Summary
Vi udviklede en horisontal skive forberedelse af et voksent pattedyr nethinden med planet for sektionering parallelt retinaoverfladen. Dendritiske områder nonradially orienterede retinale neuroner blev ikke afkortet, så studiet af signalbehandling med patch-clamp og billedbehandling teknikker.
Abstract
Lodrette slice præparater er veletablerede til at studere kredsløb og signal transmission i et voksent pattedyr nethinden. Planet af sektionering i disse præparater er vinkelret på den retinale overflade, hvilket gør den ideel til studiet af radialt orienterede neuroner som fotoreceptorer og bipolære celler. Men den store dendritiske dorne af vandrette celler, wide-field amacrine celler og ganglieceller er for det meste trunkeret, efterlader markant reduceret synaptisk aktivitet i disse celler. Henviser ganglieceller og fordrevne amacrine celler kan undersøges i en hel-monteret fremstilling af nethinden, horisontale celler og amacrine celler placeret i den indre nukleare lag kun er dårligt tilgængelige for elektroder i hele retina væv.
For at opnå maksimal tilgængelighed og synaptisk integritet, vi udviklet en horisontal skive forberedelse af musen nethinden, og studerede signal transmission ved synapsen mellem fotoreceptorer og horisontalceller. Vandret sektionering tillader (1) let og entydig visuel identifikation af horisontale celle organer for elektrode målretning, og (2) bevarelse af de udvidede horisontale celle dendritiske felter, som en forudsætning for intakt og funktionel kegle synaptiske input til vandrette celle dendritter.
Vandrette celler fra horisontale skiver udstillet tonic synaptisk aktivitet i mørket, og de svarede at orientere lysglimt med en reduktion af indadgående strøm og formindsket synaptisk aktivitet. Immuncytokemisk evidens for, at næsten alle kegler inden den dendritiske område en horisontal celle etablere synapser med sine perifere dendritter. Den horisontale forberedelse skive er derfor velegnet til at studere de fysiologiske egenskaber af horisontalt udvidede retinale neuroner samt sensorisk signaltransmission og integration på tværs af udvalgte synapser.
Introduction
Visuel information er kodet som en dynamisk spatio-temporale mønster af fotoreceptor-aktivering, og båndet synapse mellem fotoreceptorer og anden ordens neuroner bestemmer nedstrøms overførsel af visuel information. Den lodrette skive forberedelse af den mammale nethinden er et meget værdifuldt værktøj til at studere signalbehandling i lodrette veje, dvs. mellem fotoreceptorer og bipolære celler, og mellem bipolære celler og nogle typer af amacrine celle 1, 2, 3, 4.
Imidlertid vertikal skæring forårsager altid alvorlig trunkering af de dendritiske områderne mange retinale neuroner, hvilket fører til betydelige tab af synaptiske kontakter. Især i den ydre nethinde, er vandrette celler påvirkes på grund af deres sideværts spredt udvidede dendritiske marker og Axon terminalsystemer 5. I en lodretskive forberedelse, den synaptiske input af hundredvis af kegle fotoreceptor terminaler til dendritter af horisontal celle reduceres således til et par sparsomme kontakter. Dette kan være tilstrækkeligt at studere egenskaberne af de enkelte synapser, men det betyder på ingen måde repræsenterer signal databehandling ligger til grund for synkroniseret aktivering af fotoreceptor bånd synapser.
Vi udviklede derfor en horisontal skive præparat, der efterlader næsten hele keglen fotoreceptor synaptiske input til horisontale celle dendritter intakt og funktionel. Planet af sektionering løber parallelt med overfladen af nethinden, ideelt skærer gennem det indre nukleare lag mellem horisontale celler og amacrine celler. Således er vandrette skiver af den ydre nethinde skabt et indhold på præsynaptiske sted, fotoreceptorer med indre og ydre segmenter samt synaptiske terminaler og horisontale celler og bipolære celler på den postsynaptiske site. Dette præparat er velegnet to undersøge koordinerede synaptiske input i vandrette celle dendritter af alle kegle fotoreceptorer inden for sit dendritiske felt. Det således kan vise sig nyttigt at bedre at forstå funktionen af fotoreceptor bånd synapse, som er afgørende for overførsel af visuel information fra matrix af fotoreceptor aktivering i en postsynaptiske respons.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Alle procedurer blev udført i overensstemmelse med retningslinjerne for dyreforsøg udstedt af Forbundsrepublikken Tyskland.
BEMÆRK: Da den retinale væv vil være blottet for ilt under langvarige dele af denne procedure, bør gennemføres alle trin ud så hurtigt som muligt. Mus skal være mørk-tilpasset mindst 3 timer før dissektion. For at undgå lys tilpasning af nethinden, forberedelse og opskæring skal udføres under svagt rødt lys.
1. Fremstilling af medierne og andre kemikalier
- Forbered Ames 'Medium 6. Efter dissektion, fordybe retinal væv i Ames 'Medium på alle tidspunkter.
- Opløs 2,2 g Ames 'Medium og 298 mg HEPES i 250 ml destilleret vand. Koncentrationen af HEPES vil være 5 mM. Der omrøres forsigtigt, indtil alle partikler er opløst.
- Bubble Ames 'medium ved stuetemperatur med carbogen (95% oxygen, 5% bildioxid) i mindst 5 min. Supply carbogen med et glas Pasteur pipette til opløsningen. Tilslut Pasteur pipette via passende rør til udløbet af gassen regulator.
- Tilføj 475 mg natrium-bicarbonat til opløsningen. Tilsætningen af bicarbonat efter boblende forhindrer udfældning af calciumcarbonat.
- Forbered lav geleringstemperatur agarose. Agarose er nødvendig for indlejring af retinal væv under vibratome sektionering.
- Opløs 180 mg agarose i 9 ml Ames 'Medium og 1 ml destilleret vand. Brug en mikrobølgeovn til langsomt opvarme agarose-opløsning, indtil alle faststoffer er opløst. Varme i 5 - 10 trin sek for at undgå overløb. Opløsningen skal være klar og gennemsigtig.
- Store opløst agarose i vandbad ved 37 ° C for varighed af proceduren.
2. Opsætning af Vibratome
BEMÆRK: Alle sektionering er udført medvibratome opført i Materials Tabel. De angivne indstillinger henvise til denne type kun vibratome. For yderligere oplysninger om vibratome sektionering af nervevæv henvises til referere 7.
- Placer vibratome injektor klinge i knivholderen.
- Mål lodret afbøjning af bladet med "VibroCheck" enhed. Brug justeringsskruen på klingeholderen at vippe bladet, indtil den er parallel med skæreplanet. Den nøjagtige positionering af bladet er nødvendigt at forhindre persienner virkninger på sektionens overflade og at frembringe en flad sektion, som indeholder levende celler på overfladen.
- Indstil vibratome til følgende indstillinger: amplitude, 1,00; hastighed, 0,20; tykkelse, 180 - 200 um.
3. Dissektion af mus Retina
- Bedøve voksen C57BL / 6 mus ved fordampning på ca. 1 ml isofluran i en lufttæt beholder. Når anæstesi er færdig, aflive dyr ved cervikal dislokation. Detmus bør ikke være ældre end 3 måneder, ellers kvaliteten af skiverne vil blive forringet.
- Fjern øjet bold ved at placere en krum pincet under øjet. Forsigtigt løfte øjet bolden vil afsløre synsnerven. Skær synsnerven med en fjeder saks og overføre øjet bolden til en 35 mm petriskål indeholdende 2 ml Ames 'Medium.
- Udfør alle efterfølgende trin på scenen af et stereo mikroskop. Juster forstørrelsen til en værdi, der giver optimal visuel kontrol af følgende procedurer (trin 3,4-3,9).
- Punktere hornhinden ved overgangen til sclera med spidse pincet eller en 20 G nål. Under dette trin stabilisere øjet bolden med en anden pincet. Pas på ikke at beskadige nethinden med punkteringsindretningen.
- Sæt fjederen saksen i det lille hul lavet i trin 3.3 og skære en cirkel omkring hornhinden. Igen, stabilisere øjet bolden med pincet, mens der skæres. Hold snittet meget tæt på overfladen for ikke at cut ind i nethinden.
- Fjern forsigtigt hornhinde, linse og glaslegeme med pincet. Glaslegemet omfatter kun et tyndt transparent lag i bagsiden af øjet. Imidlertid er det vigtigt for vibratome sektionering at glaslegemet er fuldt fjernet.
