Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
JoVE Journal Biology
Click here for the English version

Biology

yetiştirme Published: December 12, 2016 doi: 10.3791/55048
Automatic Translation
1, 1, 1
1Division of Biological Science and Technology, Yonsei University

Summary

Biz NGT-3D ve NGB-3D olarak adlandırılan 3D nematod yetiştirme sistemlerini inşa etmek basit bir yöntem mevcut. Bu standart 2D laboratuvar C. elegans kültür plakaları daha doğal Caenorhabditis elegans habitatlar daha benzer habitatlarda nematod fitness ve davranışları incelemek için kullanılabilir.

Protocol

1. NGT-3D ve NGB-3D Çözümler hazırlayın

  1. Aşağıdaki steril çözeltiler hazırlayın: 0,1454 M NaCl çözeltisi 1 L'lik, 1 M CaCl2, 1 M MgSO 4 ile 1 L 1 L lizojeni Broth (LB), KH 2, 1 M KPO 4 tampon (108.3 g, 1 L PO 4 ve K 2 35.6 g HPO 4 ve dolgu H2O 1 l). Bu çözümleri kullanarak NGM üretimi bir önceki protokolde 10 bulunabilir.
  2. 121 ° C, 15 dk Otoklav çözümler.
  3. Steril 5 mg / ml, kolesterol çözeltisi 50 ml hazırlayın. 50 ml'lik konik bir tüp içinde, kolesterol 0.25 g ve% 99.99 50 ml etanol karışımı ve iyice karıştırın. Otoklavlamayın. 0.45 um'lik bir şırınga filtresi ile 50 ml'lik bir şırınga kullanarak, kolesterol solüsyonu sterilize edin. Bu aynı zamanda herhangi bir çözülmemiş kolesterolü ortadan kaldıracaktır.
  4. 2'-deoksi-5-f (FUDR) stokunun 150 mM 10 ml hazırlayın (İsteğe bağlı). 15 ml konik tüp içinde, 0,3693 g mixFudR ve damıtılmış su, 10 ml. İyi çalkala.

2. NGT-3D ve NGB-3D Bakteriler Kültür hazırlayın

  1. Bakteri 10 mi LB suyu inoküle. Besleme C. elegans için kullanılan standart bakteri E. coli OP50 olduğunu.
  2. Kültür gece boyunca bir çalkalama inkübatöründe 37 ° C sıcaklıkta bakteriyel aşılama.
  3. Seri seyreltme için hazırlık olarak, steril 15 ml konik tüp içine NaCl solüsyonu tümböleni 9 mi. Örneğin, 7 tüpler toplam içine kısım 9 mi OP50 soyu, E. coli 10 -7 seyreltme yapmak.
  4. NaCl çözeltisi 9 ml steril yeni bir tüp içine steril 1000 ul pipet, pipet bakteri kültürü 1 ml ya da seyreltilmiş bakteri kültürü kullanılarak ve de 10 mi karışımı girdap. İstenilen bakteriyel seyreltme ulaşana kadar tekrarlayın.
    Not: İstenilen bakteriyel seyreltme Çeşidi ve durum bakterilerin yanı sıra tam deney koşullarına bağlıdır.Örneğin, bir 10 6 - 6.5 mi NGT-3D tüp başına 200 bakteri kolonilerinin - OP50 soyu, E. coli 10 -8 seyreltme 1 üretilmesi için yeterli idi. Solucanlar güvenilir geliştirilen ve kolonilerin sayısı 10 -6 dilusyondaki meydana geldiği, 60 üzerinde iken normalde yeniden - 10 -7. NGB-3D, 10 -8 bir seyreltme kullanın.

3. yapma NGT-3B ve NGB-3D (200 mi)

