Abstract
وتستخدم بقع التامور شيوعا في جراحة الأوعية الدموية لإغلاق الأوعية. لتسهيل الدراسات للتضخم neointimal التي تشكل على التصحيح، قمنا بتطوير نموذج الفئران من الاوعية الدموية التصحيح التي يمكن استخدامها إما في الوريد أو الشريان، وخلق venoplasty التصحيح أو رأب الشريان التصحيح، على التوالي. وتناقش الجوانب التقنية لهذا النموذج. وتشريح IVC الأشعة تحت الكلى أو الشريان الأورطي ثم فرضت قريب وبشكل أقصى. يتم تنفيذ فصد 3 مم أو بضع الشريان في infrarenal الوريد الأجوف السفلي أو الشريان الأورطي من 6 إلى فئران ويستار القديمة الاسبوع-8. ثم يتم استخدام التصحيح التامور البقري (3 مم × 1.5 مم × 0.6 مم) لإغلاق الموقع باستخدام خياطة 10-0 النايلون. بالمقارنة مع بقع الشرايين، وتظهر بقع الوريدية زيادة سمك neointimal يوم بعد العملية الجراحية 7. هذا نموذج رواية التامور قسطرة التصحيح يمكن أن تستخدم لفحص تضخم neointimal على المواد الحيوية الأوعية الدموية، وكذلك لمقارنة الفروق بين الشرايين والأوردةالبيئات.
Introduction
جراحي الأوعية الدموية عادة الأوعية الدموية وثيقة مع بقع التامور، سواء البقري أو الخنزير، للحد من خطر عودة التضيق 1 و 2. في جراحة الشرايين، التامور التصحيح الاوعية الدموية ويقلل من نسبة عودة التضيق مقارنة مع إغلاق الابتدائي 3 و 4. كما يقوم التصحيح venoplasty بالمثل لإغلاق الأوردة، على الرغم من أن أقل كثيرا بالمقارنة مع إجراءات الشرايين 5، 6. بقع عادة ما تصاب تضخم neointimal على سطحها اللمعية. ومع ذلك، فإن آلية تشكيل neointimal لا تزال غير واضحة، خصوصا في مقارنة الاختلافات في تشكيل neointimal بين الشرايين والأوردة البيئات. أظهرنا سابقا أن بقع التامور جذب الخلايا الاصلية في كل من الشرايين والبيئات الوريدية وأن التصحيح الوريدي قسطرة يظهر أكثر من ذلكتشكيل neointimal ggressive بالمقارنة مع بقع الدم 7، 8.
في هذه الدراسة، ونحن تصف نموذج الفئران من الاوعية الدموية التصحيح التامور الذي هو شائع لإغلاق كل من الأوردة والشرايين والتي يمكن أن تستخدم لدراسة تشكيل neointimal. هذا الأسلوب هو نموذج حيوان صغير من تقنية فعالة تستخدم عادة في المرضى من البشر. نموذج الفئران التي يبلغ قطرها أكبر من نموذج الفأر، وتسهيل الجوانب التقنية للجراحة وتحسين منحنى التعلم للنموذج.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
موافقة لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسية المناسبة يجب الحصول عليها، مشيرا إلى أن البروتوكول الخاص يتبع المبادئ التوجيهية للجنة أخلاقيات البحوث الحيوانية مؤسستك.
1. التخدير واجراءات ما قبل الجراحة
- تخدير فئران ويستار الذكور، وتزن حوالي 200 غرام، مع تبخر الأيزوفلورين 3٪ و 1 لتر / دقيقة الأكسجين تدار في غرفة الاستقراء الاكريليك.
- تأكيد التخدير الكافي من خلال عدم وجود رد فعل على القدمين، وذيل قرصة. وضع مرهم للعين لمنع جفاف في حين أن الحيوانات تحت التخدير. ضع مستلق كل فأر على لوحة تشغيل البلاستيك ووضع قناع سيليكون لإيصال ما يتبخر 2-3٪ الأيزوفلورين عن طريق الاستنشاق المستمر. لا تترك حيوان غير المراقب حتى استعاد وعيه كافية للحفاظ على الاستلقاء القصية.