- I petriskålen, placere okularet på en måde, man ser gennem hullet ned på nethinden. Kanten af åbningen bør bestå af kun sclerale væv. Hvis den cirkulære udskæring (trin 3.4) er udført for tæt på ækvator af øjestykket, vil retinavæv også være til stede nær incisionen. Pas derefter ikke at beskadige nethinden i trin 3.8.
- Grab sclera med pincet og forsigtigt rive vævet fra hinanden. Det er vigtigt ikke at sprænges nethinden under dette trin. Hvis det er nødvendigt, løsnes nethinden fra ora serrata ved støttehjul den sclerale del af vævet med pincet og forsigtigt skrælle nethinden med de andre pincet. Hold tang lukket; aldrig håndtere retina med pincet siden væv er meget blødt og vil give gang straks.
BEMÆRK: I dette trin nethinden og resten af øjestykket vil blive tilsluttet kun på synsnerven. - Skær fastgørelsesstedet på det optiske nervehoved med fjeder saks. Nethinden bør nu frit svævende som et enkelt stykke væv i Ames 'Medium.
- Skær nethinden i 4 - 6 små rektangler på ca. 23 mm under anvendelse af en buet skalpelblad ved at holde nethinden langs kanterne med tangen, at manipulere den på plads. Undgå at klemme retinale væv i rektangler. Tag stykker fra de centrale dele af nethinden, ikke den fjerneste periferi.
- Overfør retinale stykker med en stor diameter plast Pasteur pipette til et 35 mm plastik petriskål, hvis bund er blevet erstattet af en maske med gitterstørrelse mindre end 1 mm. Fastgør petriskålen inden den øverste tredjedel af et bæger eller konisk kolbe, og nedsænkes retinale stykker i Ames 'Medium bubbled med carbogen.
4. Indlejring af retinal stykker i Agarose
- overføre omhyggeligt 2 - 3 retinale stykker ind i en 35 mm plastik petriskål sammen med nogle af Ames 'Medium. Det er mest hensigtsmæssigt at anvende en stor diameter plast Pasteur pipette til overførsel. I dette trin, er den nøjagtige orientering af retinale stykker ikke noget.
- Fjern så meget som muligt af den resterende Ames 'Medium med et glas Pasteur pipette. Så snart væsken er fjernet fortsætte med trin 4.3. Lad ikke den retinale væv tør.
- dække umiddelbart retinale stykker med 2 ml opløst agarose (37 ° C). Givet størrelsen nævnt i trin 3.10, vil brikkerne ikke krølle op i agarose.
- I væsken agarose forsigtigt at skubbe retinale stykker til bunden af petriskålen. Det ganglion cellelag skal vende nedad. Brug et stereo mikroskop for dom nøjagtige position. For positionering, håndtag retinal piECEs med en lille spatel. Placer nethinden så hurtig og præcis som mulig, da agarosen vil størkne hurtigt.
- Arrangere retinale stykker parallelt med bunden af glasset skålen; ellers sektioner vil være tangentiel eller skrå. Individuelle stykker bør ikke røre hinanden, men også bør ikke være for langt fra hinanden. Prøv at placere retinale stykker mere eller mindre på samme vandrette plan.
- Sætte glas petriskål med indlejrede retinale stykker i køleskabet (4 - 6 ° C) i mindst 2 minutter. Dette vil hurtigt hærde agarose til yderligere behandling. Så snart agarose har polymeriseret fortsætte med næste trin.
5. Montering af retinal Pieces
- Fjern forsigtigt agarose blok indeholder retinale stykker fra petriskålen. Brug en spatel eller en lignende indretning til at løfte agarose blok fra glasset. På grund af adhæsive kræfter, kan dette vise sig at være ganske vanskeligt. Men undgå at brydeagarose blok. Udfør denne og alle efterfølgende trin ved stuetemperatur.
- Placer agarose blok på et dækglas og justere dets størrelse med en skalpel. Efterlad 1 - 2 mm af agarose på hver side af de retinale stykker. Den endelige størrelse af blokken skal være omkring 1,066 mm (10 mm refererer til højden af blokken, 6 mm til sin kant længde).
- Lim agarose blok til modellen indehaveren af vibratome hjælp en instant lim. Retinale stykker skal placeres på toppen af den 10 mm høje blok og orienteret parallelt med overfladen, mens bunden er fastgjort til holderen.
- Dæk blokken straks ved at hælde den tidligere boblede Ames 'Medium i bufferen bakke af vibratome.
6. Udarbejdelse af Vandret Vibratome Sektioner
- Start sektionering. I første omgang indstille tykkelsen af skære manuelt, indtil fragmenter af retinal væv vises i skive. Så skifte til indstillingerne i trin 2.3. damus nethinden er kun omkring 200 um tyk, vil der ikke være mere end 2 - 3 i skiver pr agarose blok.
- Fjern sektioner fra bufferen bakke med en glasstav og overføre dem til 2 ml Ames 'Medium i en 35 mm petriskål.
- Store områder med det samme i en inkubator ved 37 ° C (5% CO2 / 55% O2). Agarosen omkring sektionerne vil forblive fast i inkubatoren og kan bruges til at håndtere sektionerne uden at beskadige nethinden. Bedre skive kvalitet opnås ved opbevaring ved 37 ° C inden for det respektive atmosfære sammenlignet med iltet Ames 'medium ved stuetemperatur. Sektioner kan anvendes straks eller kan lagres op til 4 timer i inkubatoren med gode fysiologiske resultater.
- Integrer næste retinale stykker i agarose og gentage §§ 4 - 6.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
I vandrette skiver af muse nethinden, kunne vandrette celle organer let identificeres i henhold til deres unikke morfologi med flere primære dendritter på vej ud af en polygonal celle krop (figur 1A). Horisontale cellelegemer placeret nær overfladen af udsnittet blev rutinemæssigt tilgængelige for patch-clamp elektroder. Under optagelser blev celler fyldt med en fluorescerende farvestof, afsløre deres indviklede dendritisk arborization, som nøje lignede morfologien af axon-bærende horisontale celler i intakte muse nethinden 8 (figur 1B). Mærkning af kegle pedicles med fluorescein-koblet jordnøddeagglutinin viste et tæt rumligt forhold mellem kegle pedicles og horisontale celle dendritter (figur 1C). Med få undtagelser blev alle kegle pedicles inden den vandrette celles dendritiske felt kontaktet af dendritiske processer.
ent "fo: holde-together.within-side =" 1 "> For at bevise, at kontakterne mellem kegler og vandrette celler var funktionelle, blev patch-clamp optagelser foretaget fra vandrette celle organer Under mørke-tilpassede betingelser, aktuelle svar var. kendetegnet ved en stor indadgående strøm ledsaget af moderat til høj-frekvens synaptisk aktivitet (figur 2A). afvigelsen fra baseline og excitatoriske postsynaptiske strømninger var forårsaget af den konstante frigivelse af glutamat i mørke, aktivering postsynaptiske AMPA- og kainat-typen glutamat receptorer 9. Individuelle synaptiske begivenheder var præget af en monofasisk bølgeform eller mere komplekse nuværende baner (figur 2B). tilstedeværelsen af tonic postsynaptiske aktivitet tyder på, at glutamat blev frigivet ved synaptiske kontakter mellem kegle fotoreceptorer og vandrette celle dendritter vist i figur 1C.Horizontal celler optaget reagerede på ændringer i lysintensitet, hvilket indikerer, at signaltransduktionskaskade i kegle fotoreceptorer var også intakt og funktionel i en vandret præparat skive. På grund af reduktionen af transmitterfrigivelse blev tonic indadgående strøm af mørke-tilpassede horisontale celler inhiberes, og synaptisk aktivitet optrådte klart mindre i nærvær af en fuld-field lys stimulus (1.300 W / cm2, 470 40 nm) (figur 3A). Ligeledes et skift til mørke fra en lys-tilpasset tilstand forårsagede en indadgående strøm og forøget synaptisk aktivitet (figur 3B). Desuden blev korte elektriske impulser (1-15 V, 1 ms) påføres gennem en platin-iridium bipolar stimulationselektrode at depolarisere alle kegle fotoreceptorer i nærheden af en vandret celle organ. Stimuleringen-induceret frigivelse af glutamat fremkaldte stor amplitude excitatoriske postsynaptiske strømme i den registrerede vandrette celle (figur 3C). I sAMMENDRAG viser disse resultater overbevisende, at synapsen mellem kegle fotoreceptorer og horisontale celler kan manipuleres eksperimentelt ved enten den endogene stimulus lys eller ved kontrolleret depolarisering af præsynaptiske elementer.
