Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

زراعة Published: December 12, 2016 doi: 10.3791/55048
Automatic Translation
1, 1, 1
1Division of Biological Science and Technology, Yonsei University

Summary

نقدم طريقة بسيطة لبناء 3D أنظمة زراعة الخيطية يسمى NGT-3D وNGB 3D. ويمكن استخدام هذه لدراسة اللياقة البدنية الخيطية والسلوكيات في الموائل التي هي أكثر مماثلة لانواع معينة ايليجانس الموائل الطبيعية من المختبر جيم لوحات ثقافة ايليجانس 2D القياسية.

Protocol

1. إعداد حلول لNGT-3D وNGB-3D

  1. إعداد الحلول العقيمة التالية: 1 لتر من حل 0.1454 M كلوريد الصوديوم، 1 لتر من 1 M CaCl 2، 1 لتر من 1 M MgSO 4، استذابة مرق (LB)، 1 لتر من 1 M KPO 4 العازلة (108.3 غرام من KH 2 ص 4 و 35.6 غرام من K 2 هبو 4، وملء H 2 O إلى 1 L). إنتاج NGM استخدام هذه الحلول يمكن العثور عليها في بروتوكول السابق 10.
  2. حلول الأوتوكلاف في درجة حرارة 121 مئوية، لمدة 15 دقيقة.
  3. تجهيز 50 مل من العقيمة 5 ملغ / مل حل الكولسترول. في أنبوب مخروطي 50 مل، مزيج 0.25 غرام من الكولسترول و 50 مل من 99.99٪ من الإيثانول وتخلط جيدا. لا الأوتوكلاف. تعقيم حل الكولسترول باستخدام حقنة 50 مل مع فلتر حقنة 0.45 ميكرون. وهذا أيضا إزالة أي الكوليسترول غير منحل.
  4. (اختياري) إعداد 10 مل من 150 ملي من 2'-ديوكسي-5-fluorouridine الأسهم (FUdR). في أنبوب مخروطي 15 مل، مزيج 0.3693 زمن FUdR و 10 مل من الماء المقطر. هز جيدا.

2. إعداد البكتيريا الثقافة لNGT-3D وNGB-3D

  1. تطعيم 10 مل مرق LB مع البكتيريا. البكتيريا العادية المستخدمة في C. ايليجانس التغذية هي كولاي سلالة OP50.
  2. ثقافة التلقيح البكتيرى عند 37 درجة مئوية في حاضنة تهتز بين عشية وضحاها.
  3. استعدادا لتخفيف المسلسل، قسامة 9 مل من محلول كلوريد الصوديوم إلى العقيمة 15 مل أنابيب مخروطية. على سبيل المثال، قسامة 9 مل إلى ما مجموعه 7 أنابيب لجعل التخفيف 10 -7 من OP50 سلالة كولاي.
  4. باستخدام معقم ماصة 1000 ميكرولتر، الماصة 1 مل من ثقافة البكتيرية أو ثقافة البكتيرية المخفف في أنبوب جديد العقيمة مع 9 مل من محلول كلوريد الصوديوم ودوامة الخليط 10 مل جيدا. كرر حتى يتم الوصول إلى التخفيف البكتيرية المطلوب.
    ملاحظة: إن تخفيف البكتيرية المطلوب يعتمد على نوع وحالة من البكتيريا فضلا عن الظروف التجريبية بالضبط.على سبيل المثال، 10 -6 - كان 10 -8 التخفيف من OP50 سلالة كولاي كافية لإنتاج 1-200 المستعمرات البكتيرية في 6.5 مل أنبوب NGT 3D. الديدان وضعت بشكل موثوق وتتكرر عادة عندما بلغ عدد المستعمرات أكثر من 60، التي وقعت في التخفيف من 10 -6 - 10 -7. لNGB-3D، استخدم تخفيف من 10 -8.