- في حين يرتدي قفازات معقمة، إزالة الشعر البطن بطني باستخدام مزيل الشعر. Buprenorphine، إما تحت الجلد أو داخل الصفاق، وكثيرا ما تعطى في هذه المرحلة.
2. العمليات الجراحية
- التصحيح venoplasty
- قبل الجراحة، وتقليم التصحيح التامور البقري باستخدام microscissor إلى 3 مم حجم × 1.5 مم × 0.6 مم. نقع التصحيح في 10 مل من محلول ملحي معقم لمدة 5 دقائق في طبق ثقافة الخلية.
- إعداد موقع شق مع مطهر موضعي وفقا لبروتوكول المؤسسي وتطبيق ثنى الجراحية. استخدام القفازات وأدوات معقمة للحفاظ على تقنية العقيم طوال الجراحة. ويمكن حقن التخدير الموضعي في موقع شق الجلد المخطط لها.
- باستخدام مشرط، وجعل شق البطن خط الوسط تمتد من مستوى الخنجري إلى ما فوق العانة.
- إدراج ضام وسلب كل أحشاء من تجويف البطن إلى الجانب الأيمن. التفاف الأمعاء في الشاش غارقة مع المياه المالحة.
- فضح طالوريد الأجوف nfrarenal (IVC). موقع التصحيح زرع حوالي 2 ملم دون مستوى أصل الأوردة الكلوية. تشريح IVC مجانا على هذا الموقع. Ligate وتقسيم كل قطني ورافد الأوردة في هذا المستوى باستخدام 6-0 خيوط النايلون.
- وضع اثنين من لقطات المجهرية في كل من الداني والقاصي infarenal IVC. إجراء فصد مع إبرة G 25 من ثقب الجدار الأمامي للIVC، ومن ثم توسيع نطاقه ليشمل حوالي 3 مم باستخدام مقص (الشكل 1A).
- إغلاق فصد مع التصحيح باستخدام تشغيل أو توقف 10-0 خيوط النايلون (الشكل 1B).
- استكمال إغلاق venoplasty. إزالة المشبك البعيدة أولا للتنفيس عن التصحيح ومن ثم إزالة المشبك الداني لاستعادة تدفق الدم إلى الوريد الأجوف السفلى.
- تأكيد الارقاء من خلال مراقبة لمدة 30 ثانية دون ضغط. عودة الأمعاء إلى وضعها الطبيعي. إغلاق البطن مع خياطة تشغيل وفقا لبروتوكولات الحيوانية المعتمدة.
- التصحيح رأب الشريان
- قبل الجراحة، وتقليم التصحيح التامور البقري باستخدام microscissor إلى 3 مم حجم × 1.5 مم × 0.6 مم. نقع في محلول ملحي معقم.
- إعداد موقع شق مع مطهر موضعي وتطبيق ثنى الجراحية. استخدام القفازات وأدوات معقمة للحفاظ على تقنية العقيم طوال الجراحة.
- باستخدام مشرط، وجعل شق البطن خط الوسط تمتد من مستوى الخنجري إلى ما فوق العانة.
- إدراج ضام وسلب كل أحشاء من تجويف البطن إلى الجانب الأيمن. التفاف الأمعاء في الشاش غارقة مع المياه المالحة.
- فضح الشريان الأورطي. موقع التصحيح زرع حوالي 2 ملم دون مستوى منشأ الشرايين الكلوية. تشريح الشريان الأورطي مجانا في هذا الموقع. Ligate وتقسيم كل الشرايين القطنية عند هذا المستوى باستخدام 6-0 خيوط النايلون.
- المشبك الشريان الأورطي infrarenal. استخدام إبرة G 25 إلى إجراء بضع الشريان بواسطة puncturiنانوغرام الجدار الأمامي من الشريان الأورطي، ومن ثم توسيع نطاقه ليشمل حوالي 3 مم باستخدام مقص (الشكل 1C).