  1. bakteri kültürü hazırlandıktan sonra, 0.6 g NaCl, 1 g granüle agar ve 500 ml'lik bir şişe içinde 0.5 g pepton karıştırın. şişeye, bir manyetik karıştırma çubuğu ile yerleştirin.
  2. 195 ml damıtılmış su ekleyin ve alüminyum folyo ile balonun ağzını kapsamaktadır.
  3. 15 dakika boyunca Otoklav 121 ° C.
  4. bir heyecan plaka üzerine sıcak otoklava balon yerleştirin ve en az 2 saat süreyle orta hızda karıştırın. 40 ° C'ye kadar balon soğutun. Bitmiş agar Clouding yol açabilir burada yüksek sıcaklıklarda devam eden olarak yeterince soğumasını emin olun.Bununla birlikte, daha düşük sıcaklıklar agar zamanından önce sertleşmesini neden olabilir.
    1. (İsteğe bağlı), soğutma sürecini hızlandırmak bir heyecan plaka üzerinde yerleştirmeden önce 40 ° C su banyosunda 15 dakika içinde balon yerleştirin.
  5. Agar ortamı sıcaklığı 40 ° C'ye ulaştığında çözelti, karıştırılmaya devam ederken, 200 ul 1 M CaCl2, 5 mg / ml, kolesterol çözeltisi 200 ul, 200 ul 1 M MgSO 4 ve 5 ml 1 M KPO 4 tampon eklemek 1 mM CaCl2, 5 ug / ml kolesterol, 1 mM MgSO 4, 1 mM KPO 4 son konsantrasyonlara.
    1. NGT-3D ömrü deneyi için (İsteğe bağlı) 120 uM, 12 bir son konsantrasyona kadar, 150 mM FudR 80 ul ekle.
  6. doğrudan balona adım 2.4 bakteri kültürü seyreltilmiş 10 ml 6 ml ekleyin.
    1. , NGT-3D için (İsteğe bağlı) adım 3.6 önce agar medya 6 ml çıkarın ve ayrı sıcak tutmak. Bu ortam için kullanılacak bakterilerden arındırılmışÜst tabaka.
  7. Steril prosedürler kullanılarak, steril bir kültür odasına ortamı dağıtmak. Emin odasının kapağı sıkıca kapatır emin olun.
    1. (İsteğe bağlı), agar üst yüzeyinde şekillendirme bakteri kolonileri önlemek 3.7 tamamen sertleşir adımdan medyada önce üst aşama 3.6.1 bakteri serbest ağar medya bir katman yapmak için. Bu NGT-3D üstündeki bir bakteri serbest bölge oluşturur.
    2. NGT-3D, bir bakteri ağar katman yapmak ve dikkatle ince bir bakteri yapmak için yarı sertleştirilmiş 3D medya üstünde bakteri özgür medya 200 ul dağıtmak için 8 ml şeffaf plastik test tüpleri içine 6,5 ml medya dökmek üstünde ücretsiz tabaka.
    3. NGB-3D, 25 cm 2 şeffaf plastik hücre kültürü şişe içine medya 65 ml dökün. Bu miktar 25 cm 2 hücre kültürü şişe gövdesini doldurmalıdır.
  8. Bakteri kolonileri büyümesine imkan vermek üzere bir hafta süreyle dikey oda sıcaklığında odaları boşen az 1 mm çapında önemli bir boyuta.
    1. NGT-3D ömrü deneyi için (İsteğe bağlı), alüminyum folyo ile kapak odaları FUDR ışık bozulmasını önlemek için.

NGT-3D (Bağıl Brood Boyut Testi) üzerine Solucan Nüfus 4. Tedbir Spor

  1. almak ve bir bakteri ücretsiz NGM plaka transfer platin tel kullanarak bir L4 sahne solucanı almak. Solucan serbestçe bünyesine bağlı bakteri kaldırmak için bir kaç dakika dolaşmak için izin verin.
  2. adımı 4.1 tekrarlayın ve solucan bakterilerden arınmış olduğundan emin olun. Genellikle, 4.1 iki tekrarlar yeterlidir.
  3. Dikkatlice bir platin tel çekme ile 3D medya yüzeyine temiz solucan yerleştirin. Solucan sonunda 3D agar matrisi içine agar girmelidir.
  4. Kapak gevşek bazı hava tüpüne almak için izin ancak agar medya kurumasını önleyen kapatın.
  5. 20 ° C'de 96 saat süreyle inkübe edilir.
  6. 4 gün sonra, sıkıca kapaklarını kapatın ve koyun88 ° C su banyosu içine NGT-3D kültür odası agar eritmek için. Isı solucanlar öldürür ama vücutları sağlam kalır.
    Not: NGT-3D 8 ml tüpler kullanılarak, 20-30 dakika kuluçka genellikle yeterlidir.
  7. Cam bir pipet kullanılarak, 9 cm plastik petri kabı üzerine erimiş ortamı aktarın. solucanlar genellikle onlara sopa gibi plastik pipetler, tavsiye edilmez.
  8. Bir iletim stereo diseksiyon mikroskobu kullanılarak, L3, L4 solucanlar, ve yetişkin aşamaları sayısını. F1 ve F2 nesil burada karışabilir olarak, L2 sahne ve genç solucanlar saymayın. Böylece, bu testte göreceli kuluçka boyutu tahlil yerine toplam kuluçka büyüklüğü testtir.

