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बिस्तर बग के खिलाफ कीटनाशक प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए एक विधि है, Published: March 15, 2017 doi: 10.3791/55092

DOI

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Brittany E. Campbell¹, Dini M. Miller²

¹Department of Entomology and Nematology, University of Florida, ²Department of Entomology, Virginia Tech

Summary

कीटनाशक मूल्यांकन अक्सर वयस्क कीड़े, बजाय अपरिपक्व चरणों के खिलाफ लक्षित कर रहे हैं। यहाँ, हम पहले nymphal बिस्तर बग चरण के लिए एक तुलना के साथ बिस्तर बग अंडे के खिलाफ कीटनाशकों के मूल्यांकन के लिए एक प्रोटोकॉल उपस्थित थे। इन प्रोटोकॉल गैर वयस्क जीवन चरणों में कीटनाशक प्रभावकारिता का मूल्यांकन करने के लिए अन्य कीड़ों के लिए समायोजित किया जा सकता है।

Abstract

कीटों के खिलाफ कीटनाशकों के मानक विषाक्तता के मूल्यांकन के लिए मुख्य रूप से वयस्क कीड़ों पर आयोजित की जाती हैं। मूल्यांकन एक खुराक पर प्रतिक्रिया या एकाग्रता-प्रतिक्रिया की अवस्था है, जहां खुराक या एक कीटनाशक की एकाग्रता के रूप में मृत्यु दर बढ़ जाती है बढ़ जाती है पर आधारित हैं। स्टैंडर्ड घातक एकाग्रता (नियंत्रण रेखा ₅₀₎ और घातक खुराक (एलडी ₅₀₎ परीक्षण है कि एक परीक्षण की आबादी का 50% मृत्यु दर में परिणाम ऐसे अंडे और जल्दी instar या nymphal चरणों के रूप में गैर वयस्क कीट जीवन चरणों के खिलाफ कीटनाशकों, की विषाक्तता के मूल्यांकन के लिए चुनौतीपूर्ण हो सकता है । हालांकि, इस बारे में जानकारी है जो नियंत्रण और उपचार के प्रयासों को प्रभावित करता है सब बिस्तर बग जीवन चरणों में कीटनाशक प्रभावकारिता, समझने के लिए आवश्यक है। इस प्रोटोकॉल एक मानक सूई bioassay बिस्तर बग अंडे के लिए संशोधित और nymphal पहले instars के इलाज के लिए एक संपर्क कीटनाशी परख का उपयोग करता है। ये assays एक एकाग्रता प्रतिक्रिया वक्र आगे कीटनाशक मूल्यांकन के लिए नियंत्रण रेखा ₅₀ मूल्यों यों की उपज है।

Introduction

बिस्तर कीड़े एक महत्वपूर्ण शहरी कीट है कि खून की कमी, त्वचा irritations, अनिद्रा, अवसाद, चिंता और उनके मानव मेजबान टीम ^{^1,} ^{^2,} ^{^3,} ^{^4,} ^{^5,} ⁶ में कारण बन सकती हैं। को नष्ट करने और बिस्तर कीड़े को नियंत्रित करने की लागत अधिक होती है और अक्सर बार एक कीट नियंत्रण कंपनी ⁷ से एक घर में कई यात्राओं की आवश्यकता होती है। कई यात्राओं आम तौर पर बिस्तर कीड़े की गुप्त व्यवहार और उन्हें मारने के साथ जुड़े कठिनाइयों की वजह से आवश्यक हैं। विशेष रूप से, बिस्तर बग अंडे उनके छोटे आकार और खोल से भ्रूण के संरक्षण की वजह से नियंत्रित करने के लिए मुश्किल हो जाता है।

वर्तमान में, संयुक्त राज्य भर में कई कीट नियंत्रण कंपनियों के लिए एक आम बात एक रासायनिक कीटनाशक का उपयोग कर बिस्तर कीड़े के लिए एक घर का इलाज है। ये सब जानते हैंकि अंडे को नियंत्रित करने के लिए मुश्किल हो जाता है, तो कई कंपनियों को फिर से उपचार ^{8 के} लिए एक दो सप्ताह की समय सीमा को लागू किया है। इस बिस्तर बग अंडे हैच करने के लिए पर्याप्त समय की अनुमति देता है, ताकि पहले instar उभरने और कथित तौर पर कीटनाशकों के साथ मारने के लिए आसान हो जाएगा। हालांकि, वहाँ बिस्तर बग अंडे और पहली instars के खिलाफ तरल कीटनाशकों की प्रभावकारिता का मूल्यांकन अध्ययन में एक कमी नहीं है।