3. صنع NGT-3D وNGB-3D (200 مل)

  1. بعد إعداد ثقافة البكتيرية، مزيج 0.6 غرام كلوريد الصوديوم، 1 غرام حبيبات أجار، و 0.5 ز ببتون في قارورة 500 مل. إدراج شريط مغناطيسي في قارورة.
  2. إضافة 195 مل من الماء المقطر، وتغطية الفم من القارورة بورق الألمنيوم.
  3. الأوتوكلاف 121 درجة مئوية لمدة 15 دقيقة.
  4. ضع قارورة تعقيمها الساخنة على طبق من ذهب ضجة، ويقلب بسرعة معتدلة لا يقل عن 2 ساعة. تبريد قارورة إلى 40 درجة مئوية. ومن المؤكد أن تبرد بما فيه الكفاية المستمر من هنا في درجات حرارة عالية قد يؤدي إلى تغيم للأجار النهائي.ومع ذلك، قد يؤدي انخفاض درجات الحرارة في تصلب السابق لأوانه أجار.
    1. (اختياري) لتسريع عملية التبريد، ضع قارورة في 40 ° C حمام الماء لمدة 15 دقيقة قبل وضع على لوحة ضجة.
  5. عندما تكون درجة الحرارة من وسائل الإعلام أجار تصل 40 درجة مئوية، إضافة 200 ميكرولتر 1 م CaCl 2، 200 ميكرولتر من 5 ملغ / حل الكولسترول مل، 200 ميكرولتر 1 م MgSO 4 و 5 مل 1 M KPO 4 العازلة مع استمرار حل لاثارة لتركيزات النهائي من 1 ملم CaCl الكوليسترول 2، 5 ميكروغرام / مل، 1 ملي MgSO 4، 1 ملم KPO 4.
    1. (اختياري) لNGT-3D عمر فحص إضافة 80 ميكرولتر من 150 مم FUdR إلى التركيز النهائي من 120 ميكرومتر 12.
  6. إضافة 6 مل من 10 مل مخففة ثقافة البكتيرية من الخطوة 2.4 في قارورة مباشرة.
    1. (اختياري) لNGT-3D، وإزالة 6 مل من وسائل الاعلام أجار قبل الخطوة 3.6 وإبقائه دافئا بشكل منفصل. وسيتم استخدام هذه الوسائط للبكتيريا مجاناالطبقة العليا.
  7. باستخدام الإجراءات العقيمة، والاستغناء عن وسائل الإعلام في غرفة الثقافة العقيمة. تأكد من أن غطاء حجرة يغلق بإحكام.
    1. (اختياري) لمنع المستعمرات البكتيرية من تشكيل في السطح العلوي للأجار، وجعل طبقة من وسائل الإعلام أجار خالية من البكتيريا من الخطوة 3.6.1 على رأس قبل وسائل الإعلام من الخطوة 3.7 يصلب تماما. وهذا خلق منطقة خالية من البكتيريا في الجزء العلوي من NGT 3D.
    2. لNGT-3D، صب 6.5 مل وسائل الاعلام الى 8 مل واضحة أنابيب اختبار من البلاستيك لجعل طبقة البكتيريا أجار، والاستغناء بعناية 200 ميكرولتر من وسائل الإعلام الحرة البكتيريا على رأس وسائل الإعلام تصلب شبه 3D لجعل bacteria- رقيقة طبقة حرة على القمة.
    3. لNGB-3D، صب 65 مل من وسائل الاعلام الى 25 سم 2 واضح من البلاستيك زجاجة ثقافة الخلية. هذا المبلغ يجب ملء الجسم من 25 سم زجاجة الثقافة 2 الخلية.
  8. ترك غرف عموديا في درجة حرارة الغرفة لمدة أسبوع للسماح للمستعمرات البكتيرية للنموإلى حجم كبير لا يقل عن 1 ملم قطر.
    1. (اختياري) لفحص عمر في NGT-3D، غرف غطاء بورق الألمنيوم لمنع تدهور ضوء FUdR.

