Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Neuroscience

את assay נימי מזין מודד צריכת המזון ב doi: 10.3791/55024 Published: March 17, 2017

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

אכילה היא חיונית; עם זאת, דה-רגולציה של צריכת המזון וכתוצאה מכך הפרעות אכילה כגון בולימיה, אנורקסיה או הנטייה הכללית לזלול מטילה עלויות על הפרט והחברה 1, 2, 3. מטרת המחקר הנוכחי היא לחשוף מנגנוני ויסות צריכת מזון ועל מנת לספק אסטרטגיה עקיפה היווצרות הפרעה. מחקרים רבים באמצעות אורגניזמים מודל יונקים סיפקו תובנות חדשות של המעגל ואת תפקידו של מערכות איתות הפרעות אכילה 4, 5, 6. עם זאת, הידע שלנו על הבסיסים העצבים מולקולריים שבבסיס הפרעות אלה עדיין רחוק מסיום. בשנים האחרונות, זבוב הפרות תסיסנית הפכה מערכת מודל ערך עבור נפרמי תובנה מכניסטית בסיסיות לתוך הסדרת metabolisמ 7, 8, 9. נימי מזין (CAFE) assay עבור תסיסנית הוקמה בשנת במעבדה של סימור Benzer בשנת 2007 בהשראת עבודה קודמת של Dethier ב blowfly 10, 11. את assay CAFE איפשר למדוד ישירות את צריכת המזון ב תסיסנית. במערכת מבחן התנהגותי זה, זבובי הניזונים מזון נוזלי מסופק נימי זכוכית מדורגות ממוקמות בתוך בקבוקון. הירידה של המניסקוס הנימים מציינת פסד של פתרון מזון באמצעות אידוי וצריכת מזון. קביעת שיעור האידוי על ידי בקבוקונים ללא זבובים מאפשר כימות מדויק של צריכת המזון.

את assay CAFE הוא אחד מכמה פרדיגמות התנהגותיים המשמשים למדידת האכלה תסיסנית וחוקרים צריכים לבחור את המתאים ביותר עבור הספציפיים שלהםשְׁאֵלָה. ההחלטה להשתמש assay מסוים כדאי לשקול את הנקודות הבאות: אופיו של המזון שמסר; תנאי ההאכלה; מדידת צריכה או ספיגת חומרים מזינות וצריכת מזון חקירה או תגובה למזון.

את assay CAFE כמתואר בדוח זה הנו אידיאלי עבור באי צריכת מזון של מקור מזון נוזלי תחת תנאי האכלה זקופים. לחלופין צריכת המזון ניתן למדוד עבור קבוצת זבוב על מקור מזון בצבע בבקבוקון או על צלחת. זבובים בדרך כלל נהרגים או בהרדמה לאחר ההאכלה והכמות לצבוע בליעה נקבעת על ידי ספקטרומטריית או בדיקה ויזואלית של הבטן המוכתמת. זבובים להתחיל להפריש האוכל לבלוע רק 30 דקות לאחר הצריכה, ולכן גישה זו קשה להשתמש לניתוח האכלה כבר רציפה התנהגויות 12, 13.

בניגוד זבובים נשמרים ללא פגע כאשר צבען נספגים עם קליעים נותבים רדיואקטיביים משמשים וצריכת רדיואיזוטופיים שלהם הוא הבקיע ב מונה הנצנץ 14, 15. הקליטה של ​​radiolabel ידי מערכת העיכול זבוב עושה מדידה ספיגת מזון ארוכת טווח אפשרי, אבל עלול להוביל הערכה נמוכה מדי של בצריכה בגלל מולקולות נותב הלא נספג ומופרש. גישה נוספת למדוד בתגובת מזון תסיסנית היא התגובה הרחבה חוטם (PER), אשר מתרחשת בדרך כלל עבור צריכת מזון 16. שיטה אלגנטית זו מודדת את התגובה הראשונית לגירוי מזון אך אינו רושמת את הכמות צריכה. צריכת מזון מותאמת באופן דינמי במהלך האכלה באמצעות אותות משוב שלאחר עיכול מספר כי הם קריטיים עבור הסדרת ההאכלה 17, 18. מספר ניסיונות נעשו בשנים האחרונות לאוסף נתונים למחצה אוטומציה ב assay PER 19, 20. PER הוא זוהה על ידי כרית חשמלית או שילוב של אלקטרודות ומנה באמצעות מחשב. שילוב assay PER עם ספיגת רדיואיזוטופיים גילה כי assay זו מוגבלת על ידי רגישות נמוכה לזיהוי הבדלי האכלת כמות 18. את assay ההאכלה הידני (MAFE) 21, שבו זבוב מוזן באופן ידני עם נימי זכוכית, פותח לאחרונה למדוד ספיגת מזון זבוב משותק יחיד. את assay MAFE מבטל את ההתערבויות של ליקוט האכלת הייזום בעל רזולוצית זמן של שניות, וייזום PER וצריכת מזון ניתן לנטר באופן עצמאי ב assay. עם זאת, הדרך שבה חוסר תנועה של הזבוב משפיע על היבטים מסוימים של התנהגות אכילה (למשל תנועה, מוטיבציה) עדיין צריכה להיחקר. עבור ביקורות השוואתיות מעולות של מבחנים שונים למדידת צריכת מזון ב תסיסנית ליlanogaster וכדי לסייע לחוקרים למצוא את האדם המתאים ביותר, ראה דיווחי Deshpande ומרקס 13, 22.

את assay CAFE ימנע כמה מהחסרונות של מבחנים המתוארים לעיל ומשלב פשטות השימוש עם מדידה אמינה של צריכת מזון. כאן, תיאור מפורט של assay CAFE מסופק ואנחנו מראים שינוי התקנה פשוט להפחתת אידוי. נציג תוצאות כולל assay בחירת שני מזון (לזמן קצר ולזמן ארוך) ואת ספיגת סוכרוז זבובים מודגמות. בדיון נשווה השיטה המתוארת שלנו עם דרכים חלופיות כדי לבצע את assay CAFE, ולהאיר מגבלות פוטנציאליות.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Assay CAFE

הערה: assay מורכב משלושה רכיבים: בקבוקון ניסיוני, מכסה ספציפית ונימים מיקרו. קופסת פלסטיק עם מכסה משמש להובלת בקבוקונים מוכנים וכדי לשלוט לחות בצורה יעילה יותר.

