Introduction
Monoklonale antistoffer (mAbs) er bioterapeutiske proteiner med økende interesse på grunn av deres evne til å handle mot flere kroniske og degenerative sykdommer 1. Som andre biomolekyler, mAbs er tilbøyelige til å gjennomgå flere fysiske endringer i alle faser av sin livssyklus (dvs. fra biosyntese til det endelige produktet). Slike modifikasjoner innbefatter, men er ikke begrenset til: deamidering, glykosylering, oksidasjon, cyklisering, isomerisering, aggregering og proteolytisk spaltning to. Derfor blir analytiske teknikker som er i stand til å løse iboende isoformer nødvendig for å overvåke mAb'ene heterogenitet og stabilitet for å kunne etablere kvalitetsspesifikasjoner.
Kapillær elektroforese (CE) er en høy ytelse separasjonsteknologi gjennomført outinside av en smal smeltet Silica tube (mikrometer utvalg) fylt med bakgrunn elektrolytt (BGE). Ved påføring av et elektrisk felt (opp til 30 000 V), ladet molekyls migrerer mot elektroden med motsatt ladning (dvs. elektro-drevet separasjon). Bruken av høye spenninger i CE tillater raske analyser og økt effektivitet, som er bedre enn klassisk gel elektroforese. Kapillær sone elektroforese (CZE) er et CE-basert teknikk rutinemessig brukt i biofarmasøytiske industrien for produktet kvalitetsvurdering 3-9. I motsetning til andre former for CE (f.eks kapillær gelelektroforese, kapillar isoelektrisk fokusering) eller kromatografi-baserte metoder, kan CZE bli utført uten bruk av denatureringsmidler eller fastfase-grensesnitt, slik at analysen av den iboende heterogenitet av mAb nær deres opprinnelige tilstand 10 . CZE separasjon av mAb isoformer forekommer inne i et smeltet silika kapillær dekket med en hydrofil polymer (nøytral kapillar), og er basert på deres ulike elektroforetisk mobilitet, som er styrt av ladning, masse, størrelse og form (eller hydrodynamisk volum) 11. mAb delene blir oppdaget nårde er mobilisert og passerer gjennom deteksjonsvinduet, som avføles ved hjelp av en ultrafiolett (UV) absorbans-detektor ved 214 nm 4.
En vellykket gjennomføring av denne analytisk teknikk vil avhenge av riktig hensyn til detaljer før og under forsøket. Fungerende ellers vil øke kostnadene og tid til å gjennomføre analysen, til slutt fører til konstant svikt og frustrasjon.
Her presenterer vi en steg-for-steg guide til å gjennomføre en vellykket analyse av mAb heterogenitet ved CZE gjennom detaljert forklaring av utarbeidelse av løsninger og prøver, utarbeidelse av CE-systemet, instrument metoder satt opp, datainnsamling, og behandlingen. For formålet med denne opplæringen, en rekombinant humant anti-tumor nekrose faktor alfa (anti-TNFa) mAb blir anvendt som protein modell; Men kan denne protokollen enkelt tilpasses for analyse av andre proteiner vurderer korte modifikasjoner. ENdditionally, flere anbefalinger for å redusere potensielle problemer er foreslått. Leseren oppfordres til å strengt følge den foreslåtte protokollen, som sannsynligheten for å lykkes vil øke.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
1. Utarbeidelse av Solutions
- Forbered BGE løsning.
- Fremstille 100 ml av en oppløsning bestående av 0,05% (m / v) hydroksy- propyl metylcellulose (HPMC), 200 mM ε-amino-n-kapronsyre (EACA) og 30 mM litiumacetat.
MERK: Som HPMC er et viskoelastisk polymer, helle pulveret inn i et begerglass, tilsett 80 ml vann og til slutt legge til rørestav. Fortsett å legge de resterende reagenser som normalt. Bruk vernebriller ved håndtering litiumacetatmetoden som det kan føre til irritasjon i øynene. - Juster til pH-verdi 4,8 ± 0,1 med 50% (v / v) eddiksyre. Tillat løsningen å stabilisere i 5 minutter og justere etter behov.
- Tilsett vann for å gjøre opp til et sluttvolum på 100 ml i målekolbe.