5. Görüntü ve Kayıt Worm Davranışı NGB-3D

  1. platin tel kullanarak bir L4 sahne solucanı almak almak ve bir bakteri ücretsiz NGM plaka transfer ve serbest bir kaç dakika hareket sağlayan yüzeye yapışmış herhangi bakterileri yok.
  2. Adımı yineleyin 5.1 wo emin olmak içinrm bakterilerden arınmış.
  3. Dikkatlice bir platin tel çekme ile şişenin boyun yakın NGB-3D agar yüzeyinin merkezi üzerine temiz solucan yerleştirin. Solucan sonunda 3D agar matrisi içine agar girmelidir.
  4. Agar medya kurumasını önlerken kapak gevşek, bazı hava tüpüne almak için izin kapatın.
  5. Görüntü veya iletim stereo mikroskop altında solucan kaydedin. solucan 3D matris boyunca hareket ederken odağı ayarlayın.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

NGT-3D inşaat agar (Şekil 1A) boyunca aralıklı küçük bakteri kolonileri ile bir agar dolu test tüpünde sonuçlanan basit ve kolay bir protokoldür. Solucanlar serbestçe bakteri kolonileri bulma ve tüketen, ağar matriks boyunca taşıyabilirsiniz. C. elegans çoğaltmak ve NGT-3D normal büyüyebilir olmadığını teyit etmek, biz doğurganlık ve standart 2D NGM plakalar ile 3D larva gelişimi karşılaştırıldı. Göreceli yavru boyutu deneyde, yetişkin C. bakteri kolonileri en az 60 koloniler (Şekil 1B) ile bol olduğunda NGT-3D çift cinsiyetli standart 2D NGM tabaklarda çift cinsiyetli sadece yanı sıra yeniden elegans. Ayrıca, NGT-3D larva gelişme de 96 saat (Şekil 1C) sonra erişkin devlet solucanlar çoğunluğu ile bakteri kolonilerinin bol olduğunda normal olarak devam eder. Ancak, bakteri kolonileri seyrek ise3D matris içinde, göreceli yavru boyutu (Şekil 1B, sol çubuk) ve larva gelişim (Şekil 1C, sol çubuk) hem olumsuz etkilenmektedir.

3D yerleşim solucanın uzun vadeli fizyolojisi üzerinde herhangi bir etkisi olup olmadığını test etmek için, biz NGT-3D ve NGM plakaları karşılaştıran bir ömrü deneyi yapılmıştır. NGT-3D solucanlar için ortalama ömrü standart NGM plakalar için 14.8 ± 3.1 gün ile karşılaştırıldığında 15.6 ± 3.6 gün idi. NGT-3D ve NGM yaşayan solucanlar için ömrü eğrileri neredeyse aynıydı. Nedenle, solucanlar 3D ve 2D koşullarında eşit olarak hayatta görünüyor.

NGB-3D imalatı da zor değildir ve Şekil 2A'da görüldüğü gibi berrak, agar dolu kültür şişesi ile sonuçlanmalıdır. Kolayca OP50 biz deoxyviolacein, koyu mor bakteri metaboliti 11 dile getirdiler, bakteri kolonileri, görüntülemek içinsuşu E. coli (Şekil 2A, 2B, istek üzerine suşu). Canlı solucanlar bir iletim Stereo diseksiyon mikroskobu (Şekil 2B, Ek Film 1) altında görüntülenebilir.

Oda sıcaklığında NGT-3D ve NGB-3D depolanması 1 aya kadar bu kültür odasından iki korumak için yeterlidir. tüp veya şişe uyan bir eklenti türü veya vidalı tip kapak uygulandığı takdirde agar Kuruma NGT-3D veya NGB-3D biri için bir endişe değil.