- إغلاق بضع الشريان مع التصحيح باستخدام تشغيل 10-0 خيوط النايلون (1D الشكل). استكمال إغلاق رأب الشريان. إزالة المشبك البعيدة أولا للتنفيس عن التصحيح ومن ثم إزالة المشبك الداني لاستعادة تدفق الدم إلى الشريان الأورطي.
- تأكيد الارقاء من خلال مراقبة لمدة 30 ثانية دون ضغط. عودة الأمعاء إلى وضعها الطبيعي. إغلاق البطن مع خياطة تشغيل وفقا لبروتوكولات الحيوانية المعتمدة.
إجراءات 3. بعد العملية
- بعد إغلاق البطن، وقف التخدير. تطبيق الرعاية اللاحقة للعمليات الجراحية، بما في ذلك تسكين ورعاية الجروح، وفقا للتعليمات التي أوصت بها لجنة رعاية واستخدام الحيوان المؤسسي.
- لتسكين الألم، استخدم البوبرينورفين عند 0.1 ملغ / كغ عضليا لا يقل عن كل 12 ساعة لمدة 24 ساعة اتبعجي العمليات الجراحية. التحقق من حالة الحيوان كل يوم في غرفة الحيوانية، وضمان الانتعاش السليم من فترة شبه المنطوق وكذلك العلاج المناسب لآلام ما بعد الجراحة. لا عودة الحيوان الذي خضع لعملية جراحية للشركة من الحيوانات الأخرى حتى تعافى تماما.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
بعد قسطرة التصحيح، لم يكن هناك الجلطة إما في وريدي (ن = 42) أو الشرايين مجموعة التصحيح (ن = 24). كان البقاء على قيد الحياة في يوم 7 100٪ في كل من المجموعتين مع إما الوريدي أو التصحيح الشرياني.
وقد تم حصاد بقع في يوم 7 وملطخة الهيماتوكسيلين ويوزين، ومقارنة سمك neointimal كما هو موضح سابقا 7. بسبب الاختلاف الصرفي واضح بين التصحيح وneointima، فمن السهل جدا للتمييز وneointima. في التصحيح وريدي، كان هناك طبقة متميزة من neointima سميكة على الجانب اللمعية من التصحيح، مع المزيد من الخلايا المتراكمة في neointima (الشكل 2A، 2C). في التصحيح الشرايين، وكان هناك طبقة neointimal أرق بكثير، مع عدد قليل من الخلايا التي تعلق على الجانب اللمعية من التصحيح (الشكل 2B، 2D). وا neointima ق سمكا بشكل ملحوظ في التصحيح الوريدي مقارنة مع التصحيح الشريان (الشكل 2E). وتم الحصول على نتائج مماثلة في يوم 14 (لا تظهر البيانات). وتشير هذه النتائج إلى أن نموذج التصحيح venoplasty يتفوق على نماذج أخرى للحصول على neointima سميكة في فترة قصيرة من الزمن.
الشكل 1: الجرذ بيريكارديال تصحيح القسطرة. (أ) صورة الممثل تظهر في فصد الوريد الأجوف السفلى. (ب) صورة الممثل تظهر في IVC بعد التصحيح التنسيب. (C) صورة الممثل تظهر في بضع الشريان الأبهر. (D) صورة الممثل تظهر الشريان الأورطي بعد التصحيح التنسيب. A، الشريان الأورطي. IVC، الوريد الأجوف السفلي. ف، والتصحيح التامور. * الخلفي البطانية من IVC أو الشريان الأورطي. علامات الحاكم هي 1 ملم.3fig1large.jpg "الهدف =" _ فارغة "> الرجاء انقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
الشكل 2: المغامرين Neointimal تضخم في تصحيح Venoplasty بالمقارنة بعام تصحيح رأب الشريان في يوم 7.
(A) التمثيلية صورة السلطة أقل تبين venoplasty التصحيح في يوم 7، والذي كان الملون مع H & E. (ب) التمثيلية صورة القوة السفلية تظهر الاوعية الدموية التصحيح في يوم 7، والذي كان الملون مع H & E. (C) التمثيلية صورة عالية الطاقة تظهر تشكيل neointimal على venoplasty التصحيح. (D) التمثيلية صورة عالية الطاقة تظهر تشكيل neointimal على رأب الشريان التصحيح. شريط مقياس = 0.5 مم؛ عالية الطاقة = 100 ميكرون. ف، والتصحيح. L، IVC أو الشريان الأورطي التجويف. N، neointima. showi الرسم البياني (E) بارزيادة نانوغرام سمك neointimal في venoplasty مقارنة رأب الشريان. شريط خطأ يدل على SEM. * P = 0.0015، اختبار (ت). ن = 4. يرجى النقر هنا لمشاهدة نسخة أكبر من هذا الرقم.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
وصفنا نموذجا قسطرة التصحيح في الفئران التي يمكن استخدامها في أي من الأوردة أو الشرايين، وخلق venoplasty التصحيح أو التصحيح رأب الشريان، على التوالي. باستخدام هذا النموذج التصحيح التامور، أظهرنا العدوانية ومستقر تضخم neointimal في الفئران IVC venoplasty مقارنة رأب الشريان الأبهر (الشكل 2) 7، 8.
العديد من الجوانب الفنية جديرة بالملاحظة. في رأب الشريان الأبهر، فمن المهم أن الغرز مشددة وكافية من حيث العدد و / أو التباعد لمنع تسرب الدم في ارتفاع الضغط البيئة الشرايين. في venoplasty IVC، من المهم تنفيذ كافة المناورات المنطوق مع الرعاية والرفق معينة، مثل جدار IVC رقيقة جدا وهشة. وبالإضافة إلى ذلك، وأسفل الظهر ورافد صغير الأوردة حول موقع غرس يجب تشريح بعناية وligated لمنع النزيف. في كل آرتيالريال والإجراءات الوريدية، يتم إزالة المشبك القاصي الأول للتنفيس عن أي الهواء اللمعية ولتفادي الانسداد الرئوي الهواء. ثم يتم إزالة المشبك الداني لاستعادة تدفق الدم البعيدة. وأخيرا، عندما ثقب الشريان الأورطي أو جدار IVC، لا ثقب الجدار الخلفي. إذا كان ثقب الجدار الخلفي، وينبغي أن تستخدم 10-0 خياطة لإغلاق الثقب.
والعيب من الاوعية الدموية التصحيح في الشريان الأورطي هو تطوير pseudoaneurysms في أوقات لاحقة (على سبيل المثال، بعد الجراحة يوم 30). ومع ذلك، كان هناك نادرا أي pseudoaneurysms لوحظ في الأيام 7 أو 14 بعد الجراحة، مما يشير إلى فائدة هذا النموذج خلال الأسابيع الأولى 2 بعد إجراء دراسة تشكيل neointimal سواء في الأوردة أو الشرايين بيئة 7 و 9.
الحيوانات الصغيرة التصحيح قسطرة ديها العديد من المزايا مقارنة بالطرازات مداخلة الكسب غير المشروع. الأولى، وزارة الطاقة سفينة المضيفةق لا تحتاج إلى مقطوع، كما يتم فقط شق الجدار الأمامي. هذا يقلل من وقت الجراحة، ويقلل من خطر النزيف. ثانيا، الكسب غير المشروع مداخلة يتطلب اثنين مفاغرة، وزيادة الوقت والمخاطر المنطوق لمضاعفات، وكذلك تمديد منحنى التعلم. التصحيح الاوعية الدموية يتطلب سوى مفاغرة واحدة، مما يقلل من الوقت المنطوق ومن خطر حدوث مضاعفات. ثالثا، والتصحيح الاوعية الدموية ويقلل بشكل جوهري خطر تضيق في موقع توصيلي، ويحتمل أن يسمح بزيادة الوقت لمراقبة ما بعد الجراحة 10.
في الختام، نحن تصف طريقة لأداء التصحيح الاوعية الدموية التي تستخدم بقع التامور لإغلاق الأوعية ذات القطر الصغير. الإجراء ينطبق أيضا على كل من الأوردة والشرايين. يظهر التامور التصحيح venoplasty تشكيل neointimal أكثر عدوانية مقارنة بالطراز رأب الشريان في أوقات ما بعد الجراحة في وقت مبكر. هذه النتيجة تشير إلى فائدة هذا أنا نموذجن تحديد الاختلافات في التفاعلات بين الأوردة والشرايين بيئات مع المواد الحيوية القابلة للزرع. وبالإضافة إلى ذلك، وأنواع مختلفة من التراكيب التصحيح يمكن فحص لاختبار استجابة لهذه المواد المختلفة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Acknowledgments
وأيد هذا العمل في جزء من المعاهد الوطنية للصحة منح R56-HL095498، R01-HL-095498 (لم)، R01-HL128406، والاستحقاق مراجعة جائزة I01-BX002336 من الولايات المتحدة وزارة بحوث الطبية الحيوية مختبر شؤون المحاربين القدامى و برنامج تنمية (لم)، وزارة ييل للجائزة Ohse جراحة (لم)، وزمالة مؤسسة سارنوف القلب والأوعية الدموية (لدائرة الخدمات الطبية المشتركة)، وذلك من خلال الموارد واستخدام المرافق في كونيتيكت نظام الرعاية الصحية شؤون المحاربين القدامى (غرب هافن، CT ). وقدمت بقع التامور البقري بسخاء لوميتر الأوعية الدموية وشركة (برلنغتون، MA).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Bovine pericardial patch | LeMaitre Vascular | ||
| Vascular clamp | Roboz Surgical Instrument Co. | RS-5424 | |
| Clamp applying forceps | Roboz Surgical Instrument Co | RS-5410 | |
| 10-0 Prolene suture | Arosurgical Co. | T05A10N10-13 |
References
- Muto, A., Nishibe, T., Dardik, H., Dardik, A. Patches for carotid artery endarterectomy: current materials and prospects. J Vasc Surg. 50 (1), 206-213 (2009).
- Li, X., et al. Current usage and future directions for the bovine pericardial patch. Ann Vasc Surg. 25 (4), 561-568 (2011).
- Biasi, G. M., Sternjakob, S., Mingazzini, P. M., Ferrari, S. A. Nine-year experience of bovine pericardium patch angioplasty during carotid endarterectomy. J Vasc Surg. 36 (2), 271-277 (2002).
- Papakostas, J. C., et al. Use of the vascu-guard bovine pericardium patch for arteriotomy closure in carotid endarterectomy. Early and long-term results. Ann Vasc Surg. 28 (5), 1213-1218 (2014).
- Ohwada, S., et al. Glutaraldehyde-fixed heterologous pericardium for vena cava grafting following hepatectomy. Hepatogastroenterology. 46 (26), 855-858 (1999).
- Mori, A., et al. Standard hepatic vein reconstruction with patch plasty using the native portal vein in adult living donor liver transplantation. Liver Transpl. 18 (5), 602-607 (2012).
- Bai, H., et al. Pericardial patch venoplasty heals via attraction of venous progenitor cells. Physiological Reports. 4 (12), (2016).
- Li, X., et al. Pericardial patch angioplasty heals via an Ephrin-B2 and CD34 positive cell mediated mechanism. PLoS One. 7 (6), 38844 (2012).
- Bai, H., et al. Pretreatment of pericardial patches with antibiotics does not alter patch healing in vivo. J Vasc Surg. 63 (4), 1063-1073 (2016).
- Muto, A., et al. Eph-B4 prevents venous adaptive remodeling in the adult arterial environment. J Exp Med. 208 (3), 561-575 (2011).
