Summary
Diese Studie berichtet über eine erfolgreiche Methode der endoskopischen Fettgewebe abgeleiteten Stromazellen (ADSC) -Blatt Transplantation für Ösophagusstriktur Prävention nach einer ausgedehnten endoskopischer Submukosadissektion (ESD) in einem Schweinemodell.
Abstract
In den vergangenen Jahren hat sich die Zell-Blatt-Konstrukt ein breites Interesse in der regenerativen Medizin vorangetrieben, vor allem für die rekonstruktive Chirurgie. Die Entwicklung von diversifizierten Technologien Fettgewebe abgeleiteten Stromazellen (ADSCs) mit verschiedenen Biomaterialien hat für den Bau von zahlreichen Arten von Tissue-Engineering-Ersatzstoffe, wie Knochen, Knorpel und Fettgewebe aus Nager, Schweine oder menschliches ADSCs geführt kombiniert. Erweiterte Speiseröhren endoskopische Submukosadissektion (ESD) ist verantwortlich für Ösophagusstriktur Bildung. Stricture Prävention bleibt eine Herausforderung, ohne effiziente Behandlungen zur Verfügung. Frühere Studien berichteten über die Wirksamkeit der Schleimhautzellen-Blatt-Transplantation in einem Hundemodell und beim Menschen. ADSCs zugewiesen worden sind entzündungshemmende Eigenschaften, lokale immunmodulierende Effekte, Neovaskularisation Induktion und Differenzierung Fähigkeiten in mesenchymalen und nicht-mesenchymale Linien. Diese ursprüngliche Studie beschreibt die endoskopische transplantation eines ADSC Tissue-Engineering-Konstrukt Ösophagusstriktur in einem Schweinemodell zu verhindern. Das Konstrukt wurde ADSC aufeinander auf einen Papierträger geschichtet Membran aus zwei allogenen ADSC Blätter zusammen. Die ADSCs wurden mit dem PKH67 fluorophormarkiertes zu testbasierte konfokale Laser Endomikroskopie (PCLE) Überwachung ermöglichen. Am Tag der Transplantation, eine 5-cm und Hemi-Umfangs ESD bekannt Ösophagusstriktur zu induzieren, wurde durchgeführt. Die Tiere wurden sofort endoskopisch mit 4 ADSC Konstrukte transplantiert. Die vollständige Haftung der ADSC-Konstrukte wurde nach 10 min der sanften Anwendung erhalten. Die Tiere wurden am Tag getötet 28. Alle Tiere erfolgreich transplantiert wurden. Die Transplantation wurde am Tag 3 mit einem positiven PCLE Auswertung bestätigt. Im Vergleich zu transplantierten Tieren entwickelte Kontrolltieren schwere Strikturen, mit großen Entwicklungs fibrotischen Gewebes, häufigere Verdauungsleiden und verminderte Gewichtszunahme. In unserem Modell die Transplantation von allogenic ADSCs, organisiert in Doppelzellschichten, nach längerer ESD war erfolgreich und stark mit einer niedrigeren Ösophagusstriktur Rate verbunden.
Introduction
Das Management von oberflächlichen Tumoren der Speiseröhre hat sich mit der Entwicklung neuer endoskopischer Techniken verändert. Heutzutage ist die endoskopische Resektion der First-Line-Behandlung. Tatsächlich ist es mit einer geringeren Morbidität und Mortalität als eine Operation mit gleicher onkologischen Ergebnisse 1, 2, 3 verbunden. EMR (EMR) und endoskopische Submukosa-Resektion (ESD) sind die am häufigsten verwendeten Techniken. Im Falle eines verlängerten oberflächlicher Tumor ist ESD bevorzugt. Im Vergleich zu EMR ermöglicht ESD en bloc Resektion, unabhängig von der Größe der Läsion und 4 formen, 5, 6. Die Haupt verzögert Komplikation der ESD ist Ösophagusstriktur Bildung, die zwischen einer und zwei Wochen nach der Resektion der Regel auftritt. Jüngste Studien veröffentlicht haben, dass Strikturenbildung gezeigt korreliert dieGröße der Resektion. Die japanische Endoskopische Society empfiehlt die Vermeidung ESD Größen von mehr als ¾ der Speiseröhre Umfang, weil sie mit einer Stenose Entwicklung in mehr als 90% der Fälle und sind für schwere Fütterung Schwierigkeiten und wesentliche Verschlechterung der Lebensqualität verantwortlich verbunden sind.