कीट अंडे, शहरी कीटों को नियंत्रित करने में सबसे कठिन जीवन स्तर, बिस्तर कीड़े के अलावा अन्य करने के लिए दर्ज किया गया है कई कृषि कीटों के अलावा। इन कठिनाइयों से अधिकांश, खोल के लिए जिम्मेदार ठहराया गया है, जबकि कुछ अध्ययनों कीटनाशक प्रतिरोध की सूचना है। अंडा चरण में प्रतिरोध ¹⁰ कैपिटिस Triatoma infestans ^9, Pediculus humanus में प्रलेखित किया गया है, Plutella xylostella ^11, Rhyzopertha डोमिनिका ^12, 13, और कई संग्रहित उत्पाद बीटल (यानी Oryzaephilus surinamensis, Tribolium castaneum, Cryptolestes ferrugineus और Rhyzopertha डोमिनिका)। ¹⁴ अंडे मंच और अपरिपक्व चरणों, साथ ही जटिलताओं खोल के माध्यम से कीटनाशक पैठ के साथ जुड़े में प्रतिरोध के विकास, इन जीवन चरणों के खिलाफ कीटनाशक प्रभावकारिता bioassays के लिए की आवश्यकता जरूरी है।

इस प्रोटोकॉल आम बिस्तर कीड़े के अंडे और पहली instar चरण में कीटनाशकों की प्रभावकारिता का निर्धारण करने के लिए एक कदम दर कदम प्रक्रिया प्रदान करता है, Cimex lectularius। इन प्रोटोकॉल के दोनों नियंत्रण रेखा ₅₀ मूल्यों की मात्रा का ठहराव अनुमति देने के लिए एकाग्रता प्रतिक्रिया assays हैं। एकाग्रता प्रतिक्रिया assays आमतौर पर, विषाक्तता अध्ययन के लिए इस्तेमाल किया जाता है लेकिन इस प्रोटोकॉल आसानी से बिस्तर बग अंडे और पहली instars के समूहों के इलाज के लिए अनुकूलित किया गया है। ये assays अनुकूलित किया जा सकताविभिन्न कीट प्रजातियों के अंडे और अपरिपक्व जीवन चरणों के लिए।

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Protocol

नोट: इस प्रोटोकॉल अलग बिस्तर बग अंडे और पहली instars के इलाज के लिए दो कीटनाशक assays भी शामिल है। दोनों प्रोटोकॉल एक ही कीटनाशकों का उपयोग किया गया है, तथापि, प्रोटोकॉल कीटनाशक प्रदर्शन को सुनिश्चित करने के लिए और आसानी से नमूनों में हेरफेर करने के लिए अनुकूलित किया जा सकता था।

1. अंडे की सूई कीटनाशक परख

एक कॉलोनी से mated, अच्छी तरह से खिलाया वयस्क महिला बिस्तर कीड़े खींचो और फिल्टर पेपर के साथ एक पेट्री डिश में महिलाओं (5-10) जगह है। यह सुनिश्चित करने के लिए कि वहाँ कीटनाशक परख के लिए पर्याप्त अंडे होगा कम से कम दस प्रतिकृति है। तो देखने के लिए महिलाओं को हर दिन अंडे रखी है की जाँच करें।
1. एक बार जब वे अंडे देते हैं, पेट्री डिश (6 सेमी × 5 सेमी) के बाहर महिलाओं लेते हैं और दैनिक एक नया फिल्टर पेपर के साथ नई पेट्री डिश में डाल दिया और पुराने और नए पेट्री डिश पर तारीख रिकॉर्ड है।
2. परख शुरू करने से पहले 5 दिनों के लिए 4 साल की उम्र के लिए अंडे की अनुमति दें। भ्रूण के विकास के दौरान कीटनाशकों परिवर्तन के लिए संवेदनशीलता, एसओ यह अंडा उम्र के लिए नियंत्रित करने के लिए महत्वपूर्ण है। डी फोटो पीरियड, 60% आरएच, और 27 डिग्री सेल्सियस: 12:12 एल पर सब जीवन के चरणों पकड़ो।
एक बार अंडे को उचित आयु वर्ग के हैं, मुलायम की नोक संदंश का उपयोग फिल्टर कागजात से धीरे बिस्तर बग अंडे को हटा दें। धीरे अंडा फिल्टर पेपर संदंश का उपयोग करने के लिए संलग्न के नीचे परिमार्जन और फिर धीरे से फेंकने बिस्तर बग अंडे को सीमित करने का अंडा पर ज्यादा दबाव लागू करने के बिना हड़पने।
हटा बिस्तर बग अंडे प्लास्टिक पेट्री डिश के अंदर उनके संबंधित समूहों में रखें। एक फ़ैब्रिक सॉफ़्नर पत्र के साथ बाहर की दुनिया में प्रत्येक पेट्री डिश के नीचे रगड़ से बिस्तर बग अंडे टूट पड़नेवाला से स्थैतिक बिजली सीमित करें। बिस्तर बग अंडे की दावत समूह (समूह प्रति 5-10 अंडे) सभी को एक बार। एक समूह को दोहराने पर विचार करें और कम से कम पांच (या अधिक) का उपयोग इस परख के लिए दोहराता है।
5 अलग अलग सांद्रता (की एक श्रृंखला पाने के लिए कीटनाशकों के धारावाहिक dilutions तैयार 0.21-21 μL / एमएल imidacloprid (0.1%) / β-cyfluthrin (0.5%) और एक नियंत्रण के लिएविलायक (पानी के नल) के साथ समाधान केवल। प्रत्येक एकाग्रता की 20 मिलीलीटर की सूई परख के लिए पर्याप्त मात्रा में है।
35 एमएल लाइन में कटौती सेंट्रीफ्यूज ट्यूब (50 एमएल) मध्यवर्ती एक कट ऑफ पहिया सहायक के साथ एक रोटरी उपकरण का उपयोग करने के लिए और फिर अपकेंद्रित्र ट्यूब (व्यास = 2.54 सेमी) एक एल्यूमीनियम के साथ एक ही रोटरी उपकरण का उपयोग करने की टोपी में एक छेद में कटौती ऑक्साइड पत्थर गौण पीस। टोपी के किनारे पर 5 सेमी छोड़ दें, जब काटने इतना है कि टोपी सुरक्षित ट्यूब (चित्रा 1) में पेंच होगा।
पर्याप्त लार्ज कैप में फिट करने के लिए वर्गों में ठीक जाल कट (~ ^{2 से} 5 सेमी)। कसकर जाल भाड़ में, किसी भी समान को नष्ट करने, अपकेंद्रित्र ट्यूब टोपी का उपयोग अपकेंद्रित्र ट्यूबों में।
एक (एक दोहराने) बिस्तर बग अंडे के समूह के एक पेंट ब्रश का उपयोग अपकेंद्रित्र ट्यूब के अंदर जाल पर रखें। 5 सेकंड के लिए एक कीटनाशक एकाग्रता में कटौती अपकेंद्रित्र ट्यूब के अंदर बिस्तर कीड़े के समूह डुबकी।
अपकेंद्रित्र ट्यूब वें से बाहर हटायेई कीटनाशक समाधान। अंदर एक प्रयोगशाला ऊतक पर सीधे अपकेंद्रित्र ट्यूब रखकर अंडे के साथ जाल सूखी।
एक छोटी सी, ठीक-बाल खड़े पेंट ब्रश का उपयोग अपकेंद्रित्र ट्यूब के बाहर अंडे के समूह निकालें और उन्हें एक साफ फिल्टर पेपर के साथ एक साफ पेट्री डिश में रखें।
रिकार्ड अंडा मृत्यु दर 14 दिनों के लिए सभी अंडे सुनिश्चित करने के लिए (पक्षियों के बच्चे विफलता) पक्षियों के बच्चे के लिए पर्याप्त समय दिया है।
एबट के सूत्र (-% नियंत्रण मृत्यु दर / 100 - नियंत्रण मृत्यु दर x 100% का परीक्षण मृत्यु दर) का उपयोग नियंत्रण उपचार में मृत्यु दर के लिए सही है।
विश्लेषण सॉफ्टवेयर ¹⁵ में इसी सांद्रता के साथ दर्ज की मृत्यु दर डालें नियंत्रण रेखा ₅₀ मूल्यों की गणना करने के लिए।

2. पहले Instar कीटनाशक परख

अच्छी तरह से खिलाया बिस्तर कीड़े (5 वयस्क पुरुषों और 5 वयस्क महिलाओं) के एक समूह को अलग करें, अधिमानतः 1 दिन पहले खिलाया, और उन्हें मतीन के लिए प्रदान की एक पेट्री डिश (6 सेमी × 5 सेमी) फिल्टर पेपर के साथ में जगहजी और अंडे बिछाने। वयस्क बिस्तर कीड़े दोस्त और लगभग 7-9 दिनों के लिए अंडे देना करने की अनुमति दें। भोजन के लिए, एक कृत्रिम खिला प्रणाली है कि कांच रक्त नलियों ¹⁶ के आस-पास में गर्म पानी circulates का उपयोग करें। इस अध्ययन के लिए, defibronated खरगोश रक्त का उपयोग करें।
पेट्री डिश से वयस्कों (× 5 सेमी 6 सेमी) निकालें और अंडे पेट्री डिश के भीतर पहले instars में पक्षियों के बच्चे के लिए अनुमति देते हैं। यह लगभग 7-9 दिन लगते हैं बिस्तर बग अंडे कमरे के तापमान पर पक्षियों के बच्चे के लिए।
एक ही उम्र के एक पेंट ब्रश का उपयोग करने का भूखा पहले instars लीजिए। उम्र दैनिक दिन वे रची पहले instars को दूर करने और रिकॉर्डिंग के द्वारा निर्धारित किया जा सकता है। उन्हें कीटनाशक परख जब तक नया, साफ पेट्री डिश में रखें। सबसे पहले instar देवियां तो कीटनाशक परख के रूप में जल्द से जल्द पूरा किया जाना चाहिए, बहुत अवशोषक प्रतिरोधी नहीं हैं।
परख के लिए, 5 अलग अलग सांद्रता और एक नियंत्रण समाधान की एक सीमा प्राप्त करने imidacloprid / β-cyfluthrin के धारावाहिक dilutions तैयारविलायक के साथ ही tion। संयुक्त राज्य अमेरिका में बिस्तर बग नियंत्रण के लिए लेबल तैयार उत्पादों इन अध्ययनों के लिए इस्तेमाल किया गया है, इसलिए विलायक पानी (लेबल के अनुसार) था।
पिपेट प्रत्येक कीटनाशक एकाग्रता और व्यक्तिगत फिल्टर कागजात पर नियंत्रण समूह के लिए पानी की 150 μL aliquots (# 1, 4.2 सेमी व्यास)। पूरे फिल्टर पेपर पूरे बढ़त और फिल्टर पेपर के केंद्र के चारों ओर बूंदों को लागू करने से pipetter का उपयोग करने पर कीटनाशक बांटो।
व्यक्तिगत हार्डबोर्ड पैनलों (7 सेमी ²⁾ के शीर्ष पर व्यक्तिगत रूप से इलाज फिल्टर कागजात रखें।
पहले instars की रिहाई के समूह (5 से 10 प्रति समूह के लिए) अलग-अलग फिल्टर कागजात, जबकि अभी भी कीटनाशक के साथ गीला और एक पेट्री डिश के एक औंधा नीचे के साथ पहली instars कवर पर।
इलाज सतह भागने से पहले instar बिस्तर कीड़े को रोकने के लिए पेट्री डिश के शीर्ष पर एक वजन रखें।
सभी के लिए 24 घंटे के प्रदर्शन के बाद पहली instar बिस्तर कीड़े के रिकार्ड मृत्यु दरकीटनाशक सांद्रता।
एबट के सूत्र (-% नियंत्रण मृत्यु दर / 100 - नियंत्रण मृत्यु दर x 100% का परीक्षण मृत्यु दर) का उपयोग नियंत्रण उपचार में मृत्यु दर के लिए सही है।
विश्लेषण सॉफ्टवेयर ¹⁵ में दर्ज की मृत्यु दर और सांद्रता डालें नियंत्रण रेखा ₅₀ मूल्यों की गणना करने के लिए।

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Representative Results

अंडे imidacloprid / β-cyfluthrin के 5 विभिन्न सांद्रता (μL / एमएल) में डूबा रहे थे। पहले instars imidacloprid / β-cyfluthrin के पाँच विभिन्न सांद्रता (चित्रा 2) के इलाज सतहों पर रखा गया था।

Harlan, रिचमंड, और महाकाव्य केंद्र (तालिका 1): हम सी lectularius के तीन अलग अलग आबादियों का इस्तेमाल किया। Harlan तनाव pyrethroid कीटनाशकों की संभावना है और डॉ हेरोल्ड Harlan से 2005 में अधिग्रहण कर लिया था। रिचमंड और महाकाव्य केंद्र उपभेदों दोनों Deltamethrin लिए प्रतिरोधी रहे हैं। रिचमंड तनाव में 2008 महाकाव्य केंद्र तनाव रिकमंड, VA में एक बुजुर्ग समूह के घर से एकत्र किया गया था ओह सिनसिनाटी में 2008 में एकत्र किया गया था।

