Waiting
Login processing...

Trial ends in Request Full Access Tell Your Colleague About Jove
Click here for the English version

Medicine

Sıçan Aort veya İnferior Vena Cava de Anjiyoplasti Patch

Published: February 27, 2017 doi: 10.3791/55253

Abstract

Perikard yamaları yaygın damarları kapatmak için damar cerrahisi kullanılır. yama üzerinde oluşturduğu neointimal hiperplazi çalışmalarını kolaylaştırmak için, sırasıyla, bir yama venoplasti veya yama arterioplastiden oluştururken, bir ven veya bir arter ya kullanılabilen yama anjiyoplasti bir fare modeli geliştirdi. Bu modelin teknik özellikleri tartışılmıştır. infra-böbrek İVC veya aort disseke ve sonra proksimal ve distal kenetlenir. 3 mm venotomi ya arteriyotomi 8 haftalık Wistar farelere, 6 infrarenal inferior vena kava veya aort gerçekleştirilir. Bir sığır perikard yama (x 1.5 mm x 0.6 mm 3 mm) daha sonra 10-0 naylon sütür kullanarak siteyi kapatmak için kullanılır. arteriyel yamalar ile karşılaştırıldığında, venöz yamalar günde 7. neointimal kalınlığı artmış göstermektedir perikard yama anjiyoplasti Bu yeni model, vasküler biyomateryallerinin üzerindeki neointimal hiperplazi incelemek yanı sıra arteriyel ve venöz arasındaki farklılıkları karşılaştırmak için kullanılabilirortamlar.

Introduction

Perikard yamalar, sığır ya da domuz ya ile yaygın yakın kan damarları damar cerrahları restenoz 1, 2 riskini azaltmak için. Arteriyel cerrahide, perikard yama anjiyoplasti birincil kapatma 3, 4 ile karşılaştırıldığında restenoz oranını düşürür. Yama venoplasti da benzer arter prosedürler 5, 6 daha az karşılaştırıldığında, ancak, damarlar kapatılması gerçekleştirilir. Yamalar genellikle kendi lümen yüzeylerde neointimal hiperplazi geliştirmek; Bununla birlikte, neointimal formasyonu mekanizması, özellikle arteriyel ve venöz ortamlar arasında neointimal oluşumunda farklar karşılaştırıldığında açık değildir. Biz daha önce perikard yamaları arteriyel ve venöz ortamlar ve venöz yama anjiyoplasti hem progenitör hücreler daha fazla a gösteriyor çekmek olduğunu gösterdiarteriyel yamalar 7, 8 ile karşılaştırıldığında ggressive neointimal oluşumu.

Bu çalışmada, biz damarları ve arterler ve her ikisi de kapanış ortak olan perikard yama anjiyoplasti fare modeli açıklayan neointimal oluşumu incelemek için kullanılabilir; Bu yöntem, genel olarak, insan hastalarda kullanılan bir çalışma tekniğinin küçük-hayvan modelidir. sıçan modelinde cerrahi teknik yönlerini kolaylaştırmak ve model için öğrenme eğrisi iyileştirilmesi, fare modelinde daha geniş bir çapa sahiptir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Protocol

Uygun Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından onaylanması için protokol kurumunuzun hayvan araştırma etik komitesi kuralları takip ettiğini belirten alınmalıdır.

1. Anestezi ve Ameliyat öncesi Prosedürleri

  1. bir akrilik indüksiyon odasına tatbik buharlaştırılmış% 3 izofluran ve 1 L / dak oksijen ile yaklaşık 200 g ağırlığındaki erkek Wistar sıçanları, anestezisi.
  2. Bir ayak ve kuyruk tutam tepki eksikliği yoluyla yeterli anestezi onaylayın. hayvanlar anestezi altında iken kuruluğunu önlemek için gözleri merhem yerleştirin. Sürekli solunum yoluyla% 3 izofluran - plastik operasyon plaka üzerinde her sıçan sırtüstü pozisyonda ve bir silikon maske pozisyon 2 buharlaşmış verebilen. sternal yatma korumak için yeterli bilinci yerine kadar gözetimsiz bir hayvan bırakmayın.
  3. Steril eldiven giyerek, saç çıkarıcı kullanarak ventral karın saç çıkarın. Buprenorphine, subkutan veya intraperitonal olarak, sık sık bu noktada yer almaktadır.