اللياقة البدنية 4. قياس السكان دودة على NGT-3D (الحضنة النسبي الحجم الفحص)

  1. اختيار مرحلة دودة L4 باستخدام سلك البلاتين اختيار ونقل على لوحة NGM خالية من البكتيريا. السماح للدودة أن تتحرك بحرية في جميع أنحاء لبضع دقائق لإزالة البكتيريا التي تعلق على الجسم.
  2. كرر الخطوة 4.1 وتأكد من أن دودة خالية من البكتيريا. عموما، وهما يكرر 4.1 كافية.
  3. وضع بعناية دودة نظيفة على سطح وسائل الإعلام 3D مع اختيار سلك البلاتين. الدودة يجب أن تدخل في نهاية المطاف أجار في آغار مصفوفة 3D.
  4. أغلق الغطاء السماح فضفاضة بعض الهواء للوصول الى الأنبوب، ولكن يمنع جفاف وسائل الإعلام أجار.
  5. احتضان لمدة 96 ساعة على 20 درجة مئوية.
  6. بعد 4 أيام، إغلاق الأغطية بإحكام ووضعغرفة الثقافة NGT-3D في حمام مئوية الماء 88 درجة لإذابة أجار. الحرارة تقتل الديدان ولكن لا تزال أجسادهم سليمة.
    ملاحظة: استخدام 8 مل أنابيب لNGT-3D، 20 - 30 دقيقة الحضانة عادة ما تكون كافية.
  7. باستخدام ماصة الزجاج، ونقل وسائل الإعلام المذابة على 9 سم طبق بتري البلاستيكية. لا ينصح الماصات البلاستيكية، كما يمكن الديدان في كثير من الأحيان الالتزام بها.
  8. عن طريق ناقل حركة ستيريو تشريح المجهر، والاعتماد على عدد الديدان في L3، L4، ومراحل الكبار. لا تعول الديدان التي هي مرحلة L2 والأصغر سنا، كما أجيال F1 و F2 يمكن الخلط هنا. وهكذا، هذا الاختبار هو نسبي حجم الحضنة فحص بدلا من مجموع فحص حجم الحضنة.

5. صورة وسجل دودة السلوك في NGB-3D

  1. اختيار مرحلة دودة L4 باستخدام سلك البلاتين اختيار وإزالة أي بكتيريا عالقة على السطح من خلال نقل إلى لوحة NGM خالية من البكتيريا والسماح لها بالتحرك بحرية لدقائق قليلة.
  2. كرر الخطوة 5.1 للتأكد من التعليم الجامعيجمهورية مقدونيا خالية من البكتيريا.
  3. وضع بعناية دودة نظيفة على مركز سطح أجار في NGB-3D بالقرب من عنق الزجاجة مع اختيار سلك البلاتين. الدودة يجب أن تدخل في نهاية المطاف أجار في آغار مصفوفة 3D.
  4. أغلق الغطاء السماح فضفاضة بعض الهواء للوصول الى الأنبوب، في حين منع جفاف وسائل الإعلام أجار.
  5. صورة أو تسجيل دودة تحت انتقال ستيريو تشريح المجهر. ضبط التركيز مع تحرك دودة من خلال مصفوفة 3D.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

بناء NGT-3D هو بروتوكول بسيط ومباشر الذي ينتج في أنبوب اختبار مليئة أجار مع المستعمرات البكتيرية صغيرة متباعدة في جميع أنحاء أجار (الشكل 1A). يمكن الديدان تتحرك بحرية من خلال مصفوفة أجار، وإيجاد واستهلاك المستعمرات البكتيرية. لتأكيد ما إذا C. ايليجانس يمكن أن تتكاثر وتنمو عادة في NGT-3D، قارنا الخصوبة ونمو اليرقات في 3D مع لوحات 2D NGM القياسية. في النسبي حجم الحضنة فحص وتعليم الكبار C. ايليجانس المخنثين في NGT-3D إنتاج فقط، وكذلك المنحرفين في لوحات 2D NGM القياسية عندما المستعمرات البكتيرية وفيرة مع لا يقل عن 60 مستعمرات (الشكل 1B). وعلاوة على ذلك، نمو اليرقات في NGT-3D أيضا تستمر عادة عندما يكون هناك الكثير من المستعمرات البكتيرية مع الغالبية العظمى من الديدان في الدولة الكبار بعد 96 ساعة (الشكل 1C). ومع ذلك، إذا المستعمرات البكتيرية هي متفرقفي مصفوفة 3D، سواء النسبي حجم الحضنة (الشكل 1B، العمود الأيسر) ونمو اليرقات (الشكل 1C، العمود الأيسر) وأثرت سلبا.