- Filtrer gjennom en hydrofil membran med en 0,2 um porestørrelse.
- Oppbevares ved 2-8 ° C i inntil 7 dager.
- Fremstille 100 ml av en oppløsning bestående av 0,05% (m / v) hydroksy- propyl metylcellulose (HPMC), 200 mM ε-amino-n-kapronsyre (EACA) og 30 mM litiumacetat.
- Forbered intern standard.
- Forbered 1 mlav en oppløsning bestående av 1% (m / v) histamin.
- Filtrer gjennom en hydrofil membran med en 0,2 um porestørrelse.
- Oppbevares ved 2-8 ° C i opptil en dag.
2. Prøvepreparering
- Fremstille 180 ul av mAb prøve fortynnet med Tris-buffer (50 mM tris (hydroksymetyl) aminometan, pH 8,0) til en sluttkonsentrasjon på 1 mg / ml.
- Tilsett 20 ul av 1% (m / v) histamin.
- Bland og sentrifuger ved 1000 xg i 5 sek.
- Plasser en mikro hetteglass inne i en universell hetteglass.
- Overfør prøven inn i mikro hetteglasset og cap universell ampullen. Tilsett prøven oppover for å unngå å introdusere noen bobler.
- Oppbevares ved 2-8 ° C i opptil en dag.
- Plasser universal hetteglass (med mikrohetteglasset med prøveløsningen) i prøven inntaksmagasinet.
3. Utarbeidelse av CE System.
- CE system rengjøring.
MERK: Conduct ther prosedyren minst en gang i uken for å unngå elektrisk strømlekkasje stammer fra oppsamling av støv og rusk. Men avhengig av programmet (f.eks bruk av en BGE med økt viskositet eller med høy saltkonsentrasjon, prøver med økt viskositet) elektroder og åpningsspakene kan kreve å bli renset oftere for å hindre krysskontaminering og prøveoverføring.- Slå av strømbryteren av CE-instrument og åpner døra.
- Rengjør overflaten av prøven cover, prøve å holde systemet (prøve- og buffer skuffer), cover kassett, klemme bar, grensesnitt blokk og elektroder med en fuktet vevde tørk. Gjenta prosedyren med en etanol-fuktet tørke og tørr før bruk.
- Skyll åpningsspakene grundig med vann. Rengjør overflaten med en vevde tørk. Gjenta prosedyren med en etanol-fuktet tørke og tørr før montering.
- Rengjør de to endene av den fiberoptiske kabelen forsiktigly med en fuktet mikrofiberklut. Gjenta prosedyren med en etanol-fuktet klut.
- Kassettenheten.
- Ta en ny nøytral kapillær (50 mikrometer innvendig diameter) ut av pakken.
- Båndet ned den ene ende av kapillaren beskyttende røret til arbeidsbenken. Vikle, rette og trekke kapillær ut slangen.
- Stikke et stykke tape eller papir til arbeidsbenken og legge til målemerker som følger: lengde til detektoren (30 cm), kapillær vindu (0,2 cm), og lengden til utløpsenden (10 cm) (dvs. 40,2 cm total lengde, 30,0 cm effektiv lengde).
- Juster kapillær vinduet til 0,2 cm målingen mark i referanse papir. Fest kapillær med tape og markere kapillær ble 2 mm utenfor målemerker.
- Skjær beskyttelseshetten ved kapillær innløpsenden (enden lengst fra vinduet) i en enkelt rett bevegelse ved hjelp av spylekanten av spalte stein.
- Senk kapillær enden i en avkortet universell hetteglass fylt med vann for å unngå permanent skade på kapillær indre belegg. Gjenta denne prosedyren hver gang kapillar ende er utsatt for omgivelsestemperatur i mer enn 1 min.
- Sett kapillær innløpsenden til utløpssiden av patronen.
- Skyv og trekk kapillær gjennom patronen som nødvendig til kapillær vindu er sentrert på kassetten vinduet.
- Sett åpning pluggen (100 um x 200 um) i kassetten vinduet.
MERK: Kontrollere at hvitt lys passerer gjennom vinduet når den utsettes for en hvit lyskilde. Hvis lyset som passerer gjennom har en brunlig utseende, justere etter behov. - Sett kapillært inn i den forhåndsformede kjølemiddel rør for en total kapillær lengde på 40,2 cm (med pre-installerte røret mutter, hylse og O-ringen i begge ender i den nevnte rekkefølge).
- Skyv kapillær gjennom coolant røret som nødvendig til kapillær vises på den andre siden av slangen.
- Sett enden av kjølevæske slangen inn i utløpssiden av patronen og trekk slangen mutter.
- Sett kapillær innløpsenden til innløpssiden av patronen.
- Skyv og trekk kapillær gjennom patronen som nødvendig til kapillær vises på innløpssiden av kassetten.
- Sett enden av kjølevæske slangen inn i innløpssiden av kassetten og trekk slangen mutter.
- Skjær beskyttelseshetten ved kapillær utløpsenden (slutten nærmest fra vinduet) i en enkelt rett bevegelse ved hjelp av spyle kanten av spalte stein.
- Sett forseglingen-holderen klipp over kapillær endene og trykk for å knipse på plass. Inspiser kapillær slutter. Hvis de ikke selv, gjenta prosedyren.
- Plasser kapillær lengde mal på kanten av arbeidsbenken.
- Plasser kassetten vendt ned against kapillær lengde mal og justere kapillær slutter med referanselinjer på malen. Dersom kapillær målemerker (se 3.2.4) ikke kan rettes inn etter referanselinjer, justere etter behov.
- Hold kapillær mot kapillær lengde og skjærte begge ender av kapillaren ved hjelp av spylekanten av spalte stein 2 mm under referanselinjer på malen.
- Inspiser kapillær ender med et forstørrelsesglass. Hvis kapillær ender er ikke glatt, burnish dem ved hjelp av myke ansiktet av spalte stein.
- Sett blender O-ringen inn i åpningen plugghull ved hjelp av O-ringen innføringsverktøy.
- Installer avkortet universal hetteglass fylt med vann inn i kassetten saken og sted kassetten i saken umiddelbart med kapillære endene settes inn i hetteglass. For kort og langtidslagring holde ved 2-8 ° C.
- Utarbeidelse av buffer skuffer.
- Fyll og plassere avkortet universal hetteglassene i buffer innløp og utløp skuffer (figur 1). Gjenta ampulle stillinger i sporene 2, 3, 4 og 5 i henhold til antall prøver som skal analyseres, plassere ett kjørefelt for hver sjette prøve injeksjoner.
MERK: Unngå å tisse på hetteglassene caps for å hindre lekkasje.
- Fyll og plassere avkortet universal hetteglassene i buffer innløp og utløp skuffer (figur 1). Gjenta ampulle stillinger i sporene 2, 3, 4 og 5 i henhold til antall prøver som skal analyseres, plassere ett kjørefelt for hver sjette prøve injeksjoner.
Figur 1: Plassering og fylle nivået av universelle ampuller i buffer innløps- og utløps skuffer. Fyll nivåer: 1/1 = 1400 mL, 3/4 = 1300 mL og 1/2 = 1000 mL. Forkortelser: W = vann, HCl = 0,1 M saltsyre. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
- CE system komponenter montering.
- Installer UV-detektor.
- Installer åpningsspakeneved å trykke opp i grensesnittet blokken.
- Installer den fiberoptiske kabelen. Sett den tilsvarende slutt på klemmen bar og, mens du holder begge ender, roter med klokken. Koble den andre enden til UV-detektor.
MERK: Håndter fiberoptisk kabel med forsiktighet under denne prosedyren siden bøying kan føre sin brudd. - Prøven og buffer skuffer inn prøven holdesystemet og smekk på plass.
- Plasser kapillær kassetten inn i grensesnittet blokk og, mens du trykker klemmen bar i begge ender, stram skruene.
4. Instrument Metoder Set-up
- Lag condition, løping og avslutning instrument metoder i henhold til følgende parametere og Tabell 1: Spenning, max: 30,0 kV; Current, maks: 300,0 uA; Patron temperatur: 20,0 ° C; Eksempel lagringstemperatur: 10,0 ° C; UV detektor startbetingelsene: Wavelength: 214 nm; Data rate: 4 Hz; Filter: Normal; Peak bredde (poeng): 16-25; Absorbans signal: Direct.
MERK: Datainnsamlingen hastigheten kan økes opp til 25 Hz for å forbedre dekningen av smale separasjonssoner.
| Conditioning metode time program | |||||||
| Tid (min) | Hendelse | Verdi | Varighet | Inlet hetteglass | Outlet hetteglass | Sammendrag | kommentarer |
| - | Skyll - Trykk | 2068 mbar | 1,0 min | BI: C1 | BO: C1 | Framover | HCl 0,1 M |
| - | Skyll - Trykk | 2068 mbar | 2,0 min | BI: B1 | BO: C1 | Framover | <td> Vann|
| - | Skyll - Trykk | 2068 mbar | 10,0 min | BI: E1 | BO: C1 | Framover | BGE |
| 0,00 | Separat - Spenning | 15,0 KV | 10,0 min | BI: D1 | BO: D1 | 0,17 Min ramp, normal polaritet | Skille |
| 10.00 | Skyll - Trykk | 2758 mbar | 10,0 min | BI: E1 | BO: C1 | Framover | BGE |
| 20.01 | Vente | - | 0,0 min | BI: A1 | BO: A1 | - | Skyll tips |
| Kjører metode time program | |||||||
| Tid (min) | Hendelse | Verdi | Varighet | Inlet hetteglass | Sammendrag | kommentarer | |
| - | Skyll - Trykk | 2068 mbar | 1,0 min | BI: C1 | BO: C1 | Forward, In / Out hetteglass økes 6 | HCl 0,1 M |
| - | Skyll - Trykk | 2068 mbar | 2,0 min | BI: B1 | BO: C1 | Forward, In / Out hetteglass økes 6 | Vann |
| - | Skyll - Trykk | 2068 mbar | 4,0 min | BI: E1 | BO: C1 | Forward, In / Out hetteglass økes 6 | BGE |
| - | Sprøyt - Trykk | 34 mbar | 20,0 sek | SI: A1 | BO: B1 | Styre, Forward | Eksempel Injection |
| - | Vente | - | 0,4 min | BI: A1 | BO: A1 | In / Out hetteglass økes 6 | Vask tips |
| 0 | Separat - Spenning | 15,0 KV | 30,0 min | BI: D1 | BO: D1 | 0,17 Min ramp, normal polaritet, In / Out hetteglass økes 6 | Eksempel Separasjon |
| 0.5 | Autozero | - | - | - | - | - | - |
| 30.01 | Stopp data | - | - | - | - | - | - |
| 30.02 | Skyll - Trykk | 2068 mbar | 2,0 min | BI: B1 | BO: C1 | Forward, In / Out hetteglass økes 6 | Vann |
| 32.03 | Vente | - | 0,0 min | BI: A1 | BO: A1 | In / Out hetteglass økes 6 | Skyll tips |
| 32.04 | Slutt | - | - | - | - | - | Slutt |
| Nedleggelse metode time program | |||||||
| Tid (min) | Hendelse | Verdi | Varighet | Inlet hetteglass | Outlet hetteglass | Sammendrag | kommentarer |
| - | Skyll - Trykk | 2068 mbar | 1,0 min | BI: E6 | BO: E6 | Framover | HCl 0,1 M |
| - | Skyll - Trykk | 2068 mbar | 6,0 min | BI: F6 | BO: F6 | Framover | Vann |
| - | Lampe - Off | - | - | - | - | - | - |
| - | Vente | - | 0,0 min | BI: A1 | BO: A1 | - | Skyll tips |
Tabell 1: Bad, kjører og avslutningstidsprogrammer.
5. datainnsamling og prosessering
- Programmere prøvesett.
- Programmere kapillær for condition bruker condition instrument metoden. Når kapillæren blir brukt for første gang, program fire repetisjoner; ellers programmere bare to repetisjoner av kondisjoneringsmetoden.
- Program prøvene som skal analyseres ved hjelp av løpe instrument metoden.
- Programmere kapillær for lagring med nedleggelse instrument metode og gjenta prosedyren angitt i avsnitt 3.2.22.
- Utføre forsøket.
- Eksportere electropherograms.
- Beregn migrasjon tid og prosentinnhold av grunnleggende, hoved ennd sure isoformer ved hjelp av høydeforskjell linje integrering av elektroferogrammet profil.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Figur 2 viser det typiske elektrisk strøm profil av en 200 mM EACA, 30 mM litium-acetat, pH 4,8 BGE med anti-TNFa-mAb prøve fortynnet med Tris-buffer (50 mM, pH 8,0). Som det kan observeres, er den nåværende stabil gjennom hele analysen, og kan svinge mellom verdier på 30 til 35 uA. Figur 3 viser CZE elektroferogrammet av en blindprøve hvor det detekterte topp tilsvarer den histamin intern standard. Det er forventet for histamin å ha en migrering tid på 3,7 til 4,1 min. Figur 4 viser CZE elektroferogrammet av anti-TNFa-mAb. Som det kan sees, blir hovedtoppen foran og etterfulgt av toppene av mindre intensitet. Siden separasjon er utført under normal polaritet (dvs. fra positiv til negativ), avslører analysen basiske isoformer (mAb varianter med positiv ladning) migrere raskere og sure isoformer (mAb varianter med negativ ladning) migrerer saktere enn hoved isoformen.
Figur 2: Strøm profilen til en typisk CZE løp. Den BGE strømmen er stabil omkring 30 uA når mAb prøven er fortynnet med Tris-buffer (50 mM, pH 8,0). Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 3: CZE elektroferogrammet av blindprøven. Legg merke til at ingen topper detekteres bortsett fra den som histamin intern standard. AU = absorbans enheter. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Figur 4: Fysiokjemiske heterogenitet av anti-TNFa-mAb bestemt ved CZE. Denne prøven består av grunnleggende, viktigste og sure isoformer. Inset viser en utvidet visning av variantene løses av CZE. AU = absorbans enheter. Klikk her for å se en større versjon av dette tallet.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I denne opplæringen, merker vi viktigheten av riktig praksis når gjennomføre CZE analyser av mAbs for å øke sannsynligheten for å lykkes. Men når CZE brukes på rutinemessig basis, problemer oppstår uunngåelig 12.
For best resultat, er det viktig å følge notatene som ble inkludert i hele protokollen, som de vil hjelpe analytikeren å overvinne og feilsøke vanskelige trinn. En viktig faktor for å oppnå en optimal oppløsning ved et gitt sett av betingelser er den korrekte fremstillingen av BGE-løsning. Denne prosessen krever å ha streng kontroll over ionestyrke av buffermidler, konsentrasjon av ikke-reduserende tilsetningsstoffer og pH. Totalt sett krever CE-systemet omsorg og oppmerksomhet på detaljer. Det kan lett bli ødelagt hvis noen skritt om systemet rengjøring eller montering ignoreres.
Den foreliggende fremgangsmåte tar hensyn til bruken av en nøytral kapillær. I motsetning til bare smeltet-silika kapillærer,nøytrale kapillærer redusere protein adsorpsjon på kapillære indre vegg, og dermed forbedre separasjonseffektiviteten, nøyaktighet og repeterbarhet 9. Imidlertid er dets bruk begrenset av mengden av injeksjoner som kan utføres. I vår erfaring, kan 120 til 150 injeksjoner utføres uten effekt på oppløsningen på grunn av den gradvise degradering av det indre belegg. Når kapillær har nådd denne grensen, vil en ny kapillær være nødvendig.
Andre protokoller er blitt rapportert for analyse av de fysisk-kjemiske heterogenitet av mAbs ved CZE, som inkluderer bruk av permanently- og dynamisk-belagte kapillarer 13,14. Men disse studiene foreslår anvendelsen av et fast sett med forutsetninger for å analysere bredt mangfold av mAbs. I motsetning til eksisterende metoder, mener vi at optimal ytelse kan bare oppnås ved å skreddersy eksperimentelle betingelser. For eksempel har den protokoll som presenteres her er benyttet, og justeres iiden for å analysere isoform heterogenitet av fire andre forskjellige mAbs og en mAb fragment 10. For å tilpasse denne protokollen for å evaluere andre mAbs, anbefales det modulering av BGE ionestyrke og pH-verdien i henhold til variantene mangfold og isoelektriske punktet til molekylet som skal analyseres.
Videre skritt etter å mestre denne teknikken bør inkludere evaluering av metoden ytelse. Parametere som for eksempel selektivitet og repeterbarhet (i form av det relative standardavvik for migrering tid og område prosent) må testes for å bekrefte at fremgangsmåten er egnet for den tiltenkte bruk.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Glacial acetic acid | Tecsiquim | AT0035-7 | |
| ACS grade hydrochloric acid | J.T. Baker | 9535-05 | |
| Histamine dihydrochloride | Fluka | 53300 | |
| (Hydroxypropyl) methyl cellulose | Fluka | 09963 | |
| Lithium acetate | Sigma-Aldrich | 517992 | |
| 6-Aminocaproic acid | Sigma-Aldrich | A2504 | |
| eCAP Tris Buffer, 50.0 mM, pH 8 | Beckman Coulter | 477427 | |
| PA 800 Plus Pharmaceutical Analysis System | Beckman Coulter | A66528 | |
| eCAP Neutral capillary | Beckman Coulter | 477441 | |
| Vial, Micro, 200 µl | Beckman Coulter | 144709 | |
| Universal Vial Caps | Beckman Coulter | A62250 | |
| Universal Vials | Beckman Coulter | A62251 | |
| Cable, Optics, UV/Vis | Beckman Coulter | 144093 | |
| UV/Vis Detector Module | Beckman Coulter | 144733 | |
| Cartridge Assembly Kit, Blank | Beckman Coulter | 144738 |
References
- Bruno, V., Battaglia, G., Nicoletti, F. The advent of monoclonal antibodies in the treatment of chronic autoimmune diseases. Neurol. Sci. 31, 283-288 (2011).
- Liu, H., Gaza-Bulseco, G., Faldu, D., Chumsae, C., Sun, J. Heterogeneity of monoclonal antibodies. J. Pharm. Sci. 97 (7), 2426-2447 (2008).
- Creamer, J. S., Oborny, N. J., Lunte, S. M. Recent advances in the analysis of therapeutic proteins by capillary and microchip electrophoresis. Anal. Methods. 6 (15), 5427-5449 (2014).
- Fekete, S., Guillarme, D., Sandra, P., Sandra, K. Chromatographic, Electrophoretic, and Mass Spectrometric Methods for the Analytical Characterization of Protein Biopharmaceuticals. Anal. Chem. 88 (1), 480-507 (2016).
- He, Y., et al. Analysis of identity, charge variants, and disulfide isomers of monoclonal antibodies with capillary zone electrophoresis in an uncoated capillary column. Anal. Chem. 82 (8), 3222-3230 (2010).
- He, Y., Isele, C., Hu, W., Ruesch, M. Rapid analysis of charge variants of monoclonal antibodies with capillary zone electrophoresis in dynamically coated fused-silica capillary. J. Sep. Sci. 34 (5), 548-555 (2011).
- Zhao, S. S., Chen, D. D. Y. Applications of capillary electrophoresis in characterizing recombinant protein therapeutics. Electrophoresis. 35 (1), 96-108 (2014).
- Štěpánová, S., Kašička, V. Determination of impurities and counterions of pharmaceuticals by capillary electromigration methods. J. Sep. Sci. 37 (15), 2039-2055 (2014).
- Štěpánová, S., Kašička, V. Recent applications of capillary electromigration methods to separation and analysis of proteins. Anal. Chim. Acta. 933, 23-42 (2016).
- Espinosa-de la Garza, C. E., et al. Analysis of recombinant monoclonal antibodies by capillary zone electrophoresis. Electrophoresis. 34 (8), 1133-1140 (2013).
- Staub, A., Guillarme, D., Schappler, J., Veuthey, J. L., Rudaz, S. Intact protein analysis in the biopharmaceutical field. J. Pharm. Biomed. Anal. 55 (4), 810-822 (2011).
- Altria, K. D. Troubleshooting. Methods in Molecular Biology, Vol 52. Capillary Electrophoresis Guidebook: Principles, Operation and Applications. Altria, K. D. , Chapter 10 (1996).
- Ma, S., Nashabeh, W. Analysis of protein therapeutics by capillary electrophoresis. Chromatographia. 53 (5), 75-89 (2001).
- Jaccoulet, E., Smadja, C., Prognon, P., Taverna, M. Capillary electrophoresis for rapid identification of monoclonal antibodies for routine application in hospital. Electrophoresis. 36 (17), 2050-2056 (2015).