Figur 1: Morfologi og Synaptiske Kontakter af vandrette Celler i en vandret Slice Forberedelse. En vandret celle (pil) placeret nær overfladen af udsnittet blev visualiseret med Dodt kontrast optik. Scale bar = 10 um (A). For imaging eksperimenter blev en horisontal celle fyldt med Oregon Green 488 BAPTA-1 (100 uM) via en patch-elektrode, som stadig er fastgjort til cellen. Scale bar = 10 um (B). Overlejring af et farvestof-injicerede vandrette celle og arrayet af kegle pedicles mærket med fluorescein-koblet jordnøddeagglutinin afslører formodede synaptiske kontakter. Scale bar = 10 um (C). Klik her for at se en større version af dette tal.
Figur 2: Synaptic Aktivitet Optaget fra en vandret Cell organ. Helcelle-spænding-clamp optagelse på et holdepotentiale på -60 mV viser højfrekvente tonic synaptisk aktivitet (A). Ved højere tidsmæssig opløsning (B), synaptiske begivenheder vise monofasiske bølgeformer (pil) eller mere komplekse nuværende baner (pilespidser). Klik her for at se en større version af dette tal.
g3.jpg "/>
Figur 3: Nuværende Responses af horisontale Cell organer fremkaldt af lys og elektrisk stimulering. Lys reaktion af en mørk-tilpasset horisontal cellelegeme registreret ved -60 mV holdepotentiale. Full-field illumination inhiberer tonic indadgående strøm og reducerer synaptisk aktivitet (A). En let-tilpasset vandret celle krop registreres under de samme betingelser viser en indadgående strøm efter en mørk flash ledsaget af øget synaptisk aktivitet under mørke (B). Vandrette linier i A og B repræsenterer timingen af stimulus. Ekstracellulær stimulering med korte elektriske impulser inducerer store amplitude excitatoriske postsynaptiske strømme som følge af den synkroniserede frigivelse af glutamat fra kegle fotoreceptorer (C). Holding potentiale: -60 mV. Pilen angiver timingen af stimulation puls. Trunkerede strømme ved begyndelsen af sporet repræsenterer stimulation artefakter..com / filer / ftp_upload / 55.173 / 55173fig3large.jpg "target =" _ blank "> Klik her for at se en større version af dette tal.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
I modsætning til lodrette skiver, er den dendritiske morfologi radialt orienterede neuroner som horisontale celler og amacrine celler velbevaret. Sammenlignet med hele nethinden præparater, disse celletyper er let tilgængelige for mikroelektroder og kan studeres af både elektrofysiologiske og billeddannende teknikker. Her har vi fokuseret på den ydre nethinde; imidlertid blevet rapporteret en lignende fremgangsmåde især for amacrine celler i den indre nethinde 10.
Egenskaberne af den horisontale forberedelse skive har flere konsekvenser for funktionelle studier. Antallet af synaptiske kontakter mellem kegle fotoreceptorer og postsynaptiske horisontale celler var næsten ikke skelnes fra den intakte nethinden. Synaptiske kontakter var funktionelle, viser tonic frigivelse af neurotransmitter i mørke. Synapsen kunne aktiveres af enten endogene stimuli som lys / mørke overgange eller ved ekstern bipolar stimulation.
Teknikken præsenteres her for det meste begrænset til vandret orienterede neuroner. Derfor er det ikke muligt at optage fra fotoreceptorer og intakte bipolære celler i en horisontal skive, idet de bipolære celle axoner vil blive afkortet. Desuden er det umuligt at præcis styring af niveauet af sektionering. En enkelt retinal stykke might således skæres på et uønsket niveau, for eksempel mellem ydre og indre segmenter af fotoreceptorer. Forøgelse af antallet af retinale stykker inden for en blok af agarose øger chancerne for en korrekt plan sektionering i det mindste i ét stykke.