  1. השתמש בקבוקון פלסטיק תרבות תסיסנית (גובה אופציונלי 8 ס"מ, 3.3 ס"מ קוטר) כמו צינור עבור assay.
  2. חותם את הבקבוקון עם מכסה פרספקס מיוצרים המכיל טבעת O (איורים 1 א, 1B). טען זבובים על ידי הקשה או עם רובה הנשיפה דרך הפתח המרכזי של המכסה (0.9 ס"מ קוטר), אשר מאפשר גם עבור זרימת אוויר ואספקת מים, ולסגור את החור עם פקק ספוג. שישה פתחים חרוטי קטן (0.4 ס"מ קוטר עליון, 0.3 ס"מ קוטר פנימי) המקיפים את החור המרכזי ולהשתלב הטיפים פיפטה של ​​2 - 20 נפח μL להחזיק הנימים במקום. (ראה דמויות הנוספת פרטים טכניים של המכסה.)
    הערה: השימוששל פקק ספוג עם פתחים עבור הנימים במקום המכסה מחוייט המשמש כתב היד שלנו אפשרי. המכסה האישית שלנו מאפשרת טיפול בטוח של הבקבוקונים המוכנים ימזערו את הסיכון כרוך נימים נופלות למטה.
  3. על מנת להציג את המזון הנוזלי, השתמש 5 microcapillaries μL עם 1 סימני μL. מקם את נימי הפתחים חרוטי במכסה ידי ניתוק העליון של 2 - קצה פיפטה μL 20 והחדרת הקצה לתוך החור (איור 1B, מסומנות קצה אדום). כדי למנוע זבובים לברוח, להכניס נימול 2 - קצה פיפטה 20 μL לאותו הפתיחה.
  4. כדי להתמודד עם בקבוקונים מוכנים מרובות בבטחה, ולהכניס אותם לתוך קופסת פלסטיק עם (איור 2 א) שיבוץ gridded.

2. הכנת זבובים

  1. שמור זבובים על מזון רגיל של 25 מעלות צלזיוס, 60% לחות יחסית מחזור 12 שעות / 12 שעות-כהה אור.
  2. כדי לשלוט תנאי גידול, להציג 35 נקבות בתולהד 15 זכרים לכל קבוצת הניסוי לתוך בקבוקון פלסטיק תרבות (גובה 9.8 ס"מ, 4.8 ס"מ קוטר) המכיל 50 מ"ל לעוף מזון. אפשר זבובים להטיל ביצים 3 הימים הראשונים, ולאחר מכן להעביר זבובים בוגרים כדי צלוחיות מזון טריות ולתת להם להטיל ביצים במשך ימים נוספים. אחרי זה, חזרו על העברה שוב. מבוגר מחק זבובים לאחר 2 ימים נוספים.
  3. כמו צריכת מזון תלויה בגודל זבוב, לקבוע את המשקל של קבוצת 100 זבובים ידי בהרדמת 2 עד 3 ימים בת מבוגר זבובים באמצעות כרית זבוב CO 2 ולאסוף אותם לתוך צינור פלסטיק 1.5 מיליליטר והמדידה עם תקן בקנה מידה מעבדתי. קבע את המשקל הרטוב של לפחות ארבע קבוצות לטוס עצמאיות מסודרות לפי מין (טבלה 1); להשתמש במשקל כדי לחשב את צריכת המזון μL לכל זבוב מ"ג. השתמש ערך כדי לקבוע את כמות המזון כי זבוב בודד הזנות לכל ניסוי ולהתאים את מספר הנימים מלאות מזון בהתאם כדי למנוע ריקון של נימים על ידי האכלה.
    1. עבור assay ג 3, שימוש20 זבובים ושני נימים מלאים. לצורך ניסוי לטווח ארוך (> 3 שעות ועד 9 ימים), השתמש קבוצה של שמונה זבובים עם אספקה ​​של ארבעה נימים מלאים (תוצאות אמינות לא ניתן להשיג עם פחות משמונה זבובים בתנאים שתוארו).
  4. זבובים נפרדים לקבוצות (8 או 20 זבובים) לאחר מדידת משקל תחת חשיפת CO 2. מעביר את הקבוצה כדי בקבוקון מזון חדש (המכיל 15 מיליליטר מזון רגיל) כדי לאפשר התאוששות מן ההרגעה 2 CO במשך 48 שעות לפני הניסוי. השתמש 4 עד זבובים בן 6 ימים עבור assay CAFE.
  5. כמו זבובים wild-type שאינם מורעבים להאכיל באופן שולי בלבד 19, 21, מראש להרעיב טס למשך 3 שעות ניסויים האכלה. אין צום נדרש כאשר צריכת מזון מנוטרת על פני כמה ימים. לקבלת צום, העברת זבובים 16 עד 20 שעות לפני הבדיקה על ידי הקשה עליהם בעדינות לתוך בקבוקון המכיל רק נייר סינון מקופל בקוטר 45 מ"מ טבולה ~ 0.5 מ"ל DDH2 O (פעמיים מים מזוקקים), וקרוב עם מכסה assay CAFE פקוק.

3. הכנת מזון נוזלי

  1. הכן 3 M (10%, w / v) פתרון המניות סוכרוז על ידי מילוי 102.6 סוכרוז g (C 12 H 22 O 11) עד 100 מ"ל DDH 2 O. פיפטה 3 μL, 33 μL, 333 μL, 3.3 מ"ל ו 6.6 מ"ל של פתרון המניות לתוך צינור פלסטיק 15 מ"ל; להוסיף 2 מ"ל של צבע מזון (עבור אדום: זהורית [E124]; עבור כחול: ארגמן אינדיגו [E132]) ולמלא עד 10 מ"ל עם DDH 2 O. הריכוזים וכתוצאה מכך הם 0.001, 0.01, 0.1, 1, ו -2 M סוכרוז .
    הערה: צבע המזון מאפשר לדמיין את המניסקוס ביתר קלות. עם זאת לצבוע עשוי להשפיע על צריכת המזון. כדי למנוע הטיה בשל צבע לוותר לצבוע מזון או באקראי את השימוש של צבעים על דגימות מזון במהלך הניסוי וקבוצות.
  2. כדי לבדוק פיפטה העדפה אלכוהול 333 μL של פתרון המניות 3 M סוכרוז בתוך שפופרת פלסטיק 15 מ"ל.הוסף 1.5 מ"ל (2.3 מ"ל) של 100% EtOH (אתנול) ולהוסיף DDH 2 O עד 10 מ"ל להביא 15% (0.25 מ"מ) ו -23% (0.39 מ"מ) פתרונות עובד.
  3. שמור פתרונות המניה ב -20 ° C ופתרונות עובד על 4 מעלות צלזיוס; להשתמש בתוך 1 בשבוע.
  4. מלאו עד 10 נימים בעת ובעונה אחת עם פתרון מזון בצבע, בכוח נימים. הכנס את הקצוות של הנימים לתוך תמיסת סוכרוז (מחזיק נימים בזווית של 45 מעלות לפתרון). עצור אם הנוזל מגיע החלק העליון (5 μL) סימן של נימי, ולהסיר פתרון עודף על בחוץ ובפנים בנייר טישו.

