Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove

Biochemistry

Capillaire Elektroforese Scheiding van monoklonaal antilichaam isovormen gebruiken een neutrale capillair

doi: 10.3791/55082 Published: January 16, 2017
* These authors contributed equally

Introduction

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Monoklonale antilichamen (mAbs) zijn biotherapeutic eiwitten met toenemende belangstelling als gevolg van hun vermogen om op te treden tegen verschillende chronische en degeneratieve ziekten 1. Net als andere biomoleculen, mAb's zijn gevoelig voor verschillende fysicochemische modificaties ondergaan in alle stadia van hun levenscyclus (dat wil zeggen, van biosynthese het eindproduct). Dergelijke modificaties omvatten, maar zijn niet beperkt tot: deamidatie, glycosylering, oxidatie, cyclisatie, isomerisatie, aggregatie en proteolytische splitsing 2. Vandaar, analytische technieken in staat om intrinsieke isovormen op te lossen zijn nodig om mAb's heterogeniteit en stabiliteit te monitoren om de kwaliteit specificaties vast te stellen.

Capillaire elektroforese (CE) is een krachtige scheidingstechnologie uitgevoerd outinside een smalle kwartsglas buis (um bereik) gevuld met een achtergrondelektrolyt (BGE). Bij toepassing van een elektrisch veld (tot 30.000 V), geladen molecuuls migreren naar de elektrode met tegengestelde lading (bijvoorbeeld elektro-driven scheiding). Het gebruik van hoge spanningen CE toelaat snel en analyses van doelmatigheid die hoger dan klassieke gelelektroforese zijn. Capillaire zone elektroforese (CZE) is een CE-gebaseerde techniek routinematig gebruikt in de biofarmaceutische industrie voor de kwaliteit van het product beoordelen 3-9. In tegenstelling tot andere vormen van CE (bijvoorbeeld, capillaire gelelektroforese, capillaire iso-elektrische focussering) of chromatografie gebaseerde werkwijzen kunnen CZE worden uitgevoerd zonder denatureringsmiddelen of vaste-fase-interfaces, waardoor de analyse van de inherente heterogeniteit van mAbs dichtbij hun natieve toestand 10 . CZE scheiding van mAb isovormen plaatsvindt in een gesmolten-silica capillaire bedekt met een hydrofiel polymeer (neutrale capillair) en is gebaseerd op hun verschillende elektroforetische mobiliteit die wordt geregeerd door lading, massa, grootte en vorm (of hydrodynamisch volume) 11. mAb resten gedetecteerd wanneerze gemobiliseerd en door het detectievenster, die wordt waargenomen door een ultraviolet (UV) detector bij 214 nm 4.

De succesvolle implementatie van deze analysetechniek is afhankelijk van de juiste aandacht voor details voor en tijdens het experiment. anderszins handelen zullen de kosten en tijd te verhogen om de analyse uit te voeren, wat uiteindelijk leidt tot constante mislukking en frustratie.

Hier presenteren we een stap-voor-stap handleiding voor een succesvolle analyse van mAb heterogeniteit voeren door CZE door de uitgebreide uitleg over de bereiding van oplossingen en monsters, de voorbereiding van de CE-systeem, het instrument methoden opgericht, de data-acquisitie en de verwerking. Ten behoeve van deze oefening een recombinant volledig menselijke anti-tumor necrosis factor alpha (anti-TNFa) mAb gebruikt als model eiwit; echter kan dit protocol gemakkelijk worden aangepast voor de analyse van andere eiwitten gezien korte modificaties. EENdditionally, een aantal aanbevelingen om te verzachten mogelijke problemen worden voorgesteld. De lezer wordt aangemoedigd om strikt volgen van het voorgestelde protocol, als de kans om te slagen zal toenemen.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

1. Voorbereiding van de Solutions

  1. Bereid de BGE-oplossing.
    1. Bereid 100 ml van een oplossing bestaande uit 0,05% (m / v) hydroxypropylmethylcellulose (HPMC), 200 mM ε-amino n-capronzuur (EACA) en 30 mM lithium acetaat.
      OPMERKING: HPMC is een veerkrachtig polymeer, giet het poeder in een glazen beker, voeg 80 ml water en tenslotte de voeg roerstaaf. Ga door het toevoegen van de resterende reagentia als normaal. Draag een veiligheidsbril bij het hanteren van lithium-acetaat als het irritatie van de ogen kan veroorzaken.
    2. Breng de pH waarde 4,8 ± 0,1 met 50% (v / v) azijnzuur. Laat de oplossing stabiliseren 5 min en indien nodig aan.
    3. Voeg water toe tot een totaal van een eindvolume van 100 ml volumetrische kolf.
    4. Filtreer door een hydrofiel membraan met een 0,2 micrometer poriegrootte.
    5. Bewaar bij 2-8 ° C gedurende maximaal 7 dagen.
  2. Bereid de interne standaard.
    1. Bereid 1 mlvan een oplossing bestaande uit 1% (m / v) histamine.
    2. Filtreer door een hydrofiel membraan met een 0,2 micrometer poriegrootte.
    3. Bewaar bij 2-8 ° C tot 1 dag.

2. Monstervoorbereiding

  1. Bereid 180 pi mAb monster verdund met Tris buffer (50 mM tris (hydroxymethyl) aminomethaan, pH 8,0) tot een uiteindelijke concentratie van 1 mg / ml.
  2. Voeg 20 pl 1% (m / v) histamine.
  3. Mengen en centrifugeren bij 1000 xg gedurende 5 sec.
  4. Plaats een micro flesje in een universele flacon.
  5. Breng het monster in de micro flesje en de dop op de universele flacon. Verdeel het monster naar boven om te voorkomen dat de invoering van eventuele luchtbellen.
  6. Bewaar bij 2-8 ° C tot 1 dag.
  7. Plaats de universele flacon (met micro injectieflacon met monsteroplossing) in het monster inlegbak.

3. Bereiding van CE System.

  1. CE-systeem schoonmaken.
    LET OP: th Conductis procedure ten minste eenmaal per week om elektrische lekstromen afgeleid van ophoping van stof en vuil te voorkomen. Afhankelijk van de toepassing (bijvoorbeeld, gebruik van een BGE met verhoogde viscositeit of hoge zoutconcentratie, monsters met verhoogde viscositeit) elektroden en Openingshefboom vereisen vaker worden gereinigd om kruisbesmetting sample overdracht te voorkomen.
    1. Schakel de schakelaar van de CE-instrument en open de voordeur.
    2. Reinig het oppervlak van het monster te dekken, monster houden systeem (monster en buffer trays), cartridgekap, klem bar, interface blok en elektroden met een met water bevochtigde geweven vegen. Herhaal de procedure met een met ethanol bevochtigd af te vegen en droog zijn voor gebruik.
    3. Spoel de opening hefbomen grondig met water. Reinig het oppervlak met een niet-geweven doekje. Herhaal de procedure met een met ethanol bevochtigd af te vegen en droog voor de installatie.
    4. Maak de twee uiteinden van de glasvezelkabel voorzichtigly met een met water bevochtigde microfiber doekje. Herhaal de procedure met een met ethanol vochtige doek.
  2. Cartridge montage.
    1. Neem een ​​nieuwe neutrale capillair (50 urn inwendige diameter) uit de verpakking.
    2. Band naar beneden één uiteinde van de capillaire beschermingsbuizen op de werkbank. Ontrollen, strek en trek de capillaire uit de slang.
    3. Plak een stukje plakband of papier naar de werkbank en voeg meting markeringen als volgt: lengte van de detector (30 cm), capillaire venster (0,2 cm) en lengte het uitlaateinde (10 cm) (dat wil zeggen 40,2 cm totale lengte, 30,0 cm effectieve lengte).
    4. Lijn de capillaire venster om het 0,2 cm meten merk in het referentiedocument. Bevestig het capillair met tape en markeer de capillaire eindigt op 2 mm buiten de meting merken.
    5. Snijd de beschermkap op de capillaire inlaat einde (het einde verst van het raam) in een enkele rechte beweging mbv de vlakke rand van het splitsen van steen.
      1. Dompel het capillaire uiteinde in een universele afgedekt flesje gevuld met water om permanente schade aan de capillaire binnenste bekleding voorkomen. Herhaal deze procedure telkens het capillairuiteinde is blootgesteld aan de omgevingstemperatuur langer dan 1 minuut.
    6. Plaats de capillaire inlaateinde naar de uitlaatzijde van de cartridge.
    7. Duw en trek de capillair door de patroon zolang tot de capillaire venster gecentreerd op het venster cartridge.
    8. Steek de stekker opening (100 urn x 200 pm) in het venster cartridge.
      OPMERKING: Controleer of wit licht door het raam bij blootstelling aan een witte lichtbron. Als het licht dat passeert een bruinig uiterlijk, zo nodig aanpassen.
    9. Plaats het capillair in de voorgevormde koelvloeistof buizen voor totaal capillaire lengte van 40,2 cm (met vooraf geïnstalleerde buis moer ferrule en O-ring aan beide einden in die volgorde).
    10. Duw de capillair door de coolant tubing zolang tot het capillair wordt aan de andere kant van de buis.
    11. Steek het uiteinde van de koelvloeistof slang in de uitlaatzijde van het patroon en draai de slang vast.
    12. Plaats de capillaire inlaateinde naar de inlaatzijde van de cartridge.
    13. Duw en trek de capillair door de patroon zolang tot het capillair aan de inlaatzijde van de cassette verschijnt.
    14. Steek het uiteinde van de koelvloeistof slang in de inlaatzijde van het patroon en draai de slang vast.
    15. Snijd de beschermkap op de capillaire uitlaat einde (het einde dichtstbijzijnde vanuit het raam) in een enkele rechte beweging mbv de vlakke rand van het splitsen van steen.
    16. Steek de seal-houder clips over de capillaire uiteinden en druk op om te breken in de juiste positie. Inspecteer de capillaire eindigt. Als ze niet eens, herhaal de procedure.
    17. Plaats de capillaire lengte sjabloon aan de rand van de werkbank.
    18. Plaats de cartridge naar beneden against de capillaire lengte template en lijn de capillaire eindigt met de referentie-lijnen op de mal. Als de capillaire meting merken (zie 3.2.4) niet af te stemmen op de referentie-lijnen, aan te passen als dat nodig is.
    19. Houd het capillair tegen de capillaire lengte template en snijd beide uiteinden van het capillair mbv de vlakke rand van het splitsen steen 2 mm onder de referentielijnen op de mal.
    20. Inspecteer de capillaire eindigt met een vergrootglas. Als capillaire uiteinden zijn niet glad, polijsten ze met behulp van de zachte gezicht van de klieven steen.
    21. Plaats de opening O-ring in de opening plug gat met behulp van de insertie gereedschap O-ring.
    22. Installeer afgedekt universele flesjes gevuld met water in de patroonhuls en plaats cartridge in geval onmiddellijk met capillaire uiteinden ingevoegd in flesjes. Voor korte en lange termijn opslag te houden bij 2-8 ° C.
  3. Bereiding van buffer trays.
    1. Vullen en plaats afgedekt universal flacons in de buffer en uitlaat trays (figuur 1). Herhalen flacon posities in banen 2, 3, 4 en 5 overeenkomstig het aantal monsters te analyseren, het plaatsen van een baan voor zes injecties monster.
      LET OP: Vermijd bevochtigen van de flacon caps om de huidige lekkage te voorkomen.

Figuur 1
Figuur 1: Positie en vul niveau van universele flacons in de buffer inlaat en uitlaat trays. Vul niveaus: 1/1 = 1400 pi, 3/4 = 1300 pi en 1/2 = 1000 pi. Afkortingen: W = water, HCl = 0,1 M zoutzuur. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

  1. CE systeemcomponenten montage.
    1. Installeer de UV-detector.
    2. Installeer de opening van hefbomendoor te drukken tot in de interface blok.
    3. Installeer de glasvezelkabel. Steek de corresponderende einde te maken aan de klem en bar, terwijl beide uiteinden, draai met de klok mee. Sluit het andere uiteinde aan de UV-detector.
      LET OP: Behandel de glasvezelkabel met zorg tijdens deze procedure, omdat het buigen kon haar breuk veroorzaken.
    4. Het monster en de buffer trays in de sample houder systeem en vastklikken.
    5. Plaats de capillaire cartridge in de interface blok en, terwijl u de klem bar aan beide uiteinden, draai de knoppen.

4. Instrument Methoden Set-up

  1. Maak de conditionering, hardlopen en afsluiten instrument werkwijzen volgens de volgende parameters en Tabel 1: Spanning, max: 30,0 kV; Huidige, max: 300,0 uA; Cartridge temperatuur: 20,0 ° C; Sample bewaartemperatuur: 10,0 ° C; UV-detector oorspronkelijke voorwaarden: Golflengte: 214 nm; Data rate: 4 Hz; Filter: Normaal; Piekbreedte (points): 16-25; Absorptie signaal: Direct.
    LET OP: Data acquisitie percentage kan worden verhoogd tot 25 Hz met het oog op de dekking van de smalle scheiding zones te verbeteren.
<td> Water Outlet flacon
Conditioning methode time programma
Tijd (min) Evenement Waarde Duur Inlet flacon Outlet flacon Overzicht Comments
- Spoel - Pressure 2068 mbar 1,0 min BI: C1 BO: C1 vooruit HCl 0,1 M
- Spoel - Pressure 2068 mbar 2,0 min BI: B1 BO: C1 vooruit
- Spoel - Pressure 2068 mbar 10,0 min BI: E1 BO: C1 vooruit BGE
0.00 Aparte - Voltage 15,0 KV 10,0 min BI: D1 BO: D1 0,17 Min ramp, normale polariteit Scheiden
10.00 Spoel - Pressure 2758 mbar 10,0 min BI: E1 BO: C1 vooruit BGE
20.01 Wacht - 0.0 min BI: A1 BO: A1 - Rinse tips
Running methode time programma
Tijd (min) Evenement Waarde Duur Inlet flacon Overzicht Comments
- Spoel - Pressure 2068 mbar 1,0 min BI: C1 BO: C1 Vooruit, In / Out flacon inc 6 HCl 0,1 M
- Spoel - Pressure 2068 mbar 2,0 min BI: B1 BO: C1 Vooruit, In / Out flacon inc 6 Water
- Spoel - Pressure 2068 mbar 4.0 min BI: E1 BO: C1 Vooruit, In / Out flacon inc 6 BGE
- Injecteren - Pressure 34 mbar 20,0 sec SI: A1 BO: B1 Override, Forward sample Injection
- Wacht - 0,4 min BI: A1 BO: A1 In / Out flacon inc 6 wash tips
0 Aparte - Voltage 15,0 KV 30,0 min BI: D1 BO: D1 0,17 Min ramp, normale polariteit, In / Out flacon inc 6 sample Scheiding
0.5 Autozero - - - - - -
30.01 stop data - - - - - -
30.02 Spoel - Pressure 2068 mbar 2,0 min BI: B1 BO: C1 Vooruit, In / Out flacon inc 6 Water
32.03 Wacht - 0.0 min BI: A1 BO: A1 In / Out flacon inc 6 Rinse tips
32.04 Einde - - - - - Einde
Shutdown methode time programma
Tijd (min) Evenement Waarde Duur Inlet flacon Outlet flacon Overzicht Comments
- Spoel - Pressure 2068 mbar 1,0 min BI: E6 BO: E6 vooruit HCl 0,1 M
- Spoel - Pressure 2068 mbar 6.0 min BI: F6 BO: F6 vooruit Water
- Lamp - Off - - - - - -
- Wacht - 0.0 min BI: A1 BO: A1 - Rinse tips

Tabel 1: Conditioning, hardlopen en shutdown tijd programma's.

5. Data Acquisition en Processing

  1. Programmeer de sample set.
    1. Programmeer de capillaire voor het conditioneren van het gebruik van de meetversterker methode. Wanneer de capillair voor het eerst programma vier herhalingen; anders programmeren slechts twee herhalingen van de voorbereidende werkwijze.
    2. Programmeer de monsters worden geanalyseerd met behulp van de lopende instrument methode.
    3. Programmeer het capillair voor opslag met behulp van de shutdown instrument methode en herhaal de procedure aangegeven in paragraaf 3.2.22.
  2. Voer het experiment.
  3. Exporteer de electroferogrammen.
  4. Bereken de migratie tijd en het percentage inhoud van de elementaire, de belangrijkste eennd zure isovormen behulp hoogteverschil lijn integratie van de elektroferogram profiel.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

Figuur 2 toont de typische elektrische stroom profiel van een 200 mM EACA, 30 mM lithium acetaat, pH 4,8 BGE met anti-TNFa mAb monster verdund met Tris buffer (50 mM, pH 8,0). Zoals kan worden waargenomen, de huidige is stabiel tijdens de analyse en kan oscilleren tussen waarden van 30 tot 35 uA. Figuur 3 toont de CZE elektroferogram van een blanco monster waarin de gedetecteerde piek overeenkomt met de histamine interne standaard. Het wordt verwacht voor histamine een migratie tijd van 3,7-4,1 min te hebben. Figuur 4 toont de CZE electropherogram van anti-TNFa mAb. Zoals kan worden opgemerkt, is de hoofdpiek voorafgegaan en gevolgd door pieken kleinere intensiteit. Sinds de scheiding onder normale polariteit (dat wil zeggen, van positief naar negatief) wordt uitgevoerd, de analyse blijkt elementaire isovormen (mAb varianten met positieve lading) sneller migreren en zure isovormen (mAb varianten met negatieve lading) migreren langzamer dan de belangrijkste isovorm.

Figuur 2
Figuur 2: Elektrische huidige profiel van een typische CZE run. De huidige BGE stabiel ongeveer 30 pA bij het mAb monster wordt verdund met Tris buffer (50 mM, pH 8,0). Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

figuur 3
Figuur 3: CZE electropherogram van blanco monster. Merk op dat er geen pieken afgezien gedetecteerd dat van de histamine interne standaard. AU = absorptie-eenheden. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

tent "fo: keep-together.within-page =" 1 "> figuur 4
Figuur 4: Fysicochemische heterogeniteit van anti-TNFa mAb bepaald door CZE. Dit monster is samengesteld uit basic, hoofd- en zure isovormen. Inzet toont een uitgebreide weergave van de varianten opgelost door CZE. AU = absorptie-eenheden. Klik hier om een grotere versie van deze figuur te bekijken.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

or Start trial to access full content. Learn more about your institution’s access to JoVE content here

In deze tutorial, benadrukken we het belang van goede praktijken bij het uitvoeren van CZE analyses van mAb's om de kans te vergroten om te slagen. Echter, wanneer CZE wordt gebruikt op een routine-basis, problemen ontstaan onvermijdelijk 12.

Voor het beste resultaat, is het belangrijk om de noten die in het hele protocol werden opgenomen te volgen, omdat ze de analist om te overwinnen en het oplossen van moeilijke stappen zal helpen. Een belangrijke overweging om optimale resolutie te verkrijgen bij een bepaalde set van omstandigheden is de juiste voorbereiding van de BGE-oplossing. Deze werkwijze vereist dat strikte controle op ionensterkte van buffermiddelen, gehalte aan niet-buffering additieven en pH. Over het algemeen, het CE-systeem vereist zorg en aandacht voor detail. Het kan gemakkelijk worden beschadigd als elke stap met betrekking tot het systeem reinigen of assemblage wordt genegeerd.

De onderhavige werkwijze beschouwt het gebruik van een neutrale capillair. Unlike kale fused-silica capillairen,neutrale haarvaten verminderen eiwit adsorptie op de capillaire binnenwand, aldus scheidend vermogen, nauwkeurigheid en herhaalbaarheid 9 verbeteren. Echter is het gebruik ervan beperkt door het aantal injecties die kunnen worden uitgevoerd. In onze ervaring, 120-150 injecties kan worden zonder invloed van de resolutie uitgevoerd door de geleidelijke afbraak van de binnenbekleding. Zodra de capillaire deze limiet heeft bereikt, zal een nieuwe capillaire vereist.

Andere protocollen zijn beschreven voor de analyse van de fysisch-chemische heterogeniteit van mAbs door CZE, die het gebruik van permanently- en dynamisch gecoate capillairen 13,14 omvatten. Echter, deze studies stellen de toepassing van een vaste set van voorwaarden om de grote diversiteit van de mAb's te analyseren. In tegenstelling tot bestaande methoden, zijn wij van mening dat optimale prestatie alleen kan worden bereikt door het afstemmen van experimentele omstandigheden. Zo heeft de hier gepresenteerde protocol gebruikt en aangepast in devroeger tot isovorm heterogeniteit van vier verschillende mAbs en mAb fragment 10 analyseren. Om dit protocol passen aan andere mAbs evalueren raden wij de modulatie van BGE ionsterkte en pH volgens de varianten diversiteit en iso-elektrische punt van het molecuul te analyseren.

Verdere stappen nadat beheersen deze techniek moet ook de evaluatie van de prestatie van de methode. Parameters zoals selectiviteit en herhaalbaarheid (in termen van de relatieve standaarddeviatie van migratietijd en oppervlaktepercentage) moeten worden getest om te bevestigen dat de methode geschikt voor het beoogde gebruik.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Glacial acetic acid Tecsiquim AT0035-7
ACS grade hydrochloric acid J.T. Baker 9535-05
Histamine dihydrochloride Fluka 53300
(Hydroxypropyl) methyl cellulose  Fluka 09963
Lithium acetate Sigma-Aldrich 517992
6-Aminocaproic acid Sigma-Aldrich A2504
eCAP Tris Buffer, 50.0 mM,  pH 8 Beckman Coulter 477427
PA 800 Plus Pharmaceutical Analysis System Beckman Coulter A66528
eCAP Neutral capillary  Beckman Coulter 477441
Vial, Micro, 200 µl Beckman Coulter 144709
Universal Vial Caps Beckman Coulter A62250
Universal Vials Beckman Coulter A62251
Cable, Optics, UV/Vis Beckman Coulter 144093
UV/Vis Detector Module Beckman Coulter 144733
Cartridge Assembly Kit, Blank Beckman Coulter 144738

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Bruno, V., Battaglia, G., Nicoletti, F. The advent of monoclonal antibodies in the treatment of chronic autoimmune diseases. Neurol. Sci. 31, 283-288 (2011).
  2. Liu, H., Gaza-Bulseco, G., Faldu, D., Chumsae, C., Sun, J. Heterogeneity of monoclonal antibodies. J. Pharm. Sci. 97, (7), 2426-2447 (2008).
  3. Creamer, J. S., Oborny, N. J., Lunte, S. M. Recent advances in the analysis of therapeutic proteins by capillary and microchip electrophoresis. Anal. Methods. 6, (15), 5427-5449 (2014).
  4. Fekete, S., Guillarme, D., Sandra, P., Sandra, K. Chromatographic, Electrophoretic, and Mass Spectrometric Methods for the Analytical Characterization of Protein Biopharmaceuticals. Anal. Chem. 88, (1), 480-507 (2016).
  5. He, Y., et al. Analysis of identity, charge variants, and disulfide isomers of monoclonal antibodies with capillary zone electrophoresis in an uncoated capillary column. Anal. Chem. 82, (8), 3222-3230 (2010).
  6. He, Y., Isele, C., Hu, W., Ruesch, M. Rapid analysis of charge variants of monoclonal antibodies with capillary zone electrophoresis in dynamically coated fused-silica capillary. J. Sep. Sci. 34, (5), 548-555 (2011).
  7. Zhao, S. S., Chen, D. D. Y. Applications of capillary electrophoresis in characterizing recombinant protein therapeutics. Electrophoresis. 35, (1), 96-108 (2014).
  8. Štěpánová, S., Kašička, V. Determination of impurities and counterions of pharmaceuticals by capillary electromigration methods. J. Sep. Sci. 37, (15), 2039-2055 (2014).
  9. Štěpánová, S., Kašička, V. Recent applications of capillary electromigration methods to separation and analysis of proteins. Anal. Chim. Acta. 933, 23-42 (2016).
  10. Espinosa-de la Garza, C. E., et al. Analysis of recombinant monoclonal antibodies by capillary zone electrophoresis. Electrophoresis. 34, (8), 1133-1140 (2013).
  11. Staub, A., Guillarme, D., Schappler, J., Veuthey, J. L., Rudaz, S. Intact protein analysis in the biopharmaceutical field. J. Pharm. Biomed. Anal. 55, (4), 810-822 (2011).
  12. Altria, K. D. Troubleshooting. Methods in Molecular Biology, Vol 52. Capillary Electrophoresis Guidebook: Principles, Operation and Applications. Altria, K. D. Chapter 10 (1996).
  13. Ma, S., Nashabeh, W. Analysis of protein therapeutics by capillary electrophoresis. Chromatographia. 53, (5), 75-89 (2001).
  14. Jaccoulet, E., Smadja, C., Prognon, P., Taverna, M. Capillary electrophoresis for rapid identification of monoclonal antibodies for routine application in hospital. Electrophoresis. 36, (17), 2050-2056 (2015).
Capillaire Elektroforese Scheiding van monoklonaal antilichaam isovormen gebruiken een neutrale capillair
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Espinosa-de la Garza, C. E., Salazar-Flores, R. D., Pérez, N. O., Flores-Ortiz, L. F., Medina-Rivero, E. Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary. J. Vis. Exp. (119), e55082, doi:10.3791/55082 (2017).More

Espinosa-de la Garza, C. E., Salazar-Flores, R. D., Pérez, N. O., Flores-Ortiz, L. F., Medina-Rivero, E. Capillary Electrophoresis Separation of Monoclonal Antibody Isoforms Using a Neutral Capillary. J. Vis. Exp. (119), e55082, doi:10.3791/55082 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
simple hit counter