Die Verhinderung von Ösophagusstriktur bleibt eine Herausforderung. Mechanismen in Strikturenbildung beteiligt sind nur teilweise bekannt. Strikturen Formationen scheint aus der Vereinigung von zwei unterschiedlichen Mechanismen zu führen: 7 (1) pro-inflammatorischen Zellrekrutierung und (2) eine übermäßige Fibrose Entwicklung. Mehrere präventive Behandlungen sind vorgeschlagen worden. Allerdings waren die Ergebnisse unbefriedigend, mit wenig Nutzen und schwere Nebenwirkungen 8, 9. Vor kurzem wurde eine japanische Team, Ohki et al. Vorgeschlagen, eine einlagige Zellschicht von autologem Mundschleimhautzellen in die Esoph zu verpflanzenageal Narbe. Transplantation wurde durchgeführt , unmittelbar nach der ESD 10, 11. Sie zeigten die Wirksamkeit dieses innovativen Ansatzes, zunächst in einem Hunde-Modell und dann bei Patienten.
Fettgewebe abgeleiteten Stromazellen (ADSCs) sind in der regenerativen Medizin vielversprechend. Ihre Anwendung in verschiedenen Bereichen hat interessante Ergebnisse gezeigt, insbesondere in den Wundheilungsprozess. ADSC Therapie bietet mehrere Vorteile, da die Zellen leicht isoliert sind und mit entzündungshemmenden Eigenschaften, lokale immunmodulierende Effekte, Neovaskularisation Induktion verbunden sind , und die Differenzierung Fähigkeiten in mesenchymalen und nicht-mesenchymale Linien 12, 13, 14.
In einer früheren Studie zeigte unser Team die Wirksamkeit der Doppel ADSC-Blatt endoskopische Transplantation für Ösophagusstriktur zurückention nach längerer ESD in einem Schweinemodell 15. In diesem Artikel Technik Berichte von ADSC-Blechkonstruktion und endoskopischer Transplantation vorgestellt.
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Protocol
Alle Tiere wurden nach dem Animal Research Ethics Committee (Richtlinien des Französisch Ministerium für Landwirtschaft) behandelt. Das Protokoll erhielt die Zustimmung der lokalen Ethikkommission genehmigten Tier Experimente an der Universität Paris Descartes (Registernummer MESR 2035,02; Medizinische Fakultät Paris Descartes, Paris, Frankreich).
1. ADSC Kultur und Labeling
- Erhalten bestätigte ADSCs von einer privaten Institution. Kultur allogenen ADSCs bei 37 ° C und 5% CO 2 mit alpha essentiellem Minimalmedium mit 10% fötalem Kalbsserum und 1% Antibiotika (Penicillin und Streptomycin).
- Erhalten etwa 24 x 10 6 ADSCs pro Tier unter Verwendung von Standard - Zellexpansionsverfahren (37 ° C und 5% CO 2). Ernte der ADSCs unter Verwendung einer Standard-Trypsin-Lösung (10 mL für eine T150-Schale). Führen Zellzählung mit einem Hämozytometer.
- Führen Markierung von Zellen am Tag vor der Transplantation mit der PKH67 Färbung procedure beschrieben.