4. הרכבת ביצוע assay נימי המזין

  1. אם בצום אינו נחוץ, להעביר את הזבובים הניסיונות אל assay על ידי קשה או על ידי מכת צנרת. הקפד לכלול שלושה בקבוקונים שליטים ללא זבובים לכמת אידוי.
  2. מוציאים בזהירות קצה פיפטה (2 - 20 נפח μL) כי היא סוגרת את אחד openin החיצוניGS, והכניס לקצה תחתון נימי זכוכית מלאה, ראשונה. אבטח את הנימים ידי צבת קצה פיפטה קודמת הבא אל הנימים. אם פתרונות מזון כמה נבדקות, לחזור על הליך זה בהתאם.
  3. מניח את הנימים מסתיימות בתוך כל הבקבוקונים באותה הרמה כדי למנוע הטיה שעלולה להתרחש אם מקורות המזון אותרו בגבהים שונים (3 - 4 סנטימטר מהמכסה); לשמור על מרחק אל נייר הסינון כדי למנוע הנימים מ דולף על ידי מקורות נגיעת מסנן נייר או צמיגויות שונות של מזון בטעות.
  4. לייבל בקצה העליון של הנוזל בצבע באמצעות עט סימון (סימן מתחיל). כדי להבטיח את הנימים השונים ניתן לזהות, לתייג אותם בנפרד באמצעות קוד צבע או פס.
  5. מניחים מבחני CAFE מרובים מוכן בתוך קופסת פלסטיק עם שיבוץ gridded ולהעביר את תיבת (איור 2 א) לעמדה בטוחה בתנאי מעבדה או בטמפרטורה, בהירי-עור-לחות מבוקרים Climתא (פרמטרים: 25 ° C, 60% לחות יחסית, 12 שעות / 12 שעות מחזור-כהה אור) אכלתי לתקופה הניסיונית (למשל 3 שעות או ימים).
  6. כמו נייר סינון תחתון מתייבש אם assay מבוצע על פני מספר ימים, החל מים טריים מדי 24 שעות באמצעות הפקק הספוג (100 μL) כדי לשמור קבועות לחות בתוך assay. השתמש ארבעה בקבוקונים נפרדים (8 ס"מ גובה, 3.3 ס"מ קוטר) מלא 30 מ"ל DDH 2 O כמכשירים לחות ומניחים אותם ליד מבחני CAFE בתיבת פלסטיק. השתמש כיסוי קופסת פלסטיק כדי ליצור סביבה מבוקרת לחות במהלך (איור 2 א) ניסוי.
    הערה: השתנות רחבה מתרחשת בתנאי מעבדה; עם זאת, זה אינו ריאלי לביצוע assay CAFE בטמפרטורת החדר (למשל., בכיתה). השימוש במכשיר humidification (מסנן נייר, עם או בלי פקק ספוג רטוב, מלא צלוחיות מים כיסוי קופסת פלסטיק) מומלץ מאוד כדי להקטין התאדות (
  7. חלף הנימים עם אלה מלאים טריים לניסויים לטווח ארוכים כל 24 שעות. שים לב זבובים מתים לפני כל מרווח 24 שעות ולהשתמש מספר הזבובים חיו לחשב לתצרוכת למשק לטוס לתקופה הבאה. מחק את הנימים הישנים לאחר מדידת הירידה של המניסקוס (ראה 5.1).
    הערה: במהלך ניסוי h 3 אנחנו בקושי רואים שום זבובים מתים. במהלך מחקר 4 ימים אנו מוצאים בדרך כלל 1 - 3 זבובים מתים.
  8. בסוף של assay או לפני החלפת הנימים, לסמן את המניסקוס התחתון של (סוף הסימן) נימים עם עט סימון בעוד assay CAFE עדיין במצב הזקוף. מחק את הנתונים אם סוף הסימן אינו מתחת לסימון הראשוני (סימן המתחיל). אין להסיר את המכסה, שכן דבר זה עשוי לשנות את המניסקוס.
  9. מוציאים בזהירות את הנימים מן assay ולאחסן אותם לאיסוף נתונים. בדקו אם הנוזל בתוך הנימים הגיע לסוף הנמוך יותר אם לא discarד הנתונים, כמו האוכל היה לא נגיש הזבובים. לאסוף את כל הנימים לכל בקבוקון כקבוצה. הכנס טיפים פיפטה נימול לתוך כל הפתחים כדי למנוע זבובים לברוח. לפרק את ההתקנה ולשטוף צלוחיות, מכסים bungs ספוג באמבט וסבון לילה יבש בטמפרטורת החדר לשימוש נוסף.
    הערה: זבובים ניתן לבצע עיבוד נוסף לאחר assay. אשר ספיגת מזון לפי העין או תחת מיקרוסקופ לנתיחה.
  10. ניסויים חזרו עם אותו גנוטיפים בשלושה ימים שונים לפחות.