لاختبار ما إذا سكن في 3D لديه أي تأثير على علم وظائف الأعضاء طويلة الأجل للدودة، أجرينا فحص عمر مقارنة لوحات NGT-3D وNGM. وكان متوسط ​​عمر للديدان على NGT-3D 15.6 ± 3.6 أيام مقارنة ب 14.8 ± 3.1 يوما لوحات NGM القياسية. كانت منحنيات عمر الديدان التي تعيش على NGT-3D وNGM متطابقة تقريبا. وهكذا، يبدو أن الديدان البقاء على قيد الحياة على حد سواء بشكل جيد في ظروف 3D و 2D.

تصنيع NGB-3D هو أيضا ليس من الصعب وينبغي أن يؤدي في زجاجة الثقافة واضحة، مليئة أجار مثل تلك التي شوهدت في الشكل 2A. لعرض بسهولة المستعمرات البكتيرية، وقد عبرنا عن deoxyviolacein، والبنفسجي الغامق المستقلب البكتيري 11، في OP50سلالة كولاي (أرقام 2A، 2B، سلالة حسب الطلب). الديدان الحية يمكن تصوير تحت انتقال تشريح ستيريو المجهر (الشكل 2B، التكميلي الفيلم 1).

تخزين NGT-3D وNGB-3D في درجة حرارة الغرفة كافية للحفاظ على كل من هذه الدوائر الثقافة لمدة تصل إلى 1 في الشهر. جفاف أجار ليست مصدر قلق لأي NGT-3D أو NGB-3D إذا تم تطبيق المكونات نوع أو المسمار سقف نوع يلائم أنبوب أو زجاجة.

شكل 1
الشكل 1: التنمية والخصوبة وعمر C. ايليجانس المزروعة في NGT-3D غير قابلة للمقارنة مع تلك التي القياسية 2D NGM. (A) صور NGT-3D في العديد من التخفيفات من البكتيريا. اليسار ويحتوي على حق 5 × 10 -7 التخفيف، ووسط هو 1 × 10 -7 التخفيف. (ب) النسبي حجم الحضنة البرية من نوع الديدان في NGT-3D إلى أقل من 60 مستعمرات OP50 (ن = 24)، أكبر أو يساوي 60 المستعمرات (ن = 14)، أو على لوحات 2D NGM (ن = 29). أشرطة الخطأ تشير إلى الخطأ المعياري. (C) في المئة من الديدان الجيل F1 في L3، L4 أو الكبار المرحلة التنموية في NGT-3D مع أقل من 60 مستعمرات OP50، أكبر من أو تساوي 60 المستعمرات، أو على لوحات 2D NGM. منحنى (D) البقاء على قيد الحياة البرية من نوع C. ايليجانس في لوحات NGT-3D أو NGM. NS لا يشير بشكل كبير يحسب مختلفة من اختبار سجل رتبة. تم تعديل هذا الرقم من لي 9. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2 الشكل 2: التصوير C. ايليجانس في 3D باستخدام NGB 3D. (A، B) صور NGB-3D؛ (C) صور الكبار C. ايليجانس بالقرب من مستعمرة OP50 سلالة كولاي معربا عن الأرجواني الداكن deoxyviolacein الصباغ. شريط المقياس هو 500 ميكرون. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.

الشكل 2
الفيلم التكميلي 1: الكبار C. ايليجانس نهج والإشريكية القولونية OP50-violace في مستعمرة في NGB 3D. الرجاء الضغط هنا لتحميل هذا الملف.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

كانت زراعة مختبر جيم ايليجانس باستخدام لوحات وسائط النمو الخيطية الكلاسيكية حاسمة لمئات من الاكتشافات الهامة من ان البحث في C. ايليجانس التي قدمها. هنا، فإننا نقدم طرق جديدة لزراعة C. ايليجانس في بيئة تعكس بشكل أكثر دقة الطبيعية موائلها ثلاثية الأبعاد. رغم أن هناك طرقا أخرى استخدمت لمراقبة C. ايليجانس في 3D 13، وهذا هو البروتوكول الأول الذي يسمح زراعة الديدان في مصفوفة 3D الصلبة. طريقتين هو موضح هنا، NGT-3D وNGB-3D، تسمح للعلماء لطرح الأسئلة من اللياقة البدنية والتنمية والنمو في زراعة 3D، وأيضا صورة وتسجيل الديدان في 3D. على الرغم من NGT-3D وNGB-3D لديهم بعض الاختلافات لوحات 2D NGM القياسية، فهي مشابهة لهذه طريقة الأصلي وتعديلها فقط لإضافة زراعة دودة في محور ض. وهكذا، نجد أن التنمية والخصوبة وعمر تسير بشكل طبيعي في ظروفنا. الوكان الهدف هو ايجاد بروتوكول أن أي مختبر يمكن أن توظف لأبحاثهم. وهذه الأساليب هي بسيطة جدا، واستنساخه بسهولة وبتكلفة منخفضة جدا، وتسمح لتعديل بروتوكولات لتناسب تجارب محددة المستخدمين.

على الرغم من كل الخطوات في بروتوكول مهمة وخطوة حاسمة في صنع NGT-3D وNGB-3D هي درجة الحرارة التبريد للأجار بعد التعقيم في خطوات 3،4-3،6 من البروتوكول. إذا كانت درجة الحرارة منخفضة جدا يبرد (عدة درجات أقل من 40 درجة مئوية)، وسوف تبدأ أجار لتتصلب وسوف حلول المضافة ليست مزيج بشكل صحيح في آغار. ومع ذلك، إذا كان التبريد غير كافية (عدة درجات أعلى من 40 درجة مئوية)، والبكتيريا وأضاف قد يموت وحل الكولسترول وأضاف قد تلقي بظلالها على أجار تقديم أجار غير مجدية لإجراء التجارب. وبالإضافة إلى ذلك، وتبلغ مساحتها الحذر هو في الخطوة 4.6. عندما يذوب آغار NGT-3D في حمام الماء، للتأكد من إغلاق الأغطية بإحكام للمساعدة في الذوبان. ومع ذلك، يمكن للحرارة تسببالقبعات إلى خطير "البوب" قبالة وتصبح قذيفة. لأغراض السلامة فمن الأفضل لتغطية حمام الماء. أجزاء كثيرة من بروتوكول قابلة للتكيف تماما للمستخدم. على سبيل المثال، وقد استخدمنا أنبوب واضح اختبار البلاستيك لNGT-3D واضحة زجاجة ثقافة الخلية 25 سم 2 (يحمل ما مجموعه 65 مل) لNGB 3D. يجب أن أنواع أخرى من الأنابيب واضحة أو زجاجات المتاحة للمستخدم أيضا العمل. أيضا، نمو البكتيريا هو قابل للتعديل. يأخذ كولاي سلالة OP50 عموما نحو أسبوع ليصل إلى 1 مم على الأقل، الذي كان المفضل لتجاربنا. في تجربتنا، وأقصر قليلا، وحتى الكثير من الأوقات نمو أطول للبكتيريا لا يبدو أن تؤثر على نمو دودة أو الخصوبة. تعديل تركيز أجار، ومع ذلك، سوف تؤثر على حركة الدودة. تركيزات أقل من أجار تؤدي إلى الديدان تظهر حركة مثل السباحة، ويمكن أن تركيزات أعلى تمنع الحركة الشاملة.

وكانت منطقة واحدة للقلق في NGB-3D قضية التكثيفوتراكم المياه. كما يصلب أجار السائل الدافئ، حتما بعض التكثيف يتطور مع مرور الوقت، وخاصة في واجهة من القمقم وأجار. وهذا يمكن أن تطرح مشاكل بالنسبة للدودة، مما يدل على السلوكيات السباحة في السوائل (14) ونمو البكتيريا، والتي يمكن أن تنتشر في جميع أنحاء زجاجة من السائل. منع التكثيف أمر صعب. وجود اثنين من الحلول الممكنة لذلك. أولا، أن نتأكد من أن دودة يمكن بسهولة تدخل أجار عن طريق وضعها في وسط سطح أجار في عنق الزجاجة. ثانيا، نحن عمدا حفاظ على تركيز البكتيريا منخفضة في NGB-3D، مما يقلل من فرصة أن مستعمرة ينمو في واجهة السائل وأجار.

قلق آخر هو التصوير من الديدان في NGB 3D. لزيادة وضوح وجودة الصور من الديدان في 3D، وينبغي أن تكون مستعمرات على مقربة من السطح ولكن لا تزال جزءا لا يتجزأ تماما في آغار. حاولنا أن تنمو المستعمرات جزءا لا يتجزأ الوحيدة قرب المعالكان م عن طريق وضع طبقة رقيقة من أجار التي تحتوي على البكتيريا على السطح، ووسائل الإعلام المتبقية خالية من البكتيريا. ومع ذلك، لم تحل القضية بشكل كامل بواسطة هذه الطريقة. بدلا من ذلك، قررنا أن تنتج العديد من زجاجات NGB-3D في وقت واحد، واستخدام فقط تلك التي تحتوي على المستعمرات القريبة من سطح جزءا لا يتجزأ، وبالتالي زيادة فرصة أن دودة ستنتقل إلى مستعمرة بالقرب من السطح. خيار واحد ونحن لم تستكشف يتغير وسائل الإعلام الصلبة لمصفوفة أخرى من آغار حبيبات نستخدم هنا. التصوير الديدان في اتجاه z محور ويمكن أيضا أن يكون تحديا. ونحن نفعل ذلك من خلال رفع وخفض تركيز الخشنة يدويا، ولكن في حالة وجود برنامج التتبع الآلي لذلك، قد يكون من المفيد جدا.

والأمل هو أن التقنيات المعروضة هنا لزراعة C. ايليجانس في 3D سوف تستخدم على نطاق واسع من قبل علماء الأحياء الخيطية. لا تزال العديد من الأسئلة حول البيولوجيا دودة، بما في ذلك الشيخوخة والسلوكيات في 3D، وعما إذا كان ما يلاحظ العلماء في2D هي ذات الصلة لدودة في 3D. في الواقع، أظهرت دراسة سابقة باستخدام NGT-3D تأثير على اللياقة البدنية الإنجابية أن زراعة 3D كان على المسخ الحسي أن يستنسخ عادة في ظروف 2D 9. وبالإضافة إلى ذلك، أظهرت دراسة واحدة السلوكيات الحركة المتغيرة في 3D مقارنة 2D 15. وأخيرا، وهذا النظام يمكن استخدامه لبدء الإجابة على الأسئلة ما إذا كانت بعض الظروف، المسوخ أو التلاعب تمنح ميزات اللياقة البدنية للحيوان في بيئة 3D موطنه الأصلي.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

وأيد هذا العمل من قبل نيو باحث غرانت [2014R1A1A1005553] من مؤسسة البحوث الوطنية لكوريا (جبهة الخلاص الوطني) إلى جيل. وزعيم المستقبل جامعة يونسي التحدي غرانت [2015-22-0133] إلى جيل