HINWEIS: Das Ziel des Färbeverfahrens ist Zellverfolgung nach der Transplantation zu ermöglichen.- Um 2 x 10 6 ADSCs zu beschriften, bereiten Lösung A (2 x 10 6 Zellen mit 100 & mgr; l Diluent C) und Lösung B (4 ul PKH67 mit 1 ml Diluent C).
- Inkubieren Lösungen A und B für 2 min. Dann fügen Sie 100 ul fötalen Kalbsserum für 1 min.
- Spülen der Lösung mit 300 ul mit Citrat versetztem RPMI (298,5 & mgr; l RPMI und 1,5 ul Citrat) und zentrifugieren bei 1.500 xg für 5 min. Wiederholen Sie diesen Vorgang 2 mal. Pflegen Sie die markierten Zellen und schützen sie vor Licht bis Blechkonstruktion.
2. Doppel ADSC-Blatt-Construct
- Am Tag vor der Transplantation, bereiten eine 12-Well-temperaturempfindlichen Zellkulturschale mit 4 ml pro Vertiefung der Zellkulturmedium, wie oben beschrieben, vor PKH-Kennzeichnung. Seed die Schale mit 1,5 x 10 6 PKH-labeled Zellen pro Vertiefung und Inkubation für 12 h (37 ° C und 5% CO 2).
- Am Tag der Transplantation, abzulösen für 30 min die konfluente Zellschicht durch die Schale bei Raumtemperatur inkubiert.
- Sanft anzusaugen einem ADSC Blatt mit einer Pipette und es auf einem hydrophoben Papierschicht (1,5 cm Durchmesser). Verwenden Sie dieses Papier als Trägermembran.
- Fassen Sie ein anderes Blatt ADSC und sanft deponieren oben auf dem anderen eine Doppelschicht-Konstrukt zu erhalten.
- Wiederholen Sie diese Verfahren, wie viele ADSC-Blatt-Konstrukte zu erhalten, wie erforderlich (4 pro Tier).
3. Speiseröhren Endoskopische Submukosa Dissektion (ESD)
- Am Tag der Transplantation, Pre-medikamen die Tiere mit 10 mg / kg intramuskulär Ketamin und induzieren sie mit 8 mg / kg intravenös Propofol. Dann Intubation durchführen und die Narkose mit Isofluran 2,5% Inhalation erhalten.
- Sobald das Tier in Narkose ist, führen ESD mit einem gastroscope, ein Videoskop und eine electro Einheit.
- Verwenden Sie ein endoskopisches Messer und Soft-Koagulation Hemi-Umfangsrückenmarken im Bereich von 40 cm bis 45 cm von der Zahnbogen zu erhalten.
- Injizieren einer Glycerinlösung Indigokarmin Farbstoff in die submucosale Schicht zur Trennung der Schleimhautschicht von der Muskelschicht enthält.
- Verwenden Sie ein endoskopisches Messer mit ENDOCUT I Modus Umfangs Einschnitte erhalten.
- Verwenden Sie ein endoskopisches Messer mit forcierter Koagulation-Modus, um die Submukosadissektion durchführen, von dem proximalen Einschnitt zum distalen Einschnitt bewegt.
- Am Ende des ESD-Verfahrens, beobachten die Hemi-Umfangs, 5 cm lange Narbe Speiseröhren die Muskelschicht ausgesetzt wird.
4. Endoskopische Transplantation
- Unmittelbar nach der ESD, endoskopisch Tiere transplantiert mit 4 Doppel ADSC-Blatt-Konstrukte.
- Fassen Sie eine ADSC-Blatt-Konstrukt mit endoskopischen Zange undschützen Sie es auf die Wundstelle während des Transports durch eine große, transparente endoskopische Kappe verwendet wird.
- Tragen Sie die gesamte Oberfläche des ADSC-Blatt-Konstrukt auf das Geschwür Bett.
- gelten vorsichtig die ADSC-Blatt-Konstrukt für 10 Minuten eine vollständige und stabile Verpflanzung zu erhalten. Zur Anwendung verwenden endoskopische Pinzette oder eine endoskopische Kappe und wenden die gesamte Oberfläche des ADSC auf die Speiseröhre Submukosa konstruieren.
- Wiederholen Sie diesen Vorgang viermal für jedes Tier, um vier transplantierten und anhaftenden Doppelzelle Blatt Konstrukte zu erhalten.
HINWEIS: Das Ziel approximativ Hälfte des verwundeten Bereich zu decken ist.
5. Postoperative Evaluierung und Follow-up
- Für jedes Tier gewährleisten post-ESD Analgesie mit der intramuskulären Injektion von 0,2 mg / kg Morphin dreimal pro Tag für den ersten Tag und mit einer 28-Tage-anti-Säurebehandlung von Esomeprazol (40 mg / Tag). Führen Sie eine antibiotische Prophylaxe mit amoxicillin (1 g / Tag) 7 Tage lang. Autorisieren Flüssigkeiten am Tag 1 und Feststoffe am folgenden Tag.
- Follow-up mit Tieren, die für 28 Tage. Erhalten Sie täglich klinische Bewertungen mit Mellow Pinkas Dysphagie Partituren 16 und Gewichtsschwankungen Messungen.
- Multimodale Stenose Bewertung: unter Vollnarkose, an geplanten Tagen 3, 14 und 28 führen eine multimodale Auswertung von Strikturen Auftreten.
- Führen Sie eine endoskopische Auswertung mit Narbe Beschreibung, Stenose Messung und Papierträgermembran Erkennung. Messen Sie die Stenose mit dem Gastroskop durch die Stenose zu durchqueren (wobei der Durchmesser des Gastroskop beträgt 8 mm). Beachten Sie die Narbe, die Aufmerksamkeit auf die entzündliche Aspekt (Schleimhaut Erythem, Schleimhautödem und Schleimhaut spontane Blutungen) und die Abwesenheit oder Anwesenheit der Papierträgermembran innerhalb der Narbe.
- Bewerben PCLE grüne Sonde durch den Gastroskop Operator Kanal direkt in die Narbe Bett. Suchen Sie nach einer spontanenund Grün-Signal kompatibel mit PKH67-markierten ADSC-Blatt-Konstrukt Verpflanzung organisiert.
- Führen Sie zwei orthogonalen Fälle von Baryt esophagography mit einem Strahlen Reifen (vorne und linksseitige Fälle). Halten Sie die engste Inzidenz für Stenose Bewertung (Grad der Stenose (%) = [1- (Länge der kurzen Achse unter Stenose / Länge der normalen Achse unter Stenose) x 100)]) 17, 18.
- Tieropfer.
- Am Tag 28, am Ende des Follow-up-Periode, führen Sie das Tieropfer. Während das Tier noch unter Vollnarkose ist, injizieren 100 mg / kg intravenös Phenobarbital. Stellen Sie sicher, Tier Tod mit der klinischen Prüfung für das Fehlen eines Herzschlags und die Bewegung der Atmung.
- Nach einer Sternotomie und Organ Belichtung, entfernen Sie die Speiseröhre von jedem Tier getötet (mit 10% gepuffertem Formalin Fixierung, Paraffineinbettung und 4 um dicke Abschnitte). Stain die Folienmit Hematoxylin und Saffron 15. Digitalisieren Sie die Folien für Computeranalyse und vergleichen Sie die Tiergruppen 15.
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Representative Results
Die Kultur der ADSCs und das Verfahren die ADSC Blatt zu erhalten , ist in Abbildung 1 dargestellt. Figur 2 zeigt den Aufbau des Transplantats, bestehend aus zwei ADSC Blätter geschichtet übereinander auf ihrer Papierträgermembran. ADSCs wurden zuvor mit dem PKH67 fluorophormarkiertes in vivo Transplantatüberwachung mit PCLE zu ermöglichen. Abbildung 3 zeigt die verschiedenen Schritte des erweiterten Speiseröhren endoskopischen Submukosadissektion, was zu einer 5-cm und hemi-Umfangsspeiseröhren Narbe. Abbildung 4 zeigt die endoskopische Transplantationsverfahren. Die Transplantation war erfolgreich für alle Tiere nach 10 min der sanften Anwendung. Abbildung 5 zeigt die positive PCLE Auswertung am Tag 3, um den Erfolg der Transplantation Verfahren bestätigt.
Die Follow-up-Periode für die multimodale Stenose analys erlaubt ist. Die unterschiedlichen Bewertungen sind in den folgenden Abbildungen und Tabelle gezeigt. Im Vergleich zu Kontrolltieren zeigte die transplantierten Tiergruppe weniger häufig Verdauungs Schwierigkeiten und höhere Gewichtszunahme an Tag 28. Ein Tier aus der Gruppe transplantierten eine schwere Stenose der Speiseröhre im Vergleich zu allen Tieren in der Kontrollgruppe entwickelten. Im Vergleich zu transplantierten Tieren entwickelte Kontrolltiere signifikant fibrotischen Gewebes. Tabelle 1 zeigt die klinische und endoskopische Befunde während des Follow-up - Periode. Abbildung 6 zeigt die endoskopische und radiologischen Befunde am Ende des Follow-up - Periode in verpflanzt und nicht transplantierten Tieren. Abbildung 7 zeigt die verschiedenen histologischen Befunde zwischen transplantierten und Kontrolltieren. Diese Daten bestätigen die Wirksamkeit der ADSC-Blatt-Transplantation für Ösophagusstriktur Prävention.
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Abbildung 1. ADSC-Blatt Baukonstruktion. A und B. Früh Passage ADSCs in Standard - Kulturschalen mit unterschiedlichen Vergrößerungen. ADSC Blätter wurden durch Kultivierung von PKH-markierten ADSCs auf kommerzielle Temperatur ansprechende Kulturschalen erhalten. C. Wenn die Inkubationstemperatur auf 20 ° C (Raumtemperatur) reduziert wurde, werden alle Zellen spontan aus der Schale Oberflächen als intakte ADSC Blätter abgelöst, ohne die Notwendigkeit für die enzymatische Behandlung. D. Ein ADSC Blatt vor Graft Bau geerntet eine Transfermembran verwendet wird . Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 2. Doppel ADSC-Blatt Baukonstruktion. A, B und C. Am Tag vor transplantation, PKH-markiertem ADSCs wurden bei frühen Passagezahl geerntet (P4 - P5), ausgesät auf einer 12-well Temperatur ansprechenden Zellkultur inokuliert und bei 37 ° C und 5% CO 2 mit alpha essentiellem Minimalmedium mit 10% fötalem Kalbsserum und 1% Antibiotika (Penicillin und Streptomycin). Jede Vertiefung wurde mit einem Poly-N-Isopropylacrylamid Membran (am Boden jeder Vertiefung) beschichtet und beimpft mit 1,5 x 10 6 Zellen. Wenn die Inkubationstemperatur auf 20 ° C (Raumtemperatur) reduziert wurde, alle Zellen als intakte Bögen ADSC ohne die Notwendigkeit enzymatischer Behandlung spontan löst. D. Theoretical Schema der Doppelzelle Blatt Konstrukt aus zwei ADSC Blätter geschichtet übereinander und auf eine Papierträgermembran. E. makroskopische Ansicht einer fertigen Doppel - Zell-Blatt - Konstrukt. Geändert von Referenz 15. Bitte klicken Sie hier t o eine größere Version dieser Figur sehen.
3. Endoskopische Submukosa Dissektion Verfahren Abbildung. A. Endoscopic Markierungen wurden geschaffen , um die Resektionsfläche zu beschreiben, im Bereich von 40 bis 45 cm von der Zahnbogen und die Hälfte des Umfangs beteiligt sind . B. Die submuköse Injektion eines Glycerinlösung Indigokarmin Farbstoff enthält. Das Ziel dieser Injektion wurde die Schleimhaut-Schicht von der Muskelschicht zu trennen, um die submucosale Schicht zu belichten. C. Peripheral Schnitte wurden extern mit den endoskopischen Markierungen durchgeführt, die injizierte Submukosa enthüllt. D. Die endoskopische Sicht am Ende des Submukosadissektion eine 5 cm lange und Hemi-Umfangsspeiseröhren Narbe zeigt.et = "_ blank"> Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 4. Doppel ADSC-Blatt Endoskopische Transplantation Verfahren. A. Vier ADSC - Konstrukte bereit transplantiert werden. B. Schutz des ADSC konstruieren unter einem großen endoskopischen Kappe vor der Transplantation. C. Endoskopische Ansicht der Kreuzung des Tieres Rachen, zeigt das ADSC Konstrukt unter der endoskopischen Kappe geschützt. D. 10 min Einsatz war ausreichend Blatt Einhaltung zu erhalten. Anwendung wurde mit der endoskopischen Kappe oder endoskopische Zange durchgeführt. Bitte klicken Sie hier , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 5. PCLE - Entdeckungen. PCle am Tag 3 zeigt spontan und intensive Signale ähnlich denen in vitro erhalten werden , kompatibel mit einem erfolgreichen zellBlattTransplantation. Es wurde kein Signal an den Tagen 14 und 28 A. Die in - vitro - PCLE Signal von ADSCs in Suspension gefunden. B. Die in - vitro - PCLE Signal von ADSCs in einer Zellschicht organisiert. C. Die in vivo PCLE Sonde Anwendung auf die Speiseröhre Narbe. D. Die in vivo PCLE Signal von ADSCs am Tag 3 nach der Transplantation sichtbar gemacht . Geändert von Referenz 15. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 6. Ergebnisseder Morphologische Analyse an Tag 28. Im Vergleich zur Kontrollgruppe zeigte die endoskopische und radiologischen Befunde am Tag 28 eine kurze und leichte Stenose ohne Upstream - Erweiterung und einer komplett neu epithelialisiert Schleimhaut. Geändert von Referenz 15. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Abbildung 7. Die histologische Auswertung der Stricture Bereiche. Die histologische Analyse wurde nach HES-Kennzeichnung und Dia Digitalisierung durchgeführt. In transplantierten Tieren (A) wurde der Heilungsprozess verbessert wird , mit einer erhöhten Reepithelialisierung und verringerte fibrosis Entwicklung, im Vergleich zu nicht transplantierten Tieren (B). Intensive fibrotischer Gewebeentwicklung warbeobachtet aufgrund muscularis mucosae Zerstörung, Invasion fibrotische inneren Muscularis Schicht und große Schleimhautdefekten. Geändert von Referenz 15. Bitte hier klicken , um eine größere Version dieser Figur zu sehen.
Tabelle 1. Klinische Prüfungen während des Follow-up - Periode. Klinische Beurteilungen erhielten eine tägliche klinische Bewertung unter Verwendung von nach dem Mellow Pinkas-Score und mit Gewichtsveränderung durchgeführt. (*) Mellow Pinkas Note 16. Geändert von Referenz 15.
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Discussion
In diesem Schweinemodell war die ADSC-Blatt - Transplantation technisch erfolgreich, und die in vivo PCLE Auswertung für Zelle Verpflanzung Überwachung erlaubt. Klinische, endoskopische, radiologische und histologische Auswertungen zeigten die Wirksamkeit der endoskopischen ADSC Blatt bei Ösophagusstriktur Prävention nach längerer ESD.
Die endoskopische Transplantation eines ADSC Glycerinlösung ein Indigokarmin Farbstoffschicht enthält, ist ein innovativer Ansatz in der regenerativen Medizin. Ohki et al. zuerst beschrieben die endoskopische Transplantationsverfahren. In ihren Studien wurden die Zell-Blatt - Konstrukte von Mundschleimhaut epithelialen Zellschichten bestehen auf einer dünnen Folie aus Polyvinylidendifluorid geschichtet, als Trägermembran verwendet , um 10, 11, 19. Die Trägermembran wurde mit endoskopischen Zange gegriffen und vorsichtig auf das Geschwür Bett gelegt. Cell-Blatt Einhaltung wurde nach 10 min der sanften Anwendung erhalten. Dieses Verfahren wurde noch nicht wiedergegeben worden. In dieser Studie wurden doppelt ADSC-Blatt-Konstrukte aus mehreren Gründen transplantiert. Die Wahl der ADSC wurde auf mehrere Studien, die anhand ihrer entzündungshemmenden Fähigkeiten gezeigt, insbesondere in der Haut Heilungsprozesses. ADSCs sind dafür bekannt, Keratinozyten und Fibroblasten - Wechselwirkungen 7 modulieren. Der Mechanismus der Entwicklung Fibrose ist komplex und nur teilweise verstanden. Die parakrine Wirkung scheint eine wichtige Rolle in ADSC Aktion zu spielen, einschließlich entzündungshemmender Faktor Produktion, wie TGFß und pro-angiogenen Faktoren 20.
Endoskopische ADSC-Blatt-Transplantation hat einige Einschränkungen. Zuerst Zellschichten wurden für 10 min auf die Speiseröhren Narbe aufgebracht, um eine stabile Haftung zu erhalten. Dieser Teil des Verfahrens war eine Herausforderung, technisch schwierig, und hatte von einem erfahrenen Endoskopiker durchgeführt werden. Trotzdem wurden alle Tiere erfolgreich transplantiert, um die Durchführbarkeit des endoskopischen Verfahrens bestätigt. Vor kurzem wurde die Verwendung eines 3D-Druckvorrichtung den Erfolg der zellBlatt Transplantation zu verbessern , wurde 21 berichtet. Zweitens ist diese Technik mit einer unbekannten Überlebensrate verbunden. Eine Ösophagus-Narbe ist eine aggressive Umgebung für die Zellen. Ein auf Temperatur ansprechende Schale ermöglicht die Herstellung der Zellblattes durch die extrazelluläre Matrix zu konstruieren und für die Bildung von Zellverbindungen. Damit die Überlebensrate und die ADSC Wechselwirkungen zu verbessern, ein Doppel ADSC-sheet - Konstrukt wurde 22 gewählt, 23. Diese Studie wurde nicht zu beurteilen, entweder das Zellüberlebensrate oder die Dosis Wirkung der Transplantation auf Ösophagusstriktur Prävention entwickelt, die beide wichtige Fragen sind. Drittens, wie in Ohki et al. Die Verwendung einer Trägermembran war notwendig, um die ADSC-sheet-Konstrukt tragen. Achterner Transplantation könnte die Papierträgermembran nicht ohne Konstrukt Zerstörung entfernt werden. Diese intra-Ösophagus-Fremdmaterial war für die erhöhte Entzündung verantwortlich. Eine optimierte Technik würde für die Entfernung des Papierträgermembran ermöglichen.
Transplantation Überwachung mit PCLE war auch eine Herausforderung. Diese neue endoskopische Bildgebungstechnik ermöglicht in vivo histologische Analyse, einschließlich der Visualisierung des Drüsenmuster, Mikrogefäßbildung und zelluläre Veränderung. PCle wurde in vielen Erkrankungen des Verdauungssystems , wie entzündliche Darmerkrankung, Barrett-Ösophagus und mucinous Pankreas Zysten 24, 25 ausgewertet. Die PCLE-kompatible PKH67 Fluorophor wurde für Markierung von Zellen verwendet. Ein Fluoreszenzsignal kompatibel mit der Anwesenheit des ADSC Blatt wurde in 4 Tieren am Tag 3. Dieses positive Ergebnis beobachtet den Erfolg der ADSC-sheet Transplantation reflektiert. Allerdings becaVerwendung PKH67 hat ein verringertes Signal im Laufe der Zeit und nach der Zellteilung, PCle Auswertung möglich war nur ein paar Tage nach der Transplantation 26. Ohki et al. und Kanai et al. Zellrasens Transplantation durch Immunofärbung überwacht, und sie bestätigten die Anwesenheit von Zellen bis zum Tag 8 nach der Transplantation. Reifen Zellen wurden in dieser Studie verwendet wurden, was den Vorteil der spezifischen Immunfärbung aufweisen.
Ösophagusstriktur ist eine der schwerwiegendsten Nebenwirkungen nach ESD, dadurch Begrenzung Technikentwicklung. Optimale Techniken Strikturenbildung zu verhindern, fehlen noch. In der klinischen Praxis Patienten mit erweiterten Speiseröhren ESD werden verschiedene präventive Behandlungen, wie Kortikosteroiden, endoskopische Ballondilatationen vorgeschrieben oder Ösophagus - Stents 27. Die lokale Anwendung von Biomaterialien wurde durchgeführt, mit unterschiedlichen Ergebnissen 28, 29 30, 31. Ein altklug und erhöhte Reepithelisierung wurde in der Speiseröhre Narbe beobachtet. Für die lokale Immunmodulation, sind nur wenige Daten in der Literatur über ADSC Injektion verfügbar oder Amnionmembran Anwendung 32, 33. Eine verzögerte Strikturenbildung und eine verminderte Strikturrate beobachtet.
In diesem Schweinemodell wurde die endoskopische zell Blatt Transplantationsverfahren erfolgreich durchgeführt. Transplantierte ADSCs in Doppelzellschichten organisiert ihre Fähigkeit bewiesen Ösophagusstriktur Bildung nach längerer ESD zu verhindern. Mechanismen in der ADSC Heilung beteiligtVerfahren sind schlecht verstanden und muss weiter in zukünftigen Studien untersucht werden. So wird in Anbetracht dieser vielversprechenden Ergebnisse sollte eine klinische Studie durchgeführt werden, um die Wirksamkeit des ADSC-sheet-Konstrukt nach längerer ESD bei Patienten zu beurteilen.
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Disclosures
Die Autoren haben nichts zu offenbaren.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Transparent endoscopic cap Q180 compatible | Olympus Optical Co | ||
| GIF-Q180 gastroscope | Olympus Optical Co | ||
| Videoscope System Exera II | Olympus Optical Co | ||
| Injection needle 18 G | Olympus Optical Co | ||
| Electrosurgery unit ERBE ICC 350 | ERBE Technology | ||
| Indigo carmin 1% | Life | ||
| Endoscopic hybrid knife | Life | ||
| Minisonde Z pCLE green probe | Mauna Kea Technology | You must learn how to use the probe. The manipulation could be difficult. | |
| Fetal bovine serum | Sigma Aldrich | 12105C | |
| Trypsin | Sigma Aldrich | T146 | |
| Alpha minimum essential medium | Thermo Fisher | 22561-021 | |
| Phosphate-Buffered Salines | Thermo Fisher | 10010-023 | |
| PKH67 dye kit | Sigma Aldrich | Mini67-KT | |
| 12-well temperature responsive cell culture dish | Upcell Thermo Scientific | 174900 | Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 min before seeding cells |
| Esomeprazole 40 mg | Biogaran | ||
| Moprhine sulfate 50 mg/mL | Lavoisier | ||
| Amoxicilline 1 g | Biogaran | ||
| Ketamine 250 mg/5 mL | Panpharma | ||
| Propofol 10 mg/mL | Fresenius | ||
| Hydrophobic paper | Carrefour |
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