5. איסוף נתונים וניתוח

  1. למדוד את המרחק בין תחילת סימן וסיום חותם על הנימים באמצעות קליפר או סרגל. כדי להעביר נתונים ישירות גיליון אלקטרוני, להשתמש USB (Universal Serial Bus) מחובר קליפר דיגיטלי (איור 1E). מחק את הנימים לאחר המדידה.
  2. חשבון גודל נימים לחשב ספיגת מזון או אידוי. לדוגמה, שקול כובעillary כי הוא 73 מ"מ ארוך ומכיל 5 μL של פתרון מזון. ירידה של 14.6 מ"מ המניסקוס משקפת את הספיגה של 1 פתרון μL. לחשב ספיגת מזון באמצעות הנוסחה הבאה:
    ספיגת מזון (μL) = מרחק נמדד (מ"מ) / 14.6 מ"מ
  3. כדי לא לכלול את השפעת האידוי על צריכת מזון, לחשב מתכוון אידוי בשלושה (לכל הפחות) הבקבוקונים השליטים ללא זבובים. פחת ערך ממוצע זה מהערך שהיה מתקבל עבור צריכת מזון על ידי הזבובים.
  4. השתמש בנוסחה הבאה כדי לקבוע את צריכת סה"כ זבוב:
    צריכת מזון (μL) = (ספיגת מזון [μL] - אובדן באידוי [μL]) / מספר כולל של זבובי הבקבוקון. בניסויים לטווח ארוך להשתמש את מספר הזבובים בחיים לפני תחילת הפסקת 24 שעות.
  5. כדי להסביר את ההבדלים בגודל הגוף, כגון בין זכר נקבות הזבוב, לנרמל צריכת המזון למשקל הגוף (מזון μL / מ"ג זבובים).
  6. השתמש בתוכנה סטטיסטית לניתוח נתונים. לקבלת נורמהנתונים מבוזרים ברית, -tests T של תלמיד השימוש לקבוע הבדלים בין שתי קבוצות זבוב, ולהשתמש ANOVA (ניתוח שונה) עם בדיקות פוסט הוק Tukey קריימר במשך יותר משתי קבוצות. במצב בחירה, לנתח הבדלים לעומת בחירה אקראית באמצעות בדיקת סימן חד מדגם פרמטרית.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

זבובים של גנוטיפ w 1118 משמשים כדי להדגים כיצד assay מבוצע. מוטציות w 1118 משמשות בדרך כלל כדי ליצור קווים מהונדסים ולשלוט הרקע הגנטי של transgenes מסומנת הגן הלבן. בדרך כלל, עבור ניסויים התנהגותיים, כל הקווים המהונדסים הם backcrossed במשך חמישה דורות למלאים אותו w 1118, אשר ממשמש פקד הניסיון. אנחנו מראים ניסויים שונים: השוואה של אובדן אידוי עבור ההתקנה השונה שלנו, ניסוי בחירת מזון לטווח קצר, ניסוי צריכת מזון לטווח ארוך, ואת ניסוי על דילולים סוכרוז שונים.

אידוי משחק תפקיד קריטי בביצוע של assay CAFE. כללנו גישות נוספות כדי assay שלנו כדי להקטין התאדות: i) פקק הספוג המרכזי ומלא עם מים כל 24 שעות; ii) addiמים תזונתיים מלאי בקבוקונים בתוך תיבת התחבורה iii) את שימוש כיסוי עבור התיבה ליצור מארז לחות (ראה 4.6). השוואת האידוי בין התקנה בלי ועם התקנים שהוזכרו לעיל, הפחתה משמעותית של אידוי נתפסת. גם את ההשפעה של תנודתיות גבוהה יותר של פתרון המכיל אתנול בלתי ניתנת לגילוי באמצעות המערך החדש.

בניסוי מזון שתי בחירת קבוצה של 20 זבובים יכול להאכיל למשך 3 שעות. בסביבות טבעיות, זבובי פרות להאכיל מועדף על תסיסת פרות עם אלכוהול 22, וזה הוכח, באמצעות התקנה דומה, כי זבובים מעדיפים פתרונות שמרים סוכרוז עם אתנול על פתרונות שמרים סוכרוז ללא אתנול 23. הנה, שתי בחירות מזון מוצעים, פתרון 0.1 M סוכרוז שכותרתו עם צבע מאכל אדום ופתרון 0.1 M סוכרוז עם 15% EtOH שכותרתו עם צבע מזון כחול (איור 1 א, ג). לשעבר חזותיamination של הבטן עולה כי הזבובים ניזונים שני הפתרונות (1D איור). צריכת מזון לכל זבוב היא גדולה משמעותי (כמעט פי 2) עבור הפתרון סוכרוז המכיל EtOH (איור 3 א).

בניסוי הבא, כך עולה ממחקר ארוך טווח, קבוצה של שמונה זבובים יש גישה למקורות מזון דומה במשך 4 ימים, וזבובים צורכים יותר של מזון המכיל אתנול בכל יום (איור 3 ב). מדד העדפה אתנול ([EtOH + Suc] - [Suc] / סך הצריכה) נשאר קבוע לאורך תקופה זו (ממוצע = 0.29, לוח 4). העדפת אתנול נצפתה עולה בקנה אחד עם מספר פרסומים אחרים ומופעים שעף יכול להבחין בין מקורות מזון השונים 24, 25, 26. אטרקצית אתנול נצפתה עשויה להיות תוצאה של התוכן הקלורי השונה שלהפתרונות המוצעים של נכסים מתגמל של אתנול 24. Assay יכול לשמש גם כדי למדוד את השפעות שליליות של תוספי מזון. Ja ועמיתיו הראו בפרסום הראשון של שיטה זו כי יישום של paraquat (תרופת חמצון) פוחת צריכת מזון 10.

בניסוי הבא, ההבדל בצריכת מזון בין המינים מוצג. דרישות מטבוליות שונות בין זכר melanogaster לנקבת ד. לדוגמא, ואילו זבובי זכרים מעדיפים מזון עשיר בפחמימות, במהלך ייצור ביצים, שלב הדורש ביוסינתזה חלבון המוגברת, נקבות מעדיפות דיאטות עשירות בחלבון על דיאטות עשירות בפחמימות 27. זכר הזדווגו וזבובים נקבה שימשו בניסוי הזה. כדי לנתח הבדלים בצריכת מזון בין 20 גברים ו -20 נקבות זבוב בתוך מרווח האכלה 3 שעות, assay CAFE מתבצע באמצעות concent סוכרוזסדרת מנה. חמש נימים נמסרו, עם פתרונות הנעים בין 10 - 3 עד 2 מ סוכרוז, והצריכה של כל פתרון נמדדה (איור 4 א). תוצאות המחקר הראו כי שני המינים העדיפו-ריכוז גבוה פתרונות סוכרוז כמקור מזון (איור 4 א). עם זאת, נשים צרכו באופן משמעותי יותר של שני פתרונות סוכרוז הנמוך ביותר הריכוז לעומת גברים (P <0.05); מצד שני, גברים צרכו באופן משמעותי יותר מהפתרונות-ריכוז גבוה (P <0.001). שים לב שנתונים אלה לא להסביר את ההבדלים בגודל הגוף. נקבה ד melanogaster הם בדרך כלל גדול וכבד יותר זכרים (טבלה 1). כאשר צריכת מזון מנורמלת לטוס מונית, הבדלים בין זכרים ונקבות בצריכה של פתרונות נמוכים סוכרוז כבר לא משמעותיים. לסיכום, גברים צורכים תמיסת סוכרוז יותר מנקבות הזדווגו, עולה בקנה אחד עם נתונים קודמים, REFLecting דרישות מטבוליות שונות אפשריות, העדפות מזינות או הבדלים פשוט ביכולת ניזונים הנימים בין שני המינים.

איור 1
איור 1: Assay מזין נימי תסיסנית. א) assay האכלה עם זבובים. נייר סינון טבול מספק מים בתחתית הבקבוקון. ארבעה נימים ניתנים במהלך הניסוי (אדום וכחול בצבע מזון נימי היפך). ראוי לציין, כי הנימים מובטחות בעמדה ידי קצה פיפטה שני, ועמדות שאינם בשימוש סגור באמצעות טיפים פיפטה. תוסף קצף במרכז המכסה מאפשר חילופי אוויר. B) תצוגה מפורטת של המכסה. טיפים פיפטה Cut (2 - 20 μL, גבולות אדומים) מוכנסים לתוך פתחי חרוטי המשרות בשימוש, וכן pi השניטיפ pette מוכנס לתוך קצה לחתוך כדי לסגור את החור. עצות פיפטה לחתוך משמשות לשליטת מיקום של microcapillaries, וטיפים נימולים משמשים כדי להחזיק את נימי הדם חזקות. C) זבוב melanogaster ד נזון נימים. ד) לאחר האכלה, צבע מזון נראה בבירור בבטן הזבוב. E) קליפר דיגיטלי משמש כדי למדוד את המרחק בין סימן מתחיל ולסמן סוף המניסקוס. הנתונים מועברים ישירות גיליון אלקטרוני של Excel באמצעות USB. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 2
איור 2: השפעת האידוי ב assay מזין הנימים. א) assay CAFE המרובה ממוקם בתוךקופסת פלסטיק עם שיבוץ gridded. לקבלת שליטה על הלחות במהלך הצלוחיות ממולאות ארבע ניסוי המים (עיגולים אדומים) ממוקמים בתוך הרשת. פקדי האידוי ממוקמים בסמיכות ישירות בקבוקונים אלה. כיסוי עבור ההתקנה כולה מוצג ברקע. B) השוואה בין אובדן נפח באמצעות אידוי. הערך הממוצע עבור אידוי מעל 4 ימים מוצג. לחות נשלטת על ידי (i) החלת מים אל פקק ספוג המרכזי (24 מרווח ח); (Ii) הוספת בקבוקונים ארבעה מלאי מים לתוך הרשת; וכן (iii) באמצעות כיסוי פלסטיק עבור ההתקנה כולה. האידוי נמוך משמעותי אם הלחות נשלטת הוא הפתרונים הנבדקים (*** P ≤ 0.001; N = 48). לא נמצאו הבדלים בתנודתיות בין EtOH המכיל והלא המכיל תמיסת סוכרוז ניתן לזהות עם התקני לחות בשימוש. אנא לחץ כאן כדי להציג גרסה גדולה יותר שלהדמות הזאת.

איור 3
איור 3: העדפת אתנול (EtOH) המכילים סוכרוז על סוכרוז פתרון. א) צריכת מזון זכר w 1118 זבובים מוצג. זכרים לצרוך באופן משמעותי יותר של EtOH 15% המכיל תמיסת סוכרוז מאשר של פתרון סוכרוז רגיל. *** P ≤ 0.001; N = 27. B) זבובים מעדיפים פתרון סוכרוז משמעותי המכיל 23% EtOH במהלך משפט 4 ימים. *** P ≤ 0.001; ** P ≤ 0.01; N = 16. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

איור 4
איור 4: Consumption (μL / לעוף μL / מ"ג זבוב) של ריכוזים סוכרוז שונים על ידי זכר ונקבה w 1118 זבובים. א) צריכת ריכוזים שונים של פתרונות סוכרוז שונה באופן משמעותי בין זכרים ונקבות. זבובי נקבה צורכים יותר בריכוזים סוכרוז נמוכים, וזבובי זכר צורכים יותר בריכוזים גבוהים. * P <0.05; *** P <0.001; N = 27 ניסויים עם 20 גברים כל, N = 30 ניסויים עם 20 נקבות כל אחד). ספיגת B) מזון על בסיס המוני. עלייה משמעותית בצריכה מתרחשת בין זכר נקבות זבוב עבור פתרונות 0.1 עד 2 מ 'סוכרוז כאשר מנורמלים לטוס מונית. *** P ≤ 0.001; N = 27 זכרים, N = 30 נקבות. אנא לחץ כאן כדי לצפות בגרסה גדולה יותר של דמות זו.

שולחן 1
טבלה 1: משקל גוף של זכר ונקבה w 1118 זבובים. ארבעה עד חמש קבוצות של 100 זבובים נמדדו, ומשקל גוף (מ"ג / זבובים) חושב. ערכים ממוצעים (עם STDEV (סטיית התקן) ו STERROR (סטיית התקן)) מוצגים. ממוצע ערכים משמשים לנרמל צריכת המזון לעוף מסה (זבוב μL / מ"ג). אנא לחץ כאן כדי להוריד את הגיליון האלקטרוני הזה.

שולחן 2
טבלה 2: הפסד אידוי (μL) ב assay CAFE. כמות הנוזל לאיבוד דרך האידוי מוצג עבור 4 ימים. לחות נשלטת (+) או לאt (-) כמתואר באיור 2. נתונים אידוי עבור שני פתרונות שונים (סוכרוז סוכרוז בתוספת EtOH) מוצגים. ערכים ממוצעים מוצגים עבור כל יום על פני התקופה (עם STDEV ו STERROR). הפסד האידוי של ניסוי דילולי סוכרוז מוצג מתחת בנפרד (כלומר ערכים). אנא לחץ כאן כדי להוריד את הגיליון האלקטרוני הזה.