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LB broth, Miller (Luria-Bertani) Difco 224620
Sodium chloride DAEJUNG 7548-4400 58.44 MW
Agar, Granulated Difco 214530
Peptone Bacto 211677
Calcium chloride, dihydrate Bio Basic CD0050 2*H2O; 147.02 MW
Cholesterol Bio Basic CD0122 386.67 MW
Ethyl alcohol B&J RP090-1 99.99%; 46.07 MW
Magnesium sulfate, anhydrous Bio Basic MN1988 120.37 MW
Potassium phosphate, monobasic, anhydrous Bio Basic PB0445 136.09 MW
2'-Deoxy-5-fluorouridine Tokyo Chemical Industry D2235 246.19 MW
Potassium phosphate, dibasic, anhydrous Bio Basic PB0447 174.18 MW
Multi-Purpose Test Tubes Stockwell Scientific ST.8570 8 ml
Test Tube Closures Stockwell Scientific ST.8575
Cell Culture Flask SPL Lifescience 70125 25 cm2
Research Stereo Microscope Nikon SMZ18
High-Definition Color Camera Head Nikon DS-Fi2
PC-Based Control Unit Nikon DS-U3
NIS-Elements Basic Research, Microscope Imaging Software Nikon MQS32000

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A Transparent Window into Biology: A Primer on Caenorhabditis elegans. Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).
  2. Consortium, C. E. S. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282 (5396), 2012-2018 (1998).
  3. Choi, J. I., Yoon, K. H., Kalichamy, S. S., Yoon, S. S., Lee, J. I. A natural odor attraction between lactic acid bacteria and the nematode Caenorhabditis elegans. ISME J. 10 (3), 558-567 (2016).
  4. Gaertner, B. E., Phillips, P. C. Caenorhabditis elegans as a platform for molecular quantitative genetics and the systems biology of natural variation. Genet Res (Camb). 92 (5-6), 331-348 (2010).
  5. Cutter, A. D. Caenorhabditis evolution in the wild. Bioessays. 37 (9), 983-995 (2015).
  6. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).
  7. Felix, M. A., Braendle, C. The natural history of Caenorhabditis elegans. Curr Biol. 20 (58), R965-R969 (2010).
  8. Barriere, A., Felix, M. A. High local genetic diversity and low outcrossing rate in Caenorhabditis elegans natural populations. Curr Biol. 15 (13), 1176-1184 (2005).
  9. Lee, T. Y., Yoon, K. H., Lee, J. I. NGT-3D: a simple nematode cultivation system to study Caenorhabditis elegans biology in 3D. Biol Open. 5 (4), 529-534 (2016).
  10. Lewis, J. A., Flemming, J. T. Basic Culture Methods. Caenorhabditis elegans.: Modern Biological Analysis of an Organism. Epstein, H. F., Shakes, D. C. 48, 4-27 (1995).
  11. Choi, S. Y., Yoon, K. H., Lee, J. I., Mitchell, R. J. Violacein: Properties and Production of a Versatile Bacterial Pigment. Biomed Res Int. , 465056 (2015).
  12. Solis, G. M., Petrascheck, M. Measuring Caenorhabditis elegans life span in 96 well microtiter plates. J Vis Exp. (48), (2011).
  13. Kwon, N., Pyo, J., Lee, S. J., Je, J. H. 3-D worm tracker for freely moving C. elegans. PLoS One. 8 (2), e57484 (2013).
  14. Pierce-Shimomura, J. T., Chen, B. L., Mun, J. J., Ho, R., Sarkis, R., McIntire, S. L. Genetic analysis of crawling and swimming locomotory patterns in C. elegans. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (52), 20982-20987 (2008).
  15. Kwon, N., Hwang, A. B., You, Y. J., SJ, V. L., Je, J. H. Dissection of C. elegans behavioral genetics in 3-D environments. Sci Rep. 5, 9564 (2015).

Tags

البروتوكولات الأساسية، العدد 118،
زراعة<em&gt; انواع معينة ايليجانس</em&gt; في ثلاثة أبعاد في المختبر
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lee, T. Y., Yoon, K. h., Lee, J. I.… More

Lee, T. Y., Yoon, K. h., Lee, J. I. Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory. J. Vis. Exp. (118), e55048, doi:10.3791/55048 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter