Abstract
فلا بد من إثبات فعالية من العلاجات المضادة للبكتيريا مرشح في النماذج الحيوانية للعدوى كجزء من عملية الاكتشاف والتطوير، ويفضل أن يكون ذلك في النماذج التي تحاكي إشارة السريري المقصود. ووصف طريقة لإحداث التهابات الرئة قوية في الفئران مناعيا والفئران والذي يسمح لتقييم العلاجات في نموذج من التهاب رئوي خطير تسببه S. الرئوية، المستدمية النزلية، الزائفة الزنجارية، K. الرئوية أو A. baumannii. يتم تخدير الحيوانات، ويترسب على اللقاح استنادا أجار في عمق الرئة عن طريق إدخال أنبوب داخل الرغامى غير الجراحية. العدوى الناجمة يتسق، قابلة للتكرار، ومستقر لمدة 48 ساعة على الأقل، ويصل إلى 96 ساعة بالنسبة لمعظم العزلات. وقد أظهرت الدراسات التي أجريت على مضادات الجراثيم تسويقها علاقة جيدة بين في نجاعة فيفو وفي قابلية المختبر، والتوافق بين الدوائية الأهداف / الدوائية تحديدفي هذا النموذج، والأهداف المقبولة سريريا وقد لوحظ. على الرغم من وجود استثمار الوقت الأولي عندما تعلم هذه التقنية، فإنه لا يمكن أن يؤديها بسرعة وكفاءة مرة واحدة ويتم تحقيق الكفاءة. وتشمل الفوائد من طراز إلغاء شرط العدلات، وزيادة متانة والتكاثر، والقدرة على دراسة المزيد من مسببات الأمراض ويعزل، وتحسين المرونة في تصميم الدراسة وإنشاء العدوى تحديا في مضيف مناعيا.
Introduction
تقييم فعالية المرشحين المحتملين المخدرات في النماذج الحيوانية للعدوى هو عنصر حاسم في عملية اكتشاف الأدوية المضادة للبكتيريا. في الجسم الحي توفر دراسات الفعالية البيانات الهامة من مختلف أنحاء مدى الجهود الاكتشاف، من توضيح العلاقات هيكل النشاط (SAR) وتحسين سلسلة الكيميائية الرائدة من خلال تحديد الدوائية، الدوائية (PK / PD) خصائص المركبات ودعم اختيار الجرعة لصنع القرار التطوير السريري وموافقة الجهات التنظيمية. ووصف العديد من النماذج عدوى الحيوان في الأدب لهذه الأغراض. واحد من النماذج الأكثر شيوعا واستخداما هو العدلات عدوى الماوس الفخذ، الذي كان رائدا من قبل نسر 1 و 2 و توسعت بنسبة Vogelman وكريغ 3 و 4 في وقت لاحق. وكان هذا النموذج لا تقدر بثمن لدعم تحديد نقاط قابلية البكتيرية وتقديم أهداف PK / PD لتوجيه الجرعات الإنسان. هناك العديد من الامتحانPLES حيث ثبتت القدرة التنبؤية لهذا النموذج 4-7. ومع ذلك، واحدة من عيوب نموذج الإصابة في الفخذ هو عدم وجود صلة مباشرة للالتهابات الرئة. الآن هناك تركيز أكبر على مطابقة موقع الإصابة في النماذج الحيوانية إلى موقع الإصابة في البشر. وبالتالي، لدراسة المركبات لعلاج الالتهاب الرئوي، وهو مثالي للاستفادة من نموذج عدوى الرئة في الحيوانات.
وقد وصفت العديد من الطرق لإحداث التهابات الرئة في الحيوانات المختبرية وتستخدم للدراسات فعالية مضادة للجراثيم بما في ذلك استنشاق الأنف، والطموح من طريق الفم والبلعوم، والتعرض الهباء الجوي، والعمليات الجراحية التلقيح داخل القصبة الهوائية 8. في كثير من الحالات، والحيوانات (وخاصة الفئران) يجب أولا المقدمة العدلات من أجل تحقيق التهاب في الرئتين قوية. وعلى الرغم من هذه الدولة المناعة بشدة، وعدد من مسببات الأمراض البكتيرية والسلالات التي تنتج العدوى قابلة للحياة في القوارض هومحدودة. على سبيل المثال، يمكن أن يكون من الصعب تحديد بنجاح المستدمية النزلية أو راكدة بومانية في نماذج الالتهاب الرئوي 9 و 10، وحتى أكثر ضراوة مسببات الأمراض، مثل المكورات العقدية الرئوية، الزائفة الزنجارية والكلبسيلة الرئوية، يمكن أن تشكل تحديات 11-13.
في عام 1991، وصف سميث نموذجا التهاب في الرئتين في فئران فطيم مناعيا التي تأسست العدوى عن طريق غرس البكتيريا مباشرة إلى الرئتين عبر بسيطة غير الجراحية طريقة التنبيب داخل الرغامى 14. التوت وآخرون. في وقت لاحق تعديل طريقة لاصابة الفئران 15. باستخدام اللقاح على أساس أجار، هذه التقنية التلقيح تحرض التهابات الرئة قوية في كل من الفئران مناعيا والفئران مع S. الرئوية، المستدمية النزلية، K. الرئوية، الزائفة الزنجارية وA. baumannii. فمن قابلة للمجموعة واسعة من العزلات، بما في ذلك إيواء مختلف مقاومةمحددات تعصب وتلك التي لا تنتج العدوى قابلة للحياة عبر طرق التلقيح أخرى. كما يسمح فعالية يتم تحديدها في الحيوانات مناعيا، وهو الشرط الذي هو أكثر أهمية من نموذج الفأر العدلات التقليدية للسكان المريض التي ليست المناعة بشدة. الاتساق والموثوقية من هذا النموذج عبر مسببات الأمراض وعزلة متعددة يجعلها مناسبة تماما للدراسات فعالية مضادة للجراثيم.
Protocol
س pneumonie
جميع الإجراءات وفقا للبروتوكولات التي وافقت عليها لجنة رعاية الحيوان واستخدام GSK المؤسسي (IACUC)، وتلبي أو تتجاوز معايير الجمعية الأمريكية لاعتماد المختبرات رعاية الحيوان (AAALAC)، والولايات المتحدة وزارة الصحة وحقوق الإنسان الخدمات وجميع القوانين الرفق بالحيوان المحلية والاتحادية.
ملاحظة: ما لم ينص على خلاف ذلك، يجب أن يتم تنفيذ جميع الإجراءات باستخدام تقنية العقيم.
1. الثقافة البكتيرية العزلات
- إعداد 3-6 أجار لوحات مع س. الرئوية أو المستدمية النزلية، وثقافة مرق عموما لا توفر ما يكفي من المواد للتلقيح.
- إزالة ثقافة الأسهم المجمدة من تخزين في -80 درجة مئوية، وذوبان الجليد تماما، وخط يصل إلى 100 ميكرولتر لكل لوحة على أجار الصويا زيتية تستكمل مع الأغنام الدم (س. الرئوية) أو على الشوكولاته أجار (المستدمية النزلية) باستخدام تقنيات علم الأحياء الدقيقة القياسية. احتضان ليلا 37 درجة مئوية مع أو بدون 5٪ CO 2.
- إعداد الثقافات مرق مع ك الرئوية، الزائفة الزنجارية أو A. baumannii.
- إزالة ثقافة الأسهم المجمدة من تخزين في -80 درجة مئوية، وذوبان الجليد تماما، وقسامة 100 ميكرولتر من الأسهم إلى 50 مل الدماغ و القلب ضخ (BHI) مرق. احتضان ليلا 37 درجة مئوية مع طيف والهز (حوالي 120 دورة في الدقيقة).
- [اختياري] إذا كان المطلوب ثقافة مرحلة السجل، قسامة 1 مل من الثقافة بين عشية وضحاها الناتجة إلى 50 مل BHI جديدة مرق. احتضان لمدة 3 ساعات في 37 درجة مئوية مع طيف والهز (حوالي 120 دورة في الدقيقة).
2. إعداد المالحة البكتيرية المعلقات
- لجميع خطوات إعداد تعليق (2،1-2،3)، واستخدام محلول ملحي في درجة الحرارة بين الهواء المحيط و 37 درجة مئوية. حصاد النمو بين عشية وضحاها من S. الرئوية أو المستدمية النزلية من لوحات أجار المستعمرات كشطمن على سطح الأرض مع حلقة عقيمة. نقل المواد التي تحصد في 5 مل من محلول ملحي حتى غائم، يتم الحصول على تعليق مبهمة وبلطف دوامة حتى متجانسة.
- الطرد المركزي 50 مل من ك الرئوية، الزائفة الزنجارية أو A. baumannii الثقافات مرق النهائي المعدة للتلقيح (على سبيل المثال بين عشية وضحاها أو تسجيل الثقافات المرحلة) لمدة 5 دقائق في 4500 ز س. إزالة طاف مع ماصة وتجاهل. Resuspend وبيليه في لا يقل عن 5 مل محلول ملحي، وبلطف دوامة لتحقيق وقف متجانسة.
- إذا لزم الأمر، تمييع تعليق باستخدام مزيد من ملحي معقم للحصول على كثافة في حدود 8-9 سجل 10 وحدات تشكيل مستعمرة (كفو) / مل. إزالة قسامة لتحديد كفو / مل. مخفف تسلسليا ولوحة قسامة كما هو موضح في الأقسام 7.5 و 7.6.
3. إعداد اللقاح استنادا آجار
- تحضير زجاجة صغيرة (حوالي 50 مل) من المغذيات أجار أكوردينغ لتعليمات الشركة الصانعة أو تذوب زجاجة من الآجار المغذي الصلبة التي كانت معدة مسبقا وتخزينها. السماح لتبرد إلى ما يقرب من 50 درجة مئوية.
- نقل أجار السائل وجميع الأدوات والمعدات اللازمة لعملية العدوى إلى منطقة الإجراء حيث سيتم إصابة الحيوانات. الحفاظ على حمام مائي صغير يقع في 42 درجة مئوية في المنطقة.
- السماح للأجار للوصول إلى درجة حرارة حوالي 50 درجة مئوية، ثم قسامة 9 مل في أنبوب معقم بحجم مناسب لتنسجم مع حمام الماء. ترك هذا الأنبوب في حمام مائي حتى equilibrates آغار إلى ما يقرب من 42 درجة مئوية. ضمان المياه على عمق والتي سوف تغطي سطح أجار في الحاوية الخاصة به ولكن لا تلمس قبعة أو غطاء.
- إضافة 1 مل من تعليق البكتيرية المالحة من الخطوة 2.3 في أنبوب يحتوي على 9 مل أجار في حمام مائي. غطاء الأنبوب، عكس عدة مرات لخلط، وإعادته إلى حمام الماء.
4 اnesthetize، التنبيب وتلقيح الحيوانات
ينصح 25 ز - العوامل المسببة للأمراض محددة حرة الفئران (SPF) مناعيا الذكور سبراغ داولي وزنها 100-120 غرام أو الذكور CD-1 الفئران وزنها 20: ملاحظة. توفير جميع الحيوانات بالغذاء والمياه الإعلانية بالمال وبالشهرة أيضا وإيوائهم اجتماعيا على رقائق الخشب أو غيرها من الفراش ماصة مع دورات القياسية ضوء الظلام 12 ساعة.
- قبل إجراء أي تجارب، الحصول على وتعقيم قنية المعادن والبولي ايثيلين أنابيب من الحجم المناسب لأنواع الحيوانات. الحصول معقمة 1 مل المحاقن المعقمة ويمكن التخلص منها الإبر عيار 25.
تحذير: تخلص دائما من هذه المحاقن والإبر في وعاء الحادة.- بالنسبة للفئران، وشراء أو تصنيع قنية المعدنية التي هي حوالي 12 سم في الطول، لديه معرف 0،9-1،0 مم والتطوير التنظيمي من 1،0-1،2 مم، وغير عازمة على تقريبي زاوية 45 درجة في نهاية واحدة. قطع على طول 11- 12 بوصة من أنابيب البولي ايثيلين مع معرف من 0.4 ملم وOD 0.8 مم. (تشير إلى
- بالنسبة للفئران، شراء أنبوب تغذية الحيوان رقم 20. إزالة الكرة من نهاية الأنبوب عن طريق الامساك بها مع كماشة وسحب بحدة، ثم ينحني برفق حد لالتقريبية زاوية 45 درجة. قطع على طول 11- 12 بوصة من أنابيب البولي ايثيلين مع معرف من 0.28 ملم وOD 0.61 مم. أيضا شراء وتعقيم كوب 100 ميكرولتر حقن حقنة صغيرة وعيار 30 المعدن الدقيقة حقن إبرة. (راجع الشكل 1B).
- وضع قنية المعدن في الزجاج، أنبوب المسمار سقف والتعقيم بالطرق العادية لتعقيم. نقع وقطع متجر أطوال أنابيب البولي ايثيلين في دورق يحتوي على الكحول مغطى.
- بالنسبة للفئران، وشراء أو تصنيع قنية المعدنية التي هي حوالي 12 سم في الطول، لديه معرف 0،9-1،0 مم والتطوير التنظيمي من 1،0-1،2 مم، وغير عازمة على تقريبي زاوية 45 درجة في نهاية واحدة. قطع على طول 11- 12 بوصة من أنابيب البولي ايثيلين مع معرف من 0.4 ملم وOD 0.8 مم. (تشير إلى
- إعداد سطح العمل وجهاز التنبيب.
- وضع حصيرة المتاح نظيفة على سطح العمل، على مقربة من حمام الماء. نقل قنية المعادن، في أنبوب التخزين الزجاج لها، لهذا السطح. إزالة الغطاء من أنبوب التخزين، وحرك نهاية "مقبض" من cannuلا إلى نهاية مفتوحة للأنبوب.
- باستخدام ملقط معقم، وإزالة طول واحد من أنابيب البولي إيثيلين من كوب وأدخله من خلال داخل قنية المعدنية المعقمة، والتأكد من أنها تتحرك بحرية. تناسب معقمة المتاح إبرة عيار 25 (بالنسبة للفئران) أو تعقيمها عيار 30 إبرة معدنية من حقنة زجاجية صغيرة حقن (بالنسبة للفئران) إلى نهاية خالية من أنابيب البولي اثيلين عن طريق تحريك الإبرة عدة ملم في أنابيب. (راجع الشكل 1A للفئران، والشكل 1B للفئران).
- علامات المكان دليل على كل قنية المعدنية وأنابيب البولي ايثيلين للإشارة إلى عمق الإدراج في الحيوان باتباع الإجراء التنبيب هو موضح أدناه على حيوان الموت الرحيم واحد. فتح تجويف الصدر للمراقبة، ثم وضع قنية المعادن بشكل صحيح ودفع أنابيب البولي ايثيلين على النحو المناسب (كما هو موضح في القسم 4.7). باستخدام القلم الذي لا يمحى، بمناسبة قنية المعادن حيث يلتقي فم الحيوان وبوليأنابيب الإثيلين، حيث يقابل الجزء العلوي من قنية المعادن للمساعدة في تحديد المكان المناسب الحيوانات المتبقية.
- داخل غطاء الدخان (أو باستخدام نظام الكسح المناسب)، تخدير تصل إلى 6 حيوانات في وقت واحد في غرفة مغلقة المتوفرة مع ≤5٪ الأيزوفلورين في 1.5 لتر / دقيقة الأكسجين حتى يتم تثبيط المنعكس هفوة (حوالي 1 دقيقة).
ملاحظة: قبل إجراء أي تجارب، ووضع الجرعة ومدة التعرض الآمن للالأيزوفلورين وفقا للشروط المحددة المستخدمة (مثل حجم / نوع الغرفة وحجم / نوع / سلالة من الحيوانات) لمنع التعرض الفتاكة غير مقصود. - ملء معقمة المتاح حقنة 1 مل (بالنسبة للفئران) بمحلول ملحي معقم عن طريق وضع طرف العقيمة في المياه المالحة وسحب على المكبس. ملء العقيمة حقنة زجاجية صغيرة حقن (بالنسبة للفئران) كما هو موضح أدناه. نعلق المحقنة إلى إبرة تركيبها أنابيب البولي ايثيلين، ومسح كامل حجم من المياه المالحة من خلال الأنبوب حتى سيرينجيتم إفراغ البريد.
- لملء حقن حقنة صغيرة (بالنسبة للفئران)، إزالة المكبس المعدني وإبرة (تركيبها أنابيب البولي ايثيلين) من حقنة وتعيين كلا جانبا.
- ملء معقمة المتاح حقنة 1 مل مع ملحي معقم (كما هو موضح أعلاه) وإرفاق معقمة المتاح إبرة عيار 25. ادخال الإبرة في الجزء العلوي من حقن حقنة صغيرة (حيث سيتم إدراج المكبس المعدني)، وتضغط على المكبس من الحقنة حتى يملأ حقن حقنة صغيرة مع المياه المالحة.
- تجاهل الحقنة والإبرة التي كانت تستخدم لملء حقن حقنة صغيرة في وعاء الحادة. إعادة إرفاق المعدن حقن الدقيقة إبرة (تركيبها أنابيب البولي ايثيلين) لغيض من حقن حقنة صغيرة وإعادة إدراج المكبس المعدني، والاكتئاب حتى تم مسح وحدة التخزين بالكامل من المياه المالحة من خلال حقنة والأنابيب.
- ملء المحاقن مع اللقاح القائم على أجار جيئة وذهابام الحاوية في حمام مائي، وأجار تدفق عبر الأنابيب فقط حتى يتم تجهيزهم للأنابيب (على سبيل المثال وليس صحيحا تماما مع آغار).
- بالنسبة للفئران، وإزالة إبرة عيار 25 (تركيبها أنابيب البولي ايثيلين) من الحقنة. تجاهل الحقنة المستخدمة في حاوية الأدوات الحادة. شغل جديدة، معقمة المتاح حقنة 1 مل مع قيحة استنادا أجار من الحاوية في حمام الماء عن طريق وضع طرف العقيمة في اللقاح وسحب على المكبس. إعادة إرفاق إبرة (تركيبها أنابيب البولي ايثيلين) وأجار تدفق عبر الأنابيب بالضغط على المكبس فقط حتى يتم تعبئة تماما أنابيب مع أجار.
- بالنسبة للفئران، وإزالة المعادن حقن الدقيقة إبرة (تركيبها أنابيب البولي ايثيلين) والمكبس معدنية من حقن حقنة الصغيرة وتوضع جانبا. باستخدام العقيمة القابل للتصرف 1 مل حقنة ومعقمة المتاح إبرة عيار 25، وملء حقن حقنة الصغير مع قيحة استنادا أجار من الحاويات فيحمام الماء باستخدام الإجراء ملء موضح في القسم 4.4. إعادة إرفاق المعدن حقن الدقيقة إبرة (تركيبها أنابيب البولي ايثيلين)، إدراج المكبس المعدني، وأجار تدفق عبر الأنابيب فقط حتى يتم تعبئة تماما أنابيب مع أجار.
- إزالة حيوان واحد من غرفة التخدير. وضع الحيوان في موقف ضعيف على حصيرة القابل للتصرف مع الرأس إلى اليمين وإلى اليسار الذيل كما هو مبين في الشكل 1C.
- باستخدام جهاز التنبيب (أي قنية المعدن مزودة أنابيب البولي ايثيلين)، أنبوبا الحيوان وإدراج قنية في الفص كبير من الرئة اليسرى (انظر الشكل 1D).
- إدراج نهاية خالية من قنية المعادن في فم الحيوان. تحويل قنية بحيث يتم الزاوية نهاية خالية صعودا ودفع برفق في القصبة الهوائية، وتجاوز بعناية الهياكل الحنجرة مع حركة التواء طفيفة. تأكيد الإدراج في القصبة الهوائية بدلا منالمريء عن طريق تحريك بلطف قنية قليلا إلى الأمام والخلف عدة مرات في حين تحسس حلقات القصبة الهوائية مع السبابة اليسرى كما هو مبين في الشكل 1C.
- عندما تصل قنية التشعب حيث تنقسم القصبة الهوائية إلى القصبة الهوائية اليمنى واليسرى، وجعل حركة التواء طفيف نحو الجانب الأيسر الحيوان لضمان أن يتم إدخال قنية في القصبات الهوائية نقاط. تقدم قنية المعدن حتى النهاية هو في منتصف الطريق إلى ثلاثة أرباع أسفل الرئة اليسرى، وذلك باستخدام علامة دليل وضعت سابقا للتأكد من أن عمق المناسبة تم التوصل إليها.
- مع قنية المعدن في مكان، دفع البولي ايثيلين أنابيب عدة ملم. استخدام علامة دليل وضعت سابقا على الأنابيب لضمان تقدم أنه حتى الآن ما يكفي فقط للخروج في نهاية قنية المعادن وليس ثقب في الرئة.
- مع كل حقنة عادية في المكان، استخدام الحقنة التي تعلق على غرس 100 ميكرولتر (بالنسبة للفئران) أو 20 ميكرولتر (بالنسبة للفئران) من suspe أجارnsion عمق الفص كبير من الرئة اليسرى (انظر الشكل 1D). سحب عدة ملم من أنابيب البولي ايثيلين، ومن ثم إزالة بلطف الجهاز التنبيب سليمة. تعيين مرة أخرى في أنبوب التخزين الزجاج، ونقل الحيوانات في قفص جديدة للتعافي.
- يستمر التخدير، تنبيب و تلقيح الحيوانات المتبقية.
- بين دفعات من الحيوانات تخدير، وإزالة الإبرة (تركيبها أنابيب) من الحقنة. بالنسبة للفئران، تجاهل الحقنة المستخدمة في حاوية الأدوات الحادة وملء الحقنة الجديدة، معقمة من اللقاح في حمام مائي. بالنسبة للفئران، إعادة ملء نفس الزجاج حقن الصغرى حقنة من اللقاح في حمام الماء باستخدام تقنية التعبئة وصفها في القسم 4.4.
- إذا يبدأ أجار لرشاقته في الجهاز التنبيب، طرد جميع ما تبقى من أجار من خلال الأنبوب. إزالة الإبرة من المحاقن (ترك الإبرة تركيبها أنابيب البولي ايثيلين). اتبع الإجراءات الموضحةفي القسم 4.4 لطرد الدافئة، ملحي معقم من خلال جهاز التنبيب، وتكرار ذلك ضروريا لواضحا تماما أي انسداد. إفراغ كافة المالحة من حقنة وإعداد اللقاح أجار مرة أخرى كما هو موضح في القسم 4.5.
- حساب اللقاح البكتيري النهائي للحيوان باستخدام كفو تحديد من تعليق المالحة (انظر القسم 2.3)، وعامل تخفيف النهائي للتعليق المالحة إلى أجار (على سبيل المثال بعشر أمثالها)، وحجم تغرس في الحيوانات (على سبيل المثال 100 ميكرولتر ل الفئران أو 20 ميكرولتر للفئران).
5. تقييم الحيوانات لاحتمال ميس التلقيح أو أحداث سلبية أخرى
- مراقبة بعناية جميع الحيوانات أثناء التنبيب، تقطير للأجار والتعافي من التخدير لتقييم لاحتمال سوء التلقيح. على الفور الموت ببطء (وفقا لمبادئ توجيهية IACUC المحلية) أي حيوان الذي ينزف، يسلك التنفس غير طبيعي (مثل صعوبة التنفس أو يلهث)، لا يتحركعادة حول القفص، أو لا يظهر مشرق العينين وصحية على التعافي من التخدير.
- إذا وقف عفوية من التنفس يحدث (عادة عندما لا يتم وضع اللقاح عميقة بما فيه الكفاية والكتل الهوائية)، تأكيد الموت عن طريق الملاحظة وتنفيذ طريقة الثانوي القتل الرحيم (مثل خلع عنق الرحم أو بضع الصدر).
- تقليل يتعرض لها طول الحيوانات الوقت لالأيزوفلورين، كما هو مطلوب تخدير فقط لعدة دقائق لتنفيذ الإجراء. إذا تم استخدام التخدير عن طريق الحقن، وضمان الحيوانات تحت الملاحظة حتى مستيقظا تماما. وضع الحيوانات، وخاصة الفئران، في بيئة تحسنت لاسترداد عند استخدام التخدير عن طريق الحقن.
- مراقبة الحيوانات على الأقل مرتين يوميا خلال فترة الدراسة لالعلامات التالية من أمراض الجهاز التنفسي: التنفس وضوحا، انتصاب الشعر، وانخفاض النشاط وانخفاض درجة حرارة الجسم. الموت ببطء على الفور (وفقا لمبادئ توجيهية IACUC المحلية) أي الحيوانات التي تحتضر، مسالامتحانات التنافسية الوطنية صعوبة في التنفس أو ضيق في التنفس، لديه انخفاضا ملحوظا في درجة حرارة الجسم على التعامل معها، غير قادر أو غير راغب في التحرك، أو لا يمكن الوصول إلى الطعام والماء.
6. العلاج إدارة الاختبار
- إعداد وإدارة العلاج الاختبار وفقا لتصميم دراسة المخطط لها. تبدأ إدارة العلاج في 1 أو 2 ساعة بعد الإصابة (أو تأخير العلاج مرة أخرى إذا كان المطلوب هو عبء البكتيرية الأساسي العالي). تفاصيل محددة لإعداد وإدارة العلاجات اختبار لا يمكن أن تعطى لأنه يعتمد على الهدف من الدراسة فضلا عن خصائص كل معاملة على حدة. (راجع الشكل 3 كمثال).
- جانبا واحد مجموعة من المصابين والحيوانات غير المعالجة لخدمة الضوابط الأساسية كما. تعداد عبء البكتيريا في الرئتين من هذه الحيوانات في العلاج مرة يبدأ لمجموعات أخرى، وفقا للإجراءات المبينة في المادة 7.
- ليحلل PK / PD، تقييمالملف الشخصى الدوائية للعلاج تدار (ق) في الدم و / أو أنسجة الحيوانات المصابة. إجراءات محددة للدراسات الدوائية هي خارج نطاق هذا المقال.
7. تعداد البكتيريا قابلة للحياة من الرئتين
- الموت ببطء مجموعة من الحيوانات غير المعالجة في وقت بدء العلاج للفئات الأخرى (المرجعية) وجميع الحيوانات المتبقية في نهاية فترة الدراسة (عادة 24، 48 أو 96 ساعة بعد العدوى) عن طريق استنشاق ارتفاع تدريجيا مستويات الكربون ثاني أكسيد داخل غرفة مغلقة أو طريقة بديلة على النحو الموصى به من قبل الإرشادات IACUC المحلية. تحقق من الموت عن طريق الملاحظة، وإجراء طريقة الثانوي القتل الرحيم (مثل خلع عنق الرحم أو بضع الصدر).
- وضع الحيوانات في موقف ضعيف على حصيرة المتاح نظيفة، والرطب جيدا الفراء على الصدر مع الكحول.
- باستخدام مقص العقيمة، وقطع طريق الجلد، الكامنة وراء طبقة العضلات والقفص الصدريموازية لعظمة القص لفتح تجويف الصدر. فهم بلطف الرئتين مع ملقط معقم وسحب لإزالة، وذلك باستخدام مقص لفصلها عن القصبة الهوائية إذا لزم الأمر. وضع الرئتين على شاش معقم لامتصاص الدم الزائد. إذا كما تم إزالة القلب، تشريح بعيدا وتجاهل.
- جعل القصاصات الصغيرة في الرئتين مع مقص معقم لفضح أقسام الداخلية واستخدام ملقط معقم لوضع الرئتين (بالإضافة إلى أي القطع التي تم مقصوص عن غير قصد إيقاف) في الجزء السفلي من حقيبة مختبر الخلاط. لفترة وجيزة لفة كائن مستديرة سميكة (مثل القلم أو علامة) على السطح الخارجي للحقيبة لهرس الأنسجة. ماصة 1 مل من محلول ملحي في الكيس، ووضع كيس في خلاط المختبر، وتشغيل الخلاط المختبر بسرعة عالية لمدة 2 دقيقة.
- نقل العينات homogenated من أكياس المخلوطة في أنابيب أو لوحات باستخدام ماصة. تمييع جناسة عشرة أضعاف بحلول aliquotting 1-جزء جناسة إلى 9 أجزاء المالحة (مثل 100 جناسة ميكرولتر إلى 900 ميكرولتر ساليه). تمييع تعليق الناجم عن ذلك عشرة أضعاف مرة أخرى بطريقة مماثلة. مواصلة تمييع كل تعليق الناتجة الجديد عامل عشرة أضعاف أخرى حتى تم إعداد لا يقل عن 6 التخفيفات المسلسل من جناسة الأصلي.
- قسامات ماصة ثلاث نسخ من 20 ميكرولتر من كل من كل التخفيفات على لوحات أجار الصويا trypticase تستكمل مع الدم الأغنام (س. الرئوية، K. الرئوية، الزائفة الزنجارية أو A. baumannii) أو على لوحات الشوكولاته أجار (المستدمية النزلية). احتضان ليلا 37 درجة مئوية مع أو بدون CO 2. (انظر الشكل 1E للحصول على مثال من لوحة الناتجة.)
- عدد المستعمرات في كل من مكررات ثلاثة في التخفيف الأول الذي يحتوي على عدد "معدود" (أي ليست كثيرة جدا المستعمرات إلى الاعتماد بشكل معقول). حساب متوسط قيمة مكررات الثلاثة. تحديد كفو في الرئتين عن طريق ضرب متوسط القيمة بنسبة 50٪ (لحساب لتصفيح 20 ميكرولتر من إجمالي 1 ملجناسة) والتخصيم في عامل التخفيف النهائي من جناسة الأصلي الذي احصي المستعمرات.
Representative Results
الأدوات المطلوبة، والتوجه للحيوان، وتظهر عمق التنبيب في الشكل 1. وتبين أيضا هو مثال ممثل المستعمرات المتزايد على صفيحة أجار بعد التخفيف المتسلسل والطلاء ثلاث نسخ من عينة جناسة الرئة. لوحظ حدوث زيادة في عبء البكتيرية عدة سجل 10 كفو فوق الضوابط الأساسية عادة في الرئتين المصابة لأكثر العزلات البكتيرية، حتى في 96 ساعة بعد الإصابة، والتباين بين الحيوانات منخفض (الشكل 2). بالنسبة لبعض المستدمية النزلية، قد يكون هناك نمو يذكر. ومع ذلك، ينبغي أن العدوى لا يبدأ عزم الذاتي في غضون فترة زمنية 48 أو 96 ساعة (الشكل 2B). هذا النموذج التهاب في الرئتين ويمكن أن تستخدم خلال تعظيم الاستفادة من سلسلة الكيميائية الرائدة لدعم البحث والإنقاذ، كما هو مبين في الشكل (3) للمركبات تمثيلية من سلسلتين مختلفة 16، 17. وهو يوفر متسقة، استنساخه التقىهود لتقييم PK / PD في الحيوانات مناعيا، وكان يستخدم لتحديد تلك المنطقة خال من المخدرات تحت منحنى الوقت التركيز على الحد الأدنى لتركيز مثبط (فوك / MIC) ترتبط فعالية من deformylase ببتيد رواية (PDF) المانع ضد S. الرئوية والمستدمية النزلية (الشكل 4). بالإضافة إلى ذلك، فوك / أهداف هيئة التصنيع العسكري للركود و1-السجل 10 تخفيض في كفو من تم تحديد الضوابط الأساسية في 11 س. الرئوية و 5 عزلات المستدمية النزلية (الجدول 1) 18. اقتران هذا النموذج العدوى مع نظام تسليم المخدرات لإعادة ملامح الدوائية البشرية في الفئران يخلق أداة قوية لتقييم الجرعات الإنسان قبل الدراسات السريرية. وتتلخص مثال على ذلك في الجدول 2، والذي يدل على أن صيغة موسعة النشر من أموكسيسيلين-clavulanate كانت أكثر فعالية من أنظمة الجرعات الحالية للكائنات مع elevaتيد MIC تقدر 19.
الشكل 1: غير الجراحية داخل القصبة الهوائية التنبيب. وتظهر أدوات تنبيب الفئران (A) والفأر (B). مرة واحدة تخدير، وينبغي وضع الحيوان كما هو مبين في C، مع رئيس للحق والذيل إلى اليسار إذا كان الأفراد الذين يؤدون هذه التقنية هو اليد اليمنى. وضع السبابة اليسار بلطف على الحلق للمساعدة في جس حلقات القصبة الهوائية لتأكيد وضع قنية الصحيح. يجب وضع اللقاح في عمق الرئة اليسرى، كما هو مبين في عرض بطني من رئة الفئران (D). يجب أن تظهر المستعمرات المتزايد على أجار بعد التخفيف المتسلسل والطلاء لعينة مماثلة لتلك التي تظهر في البريد. 1D الشكل، جميع الحقوق محفوظة © جيل سميث [الحيوانات المختبرية، المجلد 25 (1991)، G. سميث، Aطريقة غير جراحية بسيطة لتقطير داخل القصبة لإنشاء التهابات الجهاز التنفسي في الفئران، صفحات 46-49] 14. أعيد طبعها بإذن. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: أمثلة التمثيلية للبكتيريا النمو في الرئتين من الحيوانات المصابة. يعني ± البيانات الانحراف كفو القياسية من N = 5 حيوانات / مجموعة يظهر لعزلات مختلفة من S. الرئوية (A)، المستدمية النزلية (ب)، الزائفة الزنجارية (C)، K. الرئوية (D) وA. baumannii (E). شريط الأول من كل زوج (رمادي فاتح) هو bacte خط الأساسعبء ريال في 1 أو 2 ساعة بعد الإصابة، في حين أن شريط الثاني هو السيطرة النمو في نهاية الدراسة في 48 ساعة بعد الإصابة (رمادي غامق) أو 96 ساعة بعد العدوى (أسود). لم تطبق أساليب فرض رقابة البيانات؛ وبالتالي، وتشمل هذه النتائج البيانات من كل 5 حيوانات في كل مجموعة. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل (3): تقييم كفاءة مختلف سلسلة المواد الكيميائية أثناء الأمثل الرصاص. استخدمت عدوى في الرئة النماذج باستخدام التقنيات الموضحة لاستكشاف العلاقات هيكل النشاط كجزء من نوع اللاجرثومي برنامج IIA topoisomerase. تم تقييم مركبات واعدة 7 و 1 ضد الكينولون-عرضة (A) 16 أو مقاومة للالكينولون(ب) 17 عزلة من S. الرئوية، على التوالي. يمثل كل رمز كفو تحدد من رئات الفئران واحد مع خطوط تمثل مجموعة تعني والانحراف المعياري. وكان الحد الأدنى للالكمي (LLQ) 1.7 سجل 10 كفو / الرئتين. وتم وزن المركبات (56 أو 112 ملغ من محض الجزيء الأم الحرة)، وحلت في 9 مل من الماء المعقم، المخفف 3 مل إلى 3 مل من الماء (1: 1) وأنبوب تغذية عن طريق الفم من 1 مل / 125 غ الفئران تدار مرتين يوميا ( 6-7 ساعة بعيدا) لمدة 2 أيام، ابتداء من الساعة 1 ساعة بعد العدوى. وأخذت عينات من الضوابط Nontreated (NTC) في 1 ساعة بعد العدوى عن خط الأساس أو تعامل مع المياه المالحة وأخذ عينات في نهاية الدراسة (48 ساعة) لمراقبة النمو. الشكل 3A طبع من Bioorganic والكيمياء الطبية رسائل، المجلد 21، TJ مايلز وآخرون، رواية cyclohexyl-الاميدات كما مضادات الجراثيم قوية تستهدف نوع البكتيريا IIA topoisomerases، الصفحات 7483 - 7488، حقوق الطبع والنشر (2011) 16، بإذن من السيفير.الشكل 3B طبع من Bioorganic والكيمياء الطبية رسائل، المجلد 26، TJ مايلز وآخرون، ثلاثية الحلقات رواية (على سبيل المثال GSK945237) مثبطات كما قوية من نوع البكتيريا IIA topoisomerases، الصفحات 2464 - 2469، حقوق الطبع والنشر (2016) 17، بإذن من السيفير. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 4: PK / PD توصيف لالمانع PDF رواية. تم إنشاء نماذج ايماكس باستخدام جرعة تتراوح بيانات الفعالية في الفئران مناعيا إصابة في الرئة مع العزلات س. الرئوية (A) أو المستدمية النزلية (ب) لتحديد PK الأهداف / PD لمثبط PDF رواية 18. الدوائرتمثل عبئا البكتيرية متوسط 4-5 الفئران / المجموعة التي تلقت العلاج بجرعات متفاوتة من المجمع. أجريت تحليلات لربط فعالية مع خالية من المخدرات 24 ساعة AUC (الدوائر المفتوحة) أو AUC / هيئة التصنيع العسكري (الدوائر شغل). أعيد طبعها بإذن الجمعية الأمريكية حقوق التأليف والنشر © لعلم الأحياء الدقيقة، [الوسائل المضادة للجراثيم والعلاج الكيميائي، وحجم 60، 2016، الصفحات 180-189] 18. الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| ركود الدم | 1-تسجيل 10 الحد | ||||||
| كائن حي | هيئة التصنيع العسكري (ميكروغرام / مل) | R 2 ل فاي خطت (٪) | فوك | فوك / هيئة التصنيع العسكري | فوك | فوك / هيئة التصنيع العسكري | ماكس قتل (سجل 10 الحد) |
| S. الرئوية | |||||||
| 10127 | 0.25 | 99.9 | 2.0 | 8.1 | 3.6 | 14.4 | 2.8 |
| 1316009S | 0.25 | 96.1 | 6.5 | 26.0 | 15.1 | 60.3 | 1.8 |
| ATCC10813 | 0.5 | 100 | 8.4 | 16.9 | 22.2 | 44.5 | 1.2 |
| 1307007S | 1 95.8 | 16.1 | 16.1 | 20.1 | 20.1 | 2.7 | |
| ATCC6303 | 1 | 99.8 | 19.8 | 19.8 | 24.8 | 24.8 | 2.8 |
| 1629 | 2 | 100 | 15.8 | 7.9 | 21.2 | 10.6 | 2.4 |
| 298443 | 2 | 99.9 | 26.5 | 13.2 | 31.0 | 15.5 | 2.3 |
| 336808 | 2 | 86 | 8.2 | 4.2 | 19.0 | 9.5 | 2.6 |
| 338860 | 2 | 99.5 | 2.9 | 1.5 | 6.7 | 3.4 | 2.8 |
| & #160؛ 340449 | 2 | 94.6 | ثمانية | 4.0 | 14.9 | 7.4 | 2.1 |
| L11259 | 2 | 100 | 7.1 | 3.5 | تسعة | 4.5 | 2.0 |
| يعني ± SD | NA ل | NA | 11.0 ± 7.5 | 11.0 ± 7.9 | 17.0 ± 8.2 | 19.5 ± 17.8 | 2.3 ± 0.5 |
| متوسط | NA | NA | 8.2 | 8.1 | 19.0 | 14.4 | 2.4 |
| المستدمية النزلية | |||||||
| 1998-100-126H | 1 | 99.7 | 7.3 | 7.3 | 13.4 | 13.4 | 2.9 |
| 503-008H | 1 | 99.8 | 7.1 | 7.1 | 13.9 | 13.9 | 2.7 |
| 08003H | 2 | 99.9 | 14.5 | 7.2 | 16.7 | 8.3 | 2.7 |
| H128 | 2 | 96.6 | 15.3 | 7.6 | 26.0 | 13.0 | 2.7 |
| 19001H | 4 | 91.9 | 14.8 | 3.7 | 37.3 | 9.3 | 3.0 |
| يعني ± SD | NA | NA | 11.8 ± 4.2 | 6.6 ± 1.6 | 21.5 ± 10.2 | 11.6 ± 2.6 | 2.8 ± 0.1 |
| متوسط | NA | NA | 14.5 | 7.2 | 16.7 | 13.0 | 2.7 |
| وNA، لا ينطبق. | |||||||
الجدول 1: PK الأهداف / PD لالمانع PDF رواية ضد S. الرئوية والمستدمية النزلية العزلات. الجامعة الأمريكية بالقاهرة خالية من المخدرات وAUC / أهداف هيئة التصنيع العسكري للركود و1-تسجيل 10 تخفيض في كفو من خط الأساس تم تحديد مدة 11 س. الرئوية و 5 المستدمية النزلية في الفئران المصابة مناعيا في الرئة وتعامل مع مركب 18. داتوكان يستخدم للمساعدة في جرعات الإنسان مختارة للتنمية السريرية. وقد تم تكييف هذا الجدول وطبع مع إذن، والجمعية الأمريكية حقوق التأليف والنشر © لعلم الأحياء الدقيقة، [الوسائل المضادة للجراثيم والعلاج الكيميائي، وحجم 60، 2016، الصفحات 180-189] 18.
| مجموعة العلاج ل | يعني تسجيل 10 س. الرئوية (كفو / الرئة) ب ± SD لسلالة (AMX / CA MIC): | |||||||
| 05010S (2 ميكروغرام / مل) | 16001S ج (4 ميكروغرام / مل) | 16001S (4 ميكروغرام / مل) | 30005S (4 ميكروغرام / مل) | 20009S (4 ميكروغرام / مل) | 05003S (8 ميكروغرام / مل) | 404053 (8 ميكروغرام / مل) | 47003S (8 ميكروغرام / مل) | |
| مراقبة | 7.3 ± 0.4 | 7.0 ± 0.8 | 5.7 ± 1.2 | 7.1 ± 0.7 | 7.1 ± 0.4 | 6.4 ± 0.6 | 6.8 ± 0.4 | 6.0 ± 0.3 |
| AMX / CA | ||||||||
| 2000/125 ملغ محاولة (نسبة 16: 1) | ≤ 1.7 ** | 2.8 ± 1.2 ** | 2.2 ± 0.8 ** | 2.3 ± 0.9 ** | 2.5 ± 0.9 ** | 2.0 ± 0.9 ** | 3.8 ± 1.4 ** | 1.8 ± 0.2 ** |
| 1000/125 ملغ ثلاث مرات يوميا (نسبة 8: 1) | NT | NT | 2.8 ± 0.5 ** | 2.7 ± 1.3 ** | 3.3 ± 0.9 ** | 4.9 ± 0.5 ** | 6.6 ± 1.3 | 4.7 ± 0.7 ** |
| NT | NT | 3.0 ± 1.3 * | 2.1 ± 0.7 ** | 3.2 ± 0.4 ** | 5.2 ± 0.9 * | 6.4 ± 0.6 | 4.9 ± 0.4 ** | |
| 875/125 ملغ محاولة (نسبة 7: 1) | NT | NT | 4.5 ± 1.2 * | 5.6 ± 1.3 * | 5.2 ± 0.7 ** | 6.3 ± 0.7 | 6.4 ± 0.7 | 5.5 ± 0.4 |
| 500/125 الدار ملغ (نسبة 4: 1) | 3.1 ± 1.3 ** | 4.5 ± 0.9 ** | NT | NT | NT | NT | NT | NT |
| أزيثروميسين، 1000/500 ملغ التطوير التنظيمي | NT | NT | NT | 5.8 ± 2.0 | 7.1 ± 0.9 | 3.1 ± 1.0 ** | 6.6 ± 0.4 | 6.07؛ 0.6 |
| الليفوفلوكساسين، 500 ملغ التطوير التنظيمي | NT | NT | 4.2 ± 0.8 * | 5.7 ± 0.8 * | 4.9 ± 0.8 ** | 3.0 ± 1.3 ** | 3.5 ± 0.2 ** | 3.9 ± 0.8 ** |
| مجموعة العلاج د | يعني تسجيل 10 المستدمية النزلية (كفو / الرئة) ± SD لسلالة: | |||||||
| H128 (β-اكتاماز إيجابي) | تشيسترفيلد (β-اكتاماز سلبية، ومقاومة الأمبيسلين) | |||||||
| مراقبة | 6.4 ± 0.6 | 6.7 ± 0.6 | ||||||
| AMX / CA | ||||||||
| 2000/125 ملغ محاولة (نسبة 16: 1) | 2.0 ± 0.7 ** | 3.1 ± 0.9 ** | ||||||
| 1000/125 ملغ ثلاث مرات يوميا (نسبة 8: 1) | 2.1 ± 1.0 ** | 3.6 ± 1.1 ** | ||||||
| 875/125 الدار ملغ (نسبة 7: 1) | 2.8 ± 1.3 ** | 3.8 ± 1.3 ** | ||||||
| 875/125 ملغ محاولة (نسبة 7: 1) | 2.0 ± 0.8 ** | 5.1 ± 1.1 ** | ||||||
| أزيثروميسين، 1000/500 ملغ التطوير التنظيمي | 3.2 ± 1.7 * | 5.8 ± 1.1 | ||||||
| الليفوفلوكساسين، 500 ملغ التطوير التنظيمي | ≤ 1.7 ** | ≤ 1.7 ** | ||||||
| وAMX / CA، أموكسيسيلين-clavulanate. محاولة، مرتين في اليوم؛ الدار.، ثلاث مرات باليوم؛ التطوير التنظيمي، مرة واحدة في اليوم. | ||||||||
| ب كان الحد من الكشف <1.7. *، تختلف اختلافا كبيرا من التحكم (P ≤ 0.05)؛ **، تختلف اختلافا كبيرا من التحكم (P ≤ 0.01)؛ NT، لم يتم اختباره. | ||||||||
| تم اختبار ج سلالة 16001S في تجربتين منفصلتين. | ||||||||
| د-أموكسيسيلين clavulanate 500/125 ملغ (4: 1) ثلاث مرات لم يختبر يوميا ضد سلالات المستدمية النزلية. | ||||||||
الجدول 2: فعالية لمحات التعرض صوغه البلازما البشرية لمختلف أموكسيسيلين / Clavulanate الجرعات نظم. وأظهرت البيانات التي تم إنشاؤها في الفئران مناعيا إصابة في الرئة مع العزلات س. الرئوية أو المستدمية النزلية استخدام هذا النموذج أن صيغة محسنة من أموكسيسيلين-clavulanate (2كان 000/125 ملغ مرتين يوميا) أكثر فعالية من الجرعات القياسية ضد العزلات مع مرتفعة في قابلية المختبر 19. وقد تم تكييف هذا الجدول وطبع مع إذن، والجمعية الأمريكية حقوق التأليف والنشر © لعلم الأحياء الدقيقة، [الوسائل المضادة للجراثيم والعلاج الكيميائي، وحجم 49، 2005، الصفحات 908-915] 19.
Discussion
لتحقيق النجاح الأمثل في استنساخ هذا النموذج العدوى، وينبغي النظر في الاقتراحات الإضافية التالية. الفوعة من العزلات جديدة يمكن أن يتعزز من خلال الركض 2-3 مرات في الجسم الحي قبل استخدامها في الدراسة. ينبغي أن يكون دائما على استعداد الأسهم البكتيرية المجمدة من مصدر -derived الابتدائي في الجسم الحي مع عدد قليل من الممرات ممكن من الأصل، وإعادة تجميد أو تثبيط إعادة استخدام الأوراق المالية مذاب. يمكن استخدام العزلات السريرية الأخيرة تعافى من المرضى الذين يعانون من الالتهاب الرئوي، و / أو إعداد الثقافات في مرحلة النمو سجل أيضا تساعد على تحسين وضع العدوى. والتخفيف خمسة أمثالها في آغار (على سبيل المثال بإضافة 2 مل المالحة تعليق إلى 8 مل أجار) يمكن استخدامها بدلا من عشرة أضعاف لزيادة اللقاح البكتيري، وحجم اللقاح يمكن تعديلها بناء على حجم الحيوان (على سبيل المثال 200 ميكرولتر / الحيوان عادة تلقيح إلى 250 الفئران ز). قبل إضافة تعليق البكتيرية المالحة فيأجار (أي في الخطوة 2.3)، وكثافة البكتيرية يمكن التنبؤ بها أو تقدر بالمعاينة البصرية، ومعايير ماكفارلاند أو قياسات الكثافة الضوئية. ومن المفيد أن تصبح مألوفة مع خصائص النمو في المختبر لكل عزل قبل إجراء التجارب في الجسم الحي. الاتساق في النمو ومعالجة تمكن من تقدير أكثر دقة للكثافة البكتيرية لأي عزل معين. الطرق الميكروبيولوجية القياسية التي تختلف عن تلك التي وصفها، مثل وسائل الإعلام والمجانسة الأنسجة بديل، يمكن أن تستخدم بالشكل المناسب لإعداد قائح وتعداد البكتيريا من الأنسجة المصابة.
يوصى بدرجة كبيرة لإعداد أو إذابة أجار اليوم قبل التجربة وتخزينها بين عشية وضحاها في حمام مائي مستقل لتعيين 50 درجة مئوية. وهذا تبسيط العملية ومساعدة حارس ضد أجار يجري حار جدا في ذلك الوقت من العدوى. وعند درجة حرارة 41-42 درجة مئوية تحقق توازن جيد بين maintaiنينغ أجار في حالة سائلة دون أن يكون حار جدا للبقاء البكتيريا على المدى القصير. كبديل محتمل لالآجار المغذي، وقد استخدم أجار النبيل بنجاح في بعض التجارب. أنبوب واحد من اللقاح أجار وعادة ما يكفي للتجربة برمتها (وأوصى)، ولكن أنابيب متعددة يمكن أن تكون مستعدة لإصابة عدد كبير من الحيوانات (على سبيل المثال أكثر من 60)، أو عندما تتم عملية نقل العدوى لفترة أطول من 30 - 45 دقيقة إذا ويلزم عدة أنابيب اللقاح، إضافة تعليق البكتيرية المالحة إلى كل أنبوب من أجار كما هو مطلوب. وهذا يقلل من خطر أن بقاء البكتيريا و / أو اللياقة البدنية وسوف تتأثر التعرض الطويل لدرجة حرارة مرتفعة قبل التلقيح. وتجدر الإشارة إلى أن استخدام أنابيب اللقاح متعددة قد تتطلب أيضا إجراءات إضافية التوزيع العشوائي للحيوانات. كلما أمكن ذلك، ويصيب جميع الحيوانات من إعداد اللقاح نفسه. فمن المستحسن لتكييف حجم التجارب على المستوى الحالي من الكفاءة مع الشركة المصرية للاتصالاتchnique.
باحث المهرة يمكن التنبيب وتطعيم حيوان في أقل من 30 ثانية وتطعيم ما يصل الى 5-6 الحيوانات في الدفعة (أي مع حقنة واحدة كاملة من اللقاح أجار). بالنسبة لأولئك تعلم هذه التقنية، وسرعة لا تقل أهمية عن أجار سوف تبدأ في ترسيخ؛ ومع ذلك، وضع دقيق للاللقاح هو أكثر أهمية. تبدأ مع 1 أو 2 الحيوانات لكل دفعة، وزيادة كما تصبح هذه التقنية أكثر دراية. ولا تزال هذه الحيوانات على التنفس أثناء التنبيب. وبالتالي، فإن نافذة وقت للتلقيح يعتمد على مدى سرعة تعافي الحيوان من الأيزوفلورين، الذي يجب أن يكون حوالي 2-3 دقائق. الحيوانات التي توقظ خلال عملية يمكن إعادة تخدير وحاول مرة ثانية، ولكن لا ينصح أن تفعل ذلك مرارا وتكرارا. ومن المتوقع التلقيح الناجح في المحاولة الأولى في ما يقرب من 100٪ من الحيوانات مرة واحدة ويتم تحقيق الكفاءة. لاحظ أنه من الأسهل لتعلم التقنية باستخدام الفئران أولا. الفئران هي أكثر حساسية وأقل أيضاليرة سورية هي أكثر عرضة للانسداد مع أجار طدت إن لم يكن التلاعب بسرعة. المحاقن ما قبل ارتفاع درجات الحرارة، وأنابيب والمالحة وكذلك الحفاظ على جهاز التنبيب على سطح الدافئ (وليس الساخن)، مثل وسادة التدفئة على إعداد منخفض، يمكن أن تساعد في منع تصلب آغار. عندما تعلم هذه التقنية، فإنه من المفيد أيضا لممارسة التنسيب المناسب من اللقاح باستخدام صبغة داكنة اللون (مثل تتركز أزرق الميثيلين) بدلا من تعليق البكتيرية في أجار. تنفيذ الإجراء كما هو موضح، ولكن الموت ببطء الحيوان مباشرة بعد التلقيح للصباغة (عدم السماح للحيوان لاسترداد بين التخدير والقتل الرحيم). تشريح لتحديد حيث تم وضع الصبغة، وضبط تقنية وفقا لذلك.
نقطة النهاية الأولية في هذا النموذج هو كفو من الرئتين المصابة. البقاء على قيد الحياة ليست مؤشرا جيدا من عبء البكتيرية وليس نقطة نهاية الموصى بها. لدراسات الفعالية، وN المقترح هو 5-6 الحيوانات في كل مجموعة حيث أن هذا هو predicteد للكشف عن ≥1 سجل 10 الاختلافات بين الجماعات كفو مع السلطة لا يقل عن 90٪. الحيوانات يمكن أن يصاب في مجموعات بحيث زملائه في قفص البقاء معا، أو يمكن أن يتبع عملية التوزيع العشوائي الحقيقية. لاحظ أنه إذا تم تعيين مجموعة من القفص، يجب أن تكون مصابة المجموعات في تسلسل عشوائي مع الضوابط النمو في نهاية الدراسة إصابة آخر (للتأكد من بقاء البكتيرية / واللياقة البدنية لا تتأثر طول الوقت تتعرض لدرجة حرارة مرتفعة في حمام مائي). يجب أن تكون هناك أساليب فرض رقابة البيانات اللازمة، وينصح أحدا باستثناء الإزالة الفورية من أي حيوان الذي كان من الواضح أن سوء تلقيح في بداية الدراسة (قبل الشروع في أي علاج). الحيوانات التي يصرح باستخدامها قبل نهاية الدراسة ينبغي أخذ عينات والنتائج المدرجة في مجموعة البيانات إلا إذا تم تحديد سبب وجيه لاستبعاد بأثر رجعي (أي حدث لا علاقة للعدوى أو العلاج). المرحل المخدرات قد قسم الشؤون الماليةإلخ بعض العينات واعتبار مهم في جميع النماذج العدوى في الجسم الحي. إذا تم إعطاء مركب في كثير من الأحيان، على مقربة من وقت القتل الرحيم أو لديه طويلة نصف الحياة، ويمكن أن تكون موجودة في جناسة الأنسجة بتركيز عال بما يكفي لمواصلة قتل البكتيريا خارج الجسم خلال عملية التعداد الجرثومي (تخفيف وتصفيح عينات أو على لوحات أجار خلال الحضانة بين عشية وضحاها). لمنع هذا، والفحم المنشط و / أو مادة مضافة الذي يحط من قدر جزيء نشط من دون إيذاء الخلايا البكتيرية ويمكن أن يضاف إلى العينة السابقة إلى التجانس. وتشمل الأساليب الأخرى الطرد المركزي العينات لإزالة الغالبية العظمى من مركب نشط (الذي يجب أن يبقى في طاف) وتوظيف التخفيف مختلفة والطلاء خطط لتخفيف بما فيه الكفاية مركب نشط إلى تركيز غير المثبطة.
كما يتضح من الأمثلة هو مبين في الشكل 2، وهذا النموذج بنجاح طnduces التهابات الرئة في القوارض مع مجموعة واسعة من الكائنات الحية بما فيها تلك التي لا تنمو بشكل جيد في نماذج أخرى (مثل المستدمية النزلية). هذه الالتهابات هي متسقة وقابلة للتكرار، والحد من احتمال أن سوف تحتاج إلى أن تتكرر بسبب فشل نموذج و / أو ضعف الأداء مع عزل نظرا التجارب. على الرغم من أن الحيوانات مناعيا، أنهم غير قادرين على حل سريع العدوى، على كل حال. وهذا يسمح لزيادة المرونة في طول الدراسة، والحفاظ على العديد من العزلات العدوى قابلة للحياة من خلال 96 ساعة على الأقل من دون الحاجة إلى تكرار الحقن للحفاظ على العدلات. وقد لوحظ أن المنافع المحتملة لدراسة فعالية مضادة للجراثيم في الحيوانات مناعيا سابقا 20 و 21، وليس هناك دليل على أن لبعض المركبات الكيميائية (مثل oxazolidinones)، وبيانات من القوارض غير قلة العدلات قد تتنبأ بدقة أكثر الأهداف تعرض الإنسان مقارنة مع أولئك الذين أصبحوا قلة العدلات 5. الأداة المساعدة متعددة الأغراض رانه أظهر نموذج في أرقام 3 و 4 و الجدولين 1 و 2. وهذه الدراسات هي جزء من مجموعة كبيرة من البيانات المنشورة وغير المنشورة التي تم إنشاؤها باستخدام هذا النموذج لدعم جهود الرصاص الأمثل 16، 17، 22-24، للمقارنة وتأكيد الجرعات الإنسان المقترحة نظم 19، 25-29 ولتوصيف PK / PD 18، 30-32. بينما هذا النموذج هو في البداية أكثر تعقيدا لإجراء مقارنة مع طريقة استنشاق الأنف، هناك العديد من الفوائد كما هو موضح أعلاه. مع الممارسة والاستخدام الروتيني، وينبغي أن تصبح تقنيات واضحة للأداء.
وتجدر الإشارة في بعض الدراسات إلى أن عبء البكتيرية في الأساس كان أقل من ذلك استهداف عادة في النماذج عدوى الرئة الأخرى. ومن المقرر في جزء كبير منه إلى تخفيف المطلوبة في أجار وحجم التحدي صغير، لا سيما في الفئران هذا. ومع ذلك، ينبغي أن يلاحظ أيضاالذي ينظر إلى نمو البكتيريا في جميع الحالات حتى عندما كان عبء الأولي منخفضة نسبيا. الهدف الأساسي الحمل البكتيري هو 6-6،5 سجل 10 كفو / الرئتين (6،8-7،3 سجل 10 كفو / ز من الأنسجة في الفئران على أساس متوسط الأوزان الرئة) والتي تتطابق مع الكثافة المقدرة في المرضى من البشر مع التهاب رئوي حاد 33. والعبء الأساسي العالي يمكن أن يتحقق عن طريق زيادة تركيز اللقاح البكتيري أو عن طريق تأخير بدء إدارة مجمع للسماح نمو البكتيريا إضافية؛ ومع ذلك، وزيادة حمولة التحدي الكثير يمكن أن يؤدي إلى مرض حاد بشكل غير طبيعي والحاد (أي الموت في أقل من 24 ساعة) التي هي الحرارية لجميع العلاجات المضادة للبكتيريا بغض النظر عن قابلية. على الرغم من أن يتم وضع اللقاح في البداية تفضيلي في الرئة اليسرى للحيوان، تنتشر العدوى عادة في جميع أنحاء كلا الرئتين. المرض تدريجيا الرئة، ونشر البكتيريا إلى الأجهزة الأخرى، والاعتلال في نهاية المطاف هو في كثير من الأحيان observإد مع س. الرئوية، K. الرئوية والزائفة الزنجارية. من الفائدة، والالتهابات مع النزلية H. وA. baumannii وعادة ما تكون أكثر احتباسا، نادرا ما تؤدي إلى الموت في قائح البكتيريا المحدد.
وترتبط النتائج فعالية تم الحصول عليها من هذا النموذج بشكل جيد مع في المختبر لمحات قابلية وكذلك الأهداف / PD PK محددة. لوحظ انخفاض في عبء البكتيرية بشكل روتيني للعزلة تعتبر عرضة للوكيل التي يجري اختبارها، في حين أن المعرض يعتبر مقاومة أي تغيير أو نمو البكتيريا فوق خط الأساس 16، 17، 19، 24-29. وقد أظهرت الدراسات على الفئران تقييم اثنين الكينولون وماكروليد استخدام هذا النموذج 32 أن الهدف PK / PD المطلوبة ل1-تسجيل 10 تخفيض في S. الرئوية بالمقارنة مع خط الأساس ترتبط مع الهدف المحدد في الفئران عن قلة العدلات، والأهم من ذلك، مع أهداف السريرية لpneum البكتيرية المكتسبة من المجتمعonia 6، 7، 34، 35. Gepotidacin، آلية المضادات الحيوية الجديدة، تم اختبار ضد متعددة S. الرئوية ويتطلب الهدف PK / PD مماثل ل1-تسجيل انخفاض بنسبة 10 في هذا الرئة نموذج إصابة 31 كما هو مطلوب ل1-تسجيل انخفاض بنسبة 10 في نموذج الفخذ العدلات 36 عندما اتخذ اختراق الرئة في الاعتبار (البيانات في الملف). وبالمثل، فإن PK الأهداف / PD تحدد في الفئران لGSK2251052 ضد الزائفة الزنجارية ثابتة للركود، 1- و2-تسجيل 10 تخفيضات في كفو بين هذا النموذج الرئة (30) والعدلات الفخذ نموذج العدوى عند النظر اختراق الرئة 37، 38 . العلاقة مع نموذج التهاب في الرئتين العدلات باستخدام التلقيح داخل الأنف والفقراء؛ ومع ذلك، لم GSK2251052 لا تنتج أكثر من استجابة ثابتة في هذه الدراسة 38. وقد يعزى ذلك إلى اللقاح البكتيري العالي، الذي كان 8 سجل 10 خلية / الماوس بالمقارنة مع 6 سجل
هناك العديد من القيود من هذا النموذج الالتهاب الرئوي مناعيا. أولا، أنها ليست مناسبة تماما لتقييم ظهور مقاومة عفوية لأن اللقاح البكتيري العالية المطلوبة عادة لمثل هذه النتائج دراسات في وجود عدوى حادة جدا. وبعد محاولات لتحقيق البكتيرية أعباء من 7 أو 8 سجل 10 كفو في الأساس، وقد لوحظ الاعتلال السريع (أي الحيوانات أصبحت تحتضر في أقل من 24 ساعة) على الرغم من الغسل الكامل للقائح لإزالة السموم الموجودة مسبقا (البيانات في الملف). هذاقد يكون من الممكن التغلب على هذه المشكلة عن طريق استخدام القوارض أكبر. الفئران والجرذان وخصوصا أثقل (> 250 غرام)، ويبدو أن تتسامح مع أفضل العالي قائح بالمقارنة مع الفئران وقد تكون مناسبة لهذه الأنواع من الدراسات. والقيد الثاني هو أن استخدام أجار بمثابة العدوى محسن قد يحول دون استخدام نموذج لتقييم معين المضيف: التفاعلات الممرض. ويعتقد أن آغار يوفر نقطة اتصال محمية حتى يتم تأسيس العدوى تماما داخل الرئة. فمن الممكن لتقديم اللقاح في المياه المالحة بدلا من أجار للمساعدة في التغلب على هذه المسألة؛ ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أن هذا لن يؤدي إلا إلى الإصابة مع بعض العزلات. ثالثا، هناك منحنى التعلم حاد المطلوبة لإتقان هذه التقنية. هذا الإجراء يمكن أن يكون دقيقا، لا سيما في الفئران. فمن السهل أن تضع عن طريق الخطأ قنية المعدن في المريء، واستخدام القوة المفرطة يمكن أن تؤدي إلى ثقب إما المريء أو القصبة الهوائية. وضع دقيق للاللقاح أيضامطلوب أو الحيوانات إما لا يتعافى أو لا تكون مصابة بشكل كاف. ومع ذلك، مع الصبر والمثابرة، يمكن للمرء أن يصبح كفاءة عالية وأداء هذه التقنية بسرعة، سلاسة ودقة.
عن طريق إزالة شرط العدلات، وزيادة متانة والتكاثر، مما يسمح للمحققين لدراسة المزيد من مسببات الأمراض والمعزولة، وتحسين مرونة التصميم التجريبي وتوفير العدوى تحديا لتوصيف الدوائية لعلاج الالتهاب الرئوي، وهذا النموذج التهاب في الرئتين مناعيا يضيف قيمة كبيرة لاكتشاف المضادات الحيوية المجتمع. وزيادة استخدام هذا النموذج من قبل المحققين إضافية تساعد على توفير القياس اللازمة لذلك للحصول على قبول أكثر انتشارا ومواصلة تقديم معلومات داعمة لتفسير مناسب.
Disclosures
الكتاب والعاملين في شركة جلاكسو سميث كلاين للادوية وتملك أسهم من الأسهم دفع جميع داخل الشركة.
Acknowledgments
يرغب JH أن نعترف وأشكر معلمه، صديق والمدير السابق فاليري بيري لتعليم لنا لأول مرة هذا النموذج. وغاري Woodnutt، الذي علمنا أسس وألهم التزامنا مجال مضاد للجراثيم PK / PD. ترغب جميع المؤلفين أن أشكر ديفيد باين على دعمه وتقديره للعلم لدينا. ونود أن نعترف لدينا سابقا في الجسم الحي الزملاء علم الأحياء المجهرية الذين ساهموا في الجسم من البيانات التي تم إنشاؤها باستخدام هذه الطرق، وخاصة بيت DeMarsh، روب ستروب، روني صفحة ونيريسا سيمون. وأخيرا، نتوجه بالشكر لدينا في المختبر الزملاء علم الأحياء المجهرية للحصول على المساعدة، وخاصة لتوفير كافة البلدان المتوسطة الدخل نطلب (لين مكلوسكي، جوش الغربية وشارون مين)؛ ولفريق العمل لدينا علم الأحياء الدقيقة السريرية الذي يقدم مشورة الخبراء والدعم (ليندا ميلر، نيكول Scangarella-عمان وديبورا بتلر).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| TSA II Trypticase Soy Agar with 5% Sheep Blood | Becton Dickinson and Company | 4321261 | |
| Chocolate II Agar | Becton Dickinson and Company | 4321267 | |
| BBL Brain Heart Infusion Broth Modified | Becton Dickinson and Company | 299070 | |
| BBL Trypticase Soy Broth with 20% Glycerol | Becton Dickinson and Company | 297808 | storage media for frozen stock |
| Inoculating loop | Nunc | 251586 | |
| 0.9% Sodium Chloride, USP | Baxter Healthcare Corporation | NDC 0338-0048-04 | |
| Difco Nutrient Agar | Becton Dickinson and Company | 213000 | |
| 30 mL free standing centrifuge tube with cap | EverGreen Scientific | 222-3530-G80 | |
| 50 mL Polypropylene Conical Tube 30 x 115 mm | Falcon, a Corning Brand | 352070 | |
| 14 mL Polypropylene Round-Bottom Tube 17 x 100 mm | Falcon, a Corning Brand | 352059 | |
| Guide Tool | Intek Services Ltd | GT01 | custom-made metal cannula for rats |
| 90' Portex tubing | SAI | POR-080-100 | plastic cannula for rats |
| 1 mL TB syringe slip tip | Becton Dickinson and Company | 309659 | |
| PrecisionGlide Needle 25 G x 5/8 | Becton Dickinson and Company | 305122 | |
| Animal feeding needle - straight 20 x 3" 2-1/4 | Popper and Sons, Inc | 7903 | used to create metal cannula for mice |
| Intramedic polyethylene tubing | Clay Adams brand - Becton Dickinson and Company | 427401 | plastic cannula for mouse |
| 75 TN 5.0 µL syringe 26s/2"/2 | Hamilton | 87930 | HPLC glass injection syringe |
| Pyrex tube, culture 25x150 screwcap with rubber liner | Corning | 9825-25 | to autoclave/store metal cannulae |
| 70% isopropyl alcohol | Vi-Jon (Swan) | NDC 0869-0810-43 | |
| Isoflurane, USP | Piramal Healthcare | NDC 66794-013-10 | |
| Stomacher | Seward | Stomacher80 | |
| Stomacher 80 classic bags | Seward | BA6040 | |
| Assay plate, 96 well, round bottom | Costar, Corning Inc | 3795 | optional, for serial diluting |
| Blood Omni Plates | Hardy | #A127 | optional, rectangular blood plates |
References
- Eagle, H., Fleischman, R., Levy, M. Continuous' vs. 'discontinuous' therapy with penicillin: the effect of the interval between injections on therapeutic efficacy. N Engl J Med. 248 (12), 481-488 (1953).
- Eagle, H., Fleischman, R., Musselman, A. D. The bactericidal action of penicillin in vivo: the participation of the host, and the slow recovery of the surviving organisms. Ann Intern Med. 33 (3), 544-571 (1950).
- Vogelman, B., et al. Correlation of antimicrobial pharmacokinetic parameters with therapeutic efficacy in an animal model. J Infect Dis. 158 (4), 831-847 (1988).
- Craig, W. A. Pharmacokinetic/pharmacodynamic parameters: rationale for antibacterial dosing of mice and men. Clin Infect Dis. 26 (1), 1-12 (1998).
- Ambrose, P. G., et al. Pharmacokinetics-pharmacodynamics of antimicrobial therapy: it's not just for mice anymore. Clin Infect Dis. 44 (1), 79-86 (2007).
- Ambrose, P. G., Bhavnani, S. M., Owens, R. C. Clinical pharmacodynamics of quinolones. Infect Dis Clin North Am. 17 (3), 529-543 (2003).
- Andes, D. Pharmacokinetic and pharmacodynamic properties of antimicrobials in the therapy of respiratory tract infections. Curr Opin Inf Dis. 14 (2), 165-172 (2001).
- Mizgerd, J. P., Skerrett, S. J. Animal models of human pneumonia. Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. 294 (3), L387-L398 (2008).
- Antibiotics in laboratory medicine, 5th edition. Chapter 15: Evaluation of antimicrobials in experimental animal infections. Lorian, V. , Lippincott Williams & Wilkins. Philadelphia. (2005).
- McConnell, M. J., Actis, L., Pachón, J. Acinetobacter baumannii: human infections, factors contributing to pathogenesis and animal models. FEMS Microbiol Rev. 37 (2), 130-155 (2013).
- Nuermberger, E. Murine models of pneumococcal pneumonia and their applicability to the study of tissue-directed antimicrobials. Pharmacotherapy. 25 (12 Pt 2), 134S-139S (2005).
- Mehrad, B., Standiford, T. J. Use of animal models in the study of inflammatory mediators of pneumonia. ILAR J. 40 (4), 167-174 (1999).
- De Simone, M., et al. Host genetic background influences the response to the opportunistic Pseudomonas aeruginosa infection altering cell-mediated immunity and bacterial replication. PLoS ONE. 9 (9), (2014).
- Smith, G. A simple non-surgical method of intrabronchial instillation for the establishment of respiratory infections in the rat. Lab Anim. 25 (1), 46-49 (1991).
- Berry, V., Ferreira-Cornwell, M. C., Singley, C., Woodnutt, G. Development of experimental murine infections caused by H. influenzae and H. parainfluenzae. Clin Microbiol Infect. 7 (S1), 322 (2001).
- Miles, T. J., et al. Novel cyclohexyl-amides as potent antibacterials targeting bacterial type IIA topoisomerases. Bioorg Med Chem Lett. 21 (24), 7483-7488 (2011).
- Miles, T. J., et al. Novel tricyclics (e.g. GSK945237) as potent inhibitors of bacterial type IIA topoisomerases. Bioorg Med Chem Lett. 26 (10), 2464-2469 (2016).
- Hoover, J., et al. Pharmacokinetics/pharmacodynamics of peptide deformylase inhibitor GSK1322322 against Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, and Staphylococcus aureus in rodent models of infection. Antimicrob Agents Chemother. 60 (1), 180-189 (2016).
- Berry, V., Hoover, J., Singley, C., Woodnutt, G. Comparative bacteriological efficacy of pharmacokinetically enhanced amoxicillin-clavulanate against Streptococcus pneumoniae with elevated amoxicillin MICs and Haemophilus influenzae. Antimicrob Agents Chemother. 49 (3), 908-915 (2005).
- Czock, D., Markert, C., Hartman, B., Keller, F. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of antimicrobial drugs. Expert Opin Drug Metab Toxicol. 5 (5), 475-487 (2009).
- Drusano, G. L., Fregeau, C., Liu, W., Brown, D. L., Louie, A. Impact of burden on granulocyte clearance of bacteria in a mouse thigh infection model. Antimicrob Agents Chemother. 54 (10), 4368-4372 (2010).
- Miles, T. J., et al. Novel hydroxyl tricyclics (e.g. GSK966587) as potent inhibitors of bacterial type IIA topoisomerases. Bioorg Med Chem Lett. 23 (19), 5437-5441 (2013).
- Hunt, E. Pleuromutilin antibiotics. Drugs Future. 25 (11), 1163-1168 (2000).
- Jin, Q., et al. Novel LpxC inhibitors with broad-spectrum gram-negative activity. Proceedings of the 44th National Organic Chemistry Symposium.. College Park, MD, , Abstract T-31 (2015).
- Singley, C., Page, R., Hoover, J., Elefante, P., DeMarsh, P. Efficacy of a LRS inhibitor GSK2251052 against Enterobacteriaceae isolates using a computer-controlled infusion system to recreate human PK profiles in rats. Clin Microbiol Infect. 17 (S4), S429-S430 (2011).
- Berry, V., et al. Comparative in vivo activity of gemifloxacin in a rat model of respiratory tract infection. J Antimicrob Chemother. 45 (S1), 79-85 (2000).
- Tsuji, M., et al. S-649266, a Novel Siderophore Cephalosporin: Efficacy against Klebsiella pneumoniae producing NDM-1 or KPC in rat lung infection model with recreated humanized exposure profile of 2 gram dose with 1 hour and 3 hours infusion. Open Forum Infect Dis. 1 (S1), S106-S107 (2014).
- Tsuji, M., et al. Use of Iron Depleted Mueller Hinton Broth (IDMHB) for microdilution testing of S-649266, a novel siderophore cephalosporin. 26th European Congress of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, Amsterdam, Netherlands, , Abstract P0808 (2016).
- Singley, C., Hoover, J., DeMarsh, P. J., Elefante, P., Zalacain, M. Efficacy of PDF Inhibitor GSK1322322 Against Abscess Infections Caused by MRSA Using a Computer-Controlled Infusion System to Recreate Human PK Profiles in Rats. Proceedings of the 60th Annual Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Boston, MA, , Abstract F1-2114 (2010).
- Hoover, J., Mininger, C., Rittenhouse, S. GSK2251052, a novel LeuRS inhibitor, is effective against multi-drug resistant Pseudomonas aeruginosa in a mouse pneumonia model. Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. San Francisco, CA, , Abstract B-1308 (2012).
- Hoover, J., Mininger, C., Novick, S., Rittenhouse, S. Efficacy of GSK2140944 against Streptococcus pneumoniae in a non-neutropenic mouse lung infection model. Proceedings of the 53rd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. Denver, CO, , Abstract A-014 (2013).
- Hoover, J. L., et al. Selection of a lung infection model to predict efficacy in community-acquired pneumonia (CAP) caused by S. pneumoniae (SP). Proceedings of the 47th Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. Chicago, Illinois, , Abstract A-17 (2007).
- Drusano, G. L., et al. Saturability of granulocyte kill of Pseudomonas aeruginosa in a murine model of pneumonia. Antimicrob Agents Chemother. 55 (6), 2693-2695 (2011).
- Peric, M., Browne, F. A., Jacobs, M. R., Applebaum, P. C. Activity of nine oral agents against gram-positive and gram-negative bacteria encountered in community-acquired infections: use of pharmacokinetic/pharmacodynamic breakpoints in the comparative assessment of beta-lactam and macrolide antimicrobial agents. Clin Ther. 25 (1), 169-177 (2003).
- Calbo, E., Garau, J. Application of pharmacokinetics and pharmacodynamics to antimicrobial therapy of community-acquired respiratory tract infections. Respiration. 72 (6), 561-571 (2005).
- Bulik, C. C., et al. Evaluation of the pharmacokinetics-pharmacodynamics of GSK2140944 against Staphylococcus aureus and Streptococcus pneumoniae in a murine-thigh infection model. Proceedings of the 54th Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy. Washington, DC, , Abstract A-680 (2014).
- Bulik, C. C., et al. Evaluation of the pharmacokinetics-pharmacodynamics of GSK2251052 against gram-negative bacilli in a murine-thigh infection model. Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. San Francisco, CA, , Abstract A-1270 (2012).
- Andes, D. R., et al. Evaluation of the pharmacokinetics-pharmacodynamics of GSK2251052 against gram-negative bacilli using data from a neutropenic murine-pneumonia infection model. Proceedings of the 52nd Interscience Conference of Antimicrobial Agents and Chemotherapy. San Francisco, CA, , Abstract A-1271 (2012).