טבלה 3
טבלה 3: צריכה של 0.1 M סוכרוז עם / בלי 15% EtOH ידי זכר w 1118 זבובים הפד למשך 3 שעות. צריכת שני הפתרונות על ידי קבוצות של 20 זבובים נמדדה במשך 3 שעות ב -3 ימים. ערכי צריכה לקבוצות זבוב מחולקים במספר הזבובים שבודקים את האומדן ספיג מיקרוליטר לכל זבוב לאחר הפחתת אובדן אוויר. ערכים ממוצעים (עם STDEV ו STERROR) מוצגים. אנא לחץ כאן כדי להוריד את הגיליון האלקטרוני הזה.

טבלה 4
לוח 4: צריכת 0.1 M סוכרוז עם וללא 23% EtOH במשך ארבעה ימים על ידי זכר w 1118 זבובים. צריכת שני הפתרונות על ידי קבוצות של 8 זבובים נמדדה במשך 24 שעות במשך 4 ימים. מדד העדפת אתנול חושבה באמצעות הנוסחה הבאה ([Suc + EtOH] - [Suc] / סך הצריכה). ערכי צריכה לקבוצות זבוב מחולקים במספר הזבובים שבודקים את האומדן ספיג μL לכל לטוס לאחר הפחתת אובדן אוויר. ערכים ממוצעים (עם STDEV ו STERROR) מוצגים עבור כל יום..jove.com / קבצים / ftp_upload / 55024 / JoVE55024R1-Diegelmann-לוח-4.xlsx "target =" _ blank "> אנא לחץ כאן כדי להוריד את הגיליון האלקטרוני הזה.

לוח 5
לוח 5: צריכת חמישה ריכוזים של סוכרוז על ידי זכר ונקבה w 1118 זבובים. צריך של כל פתרון, ואת הערך תמורת הסכום של צריכת סוכרוז, מוצג. ערכים ממוצעים עבור כל ריכוז ניתנים להלן כל עמודה (עם STDEV ו STERROR). כדי לחשב את צריכת מבוסס על מסת זבוב (ספיגת מיקרוליטר מיליגרם של זבוב), צריכת המזון מחולקת במשקל הממוצע של זבובים זכר או נקבה (מטבלה 1, המוצג בצד ימין). אנא לחץ כאן כדי להוריד את הגיליון האלקטרוני הזה.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

הדו"ח מתאר את assay CAFE בצורת צעד אחר צעד, תוך התמקדות ההגדרה הטכנית והביצועים מוצלחים במעבדה. בשל הפשטות שלה, assay זה יכול לשמש גם מבחינה חינוכית כניסוי ספר. הדוגמות מראות כי assay מאפשר חקירה של חישת מזון, העדפה וצריכה תסיסנית על פני תקופות זמן קצרות יותר (שעות עד ימים). את assay CAFE כבר בשימוש נרחב בתחום לחקור נושאים, לרבות מזון צריכת סמים, התמכרויות, הומאוסטזיס אנרגיה ובקרה העצבית של האכלה 16, 18, 24, 25.

ב assay CAFE, זבובים ניסיוניים חייבים בהצלחה לבצע מספר פעולות כדי להשיג מזון, כגון חיפוש אחר מזון, חישת תנועה; אי יכולת לבצע משימות אלה עלולות לגרום לצריכה מופחתת. להזדקנות התנהגות תלויה בעיקר על מצב הרעב של הזבובים יכולים להיות מוגברת על ידי בצום 19, 21. חישה, ובכך לוקליזציה, של מקור המזון יכולים להיות מושפעת על ידי היכולת של הזבוב להריח או לטעום ואולי בעקיפין לגרום לשיעור צריכה נמוך 28. התצוגה של המזון בסוף נימי המאלץ לטוס לרדת באופן פעיל להחזיק את עצמו במצב בלתי הפוך להאכיל. כדי להחזיק את עמדת השתייה על הנימים, לטוס חייב לתאם התכווצות השרירים שלה. ירידת ערך או פעילות יתר של תנועה בבירור תשפיע ספיגת מזון, כמו לעשות ליקויי תנועה עקב הזדקנות. בנוסף, הפרעה באמצעות זבובים אחרים בזמן תמרון זה מובילה סיום מוקדם של בליעת מזון. לכן, את מספר הזבובים לשמש צריך להיקבע לפני הניסוי. מספר זה אמור להבטיח שכל הזבובים יכולים להיות מוזנים כראוי וצריך לשלוט על fצפיפות ly בבקבוקון (מ -8 עד למקסימום של 20 זבובים הבקבוקון assay ד melanogaster CAFE שלנו). האכלה מושפעת הערך התזונתי של הארוחה, וזבובים דינמיים להתאים הבליעה שלהם בהתאם 24, 29. זה היה הראה כי מוטציות חסרות הנוירוטרנסמיטר octopamine יש ציוני תגובת PER רגילים אבל באותו הזמן להראות ירידה משמעותית בצריכת מזון 14. יתר על כן, במהלך האכלה, את המוטיבציה להמשיך ירידות אכילה ומובילה סיום ההתנהגות.

השיקולים הנ"ל חלים לא רק על assay CAFE, הם משפיעים האכלת התנהגות נמדדה במערכות בדיקה אחרות גם כן. לכן, היכולת של זבובים כדי לבצע את assay חייב להילקח בחשבון כאשר מודדים את צריכת המזון. למרות זאת הוא לא מאתגר מבחינה טכנית, assay CAFE יש כמה חסרונות מעשיים מרובים. הירידה של המניסקוסבתוך נימי תלויים צריכת מזון אובדן אידוי על ידי הזבובים. אידוי גבוה הוא בעייתי לגבי יחס האות לרעש ולכן צריך להיות ממוזער. יישמנו מספר גישות נוספות והתקנים לשלוט הלחות במהלך תקופת הניסוי (ראה 4.6). אבזרים אלה סייעו לנו להפחית את האידוי משמעותי ואפילו תופעות בוטלו התנודתיות שונים של מקורות המזון השתמשנו. אף על פי כן, אם לא קאמרי אקלים זמין assay יכול להתבצע בטמפרטורת חדר (למשל בכיתה) עם ערכי אידוי גבוהים כמו חסרון.

כאמור בפרוטוקול, קצות הנימים צריכים להיות ממוקמים באותה הרמה בתוך הבקבוקון כדי למנוע הטיה של הבחירה לטוס עקב במרחקים שונים למקור המזון. כדי להשיג זאת, עמדת הנימים הוא קבוע עם קצה פיפטה שני. אורכו של הנימים מופיע לא להיות קריטריון ההאכלה רושפתסוג טס 10. כל שפיכה של הנוזל יכולה לערער readout המדויק של צריכת מזון (ראה 4.3 ו -4.9); בסביבה ללא רטט מונעת דליפות. חלקיקי נימי בלוק הפתרון לזרום ולמנוע צריכת מזון. פתרון המזון, במיוחד אם הוא מכיל שמרים, צריך להיות נמס לגמרי כדי למנוע חסימה כזו. השימוש של תמצית שמרים מסיס במים יכול להתגבר על בעיה זו אך כמקור שלם של תזונה הוא עלול לגרום עלויות כושר נוספות. נגישות מזון צריכה להיות מוערכת לפני ואחרי הניסוי. הנתונים לטוס רק שצריך להיכלל בניתוח הוא השיג שם גישה למזון נכחה במהלך הניסוי כולו (ראה סעיף 4.9). עמדת ההאכלה-במהופך היא תכונה קריטית של הניסוי. בתנאים טבעיים, עמדת האכלה זה אינו זר לטוס, כמו פירות תולה למטה מעצים והם עלולים לרדת פרי רקוב. זו נתמכת על ידי ניסויים comparing הגדלים הארוחה של זבובי האכלה במצב הפוך ב assay CAFE (i) עמדת אכילה אופקית של זבובים משותקים ב assay MAFE וכן (ii) עמדו בצד ימני-עד האכלה באמצעות מזון radiolabeled 13, 21 . למרות תצוגת המזון ההפוכה לא נראה שיש בעיה של הזבובים, זה יכול להשפיע על רכב מזון בתוך הנימים. תוספי מושעה כגון תאי שמרים יכולים להטביע באמצעות כוח משיכה כדי התחתונה של הנימים ולכן עשוי להיות מרוכז יותר בחלק התחתון או אולי לחבר את הנימים. זה היה להשפיע על התנהגות זבוב ולכן התוצאות. הבטיח כי מרכיבי פתרון ההאכלה מתמוססים לחלוטין, ולעתים קרובות מציג נימים טריות במהלך ניסויים לטווח ארוך, ממזער השפעה זו על צריכת מזון.

השימוש של assay CAFE המתואר כאן מאפשר מדידה של צריכת המזון בקבוצה לטוס לאורך זמן משתרע שלשעות או ימים. אם ניתוח מפורט יותר נדרש (למשל., התנהגות זבוב יחיד או התנהגות בטווח של דקות), מבחני האכלה אחרים, כגון assay MAFE, מתאימים יותר. זה עשוי להיות אפשרי עבור מספר הזבובים כדי להצטמצם עוד יותר באמצעות צינור 1.5 מ"ל microcentrifuge ו יחיד נימי 30.

מספר ניסויים על מנת לקבל את תוצאות נציג נע בין 15 ל 27, עולה בקנה אחד עם הניסויים שתוארו בספרות 17, 24. Assay יכול להתבצע בצורה עיוורת קלסית פוסל הטיה פוטנציאלית מהנסיין, וזה חוזר על עצמו בדרך כלל לפחות ארבעה עד חמש פעמים על כל אחד כמה ימים. נתונים שהושגו עם assay CAFE יכול להיות מנורמל משקל הגוף כדי להסביר את ההבדלים בהתנהגות האכילה קשורה לגודל הגוף. התוצאות שהושגו עם assay זה הן חזקות לשחזור, כך שהואכבר הציג בהצלחה קורסים מעשיים לסטודנטים לתארים מתקדמים.

את assay CAFE נעשה שימוש נרחב בתחום מטבולית ומחקר טעם תסיסנית; יש לו יישומים מרובים לבחינת התפקיד של תוספי מזון ו / או תרופות על האכלת התנהגות, וזה יכול לשמש כדי לחקור את תגובת המנה למקור מזון ספציפי 24. בשילוב עם המגוון המדהים של טכניקות להשתמש כדי לתפעל מעגלים עצביים melanogaster ד, assay זה גם מאפשר לחוקרים לחקור את התפקיד של מערכות חיזוק על האכלת התנהגות 12, 17, 18.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Disclosures

החוקרים אין לי מה לחשוף.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Vials (breeding) Greiner Bio-One 960177 www.greinerbioone.com
Vials (CAFE assay) Greiner Bio-One 217101 www.greinerbioone.com
Lid-CAFE assay Workshop
Plastic box, low wall Plastime 353 www.plastime.it
Cover for the plastic box Workshop
Capillaries BLAUBRAND  REF 7087 07 www.brand.de
Pipette tips Greiner Bio-One 771290 www.greinerbioone.com
Filter paper circles Whatman 10 311 804 www.sigmaaldrich.com
D(+)-Sucrose AppliChem 57-50-1 www.applichem.com
Ethanol absolute VWR Chemicals 20,821,330 www.vwr.com
Food color (red, E124) Backfun 10027 www.backfun.de
Food color (blue, E133) Backfun 10030 www.backfun.de
Soap solution (CVK 8) CVH 103220 www.cvh.de
Digital caliper GARANT 412,616 www.hoffmann-group.com
Vials (breeding) Height 9.8 cm, diameter 4.8 cm 
Vials (CAFE assay) Height 8 cm, diameter 3.3 cm
Lid-CAFE assay Produced in university workshop, technical drawing supplied
Please click here to download this file.
Plastic box, low wall A plastic grid inlay was custom-made for 8 x 10 vial positions 
Cover for the plastic box Dimensions (37 x 29 x 18 cm)
Capillaries DIN ISO 7550 norm,  IVD-guideline 98/79 EG, ends polished
Pipette tips Pipettes for the outer circle are cut according to the lid
Filter paper circles 45 mm diameter works nicely if folded for the vials used
D(+)-Sucrose Not harmful
Ethanol absolute Highly flammable liquid and vapor
Food color (red, E124) Not stated
Food color (blue, E133) Not stated
Soap solution (CVK 8) Odor neutral soap
Digital caliper
Standard fly food (for 20 L)
Agar 160 g
Brewer's Yeast 299.33 g
Cornmeal 1,200 g
Molasses 1.6 L
Propionic acid 57.3 mL
Nipagin 30% 160 mL

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Krauth, C., Buser, J., Vogel, K. How high are the costs of eating disorders - anorexia nervosa and bulimia nervosa - for German society. Eur. J. Health Econ. 3, (4), 244-250 (2002).
  2. Cawley, J., Meyerhoefer, C. The medical costs of obesity and instrumental variables approach. J. Health Econ. 31, 219-230 (2012).
  3. PriceWaterhouse Coopers LLP. The costs of eating disorders: Social, health and economic impacts. Assessing the impact of eating disorders across the UK on behalf of BEAT. PwC. Available from: https://www.beat.co.uk/assets/000/000/302/The_costs_of_eating_disorders_Final_original.pdf (2015).
  4. Lenard, N. R., Berthoud, H. R. Central and peripheral regulation of food intake and physical activity: pathways and genes. Obesity. 16, S11-S22 (2008).
  5. Magni, P., et al. Feeding behavior in mammals including humans. Trends in Comp. Endocrinology and Neurobiology. 1163, 221-232 (2009).
  6. Morton, G. J., Meek, T. H., Schwartz, M. W. Neurobiology of food intake in health and disease. Nature Reviews Neuroscience. 15, 367-378 (2014).
  7. Bharuchka, K. N. The epicurean fly: using Drosophila melanogaster to study metabolism. Pediatr. Res. 65, (2), 132-137 (2009).
  8. Smith, W. W., Thomas, J., Liu, J., Li, T., Moran, T. H. From fat fruit fly to human obesity. Physiol. Behav. 136, 15-21 (2014).
  9. Rajan, A., Perrimon, N. Of flies and men: insights on organismal metabolism from fruit flies. BMC Biology. 11, (2013).
  10. Ja, W. W., et al. Prandiology of Drosophila and the CAFE assay. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 104, (20), 8253-8256 (2007).
  11. Dethier, V. G. The Hungry Fly: A Physiological Study of the Behavior Associated with Feeding. Harvard Univ Press. Cambridge, MA. (1976).
  12. Albin, S. D., Kaun, K. R., Knapp, J., Chung, P., Heberlein, U., Simpson, J. H. A subset of serotonergic neurons evokes hunger in adult Drosophila. Curr. Biol. 25, 2435-2440 (2015).
  13. Deshpande, S. A., et al. Quantifying Drosophila food intake: comparative analysis of current methodology. Nat. Methods. 11, (5), 535-540 (2014).
  14. Geer, B. W., Olander, R. M., Sharp, P. L. Quantification of dietary choline utilization in adult Drosophila melanogaster by radioisotope methods. J. Insect Physiol. 16, 33-43 (1970).
  15. Thompson, E. D., Reeder, B. A., Bruce, R. D. Characterization of a method for quantitating food consumption for mutation assays in Drosophila. Environ. Mol. Mutagen. 18, 14-21 (1991).
  16. Wong, R., Piper, M. D., Wertheim, B., Partridge, L. Quantification of food intake in Drosophila. PLoS One. 4, (6), e6063 (2009).
  17. Scheiner, R., Steinbach, A., Classen, G., Strudthoff, N., Scholz, H. Octopamine indirectly affects proboscis extension response habituation in Drosophila melanogaster by controlling sucrose responsiveness. J. Insect Physiol. 69, 107-117 (2014).
  18. Liu, Y., Luo, J., Carlsson, M. K., Nässel, D. R. Serotonin and insulin-like peptides modulate leucokinin-producing neurons that affect feeding and water homeostasis in Drosophila. J. Comp. Neurol. 523, 1840-1863 (2015).
  19. Ro, J., Harvanek, Z. M., Pletcher, S. D. FLIC: high-throughput, continuous analysis of feeding behaviors in Drosophila. PLoS One. 9, (6), e101107 (2014).
  20. Itskov, P. M. Automated monitoring and quantitative analysis of feeding behavior in Drosophila. Nat. Commun. 5, 4560 (2014).
  21. Qi, W., Yang, Z., Lin, Z., Park, J. Y., Suh, G. S. B., Wang, L. A quantitative feeding assay in adult Drosophila reveals rapid modulation of food ingestion by its nutritional value. Mol. Brain. 8, 87 (2015).
  22. Marx, V. Metabolism: feeding fruit flies. Nat. Methods. 12, (7), 609-612 (2015).
  23. Spieth, H. T. Courtship behavior in Drosophila. Annu. Rev. Entomol. 19, 385-405 (1974).
  24. Devineni, A. V., Heberlein, U. Preferential ethanol consumption in Drosophila models features of addiction. Curr. Biol. 19, (24), 2126-2132 (2009).
  25. Lee, K. P., et al. Lifespan and reproduction in Drosophila: New insights from nutritional geometry. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 105, (7), 2498-2503 (2008).
  26. Pohl, J. B., et al. Ethanol preference in Drosophila melanogaster is driven by its caloric value. Alcohol Clin. Exp. Res. 36, (11), 1903-1912 (2012).
  27. Vargas, M. A., Luo, N., Yamaguchi, A., Kapahi, P. A role for S6 kinase and serotonin in postmating dietary switch and balance of nutrients in D. melanogaster. Curr. Biol. 20, (11), 1006-1011 (2010).
  28. Masek, P., Scott, K. Limited taste discrimination in Drosophila. Proc. Natl. Acad. Sci. 107, (33), 14833-14838 (2010).
  29. Pool, A. H., Scott, K. Feeding regulation in Drosophila. Curr. Opin. Neurobiol. 29, 57-63 (2014).
  30. Luo, J. N., Lushchak, O. V., Goergen, P., Williams, M. J., Nässel, D. R. Drosophila insulin-producing cells are differentially modulated by serotonin and octopamine receptors and affect social behavior. Plos One. 9, (6), e99732 (2014).
את assay נימי מזין מודד צריכת המזון ב<em&gt; תסיסנית</em
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Diegelmann, S., Jansen, A., Jois, S., Kastenholz, K., Velo Escarcena, L., Strudthoff, N., Scholz, H. The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (121), e55024, doi:10.3791/55024 (2017).More

Diegelmann, S., Jansen, A., Jois, S., Kastenholz, K., Velo Escarcena, L., Strudthoff, N., Scholz, H. The CApillary FEeder Assay Measures Food Intake in Drosophila melanogaster. J. Vis. Exp. (121), e55024, doi:10.3791/55024 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter