Summary
살충제의 평가는 종종 성인 곤충보다는 미성숙 단계에 대해 목표로하고 있습니다. 여기, 우리는 첫 번째 nymphal 침대 버그 단계에 대한 비교와 함께 침대 버그 계란에 대한 살충제를 평가하기위한 프로토콜을 제시한다. 이러한 프로토콜은 비 성인의 삶의 단계에서 살충제의 효능을 평가하기 위해 다른 곤충에 따라 조정 될 수있다.
Abstract
해충에 대한 살충제의 표준 독성 평가는 주로 성인 곤충에 실시하고 있습니다. 평가는 용량 또는 살충제의 농도 증가 사망률 증가 용량 - 반응 또는 농도 - 반응 곡선에 기초한다. 표준 치사 농도 (LC 50)과 치사량 (LD 50) 테스트 인구의 50 %의 사망률을 초래할 테스트는 계란과 조기 령 또는 nymphal 단계와 같은 비 성인 곤충 생활 단계에 대한 살충제의 독성을 평가하기 위해 도전 할 수있다 . 그러나이 정보는 제어 및 치료 노력에 영향을 미치는 모든 침대 버그 삶의 단계에서 살충제의 효과를 이해하는 데 필수적이다. 이 프로토콜은 침대 버그 계란에 대한 수정 된 표준 찍기 생물 검정 및 nymphal 첫 번째 령충 치료에 대한 연락처 살충 분석을 사용합니다. 이러한 분석은 또한 살충제 평가를 위해 50 LC 값을 정량화하는 농도 - 반응 곡선을 생성한다.
Introduction
빈대는 인간 호스트 1, 2, 3, 4, 5, 6에서 혈액 손실, 피부 자극, 불면증, 우울증, 불안을 일으킬 수있는 중요한 도시 해충이다. 침대 버그를 제거하고 제어하는 비용은 높은 종종 시간은 해충 방제 회사 (7)에 의해 집에 여러 개의 방문이 필요합니다. 여러 방문은 보통 때문에 침대 버그의 비밀 행동을 죽이는과 관련된 어려움 필요합니다. 특히, 침대 벌레 알은 그들의 작은 크기와 껍질로 태아 보호의 제어가 곤란하다.
현재 미국 전역의 많은 해충 방제 기업에 대한 일반적인 관행은 화학 살충제를 사용하여 침대 버그에 대한 가정을 치료하는 것입니다. 이것은 잘 알려져계란을 제어하기 어려운 것으로, 많은 회사들은 재 치료 8 2 주 기간을 구현 하였다. 첫 번째 령이 등장하고 소문 살충제로 죽일 쉽게 될 수 있도록이 침대 버그 달걀을 부화 할 수있는 충분한 시간이 있습니다. 그러나, 침대 버그 계란, 첫 번째 령충에 대한 액체 살충제의 효능을 평가하는 연구의 부족이있다.
곤충 계란 많은 농업 해충 이외에 빈대 이외 도시 해충으로 제어 할 수있는 가장 어려운 수명 단계로 설명되었다. 몇 가지 연구가 살충제 저항성을보고하면서 이러한 어려움의 대부분은 껍질에 기인하고있다. 계란 단계에서 저항, 배추 11 xylostella, 10 capitis Triatoma의 infestans 9 Pediculus humanus에 Rhyzopertha의 도미니카 (12)를 기록하고있다
이 프로토콜은 일반적인 침대 버그의 계란과 첫 번째 령 단계에서 살충제의 효과를 결정하기위한 단계별 절차를 제공하고, CIMEX는 lectularius. 이들 프로토콜 모두는 LC (50) 값의 정량화를 허용하는 농도 - 반응 분석이다. 농도 - 반응 분석은 일반적으로 그러나이 프로토콜은 쉽게 베드 버그 계란, 첫 번째 령충 그룹을 치료에 적용되어, 독성 연구에 사용됩니다. 이러한 분석은 적용 할 수있다다양한 곤충 종의 계란과 미성숙 한 삶의 단계에 대한.
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Protocol
참고 :이 프로토콜은 별도로 침대 버그 계란과 첫 령충을 치료하기위한 두 개의 살충제 분석을 포함한다. 두 프로토콜은 동일한 살충제를 사용하여 수행 하였다 그러나, 프로토콜은 살충제 노출을 보장하기 용이 시료를 조작하도록 구성 할 수 있었다.
1. 계란 디핑 살충제 분석
- 식민지에서 성관계를 잘 자란 성인 여성 침대 버그를 잡아 당겨 필터 종이 페트리 접시로 여성 (5-10)를 배치합니다. 살충제 분석을위한 충분한 계란이 될 수 있도록하기 위해 적어도 10 복제가 있습니다. 암컷 매일 계란을 마련했다 있는지 확인합니다.
- 그들이 알을 낳는되면, 페트리 접시 (6cm × 5cm)에서 암컷을 매일 새 필터 종이 새로운 배양 접시에 넣어 및 이전 및 새로운 배양 접시에 날짜를 기록.
- 분석을 시작하기 전에 오일에 4 세에 계란을 허용합니다. 배아 개발하는 동안 살충제의 변화에 대한 민감도는이야오 계란 나이를 통제하는 것이 중요하다. D의 광주, 60 % RH, 27 ° C : 12시 12분 L 모든 삶의 단계를 잡으십시오.
- 계란이 적절하게 숙성 한 후, 소프트 - 팁 집게를 사용하여 필터 논문에서 조심스럽게 침대 버그 알을 제거합니다. 부드럽게 집게를 사용하여 여과지에 부착 된 계란의 바닥을 긁어 부드럽게 던지고 침대 벌레 알을 제한하기 위해 계란 많은 압력을 가하지 않고 잡아.
- 내부 플라스틱 배양 접시의 각각의 그룹으로 제거 침대 버그 알을 놓습니다. 직물 연화제 시트와 외부에 각각 페트리 접시의 바닥을 문질러 침대 버그 계란 마리의 정전기를 제한합니다. 한 번에 침대 버그 계란의 치료 그룹 (그룹당 5 ~ 10 알). 한 그룹에게 복제를 고려하고이 분석을위한 복제 적어도 다섯 개 (또는 그 이상)를 사용합니다.
- 5 가지 농도 (의 범위를 얻기 위해 살충제의 연속 희석을 준비 0.21-21 μL / mL의 이미다클로 프리드 (0.1 %) / β-cyfluthrin (0.5 %) 및 제어를위한용제 (수돗물)와 솔루션 만. 침지 분석을위한 충분한 볼륨을 각 농도의 20 ㎖를 확인합니다.
- 35 mL의 회선 절단 원심 분리 튜브 (50 mL)의 내측 차단 휠 액세서리와 회전 공구를 사용하고 원심 분리 튜브 (직경 = 2.54 cm)는 알루미늄과 같은 회전 공구를 사용하여 뚜껑에 구멍을 잘라 산화 돌 액세서리를 연마. 캡 안전하게 튜브 (도 1)에 나사되도록 절단 할 때, 캡의 가장자리에 5cm 남기기.
- 캡에 맞게 충분히 큰 사각형으로 미세 메쉬 컷 (~ 5cm 2). 원심 분리 튜브의 캡을 사용하여 원심 분리기 튜브에 어떠한 충돌을 제거 단단히 메쉬 스크류.
- 원심 분리기 튜브의 내부에 메쉬에 페인트 브러시를 사용하여 침대 버그 계란의 그룹 (하나의 복제)를 놓습니다. 5 초 동안 살충제 농도로 절단 원심 분리기 튜브의 내부에 침대 버그의 그룹을 찍어.
- 일에서 원심 분리기 튜브를 제거전자 살충제 솔루션입니다. 내부 기관 조직에 직접 원심 관을 배치하여 계란 메쉬를 건조.
- 작은 미세 강모 페인트 브러시를 사용하여 원심 분리 관에서 계란의 그룹을 제거하고 깨끗한 종이 필터와 깨끗한 페트리 접시에 배치합니다.
- 기록 달걀 사망률 모든 계란을 보장하기 위해 14 일 동안 (부화 실패는) 부화 할 수있는 충분한 시간이 있었다.
- 애보트의 식 (- % 제어 사망 / 100 - 제어 사망률 × 100 % 테스트 사망률)를 사용하여 제어 치료 사망률에 대한 올바른.
- LC (50) 값을 계산하는 분석 소프트웨어 (15)에 대응하는 농도 기록 사망률을 삽입합니다.
2. 먼저 탈피 살충제 분석
- 바람직하게는 1 일전 공급, 잘 공급 침대 버그 (5 성인 남성 5 성인 여성)의 그룹을 분리하고, MATIN 제공 여과지와 페트리 접시 (6cm × 5cm)로 배치g, 계란 누워. 성인 침대 버그가 짝을 약 7-9일에 대한 알을 낳기 할 수 있습니다. 수유, 혈액 (16)을 둘러싸는 유리관에 온수를 순환 인공 공급 시스템을 사용한다. 이 연구를 위해, defibronated 토끼의 혈액을 사용합니다.
- 페트리 접시에서 성인 (5cm × 6cm)를 제거하고 계란이 배양 접시 내에서 첫 번째 령충에 부화 할 수 있습니다. 침대 버그 계란은 실온에서 부화하는 것은 약 7-9일 소요됩니다.
- 페인트 브러시를 사용하여 같은 나이의 unfed 첫 번째 령충를 수집합니다. 연령은 빗금 하루 매일 제 령기를 제거하고 기록함으로써 결정될 수있다. 살충제 분석까지 새로운, 깨끗한 페트리 접시에 배치합니다. 살충제 분석이 가능한 한 빨리 완료해야하므로 먼저 령 약충은, 저항하는 매우 건조하지 않습니다.
- 분석을 위해, 5 가지 농도 및 제어 SOLU의 범위를 얻을 이미다클로 / β-cyfluthrin의 희석액을 제조용매 만에 기. 미국에서 베드 버그 제어 표지 배합 제품에 따라서 용매 (라벨에 따라) 물이고, 이러한 연구에 사용되었다.
- 피펫 개별 여과지 상 대조군에 대한 각 살충제 농도 및 물 150 μL 씩 (# 1; 4.2 cm 직경). 여과지의 전체 가장자리와 중심을 적을 적용하여 피펫을 사용하여 전체 여과지 위에 살충제 배포.
- 개별 널빤지 패널 (7cm 2)의 상부에 개별적으로 처리 필터 종이를 놓습니다.
- 반면 여전히 살충제와 습식 및 페트리 접시의 반전 바닥 첫 번째 령충을 커버 개별 여과지 위에 첫 번째 령충의 릴리스 그룹 (그룹당 10-5).
- 처리 된 표면을 탈출 첫 번째 령 침대 버그를 방지하기 위해 페트리 접시 위에 무게를 놓습니다.
- 모두 24 시간 노출 후 처음 령 침대 버그의 기록 사망살충제 농도.
- 애보트의 식 (- % 제어 사망 / 100 - 제어 사망률 × 100 % 테스트 사망률)를 사용하여 제어 치료 사망률에 대한 올바른.
- LC (50) 값을 계산하는 분석 소프트웨어 (15)에 기록 사망률과 농도를 넣습니다.
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Representative Results
계란은 이미다클로 프리드 / β-cyfluthrin의 5 가지 농도 (μL / ㎖)로 감소 하였다. 첫 번째 령충은 이미다클로 프리드 / β-cyfluthrin의 다섯 가지 농도 (그림 2)의 처리 표면에 배치했다.