2. Operatif Prosedürler

  1. yama venoplasti
    1. Ameliyattan önce, 3 mm x 1.5 mm x 0.6 mm boyutlarında bir microscissor kullanarak sığır perikard yama kırpın. bir hücre kültür kabı içinde, 5 dakika süre ile sterilize tuz 10 mL yama bekletin.
    2. senin kurumsal protokole göre bir topikal antiseptik ile kesi sitesi hazırlayın ve bir cerrahi örtü uygulayın. ameliyat boyunca aseptik teknik korumak için steril eldiven ve aletler kullanın. Lokal anestezi planlanan cilt kesisi siteye enjekte edilebilir.
    3. Bir neşter kullanılarak, sadece pubis üstünde kılıç şeklinde seviyesine uzanan bir orta hat karın kesi yapmak.
    4. retractor takın ve sağ tarafa doğru karın boşluğundan tüm bağırsakları eviscerate. serum fizyolojik ile ıslatılmış gazlı bez bağırsakları sarın.
    5. i Açığanfrarenal vena kava (IVC). Yama implantasyon yeri renal venler kökenli seviyesinin yaklaşık 2 mm 'dir; Bu sitede IVC ücretsiz teşrih. Bağlanır ve 6-0 naylon sütür kullanarak bu düzeydeki tüm lomber ve kolu damarlar bölün.
    6. Proksimal ve distal infarenal IVC hem genelinde iki mikrocerrahi klipleri yerleştirin. Makas (Şekil 1A) kullanarak yaklaşık 3 mm uzatmak ardından IVC ön duvarını batırılarak 25 G iğne ile venotomi gerçekleştirin ve.
    7. Çalışan veya kesintiye 10-0 naylon sütür (Şekil 1B) kullanılarak yama ile venotomi kapatın.
    8. venoplasti kapatma tamamlayın. yama havalandırma ve ardından IVC kan akışını geri proksimal kelepçe kaldırmak için ilk uzak kelepçe çıkarın.
    9. sıkıştırma olmadan 30 saniye gözlemleyerek hemostaz onaylayın. doğal pozisyona bağırsakları dönün. onaylanmış hayvan protokollerine göre çalışan bir dikiş ile karın kapatın.
  2. yama arterioplastiden
    1. Ameliyattan önce, 3 mm x 1.5 mm x 0.6 mm boyutlarında bir microscissor kullanarak sığır perikard yama kırpın. sterilize tuzlu su içinde ıslatın.
    2. Topikal antiseptik ile kesi sitesi hazırlayın ve bir cerrahi örtü uygulayın. ameliyat boyunca aseptik teknik korumak için steril eldiven ve aletler kullanın.
    3. Bir neşter kullanılarak, sadece pubis üstünde kılıç şeklinde seviyesine uzanan bir orta hat karın kesi yapmak.
    4. retractor takın ve sağ tarafa doğru karın boşluğundan tüm bağırsakları eviscerate. serum fizyolojik ile ıslatılmış gazlı bez bağırsakları sarın.
    5. aorta Açığa. Yama implantasyon yeri renal arterler kökenli seviyesinin yaklaşık 2 mm 'dir; bu sitede ücretsiz aort teşrih. Bağlanır ve 6-0 naylon sütür kullanarak bu düzeydeki tüm lomber arterler bölün.
    6. infrarenal aorta kelepçe. puncturi tarafından arteriyotomi gerçekleştirmek için 25 G iğne kullanınyaklaşık 3 mm ile makas (Şekil 1C) kadar uzatmak, sonra aortun ön duvarını ng ve.
    7. 10-0 naylon dikişler (Şekil 1D) çalıştıran kullanarak yama ile arteriyotomi kapatın. arterioplastiden kapatma tamamlayın. yama havalandırma ve ardından aorta kan akışını geri proksimal kelepçe kaldırmak için ilk uzak kelepçe çıkarın.
    8. sıkıştırma olmadan 30 saniye gözlemleyerek hemostaz onaylayın. doğal pozisyona bağırsakları dönün. onaylanmış hayvan protokollerine göre çalışan bir dikiş ile karın kapatın.

3. Post-operatif prosedürler

  1. Karnın kapanmasından sonra, anestezi durdurma. Kurumsal Hayvan Bakım ve Kullanım Kurulu tarafından tavsiye edilen talimatlara uygun olarak analjezi ve yara bakımı da dahil olmak üzere post-operatif bakım, uygulayın.
  2. analjezi için 0.1 mg buprenorfin kullanımı / kg kas 24 saat süre ile, her 12 saat daha az izleyincerrahi girişimler ing. peri-operatif dönemden doğru kurtarma yanı sıra ameliyat sonrası ağrının yeterli tedavi sağlanması, hayvan odasında her gün hayvanın durumunu kontrol edin. Tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirkete ameliyat geçirmiş bir hayvan iade etmeyin.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Representative Results

Yama anjiyoplastiden sonra, venöz (n = 42) ya da arteriyel (n = 24) bir düzeltme grupları ya da herhangi bir tromboz vardı. 7. günde Survival bir venöz ya da arteriyel yama ile ya her iki grupta% 100 oldu.