उच्चतर नियंत्रण रेखा ₅₀ मूल्यों संकेत दिया है कि एक उच्च एकाग्रता के 50% को मारने के लिए आवश्यक थारिचमंड और महाकाव्य केंद्र तनाव से परीक्षण आबादी अंडे। अंडे के लिए इसी प्रकार, रिचमंड और महाकाव्य केंद्र आबादी से पहले instars परीक्षण आबादी का 50% को मारने के लिए कीटनाशक के उच्च सांद्रता की आवश्यकता है। नियंत्रण रेखा ₅₀ मूल्यों विभिन्न पत्र के द्वारा पीछा काफी अलग हैं।

आकृति 1
चित्रा 1. संशोधित अपकेंद्रित्र ट्यूब की तस्वीर। एक छेद, टोपी में कटौती की गई है, ताकि जाल का एक चौकोर टुकड़ा टोपी में खराब कर दिया जा सकता है। जाल टुकड़े खारिज कर दिया और जब विभिन्न कीटनाशकों का उपयोग कर बदला जा सकता है। बिस्तर बग अंडे एक पेंट ब्रश का उपयोग कर जाल पर सीधे रखा और सूई परख के लिए कीटनाशक समाधान में तो डूबे हुए हैं। इस figur का एक बड़ा संस्करण देखने के लिए यहां क्लिक करेंई।

चित्र 2
चित्रा 2 एक खुराक पर प्रतिक्रिया ग्राफ का प्रतिनिधित्व। imidacloprid / β-cyfluthrin प्रतिशत प्रतिक्रिया (मृत्यु) Harlan तनाव बिस्तर बग अंडे के y अक्ष और उस बिस्तर कीड़े के लिए एक्स अक्ष पर प्रतिनिधित्व किया है अवगत कराया गया लॉग एकाग्रता पर साजिश रची है। अंडे की मृत्यु दर में वृद्धि हुई है के रूप में खुराक में वृद्धि हुई है और मृत्यु दर सबसे अधिक एकाग्रता का परीक्षण पर 100% पर पहुंच गया।

लाइफ स्टेज / तनाव	n	नियंत्रण रेखा _{से 50} (95% सीआई)	ढाल ± एसई	एक्स ² (डीएफ)
अंडे
Harlan	250	0.41a ( 0.276-.548)	1.86 ± 0.24	33.42 (23)
रिचमंड	320	1.23b (0.59-2.10)	1.13 ± 0.14	82.57 (30)
महाकाव्य केंद्र	400	2.10b (1.049-4.587)	0.95 ± 0.10	149.91 (38)
सबसे पहले instars
Harlan	150	0.04a (0.030-.063)	2.16 ± 0.34	38.17 (28)
रिचमंड	195	4.81b (1.94-10.26)	0.66 ± 0.12	45.87 (37)
महाकाव्य केंद्र	190	19.72b (8.18-184.48)	0.75 ± 0.17	45.39 (36)

"> तालिका 1 बिस्तर बग अंडा और पहली instar नियंत्रण रेखा ₅₀ मूल्यों कैम्पबेल और मिलर 2015 ¹³ से संशोधित की तुलना।

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Disclosures

लेखकों के पास खुलासे के लिए कुछ भी नहीं है।

Acknowledgments

हम कमजोर पड़ने और कीटनाशक तैयार करने के लिए सहायता मौली दृढ़ धन्यवाद। हम यह भी प्रायोगिक डिजाइन के साथ सहायता के लिए PROBIT विश्लेषण मार्गदर्शन के लिए ट्रॉय एंडरसन और जाकारी Adelman धन्यवाद। इस शोध आंशिक रूप से एक Entomological फाउंडेशन पुरस्कार से और वर्जीनिया कीट प्रबंधन छात्रवृत्ति धन के द्वारा समर्थित किया गया था।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Petri dishes	Fisher Scientific Inc.	08-757-105	Plastic
Filter paper	Whatman	1001-042
Featherweight forceps	Fisher Scientific Inc.	4750
Temprid SC (imidacloprid/bifenthrin)	Bayer CropScience
Transport GHP (acetamiprid/bifenthrin)	FMC Corp.
Centrifuge tube		06-443-18	50 mL; flat-top threaded
Fine mesh		7250C
KimWipe		06-666A	11 cm x 21 cm
Small paint brush			Any small paint brush
Hardboard panels			Composite wood or tile would be sufficient from a home improvement store
Metal weights			Any type of metal screw that will hold the weight of the Petri dish down onto a surface