओं को हटाने के अज्ञात प्रभाव के लिए बाद में आवश्यकता के साथ थायराइड के हटाने से बचा जाता है। Fluorescently लेबल parathyroid ग्रंथियों भी अन्य जांच कि parathyroid ग्रंथियों के अलगाव की आवश्यकता के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है। इस मॉडल की सीमा सर्जरी के लिए आवश्यकता भी शामिल है। बेसिक microsurgery कौशल और एक फ्लोरोसेंट प्रकाश स्रोत के साथ एक विच्छेदन खुर्दबीन के लिए आवश्यक हैं।

कि शल्य चिकित्सा के लिए की आवश्यकता समाप्त hypoparathyroid चूहों पैदा करने के लिए एक दूसरी तकनीक का प्रदर्शन किया है। डिप्थीरिया विष का इलाज PTHcre-आई डी टी आर चूहों एक मामूली hypoparathyroidism phenotype दिखा रहे हैं, लेकिन बस माउस में intraperitoneally डीटी इंजेक्शन लगाने की आवश्यकता है। महत्वपूर्ण हिस्सा foआर इस मॉडल था खुराक के अनुकूलन पैदा करने और आहार खुराक। डीटी की उच्च खुराक विषाक्तता के लिए नेतृत्व किया है, लेकिन कम मात्रा दृष्टिकोण की प्रभावकारिता की कमी हुई। हम निर्धारित किया है कि 5 माइक्रोग्राम / किलो, प्रशासित पर 2 इंजेक्शन की खुराक रेजिमेंट 3 दिन के अलावा, कोई / न्यूनतम मृत्यु दर के साथ विश्वसनीय और स्थिर hypocalcemia में हुई।

अंत में, हमें उम्मीद है कि इन दो दृष्टिकोणों का अधिग्रहण hypoparathyroidism के लिए उपयोगी माउस मॉडल प्रदान करते हैं। एक उपन्यास लंबे समय से अभिनय PTH उपयोग करना, हम hypoparathyroidism 17 के लिए नई दवाओं की प्रभावकारिता का निर्धारण करने में इन मॉडलों के दोनों का इस्तेमाल पहली बार सूचना दी।

Acknowledgments

यह काम एनआईएच द्वारा समर्थित किया गया अनुदान मौखिक रोगों ओपन अनुदान SKLOD2015OF01 (आरबी) के R01-DK100584 और चीन के राज्य कुंजी प्रयोगशाला। हम मदद के लिए Wenping झाओ, Tadatoshi सातो, और केली लौटर धन्यवाद।

Materials

Name Company Catalog Number Comments
ROSAmT/mG mice The Jackson Laboratory 7676
PTH-Cre mice The Jackson Laboratory 5989
iDTRmice The Jackson Laboratory 7900
6-0 polyglactin 910 suture with needle Ethicon, Inc J510G
Safety Single Edge Razor Blades American Safety Razor Company 66-0089
Disposable Scalpel Feather Safety Razor Co., LTD 72042-11
Povidone-Iodine Prep Pads Dynarex Corporation 1108
Ply gauze Busse. Inc BHD707
0.9% Sodium Chloride Solution HOSPIRA Worldwide, Inc 07983-09
1 mL 29 G Insulin Syringe BECTON DICKINSON 329622
Surgical Incise Drapes 3M 6640EZ
Dumstar Biology forceps Roboz Surgical Instrument Co., Inc RS-4984
Micro Dissecting Spring Scissors Roboz Surgical Instrument Co., Inc RS-5605
Needle Holder MILTEX.,Inc V98-42
2,2,2-Tribromethanol Sigma-Aldrich T48402
2-Methyl-2-Butanol Sigma-Aldrich 152463 For dissolve the 2,2,2-Tribromethanol
Diphtheria Toxin Powder Sigma-Aldrich D0564 Dissolve in 0.9% sodium chloride solution at 1 mg/mL as the stock solution in -80 °C
Multicap Blood Collection Capillary tubes Siemens Healthcare Diagnostics Ltd 855578 For collecting blood in iCa2+ analysis using RapidLab 348 Ca2+/pH analyzer
RapidLab 348 Ca2+/pH analyzer Siemens Healthcare For iCa2+ analysis

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References

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चिकित्सा अंक 121 hypoparathyroidism parathyroidectomy parathyroid ग्रंथियों GFP डिप्थीरिया विष पशु मॉडल
Hypoparathyroid चूहे बनाने के लिए दो तकनीक: Parathyroidectomy GFP ग्रंथियों और डिप्थीरिया विष की मध्यस्थता पैराथाइरॉइड पृथक का उपयोग
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Bi, R., Fan, Y., Luo, E., Yuan, Q., Mannstadt, M. Two Techniques to Create Hypoparathyroid Mice: Parathyroidectomy Using GFP Glands and Diphtheria-Toxin-Mediated Parathyroid Ablation. J. Vis. Exp. (121), e55010, doi:10.3791/55010 (2017).

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