할란, 리치몬드, 에픽 센터 (표 1) : 우리는 C. lectularius의 세 가지 다른 집단을 사용했다. 할란 변형은 피레스 로이드 계 살충제에 민감 박사 해롤드 할란에서 2005 년에 인수되었다. 리치몬드와 에픽 센터 균주는 델타 메트 린에 강한 상표입니다. 리치몬드 균주는 2008 년 에픽 센터 균주에서 리치몬드, 버지니아에서 노인 그룹 홈에서 수집되었다 OH, 신시내티에서 2008 년에 수집 하였다.
LC 50 높은 값은 더 높은 농도의 50 %를 죽이는 데 필요한 것을 지시리치몬드와 에픽 센터 균주에서 테스트 인구 계란입니다. 계란과 유사하게, 리치몬드와 에픽 센터 인구의 첫 번째 령충은 테스트 인구의 50 %를 죽이는 살충제의 높은 농도 필요합니다. 다른 문자 다음에 LC (50) 값은 크게 다르다.
변형 된 원심 분리 튜브 1. 사진도. 메쉬의 사각형 조각 뚜껑에 나사 결합 될 수 있도록 홀이 캡으로 절단되었다. 메쉬 편 파기 다른 살충제를 사용할 때 교체 될 수있다. 침대 버그 계란 침지 분석에 대한 살충제 솔루션에 페인트 브러시를 사용하여 메시에 직접 배치하고 침수된다. 이 figur의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오이자형.
용량 - 반응 그래프 2. 표현한 도표. 이미다클로 프리드 / β-cyfluthrin에 할란 균주 침대 벌레 계란 백분율 응답 (사망률)은 Y 축과 빈대는 x 축 상에 표현되는 노출되었다고 로그 농도에 도시된다. 용량이 증가하고 사망률이 시험에서 가장 높은 농도에서 100 %에 도달로 계란 사망률은 증가했다.
| 라이프 스테이지 / 스트레인 | 엔 | LC (50) (95 % CI) | 경사 ± SE | X 2 (DF) | |
| 달걀 | |||||
| 할란 | (250) | 0.41a ( 0.276-0.548) | 1.86 ± 0.24 | 33.42 (23) | |
| 리치몬드 | (320) | 1.23b (0.59-2.10) | 1.13 ± 0.14 | 82.57 (30) | |
| 에픽 센터 | (400) | 2.10b (1.049-4.587) | 0.95 ± 0.10 | 149.91 (38) | |
| 먼저 령충 | |||||
| 할란 | (150) | 0.04a (0.030-0.063) | 2.16 ± 0.34 | 38.17 (28) | |
| 리치몬드 | 195 | 4.81b (1.94-10.26) | 0.66 ± 0.12 | 45.87 (37) | |
| 에픽 센터 | (190) | 19.72b (8.18-184.48) | 0.75 ± 0.17 | 45.39 (36) | |
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Disclosures
저자는 공개 아무것도 없어.
Acknowledgments
우리는 희석 및 농약 제형 지원 몰리 굳게 감사합니다. 우리는 또한 실험 설계에 도움을 프로 빗 분석 지침 트로이 앤더슨과 재커리 아델 감사합니다. 이 연구는 부분적으로 곤충학 재단 상으로 버지니아 해충 관리 장학금 기금에 의해 지원되었다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Petri dishes | Fisher Scientific Inc. | 08-757-105 | Plastic |
| Filter paper | Whatman | 1001-042 | |
| Featherweight forceps | Fisher Scientific Inc. | 4750 | |
| Temprid SC (imidacloprid/bifenthrin) | Bayer CropScience | ||
| Transport GHP (acetamiprid/bifenthrin) | FMC Corp. | ||
| Centrifuge tube | 06-443-18 | 50 mL; flat-top threaded | |
| Fine mesh | 7250C | ||
| KimWipe | 06-666A | 11 cm x 21 cm | |
| Small paint brush | Any small paint brush | ||
| Hardboard panels | Composite wood or tile would be sufficient from a home improvement store | ||
| Metal weights | Any type of metal screw that will hold the weight of the Petri dish down onto a surface |
References
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