Şekil 1
Şekil 1: NGT-3D ekili C. elegans geliştirilmesi, doğurganlık ve ömrü standart 2D NGM ile karşılaştırılabilir. (A) bakterilerin çeşitli dilüsyonlarda NGT-3D görüntüleri. sol veSağ 5 x 10 -7 seyreltme içerir ve orta 1 x 10 -7 seyreltme olduğunu. Az 60 OP50 koloniler (n = 24), NGT-3D yabani tip solucanlar (B) bağıl kuluçka boyutu, daha büyük ya da 60 koloni (n = 14) ya da 2D NGM plakaları (n = 29) üzerine eşit. Hata çubukları standart hata gösterir. Daha büyük ya da 60 koloniler eşit veya 2D NGM plakalar üzerinde az 60 OP50 koloniler ile NGT-3D L3, L4 veya yetişkin gelişim aşamasında F1 nesil solucanlar (C) Yüzde. NGT-3B ya da NGM plakalar yabani tip C. elegans (D) hayatta kalma eğrisi. NS önemli ölçüde farklı log-rank testi ile hesaplanmıştır olmadığını gösterir. Bu rakam Lee 9 modifiye edilmiştir. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

şekil 2 Şekil 2: NGB-3D kullanarak 3D Görüntüleme C. elegans. (A, B) NGB-3D görselleri; Koyu mor pigment deoxyviolacein ifade OP50 suşu E. coli kolonisi yakın yetişkin C. elegans (C) Görüntüler. Ölçek çubuğu 500 mm. Bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

şekil 2
Ek Film 1: Yetişkin C. elegans NGB-3D koloni bir E. coli OP50-violace yaklaşım. Bu dosyayı indirmek için tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Klasik nematod büyüme ortamı plakaları kullanılarak C. elegans laboratuvar ekimi sağlamıştır C. elegans araştırma önemli keşiflerinden yüzlerce önemliydi. Burada, daha doğru kendi doğal üç boyutlu habitatları yansıtan bir ortamda C. elegans yetiştirmek için yeni yöntemler sunuyoruz. Diğer yöntemler 3D 13 C. elegans gözlemlemek için kullanılmışsa da, bu katı 3 boyutlu matris solucanlar ekimi sağlayan ilk protokoldür. Burada gösterilen iki yöntem, NGT-3D ve NGB-3D, bilim adamları görüntü de 3D ekimi fitness, kalkınma ve büyüme sorular, sormak ve 3D solucanlar kaydetmek için izin verir. NGT-3D ve NGB-3D standart 2D NGM plakaları bazı farklılıklar olmasına rağmen, bu orijinal yönteme benzer ve sadece z-ekseninde solucan ekimi eklemek için ayarlıdır. Böylece, geliştirme, doğurganlık ve ömrü bizim koşullarda normal devam bulabilirsiniz.amaç herhangi bir laboratuvar araştırmaları için istihdam edebilir bir protokol oluşturmak oldu. Bu yöntemler, çok düşük bir maliyetle kolay üretilebilir, çok basit ve kullanıcıların özel deneyler uyacak protokollerin ayarlama sağlar.

protokol tüm adımları önemli olmakla birlikte, NGT-3D ve NGB-3D yapımında kritik bir adım protokolünün 3.6 Adımlar 3.4 otoklav sonrası agar soğutma sıcaklığıdır. Sıcaklık (40 ° C'nin altında birkaç derece) çok düşük soğur ise, ağar sertleşmesine başlayacak ve katma değerli çözümler agar içine düzgün karıştırmak olmaz. soğutma yetersiz (40 ° C'nin üzerinde birkaç derece) olduğu, ancak, katma bakteriler ölebilir ve katma kolesterol çözüm deneyleri için yararsız agar render agar bulut olabilir. Buna ek olarak, dikkatli bir alan adımında 4.6 olduğunu. su banyosunda NGT-3D agar erime, erime yardımcı olmak için sıkıca kapaklarını kapatın emin olun. Bununla birlikte, bir ısı neden olabilirkapaklar tehlikeli kapalı "pop" ve bir mermi olmak. Güvenlik amacıyla su banyosu kapsayacak şekilde en iyisidir. protokolün birçok yerinde kullanıcıya oldukça uyarlanabilir. Örneğin, NGT-3D için şeffaf plastik test tüpü ve NGB-3D için 25 cm 2 berrak hücre kültürü şişesi (65 ml toplam tutar) kullandık. kullanıcı için kullanılabilir net tüpler veya şişelerin diğer türleri de çalışması gerekir. Ayrıca, bakteriyel büyüme ayarlanabilir. E. coli OP50 genellikle bizim deneyler için tercih edildi, en az 1 mm, büyümeye yaklaşık bir hafta sürer. Bizim tecrübelerimize göre, bakteriler için biraz daha kısa ve hatta çok daha uzun büyüme süreleri solucan büyümesi ya da doğurganlığı etkiler görünmemektedir. Agar konsantrasyonu ayarlanması, ancak, solucan hareketi etkileyecektir. agar düşük konsantrasyonlarda yüzme gibi hareketi gösteren solucan neden ve yüksek konsantrasyonlarda genel hareketini engelleyebilir.

NGB-3D endişe bir alan yoğunlaşması sorunu olduve su birikmesi. Sıcak sıvı ağar sertleşir gibi, kaçınılmaz olarak bazı yoğunlaşma, özellikle şişe ve agar arayüzünde, zamanla gelişir. Bu yüzme sıvılar 14 davranışlarını ve sıvı ile şişe boyunca yayılabilir bakterilerin üremesini gösterir solucan için sorun teşkil edebilir. yoğunlaşma önlenmesi zordur. İki olası ilaçları bunun için vardır. İlk olarak, biz solucan kolayca şişenin boynundaki agar yüzeyinin ortasında yerleştirerek agar girebilirsiniz emin olun. İkincisi, biz kasıtlı böylece bir koloni sıvı ve agar arayüzünde büyür şansı azalan, NGB-3D düşük bakteri konsantrasyonu tutun.

Başka bir endişe NGB-3D solucanlar görüntülenmesidir. 3D solucanlar görüntülerin netlik ve kalitesini artırmak, koloniler yüzeye yakın olmalı ama tamamen agar gömülü kalır. Biz surfa yakın sadece gömülü kolonileri büyümeye teşebbüsyüzeyde bakteri içeren agar ince bir tabaka yerleştirmek ve kalan ortam ile ce bakteri serbest bırakıldı. Ancak konu tam olarak bu yöntemle çözüldü değildi. Bunun yerine, biz aynı anda çok sayıda NGB-3D şişe üretmek ve böylece bir solucan yüzeyine yakın bir koloniye hareket edeceğini şansını artırarak, yüzeye yakın koloniler gömülü içeren sadece olanları kullanmaya karar verdi. Biz keşfedilmeyi değil bir seçenek burada istihdam granül agar başka bir matris katı ortam değişiyor. z ekseni yönünde solucanlar Görüntüleme de zor olabilir. Biz elle yükseltilmesi ve kaba odak düşürerek bunu, ama otomatik izleme programı bunun için varsa, oldukça yararlı olabilir.

Umut 3D C. elegans ekimi için burada sunulan teknikler yaygın nematod biyologlar tarafından kullanılacak olmasıdır. Birçok soru 3D yaşlanma ve davranışlar da dahil olmak üzere solucan biyoloji, hakkında kalır ve bilim adamları ne uyup uymadıklarını2D 3D solucan için geçerlidir. Nitekim, NGT-3D kullanarak bir önceki çalışma 3D ekimi 2B koşullarında 9 normalde yeniden üreten bir duyusal mutant üzerinde olduğu üreme fitness etkisini gösterdi. Buna ek olarak, bir çalışma 2D 15 oranla 3D değişmiş hareket davranışlarını gösterdi. Son olarak, bu sistem belirli koşulların, mutantlar veya manipülasyonlar doğal 3D ortamda hayvan fitness avantajlar sağladığı olsun sorulara cevap başlamak için kullanılabilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Bu çalışma ile desteklenmiştir Yeni Araştırmacı Grant [2014R1A1A1005553] Liberal Kore Ulusal Araştırma Vakfı (UÇK) 'dan; ve Yonsei Üniversitesi Gelecek Lider Mücadelesi Grant [2015-22-0133] Liberal için

Materials

Name Company Catalog Number Comments
LB broth, Miller (Luria-Bertani) Difco 224620
Sodium chloride DAEJUNG 7548-4400 58.44 MW
Agar, Granulated Difco 214530
Peptone Bacto 211677
Calcium chloride, dihydrate Bio Basic CD0050 2*H2O; 147.02 MW
Cholesterol Bio Basic CD0122 386.67 MW
Ethyl alcohol B&J RP090-1 99.99%; 46.07 MW
Magnesium sulfate, anhydrous Bio Basic MN1988 120.37 MW
Potassium phosphate, monobasic, anhydrous Bio Basic PB0445 136.09 MW
2'-Deoxy-5-fluorouridine Tokyo Chemical Industry D2235 246.19 MW
Potassium phosphate, dibasic, anhydrous Bio Basic PB0447 174.18 MW
Multi-Purpose Test Tubes Stockwell Scientific ST.8570 8 ml
Test Tube Closures Stockwell Scientific ST.8575
Cell Culture Flask SPL Lifescience 70125 25 cm2
Research Stereo Microscope Nikon SMZ18
High-Definition Color Camera Head Nikon DS-Fi2
PC-Based Control Unit Nikon DS-U3
NIS-Elements Basic Research, Microscope Imaging Software Nikon MQS32000

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Corsi, A. K., Wightman, B., Chalfie, M. A Transparent Window into Biology: A Primer on Caenorhabditis elegans. Genetics. 200 (2), 387-407 (2015).
  2. Consortium, C. E. S. Genome sequence of the nematode C. elegans: a platform for investigating biology. Science. 282 (5396), 2012-2018 (1998).
  3. Choi, J. I., Yoon, K. H., Kalichamy, S. S., Yoon, S. S., Lee, J. I. A natural odor attraction between lactic acid bacteria and the nematode Caenorhabditis elegans. ISME J. 10 (3), 558-567 (2016).
  4. Gaertner, B. E., Phillips, P. C. Caenorhabditis elegans as a platform for molecular quantitative genetics and the systems biology of natural variation. Genet Res (Camb). 92 (5-6), 331-348 (2010).
  5. Cutter, A. D. Caenorhabditis evolution in the wild. Bioessays. 37 (9), 983-995 (2015).
  6. Brenner, S. The genetics of Caenorhabditis elegans. Genetics. 77 (1), 71-94 (1974).
  7. Felix, M. A., Braendle, C. The natural history of Caenorhabditis elegans. Curr Biol. 20 (58), R965-R969 (2010).
  8. Barriere, A., Felix, M. A. High local genetic diversity and low outcrossing rate in Caenorhabditis elegans natural populations. Curr Biol. 15 (13), 1176-1184 (2005).
  9. Lee, T. Y., Yoon, K. H., Lee, J. I. NGT-3D: a simple nematode cultivation system to study Caenorhabditis elegans biology in 3D. Biol Open. 5 (4), 529-534 (2016).
  10. Lewis, J. A., Flemming, J. T. Basic Culture Methods. Caenorhabditis elegans.: Modern Biological Analysis of an Organism. Epstein, H. F., Shakes, D. C. 48, 4-27 (1995).
  11. Choi, S. Y., Yoon, K. H., Lee, J. I., Mitchell, R. J. Violacein: Properties and Production of a Versatile Bacterial Pigment. Biomed Res Int. , 465056 (2015).
  12. Solis, G. M., Petrascheck, M. Measuring Caenorhabditis elegans life span in 96 well microtiter plates. J Vis Exp. (48), (2011).
  13. Kwon, N., Pyo, J., Lee, S. J., Je, J. H. 3-D worm tracker for freely moving C. elegans. PLoS One. 8 (2), e57484 (2013).
  14. Pierce-Shimomura, J. T., Chen, B. L., Mun, J. J., Ho, R., Sarkis, R., McIntire, S. L. Genetic analysis of crawling and swimming locomotory patterns in C. elegans. Proc Natl Acad Sci U S A. 105 (52), 20982-20987 (2008).
  15. Kwon, N., Hwang, A. B., You, Y. J., SJ, V. L., Je, J. H. Dissection of C. elegans behavioral genetics in 3-D environments. Sci Rep. 5, 9564 (2015).

Tags

Temel Protokolleri Sayı 118, Nematod üreme spor 3D üç boyutlu davranış nematod ekimi
yetiştirme<em&gt; Caenorhabditis elegans</em&gt; Laboratuvarı Üç boyutlu
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Lee, T. Y., Yoon, K. h., Lee, J. I.… More

Lee, T. Y., Yoon, K. h., Lee, J. I. Cultivation of Caenorhabditis elegans in Three Dimensions in the Laboratory. J. Vis. Exp. (118), e55048, doi:10.3791/55048 (2016).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter