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ADSC पत्र ट्रांसप्लांटेशन विस्तारित इसोफेजियल इंडोस्कोपिक सबम्यूकोसल विच्छेदन के बाद निंदा रोकने के लिए

Published: February 10, 2017 doi: 10.3791/55018
Automatic Translation
1,2,3, 3, 1,4, 1,3,5, 3, 3, 1,3,5, 1,2, 1,3,5, 1,2,3
1Assistance Publique-Hôpitaux de Paris, Université Paris Descartes Sorbonne Paris Cité, 2Department of Gastroenterology, Hôpital Européen Georges Pompidou, 3UMR-S970, Université Paris Descartes Sorbonne Paris Cité, 4Department of Pathology, Hôpital Européen Georges Pompidou, 5Department of Radiology, Hôpital Européen Georges Pompidou

Summary

इस अध्ययन endoscopical वसा ऊतकों व्युत्पन्न stromal सेल (ADSC) के एक सफल विधि की रिपोर्ट एक सूअर मॉडल में एक विस्तारित इंडोस्कोपिक सबम्यूकोसल विच्छेदन (ईएसडी) के बाद -sheet esophageal निंदा की रोकथाम के लिए प्रत्यारोपण।

Abstract

पिछले वर्षों में, सेल चादर का निर्माण विशेष रूप से पुनर्निर्माण सर्जरी की प्रक्रियाओं के लिए पुनर्योजी चिकित्सा के क्षेत्र में व्यापक हित को प्रेरित किया है। विभिन्न biomaterials के साथ वसा ऊतकों व्युत्पन्न stromal कोशिकाओं (ADSCs) के संयोजन विविध प्रौद्योगिकियों के विकास जैसे हड्डी, कार्टिलेज, और कृंतक, सुअर, या मानव ADSCs से वसा ऊतकों के रूप में ऊतक इंजीनियर के विकल्प, के कई प्रकार के निर्माण के लिए प्रेरित किया है। विस्तारित esophageal इंडोस्कोपिक सबम्यूकोसल विच्छेदन (ईएसडी) esophageal निंदा गठन के लिए जिम्मेदार है। निंदा रोकथाम चुनौती बनी हुई है, कोई कुशल उपलब्ध उपचार के साथ। पिछले अध्ययनों से एक कुत्ते मॉडल में और मनुष्यों में श्लैष्मिक सेल चादर प्रत्यारोपण के प्रभाव को सूचना दी। ADSCs mesenchymal और गैर-mesenchymal प्रजातियों में विरोधी भड़काऊ गुणों, स्थानीय प्रतिरक्षा modulating प्रभाव, neovascularization प्रेरण, और भेदभाव क्षमताओं के लिए जिम्मेदार ठहराया जाता है। यह मूल अध्ययन इंडोस्कोपिक टीआरए का वर्णनएक ADSC ऊतक इंजीनियर निर्माण के nsplantation एक सूअर मॉडल में esophageal निंदा रोकने के लिए। ADSC निर्माण एक कागज समर्थन झिल्ली पर एक दूसरे पर स्तरित दो allogenic ADSC शीट से बना था। ADSCs PKH67 fluorophore जांच आधारित लेजर confocal endomicroscopy (pCLE) निगरानी की अनुमति के साथ लेबल रहे थे। प्रत्यारोपण के दिन, 5 सेमी और अर्ध-परिधीय ईएसडी esophageal निंदा प्रेरित करने के लिए जाना जाता प्रदर्शन किया गया था। पशु तुरंत endoscopically 4 ADSC निर्माणों के साथ प्रत्यारोपित किया गया। ADSC निर्माणों की पूरी आसंजन कोमल आवेदन करने के 10 मिनट के बाद प्राप्त हुई थी। पशु दिन 28. सभी जानवरों को सफलतापूर्वक प्रत्यारोपित किया गया पर बलिदान किया गया। ट्रांसप्लांटेशन एक सकारात्मक pCLE मूल्यांकन के साथ 3 दिन पर इस बात की पुष्टि की गई थी। प्रत्यारोपित जानवरों की तुलना में, नियंत्रण जानवरों प्रमुख तंतुमय ऊतक विकास, अधिक लगातार पाचन मुसीबत, और कम वजन के साथ गंभीर प्रतिबंधों का विकास किया। हमारे मॉडल में, allogeni का प्रत्यारोपणग ADSCs, डबल सेल शीट में संगठित, विस्तारित ईएसडी के बाद सफल और दृढ़ता से एक कम esophageal निंदा की दर के साथ जुड़े थे।

Introduction

सतही esophageal ट्यूमर के प्रबंधन के नए एंडोस्कोपिक तकनीक के विकास के साथ बदल गया है। आजकल, इंडोस्कोपिक लकीर पहली पंक्ति उपचार है। वास्तव में, यह बराबर आंकलोजिकल परिणाम 1, 2, 3 के साथ एक सर्जरी की तुलना में कम रुग्णता और मृत्यु दर के साथ जुड़ा हुआ है। इंडोस्कोपिक श्लैष्मिक लकीर (ईएमआर) और इंडोस्कोपिक सबम्यूकोसल लकीर (ईएसडी) सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल की तकनीक है। एक विस्तारित सतही ट्यूमर के मामले में, ईएसडी पसंद किया जाता है। ईएमआर की तुलना में, ESD, घाव आकार की परवाह किए बिना गुट एन resectioning की अनुमति देता है और आकार 4, 5, 6। ईएसडी की मुख्य देरी जटिलता esophageal निंदा गठन, जो आम तौर पर लकीर के बाद एक और दो सप्ताह के बीच होता है। हाल ही में प्रकाशित अध्ययन से पता चला है कि निंदा गठन के लिए जोड़ा जाता हैलकीर के आकार। जापानी इंडोस्कोपिक सोसायटी से परहेज करने की सिफारिश की ईएसडी esophageal परिधि क्योंकि वे मामलों के 90% से अधिक में निंदा विकास के साथ जुड़ा हुआ है और गंभीर खिला मुसीबतों और जीवन की गुणवत्ता में प्रमुख गिरावट के लिए जिम्मेदार हैं की ¾ से बड़ा आकार।

esophageal निंदा की रोकथाम चुनौती बनी हुई है। निंदा गठन में शामिल तंत्र केवल आंशिक रूप से जाना जाता है। (1) समर्थक भड़काऊ सेलुलर भर्ती और (2) अत्यधिक फाइब्रोसिस विकास 7: संरचनाओं निंदा दो अलग तंत्र के सहयोग से परिणाम के लिए लगता है। कई निवारक उपचार प्रस्तावित किया गया है। लेकिन, परिणाम, असंतोषजनक थे थोड़ा लाभ और गंभीर साइड इफेक्ट 8, 9 के साथ। हाल ही में, एक जापानी टीम, Ohki एट अल। , Esoph में ऑटोलॉगस मौखिक श्लैष्मिक कोशिकाओं की एक परत सेल चादर प्रत्यारोपण करने का प्रस्तावageal निशान। ट्रांसप्लांटेशन ईएसडी 10, 11 के तुरंत बाद किया गया था। वे इस नए दृष्टिकोण की प्रभावशीलता का प्रदर्शन किया, एक कुत्ते मॉडल में पहले और उसके बाद रोगियों में।

वसा ऊतकों व्युत्पन्न stromal कोशिकाओं (ADSCs) पुनर्योजी चिकित्सा में वादा कर रहे हैं। कई क्षेत्रों में अपने आवेदन दिलचस्प परिणाम दिखाया गया है, विशेष रूप से घाव चिकित्सा प्रक्रिया में। क्योंकि कोशिकाओं को आसानी से अलग कर रहे हैं और विरोधी भड़काऊ गुण, स्थानीय immunomodulating प्रभाव, neovascularization प्रेरण, और भेदभाव क्षमताओं mesenchymal और गैर-mesenchymal प्रजातियों 12, 13, 14 में के साथ जुड़े रहे ADSC चिकित्सा, कई लाभ प्रदान करता है।

पिछले एक अध्ययन में, हमारी टीम esophageal निंदा आखिरी लिए डबल ADSC पत्र इंडोस्कोपिक प्रत्यारोपण के प्रभाव का प्रदर्शनएक सूअर मॉडल 15 में विस्तारित ईएसडी के बाद ention। इस अनुच्छेद में, ADSC-शीट निर्माण और endoscopical प्रत्यारोपण तकनीक का प्रतिवेदन प्रस्तुत कर रहे हैं।

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Protocol

सभी जानवरों को पशु अनुसंधान आचार समिति (कृषि के फ्रेंच मंत्रालय के दिशा निर्देशों) के अनुसार इलाज किया गया। (; चिकित्सा पेरिस डेसकार्टेस, पेरिस, फ्रांस के संकाय पंजीकृत संख्या MESR 2035.02) प्रोटोकॉल स्थानीय आचार समिति पेरिस डेसकार्टेस विश्वविद्यालय में पशु प्रयोगों के लिए अधिकृत की मंजूरी प्राप्त किया।

1. ADSC संस्कृति और लेबलिंग

  1. एक निजी संस्थान से इस बात की पुष्टि ADSCs प्राप्त करते हैं। 37 डिग्री सेल्सियस और 5% से 10% भ्रूण वील सीरम और 1% एंटीबायोटिक दवाओं (पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन) सहित अल्फा न्यूनतम आवश्यक माध्यम के साथ सीओ 2 संस्कृति allogenic ADSCs।
  2. मानक सेल विस्तार प्रक्रियाओं (37 डिग्री सेल्सियस और 5% सीओ 2) का उपयोग कर पशु प्रति लगभग 24 x 10 6 ADSCs प्राप्त करते हैं। एक मानक trypsin समाधान (एक T150 डिश के लिए 10 एमएल) का उपयोग ADSCs हार्वेस्ट। एक hemocytometer साथ सेल गिनती प्रदर्शन करना।
  3. सेल PKH67 धुंधला पीआर का उपयोग प्रत्यारोपण से पहले दिन लेबलिंग प्रदर्शन करनाocedure नीचे वर्णित है।
    नोट: धुंधला प्रक्रिया के लक्ष्य के प्रत्यारोपण के बाद सेल ट्रैकिंग की अनुमति है।
    1. आदेश 2 एक्स 10 6 ADSCs लेबल करने में, समाधान एक तैयार करने और समाधान बी (मंदक सी के 1 एमएल के साथ PKH67 के 4 μL) (मंदक सी के 100 μL के साथ 2 x 10 6 कोशिकाओं)।
    2. 2 मिनट के लिए समाधान ए और बी सेते हैं। फिर, 1 मिनट के लिए भ्रूण वील सीरम के 100 μL जोड़ें।
    3. 5 मिनट के लिए 1,500 XG पर citrated RPMI के 300 μL के साथ समाधान (RPMI के 298.5 μL और साइट्रेट के 1.5 μL) और सेंट्रीफ्यूज कुल्ला। इस आपरेशन को दोहराएँ 2 बार। लेबल कोशिकाओं को बनाए रखने और चादर निर्माण जब तक प्रकाश से उन्हें बचाने के लिए।

2. डबल ADSC-शीट निर्माण

  1. दिन के प्रत्यारोपण से पहले, सेल संस्कृति के माध्यम से अच्छी तरह से प्रति 4 एमएल, ऊपर वर्णित है, इससे पहले कि PKH-लेबलिंग के साथ एक 12 अच्छी तरह से तापमान संवेदनशील सेल संस्कृति पकवान तैयार करते हैं। 1.5 x 10 6 PKH-labele के साथ पकवान बीजअच्छी तरह से प्रति डी कोशिकाओं और 12 घंटे (37 डिग्री सेल्सियस और 5% सीओ 2) के लिए सेते हैं।
  2. प्रत्यारोपण के दिन, 30 मिनट के लिए कमरे के तापमान पर पकवान incubating द्वारा मिला हुआ सेल चादर अलग।
  3. धीरे से एक विंदुक के साथ एक ADSC चादर aspirate और एक हाइड्रोफोबिक कागज (1.5 सेमी व्यास) पर यह परत। एक समर्थन झिल्ली के रूप में इस पत्र का प्रयोग करें।
  4. एक और ADSC चादर समझ और धीरे से एक डबल परत का निर्माण प्राप्त करने के लिए एक दूसरे के शीर्ष पर जमा।
  5. जरूरत के रूप में (प्रति पशु 4) के रूप में कई ADSC पत्र निर्माणों प्राप्त करने के लिए इन प्रक्रियाओं को दोहराएँ।

3. इसोफेजियल इंडोस्कोपिक सबम्यूकोसल विच्छेदन (ईएसडी)

  1. प्रत्यारोपण के दिन, इंट्रामस्क्युलर ketamine के 10 मिलीग्राम / किलो के साथ जानवरों पूर्व औषधि और उन्हें 8 मिलीग्राम / नसों में Propofol किलो के साथ प्रेरित। फिर, अंतःश्वासनलीय इंटुबैषेण प्रदर्शन और isoflurane 2.5% साँस लेना के साथ संज्ञाहरण बनाए रखें।
  2. एक बार जानवर सामान्य संज्ञाहरण के तहत, एक gastrosc साथ ईएसडी प्रदर्शनope, एक videoscope, और एक electrosurgery इकाई।
    1. अर्ध-परिधीय पृष्ठीय 40 सेमी से दंत चाप से 45 सेमी से लेकर अंक प्राप्त करने के लिए एक इंडोस्कोपिक चाकू और मुलायम जमावट का प्रयोग करें।
    2. पहलवान परत से श्लैष्मिक परत के विभाजन के लिए सबम्यूकोसल परत में नील लाल डाई युक्त एक ग्लिसरॉल समाधान इंजेक्षन।
    3. परिधीय चीरों प्राप्त करने के लिए endocut मैं मोड के साथ एक इंडोस्कोपिक चाकू का प्रयोग करें।
    4. सबम्यूकोसल विच्छेदन प्रदर्शन करने के लिए, समीपस्थ चीरा से बाहर का चीरा के लिए चलती मजबूर जमावट मोड के साथ एक इंडोस्कोपिक चाकू का प्रयोग करें।
  3. ईएसडी प्रक्रिया के अंत में, अर्ध-परिधीय, 5 सेमी लंबे esophageal निशान पहलवान परत उजागर निरीक्षण करते हैं।

4. इंडोस्कोपिक ट्रांसप्लांटेशन

  1. इसके तत्काल बाद ईएसडी, endoscopically 4 डबल ADSC पत्र निर्माणों के साथ जानवरों प्रत्यारोपण।
    1. इंडोस्कोपिक संदंश और के साथ एक ADSC-शीट निर्माण काबूएक बड़े, पारदर्शी इंडोस्कोपिक टोपी का उपयोग करके घाव साइट के लिए परिवहन के दौरान बचाने के लिए।
    2. अल्सर बिस्तर पर ADSC पत्र निर्माण की पूरी सतह को लागू करें।
    3. धीरे एक पूर्ण और स्थिर engraftment प्राप्त करने के लिए 10 मिनट के लिए ADSC-शीट का निर्माण लागू होते हैं। आवेदन के लिए, इंडोस्कोपिक संदंश या एक इंडोस्कोपिक टोपी का उपयोग करें और ADSC की पूरी सतह esophageal सबम्यूकोसल परत पर निर्माण लागू होते हैं।
  2. आदेश में चार प्रत्यारोपित और पक्षपाती डबल सेल चादर निर्माणों प्राप्त करने के लिए इस प्रक्रिया को दोहराएँ प्रत्येक जानवर के लिए चार बार।
    ध्यान दें: लक्ष्य घायल क्षेत्र के approximatively आधा कवर करने के लिए है।

5. पश्चात मूल्यांकन और अनुवर्ती

  1. प्रत्येक जानवर के लिए, 0.2 मिलीग्राम अफ़ीम की / किग्रा पहले दिन के लिए और एक 28 दिन की Esomeprazole विरोधी एसिड उपचार (40 मिलीग्राम / दिन) के साथ एक दिन में तीन बार इंट्रामस्क्युलर इंजेक्शन के साथ के बाद ईएसडी पीड़ानाश किया जाता है। amoxicill साथ एंटीबायोटिक प्रोफिलैक्सिस प्रदर्शन करना(1 जी / दिन) 7 दिनों के लिए है। अगले दिन 1 दिन पर तरल और ठोस अधिकृत करें।
  2. 28 दिनों के लिए जानवरों के साथ पालन करें। मधुर Pinkas निगलने में कठिनाई स्कोर 16 और वजन परिवर्तन माप का उपयोग दैनिक नैदानिक मूल्यांकन प्राप्त करते हैं।
  3. मल्टीमॉडल निंदा मूल्यांकन: सामान्य संज्ञाहरण, अनुसूचित दिन 3, 14, और 28 के अंतर्गत, निंदा घटना के एक बहुविध मूल्यांकन करते हैं।
    1. एक इंडोस्कोपिक मूल्यांकन निशान विवरण, निंदा माप, और कागज समर्थन झिल्ली का पता लगाने का उपयोग कर प्रदर्शन करना। निंदा उपाय gastroscope का उपयोग कर निंदा के माध्यम से पार करने के लिए (gastroscope के व्यास 8 मिमी है)। निशान का निरीक्षण करें (, श्लैष्मिक पर्विल, श्लैष्मिक शोफ और सहज रक्तस्राव mucosal) भड़काऊ पहलू की ओर ध्यान दे, और अभाव या कागज समर्थन झिल्ली की मौजूदगी के निशान के भीतर।
    2. निशान बिस्तर में सीधे gastroscope ऑपरेटर नहर के माध्यम से pCLE हरी जांच लागू करें। एक सहज लिए खोजऔर हरी झंडी PKH67 लेबल ADSC-शीट निर्माण engraftment के साथ संगत का आयोजन किया।
    3. एक रेडियोलॉजिकल घेरा (आगे और वाम पक्षीय घटनाओं) के साथ Baryte esophagography के 2 orthogonal घटनाओं प्रदर्शन करना। निंदा मूल्यांकन के लिए यानी घटना रखें (निंदा (% की डिग्री) = [1- (एक प्रकार का रोग के तहत कम अक्ष की लंबाई / एक प्रकार का रोग के तहत सामान्य अक्ष) की लंबाई x 100)]) 17, 18।
  4. पशु बलि।
    1. 28 दिन पर, अनुवर्ती अवधि के अंत में, पशु बलि प्रदर्शन करते हैं। जबकि पशु सामान्य संज्ञाहरण के तहत अब भी है, 100 मिलीग्राम / नसों में phenobarbital किलो इंजेक्षन। एक दिल की धड़कन की अनुपस्थिति के लिए और आंदोलन को साँस लेने के नैदानिक ​​परीक्षा का उपयोग कर पशु मौत सुनिश्चित करें।
    2. एक sternotomy और अंग प्रदर्शन के बाद, प्रत्येक का बलिदान से पशु (10% बफर formalin निर्धारण, आयल एम्बेडिंग, और 4 माइक्रोन मोटी वर्गों के साथ) घेघा को हटा दें। स्लाइड दागHematoxylin और केसर 15 के साथ। कम्प्यूटरीकृत विश्लेषण के लिए स्लाइड डिजिटलीकरण और पशुओं के समूहों के 15 की तुलना करें।

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Representative Results

ADSCs और प्रक्रिया ADSC चादर प्राप्त करने के लिए की संस्कृति चित्र 1 में दिखाया गया है। चित्रा 2 भ्रष्टाचार के निर्माण, उनके कागज समर्थन झिल्ली पर एक दूसरे पर स्तरित दो ADSC शीट से बना चलता। ADSCs पहले PKH67 fluorophore साथ लेबल रहे थे pCLE साथ विवो भ्रष्टाचार की निगरानी में अनुमति देने के लिए। चित्रा 3 5 सेमी और अर्ध-परिधीय esophageal निशान में जिसके परिणामस्वरूप, विस्तारित esophageal इंडोस्कोपिक सबम्यूकोसल विच्छेदन के विभिन्न चरणों से पता चलता है। चित्रा 4 इंडोस्कोपिक प्रत्यारोपण प्रक्रिया से पता चलता है। प्रत्यारोपण कोमल आवेदन करने के 10 मिनट के बाद सभी जानवरों के लिए सफल रहा था। चित्रा 5, 3 दिन पर सकारात्मक pCLE मूल्यांकन से पता चलता प्रत्यारोपण प्रक्रिया की सफलता की पुष्टि।

अनुवर्ती अवधि बहुविध निंदा Analys के लिए अनुमति दी है। अलग आकलन निम्न आंकड़े और तालिका में दिखाया जाता है। से प्रत्यारोपित समूह नियंत्रण समूह में सभी जानवरों की तुलना में एक गंभीर esophageal निंदा विकसित पशुओं को नियंत्रित करने के लिए की तुलना में, प्रत्यारोपित पशु समूह लगातार कम पाचन मुसीबत और पर दिन 28. एक पशु अधिक से अधिक वजन दिखाया। प्रत्यारोपित जानवरों की तुलना में, नियंत्रण जानवरों महत्वपूर्ण तंतुमय ऊतक विकसित की है। तालिका 1 अनुवर्ती अवधि के दौरान नैदानिक और endoscopical निष्कर्षों से पता चलता है। चित्रा 6 प्रत्यारोपित और गैर प्रत्यारोपित पशुओं में अनुवर्ती अवधि के अंत में इंडोस्कोपिक और रेडियोलॉजिकल निष्कर्षों से पता चलता है। चित्रा 7 प्रत्यारोपित और नियंत्रण जानवरों के बीच अलग ऊतकीय निष्कर्षों से पता चलता है। इन आंकड़ों esophageal निंदा की रोकथाम के लिए ADSC पत्र प्रत्यारोपण की प्रभावशीलता की पुष्टि करें।

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चित्रा 1. ADSC-शीट का निर्माण। विभिन्न आवर्धन के साथ मानक संस्कृति बर्तन में ए और बी प्रारंभिक बीतने ADSCs। ADSC शीट वाणिज्यिक तापमान उत्तरदायी संस्कृति व्यंजन पर PKH लेबल ADSCs संवर्धन द्वारा प्राप्त किया गया। सी ऊष्मायन तापमान 20 डिग्री सेल्सियस (कमरे के तापमान) के लिए कम हो गया था, जब सभी कोशिकाओं अनायास बरकरार ADSC शीट के रूप में पकवान सतहों से अलग, एंजाइमी उपचार के लिए आवश्यकता के बिना। डी एक ADSC चादर एक हस्तांतरण झिल्ली का उपयोग कर भ्रष्टाचार के निर्माण से पहले काटा। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्र 2
चित्रा 2 डबल ADSC-शीट का निर्माण। ए, बी, सी और दिन पहले transplantation, PKH लेबल ADSCs जल्दी पारित होने के नंबर पर काटा गया (पी 4 - पी -5), एक 12 अच्छी तरह से तापमान संवेदनशील सेल संस्कृति पर वरीयता प्राप्त है, और 10% भ्रूण सहित 37 डिग्री सेल्सियस और 5% अल्फा न्यूनतम आवश्यक माध्यम के साथ सीओ 2 में सुसंस्कृत वील सीरम और 1% एंटीबायोटिक दवाओं (पेनिसिलिन और स्ट्रेप्टोमाइसिन)। हर अच्छी तरह से एक पाली-एन-isopropylacrylamide झिल्ली के साथ (प्रत्येक के तल पर अच्छी तरह से) लेपित किया गया था और 1.5 x 10 6 कोशिकाओं के साथ वरीयता प्राप्त। ऊष्मायन तापमान 20 डिग्री सेल्सियस (कमरे के तापमान) के लिए कम हो गया था, जब सभी कोशिकाओं अनायास एंजाइमी उपचार के लिए आवश्यकता के बिना बरकरार ADSC शीट के रूप में अलग। डबल सेल चादर दो ADSC शीट से बना निर्माण के डी सैद्धांतिक स्कीमा एक दूसरे पर स्तरित और एक कागज समर्थन झिल्ली के लिए आवेदन किया। एक पूरा डबल सेल चादर निर्माण के ई Macroscopic देखें। संदर्भ 15. से संशोधित कृपया यहाँ क्लिक करें टी ओ यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए।

चित्र तीन
चित्रा 3. इंडोस्कोपिक सबम्यूकोसल विच्छेदन प्रक्रिया। ए इंडोस्कोपिक निशान लकीर क्षेत्र चित्रित करने के लिए, दंत चाप से 40 से 45 सेमी से लेकर और परिधि के आधे से जुड़े बनाया गया था। बी इंडिगो लाल डाई युक्त एक ग्लिसरॉल समाधान के सबम्यूकोसल इंजेक्शन। इस इंजेक्शन के लक्ष्य के आदेश सबम्यूकोसल परत को बेनकाब करने में पेशी परत से श्लैष्मिक परत अलग करने के लिए किया गया था। सी परिधीय चीरों इंजेक्शन सबम्यूकोसल परत खुलासा इंडोस्कोपिक के निशान को बाह्य रूप से प्रदर्शन किया गया। डी 5 सेमी लंबे और अर्ध-परिधीय esophageal निशान दिखा सबम्यूकोसल विच्छेदन के अंत में इंडोस्कोपिक देखें।एट = "_blank"> यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 4
चित्रा 4 डबल ADSC पत्र इंडोस्कोपिक प्रत्यारोपण प्रक्रिया। ए चार ADSC प्रत्यारोपित किया जा करने के लिए तैयार निर्माण करती है। ADSC के बी संरक्षण प्रत्यारोपण से पहले एक बड़ी इंडोस्कोपिक टोपी के तहत निर्माण। पशु ग्रसनी के पार, ADSC निर्माण इंडोस्कोपिक टोपी के तहत संरक्षित दिखाने का सी इंडोस्कोपिक देखें। डी आवेदन के 10 मिनट चादर पालन प्राप्त करने के लिए पर्याप्त था। आवेदन इंडोस्कोपिक टोपी या इंडोस्कोपिक संदंश का उपयोग किया गया था। यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 5 चित्रा 5. pCLE निष्कर्षों। 3 दिन pCLE एक सफल सेल प्रत्यारोपण चादर के साथ संगत इन विट्रो में प्राप्त उन लोगों के लिए इसी तरह सहज और तीव्र संकेतों से पता चलता। कोई संकेत दिनों 14 और 28 ए निलंबन में ADSCs की इन विट्रो pCLE संकेत पर पाया गया था। बी इन विट्रो एक सेल चादर में आयोजित ADSCs की pCLE संकेत। सी में विवो pCLE जांच esophageal निशान करने के लिए आवेदन। डी। इन विवो ADSCs की pCLE संकेत प्रत्यारोपण के बाद 3 दिन पर देखे। संदर्भ 15. से संशोधित यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 6
चित्रा 6 परिणामरूपात्मक विश्लेषण के दिन 28. नियंत्रण समूह की तुलना में, इंडोस्कोपिक और 28 दिन पर रेडियोलॉजिकल निष्कर्षों अपस्ट्रीम फैलने और एक पूरी तरह से फिर epithelialized म्यूकोसा के बिना एक छोटी और प्रकाश निंदा दिखाया। संदर्भ 15. से संशोधित यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

चित्रा 7
चित्रा 7. निंदा क्षेत्रों के histological मूल्यांकन। ऊतकीय विश्लेषण के बाद HES लेबलिंग और स्लाइड डिजिटलीकरण किया गया था। प्रत्यारोपित जानवरों (ए) में, घाव भरने की प्रक्रिया में वृद्धि हुई है फिर से epithelialization के साथ सुधार किया गया था, और फाइब्रोसिस विकास में कमी आई है, की तुलना में गैर प्रत्यारोपित जानवरों (बी)। तीव्र तंतुमय ऊतक विकास किया गयापेशीय mucosae विनाश, fibrotic भीतरी परत पेशीय आक्रमण, और बड़े श्लैष्मिक दोष की वजह से मनाया। संदर्भ 15. से संशोधित यह आंकड़ा का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करें।

तालिका एक
तालिका 1 अनुवर्ती अवधि के दौरान क्लिनिकल आकलन। नैदानिक ​​आकलन मधुर Pinkas स्कोर करने के लिए और वजन बदलाव के साथ अनुसार एक दैनिक नैदानिक ​​मूल्यांकन का उपयोग कर प्रदर्शन किया गया। (*) मधुर Pinkas 16 स्कोर। संदर्भ 15 से संशोधित।

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Discussion

इस सुअर मॉडल में, ADSC पत्र प्रत्यारोपण तकनीकी रूप से सफल रहा था, और इन विवो pCLE मूल्यांकन सेल engraftment की निगरानी के लिए अनुमति दी। , नैदानिक ​​endoscopical, रेडियोलॉजिकल, और histological मूल्यांकन बढ़ाया ईएसडी के बाद esophageal निंदा की रोकथाम पर इंडोस्कोपिक ADSC चादर की प्रभावशीलता का प्रदर्शन किया।

एक ADSC ग्लिसरॉल एक इंडिगो लाल डाई चादर युक्त समाधान के इंडोस्कोपिक प्रत्यारोपण पुनर्योजी चिकित्सा के क्षेत्र में एक अभिनव तरीका है। Ohki एट अल। पहले इंडोस्कोपिक प्रत्यारोपण प्रक्रिया का वर्णन किया। उनकी पढ़ाई में, सेल चादर निर्माणों polyvinylidene difluoride की एक पतली शीट पर स्तरित मौखिक श्लैष्मिक उपकला कोशिका चादरें, एक समर्थन झिल्ली 10, 11, 19 के रूप में इस्तेमाल से बना रहे थे। समर्थन झिल्ली इंडोस्कोपिक संदंश के साथ समझा गया था और ध्यान अल्सर बिस्तर पर रख दिया गया। celएल चादर पालन कोमल आवेदन करने के 10 मिनट के बाद प्राप्त हुई थी। यह प्रक्रिया अभी तक reproduced नहीं किया गया है। इस अध्ययन में डबल ADSC पत्र निर्माणों कई कारणों के लिए प्रत्यारोपित किया गया। ADSC के चुनाव कई अध्ययन बताते हैं कि उनके विरोधी भड़काऊ क्षमताओं का प्रदर्शन किया, विशेष रूप से त्वचा के उपचार प्रक्रिया में पर आधारित था। ADSCs keratinocyte और fibroblast बातचीत 7 मिलाना जाना जाता है। फाइब्रोसिस विकास के तंत्र जटिल और आंशिक रूप से ही समझ में आ रहा है। पैराक्राइन प्रभाव ऐसे TGFβ और समर्थक एन्जियोजेनिक कारकों 20 के रूप में विरोधी भड़काऊ कारक उत्पादन, सहित ADSC कार्रवाई करने में एक प्रमुख भूमिका निभा रहा है।

इंडोस्कोपिक ADSC पत्र प्रत्यारोपण कई सीमाएं हैं। सबसे पहले, सेल चादरें एक स्थिर आसंजन प्राप्त करने के लिए esophageal निशान करने के लिए 10 मिनट के लिए लागू किया गया। प्रक्रिया का यह हिस्सा, चुनौतीपूर्ण तकनीकी रूप से कठिन था, और एक अनुभवी endoscopist द्वारा प्रदर्शन किया जा सकता था। फिर भी, सभी जानवरों को सफलतापूर्वक प्रत्यारोपित किया गया, इंडोस्कोपिक प्रक्रिया की व्यवहार्यता की पुष्टि। हाल ही में, एक 3 डी-मुद्रित डिवाइस का उपयोग सेल चादर प्रत्यारोपण की सफलता में सुधार करने के लिए 21 की सूचना मिली थी। दूसरा, इस तकनीक को एक अज्ञात जीवित रहने की दर के साथ जुड़ा हुआ है। एक esophageal निशान कोशिकाओं के लिए एक आक्रामक माहौल है। एक तापमान संवेदनशील डिश सेल-शीट के उत्पादन के लिए बाह्य मैट्रिक्स के माध्यम से और सेल कनेक्शन के गठन के लिए निर्माण की अनुमति देता है। इस प्रकार, जीवित रहने की दर और ADSC बातचीत, एक डबल ADSC-शीट का निर्माण 22 में चुना गया था, 23 में सुधार होगा। इस अध्ययन में या तो सेल जीवित रहने की दर या esophageal निंदा की रोकथाम पर प्रत्यारोपण की खुराक प्रभाव है, जो दोनों महत्वपूर्ण सवाल कर रहे हैं आकलन करने के लिए तैयार नहीं था। Ohki एट अल में के रूप में, तीसरा। एक समर्थन झिल्ली के उपयोग ADSC-शीट का निर्माण पूरा करने के लिए जरूरी हो गया था। पिछाड़ीएर प्रत्यारोपण, कागज समर्थन झिल्ली का निर्माण विनाश के बिना नहीं हटाया जा सकता है। यह इंट्रा-esophageal विदेशी सामग्री वृद्धि की सूजन के लिए जिम्मेदार था। एक अनुकूलित तकनीक कागज समर्थन झिल्ली को हटाने के लिए अनुमति होगी।

pCLE साथ ट्रांसप्लांटेशन निगरानी भी चुनौतीपूर्ण था। इस नए इंडोस्कोपिक इमेजिंग तकनीक ग्रंथियों के पैटर्न के दृश्य, सूक्ष्म vascularization, और सेलुलर परिवर्तन सहित, विवो ऊतकीय विश्लेषण में अनुमति देता है। pCLE इस तरह के भड़काऊ आंत्र रोग, बैरेट घेघा, और mucinous अग्न्याशय अल्सर 24, 25 के रूप में कई पाचन रोगों, में मूल्यांकन किया गया था। pCLE-संगत PKH67 fluorophore सेल लेबलिंग के लिए इस्तेमाल किया गया था। ADSC चादर की उपस्थिति के साथ संगत एक फ्लोरोसेंट संकेत 3. दिन पर 4 पशुओं में मनाया गया यह सकारात्मक परिणाम ADSC पत्र प्रत्यारोपण की सफलता परिलक्षित। हालांकि, becaउपयोग PKH67 समय के साथ एक कम संकेत है और कोशिका विभाजन के बाद, pCLE मूल्यांकन केवल कुछ ही दिनों के बाद प्रत्यारोपण के 26 संभव था। Ohki एट अल। और Kanai एट अल। immunostaining के माध्यम से सेल प्रत्यारोपण शीट पर नजर रखी, और वे प्रत्यारोपण के बाद 8 दिन तक कोशिकाओं की उपस्थिति की पुष्टि की। परिपक्व कोशिकाओं को इस अध्ययन, विशिष्ट immunostaining का फायदा है, जिसमें इस्तेमाल किया गया।

Esophageal निंदा ईएसडी निम्नलिखित सबसे गंभीर प्रतिकूल घटनाओं, जिससे तकनीक के विकास को सीमित करने से एक है। इष्टतम तकनीक निंदा गठन अभी भी कमी कर रहे हैं रोकने के लिए। नैदानिक अभ्यास में, विस्तारित esophageal ईएसडी के साथ रोगियों ऐसे corticosteroids, इंडोस्कोपिक गुब्बारा dilatations, या esophageal 27 स्टेंटिंग के रूप में विभिन्न निवारक उपचार, निर्धारित कर रहे हैं। Biomaterial के स्थानीय आवेदन अलग-अलग परिणाम 28, 29, के साथ आयोजित किया गया है 30, 31 में मूल्यांकन किया गया था। एक असामयिक और वृद्धि की फिर से epithelialization esophageal निशान में मनाया गया। स्थानीय immunomodulation के लिए, कम डेटा ADSC इंजेक्शन या एमनियोटिक झिल्ली आवेदन 32, 33 के बारे में साहित्य में उपलब्ध हैं। एक देरी निंदा गठन और एक कम दर निंदा मनाया गया।

इस सुअर मॉडल में, इंडोस्कोपिक सेल चादर प्रत्यारोपण प्रक्रिया सफलतापूर्वक प्रदर्शन किया गया था। प्रत्यारोपित डबल सेल शीट में आयोजित ADSCs बढ़ाया ईएसडी के बाद esophageal निंदा गठन को रोकने के लिए अपनी क्षमता का प्रदर्शन किया। ADSC उपचार में शामिल तंत्रप्रक्रिया खराब समझ रहे हैं और भविष्य के अध्ययनों में आगे की जांच की जानी चाहिए। इस प्रकार, इन आशाजनक परिणाम को देखते हुए, एक चिकित्सीय परीक्षण ADSC पत्र रोगियों में बढ़ाया बाद ईएसडी निर्माण के प्रभाव का आकलन करने के लिए आयोजित किया जाना चाहिए।

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Disclosures

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Materials

Name Company Catalog Number Comments
Transparent endoscopic cap Q180 compatible Olympus Optical Co
GIF-Q180 gastroscope  Olympus Optical Co
Videoscope System Exera II  Olympus Optical Co
Injection needle 18 G Olympus Optical Co
Electrosurgery unit ERBE ICC 350  ERBE Technology
Indigo carmin 1% Life
Endoscopic hybrid knife Life
Minisonde Z pCLE green probe Mauna Kea Technology You must learn how to use the probe. The manipulation could be difficult.
Fetal bovine serum Sigma Aldrich 12105C
Trypsin Sigma Aldrich T146
Alpha minimum essential medium Thermo Fisher 22561-021
Phosphate-Buffered Salines Thermo Fisher 10010-023
PKH67 dye kit Sigma Aldrich Mini67-KT
12-well temperature responsive cell culture dish Upcell Thermo Scientific 174900 Feel the weel with 4 mL standard medium culture 30 min before seeding cells
Esomeprazole 40 mg  Biogaran
Moprhine sulfate 50 mg/mL Lavoisier
Amoxicilline 1 g Biogaran
Ketamine 250 mg/5 mL Panpharma
Propofol 10 mg/mL Fresenius
Hydrophobic paper Carrefour

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References

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ADSC पत्र ट्रांसप्लांटेशन विस्तारित इसोफेजियल इंडोस्कोपिक सबम्यूकोसल विच्छेदन के बाद निंदा रोकने के लिए
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