Yamalar 7. günde toplandı ve hematoksilin ve eosin ile boyanmış ve önceden tarif edildiği gibi 7 neointimal kalınlığı karşılaştırılmıştır edildi. Çünkü yama ve Neointimanın arasındaki belirgin morfolojik farkın, neointima ayrımcılık çok kolaydır. Venöz yama, Neointimanın (Şekil 2A, 2C) biriken fazla hücreleri ile yama, luminal tarafında kalın Neointimanın ayrı bir tabaka vardı; arter yaması, yama (Şekil 2B, 2D) luminal tarafına bağlı birkaç hücre ile daha ince neointimal tabakası vardı. neointima wa arter yama (Şekil 2E) göre venöz yama anlamlı kalın s. Benzer sonuçlar 14. günde elde edilmiştir (veriler gösterilmemiştir). Bu sonuçlar, yama venoplasti modeli kısa bir süre içinde koyu bir neointima elde etmek için diğer modeller üzerinde daha iyi olduğunu göstermektedir.

Şekil 1
Şekil 1: Sıçan Perikardiyal Yama Anjiyoplasti. (A) İVC venotomi gösteren Temsilcisi fotoğraf. (B) yama yerleştirildikten sonra IVC gösteren Temsilcisi fotoğraf. (C) aort arteriyotomi gösteren Temsilcisi fotoğraf. (D) yama yerleştirildikten sonra aorta gösteren Temsilcisi fotoğraf. A, aort; VKİ, inferior vena kava; P, perikard yama; * IVC veya aort arka intima; cetvel işaretleri 1 mm'dir.3fig1large.jpg "target =" _ blank "> bu rakamın daha büyük bir versiyonunu görmek için lütfen buraya tıklayınız.

şekil 2
Şekil 2: Agresif neointimal Hiperplazi Patch venoplasti içinde Günü 7 Patch arterioplastiden karşılaştırıldığında.
(A) H & E ile boyandı 7. günde, yama venoplasti gösteren Örnek düşük güç fotoğrafı. (B) H & E ile boyandı 7. günde yama anjioplasti gösteren Temsilcisi düşük güç fotoğrafı. (C) yama venoplasti üzerinde neointimal oluşumu gösteren temsili yüksek güç fotoğraf. (D) yama arterioplastiden üzerinde neointimal oluşumu gösteren temsili yüksek güç fotoğraf. Ölçek çubuğu = 0,5 mm; Yüksek güç = 100 um. P, yama; L, VKİ veya aort lümen; N, neointima. (E) çubuk grafiği showing arterioplastiden göre venoplasti neointimal kalınlığı artmıştır. hata çubuğu SEM gösterir; * P = 0.0015, t-testi; n = 4 , bu rakamın büyük halini görmek için lütfen buraya tıklayınız.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Discussion

Bu, sırasıyla, bir yama venoplasti veya yama arterioplastiden oluşturma damar veya arterlerde da kullanılabilir sıçanda bir yama anjiyoplasti modeli açıklanmaktadır. Bu perikard yama modeli kullanarak, aort arterioplastiden (Şekil 2) 7, 8 ile karşılaştırıldığında sıçan IVC venoplasti agresif ve kararlı neointimal hiperplazi gösterdi.

Çeşitli teknik açıdan dikkat çekicidir. Aort arterioplastiden olarak, dikiş arter ortamının daha yüksek bir basınç kanının sızmasını önlemek için sıkı bir sayı ve / veya aralık yeterli olması önemlidir. VKİ venoplasti, IVC duvar son derece ince ve kırılgan olduğu için, özellikle bakım ve yumuşaklığı ile operatif tüm manevralar gerçekleştirmek için önemlidir. Buna ek olarak, implantasyon site çevresinde lomber ve küçük kolu damarlar dikkatle disseke ve kanamayı önlemek lige gerekir. Her iki arte içinderiyali ve venöz prosedürler, uzak kelepçe herhangi lümen havayı tahliye etmek ve bir akciğer hava embolisi önlemek için ilk kaldırılır. proksimal kelepçe sonra distal kan akımını geri kaldırılır. aorta veya IVC duvar delme sırasında Son olarak, posterior duvarı delmeyin yoktur; arka duvar delinmiş ise, bir 10-0 dikiş deliği kapatmak için kullanılmalıdır.

Aort yama anjiyoplasti bir dezavantajı ilerleyen zamanlarda (örneğin, post-operatif gün 30) de psödoanevrizmaların geliştirilmesidir. Bununla birlikte, venöz veya arteryel ortamında 7, 9 ya da neointimal oluşumu çalışma prosedürü sonraki ilk 2 hafta boyunca bu modelin yarar gösteren, ender ameliyat sonrası gün 7 ya da 14 gözlenen herhangi bir yalancı vardı.