Den horisontale forberedelse skive er velegnet til at studere de unikke egenskaber af bånd synapser af stang og kegle fotoreceptorer. Hidtil har vi brugt et dyr knock-out system til at undersøge betydningen af præsynaptiske proteiner complexin 3 og complexin 4 på synaptisk transmission mellem kegle fotoreceptorer og vandrette celler 11. Det er også muligt at studere egenskaberne af postsynaptiske neurotransmitterreceptorer, som tidligere 9 vist.
Fremtidige ansøgninger vil omfatte studiet af synaptiske proteiner baseret på transgene mus linjer med elektrofysiologiske og billeddannende teknikker. Det vil også være muligt at undersøge biofysiske proejendommene af gap junctions mellem horisontale celler. Da lette reaktioner kan måles, vil teknikken også anvendes til at undersøge kodning af endogene stimuli ved den første synapse af det visuelle system. Det er muligt at udføre fremstillingen i mørke for at forhindre lys tilpasning af vævet, ellers de lette svar vil være stort set kegle-drevet.
Sammenfattende horisontale forberedelse skive repræsenterer en ny mulighed for at øge tilgængeligheden af individuelle synapser som en forudsætning for at studere deres funktionelle egenskaber i pattedyrs retina 12.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Ames' Medium | Sigma | A1420 | |
| Sodium Bicarbonate | Sigma | S5761 | |
| Hepes | Sigma | H3375 | |
| Carbogen | Air Liquide | ||
| Agarose | Sigma | A9045 | |
| 35 mm Petri dish (plastic) | Nunc Thermofisher | 150318 | |
| Glass Petri dish | Chemoline | 50-1470-40 | |
| Isoflurane | Dispensary university hospital | ||
| Vibratome injector blade | Biosystems | 39053250 | |
| Vibratome | Leica Microsystems | VT1200 | |
| Vibrocheck | Leica Microsystems | ||
| Microwave | |||
| Water bath | |||
| Forceps | |||
| 20 G needles | |||
| Spring scissors | |||
| Curved scalpel blades | |||
| Stereo microscope | |||
| Plastic Pasteur pipette | |||
| Glass Pasteur pipette |
References
- DeVries, S. H., Li, W., Saszik, S. Parallel processing in two transmitter microenvironments at the cone photoreceptor synapse. Neuron. 50, 735-748 (2006).
- Jackman, S. L., et al. Role of the synaptic ribbon in transmitting the cone light response. Nature Neuroscience. 12 (3), 303-310 (2009).
- Rabl, K., Cadetti, L., Thoreson, W. B. Kinetics of exocytosis is faster in cones than in rods. J. Neurosci. 25 (18), 4633-4640 (2005).
- Singer, J. H., Lassová, L., Vardi, N., Diamond, J. S. Coordinated multivesicular release at a mammalian ribbon synapse. Nature Neuroscience. 7 (8), 826-833 (2004).
- Peichl, L., González-Soriano, J. Morphological types of horizontal cell in rodent retinae: a comparison of rat, mouse, gerbil, and guinea pig. Vis. Neurosci. 11, 501-517 (1994).
- Ames, A., Nesbett, F. B. In vitro retina as an experimental model of the central nervous system. J. Neurochem. 37 (4), 867-877 (1981).
- Mathis, D. M., Furman, J. J., Norris, C. M. Preparation of acute hippocampal slices from rats and transgenic mice for the study of synaptic alterations during aging and amyloid pathology. J. Vis. Exp. (49), (2011).
- Peichl, L., Sandmann, D., Boycott, B. B. Comparative anatomy and function of mammalian horizontal cells. Development of the Retina. , Plenum Press. New York. (1998).
- Feigenspan, A., Babai, N. Functional properties of spontaneous excitatory currents and encoding of light/dark transitions in horizontal cells of the mouse retina. Eur. J. Neurosci. 42 (9), 2615-2632 (2015).
- Enoki, R., Jakobs, T. C., Koizumi, A. Horizontal slice preparation of the retina. J. Vis. Exp. (1), e108 (2006).
- Babai, N., et al. Functional roles of complexin3 and complexin4 at mouse photoreceptor ribbon synapses. J. Neurosci. 36, 6651-6667 (2016).
- Thoreson, W. B. Horizontal slices of mouse retina expose horizontal cells and their properties (Commentary on Feigenspan & Babai). Eur. J. Neurosci. 42 (9), 2613-2614 (2015).