Küçük hayvan yama anjiyoplasti interpozisyon grefti modellere göre birçok avantajı vardır. İlk olarak, ev sahibi damar doeSadece bir ön duvarı kesi yapılır olarak, kesilen gerekmez s; Bu cerrahi süresini azaltır ve kanama riskini en aza indirir. İkincisi, interpozisyon grefti iki anastomoz komplikasyon ameliyat süresi ve riskini artıran yanı sıra öğrenme eğrisi uzanan gerektirir. Patch anjiyoplasti ameliyat süresi ve komplikasyon riskini azaltır, tek bir anastomoz gerektirir. Üçüncü olarak, yama anjiyoplasti özünde potansiyel postoperatif gözlem 10 için artmış süre vererek, anastomoz yerinde darlık riskini azaltır.

Sonuç olarak, küçük çaplı damarları kapatmak için perikard yamaları kullanan yama anjiyoplasti gerçekleştirmek için bir yöntem tarif; Prosedür damarları ve arterler de aynı şekilde uygulanabilir. Perikard yama venoplasti erken postoperatif zamanlarda arterioplastiden modeline kıyasla daha agresif neointimal oluşumu göstermektedir. Bu sonuç bu model i programı önerirn venöz ve implante biyomateryallerle arter çevresi arasındaki karmaşık etkileşimlerin farklılıkları belirleyen. Buna ek olarak, yama bileşimleri farklı tipte, bu farklı malzemelere karşılığının test edilmesi için kontrol edilebilir.

Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.

Acknowledgments

Bu çalışma, Ulusal Sağlık Hibeler R56-HL095498, R01-HL-095498 (AD), R01-HL128406, Veterans Affairs Biyomedikal Laboratuvarı Araştırma Amerika Birleşik Devletleri Bölümü Merit İnceleme Ödülü I01-BX002336 Enstitüleri tarafından kısmen desteklenmiştir Gelişim Programı (MS), Yale (AD) Cerrahi Ohse ödülü Bölümü (JMS kadar) Sarnoff Kardiyovasküler Vakfı Bursu ve kaynaklar yoluyla ve Veterans Affairs Connecticut Sağlık Sistemi (West Haven, CT de tesislerinin kullanımı ). Sığır perikardiyal yamalar cömertçe Lemaitre Vasküler Inc. (Burlington, MA) tarafından temin edildi.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Bovine pericardial patch LeMaitre Vascular
Vascular clamp Roboz Surgical Instrument Co. RS-5424
Clamp applying forceps Roboz Surgical Instrument Co RS-5410
10-0 Prolene suture Arosurgical Co. T05A10N10-13

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Muto, A., Nishibe, T., Dardik, H., Dardik, A. Patches for carotid artery endarterectomy: current materials and prospects. J Vasc Surg. 50 (1), 206-213 (2009).
  2. Li, X., et al. Current usage and future directions for the bovine pericardial patch. Ann Vasc Surg. 25 (4), 561-568 (2011).
  3. Biasi, G. M., Sternjakob, S., Mingazzini, P. M., Ferrari, S. A. Nine-year experience of bovine pericardium patch angioplasty during carotid endarterectomy. J Vasc Surg. 36 (2), 271-277 (2002).
  4. Papakostas, J. C., et al. Use of the vascu-guard bovine pericardium patch for arteriotomy closure in carotid endarterectomy. Early and long-term results. Ann Vasc Surg. 28 (5), 1213-1218 (2014).
  5. Ohwada, S., et al. Glutaraldehyde-fixed heterologous pericardium for vena cava grafting following hepatectomy. Hepatogastroenterology. 46 (26), 855-858 (1999).
  6. Mori, A., et al. Standard hepatic vein reconstruction with patch plasty using the native portal vein in adult living donor liver transplantation. Liver Transpl. 18 (5), 602-607 (2012).
  7. Bai, H., et al. Pericardial patch venoplasty heals via attraction of venous progenitor cells. Physiological Reports. 4 (12), (2016).
  8. Li, X., et al. Pericardial patch angioplasty heals via an Ephrin-B2 and CD34 positive cell mediated mechanism. PLoS One. 7 (6), 38844 (2012).
  9. Bai, H., et al. Pretreatment of pericardial patches with antibiotics does not alter patch healing in vivo. J Vasc Surg. 63 (4), 1063-1073 (2016).
  10. Muto, A., et al. Eph-B4 prevents venous adaptive remodeling in the adult arterial environment. J Exp Med. 208 (3), 561-575 (2011).

Tags

Tıp Sayı 120 perikard yama Arteriyotomi venotomi anjiyoplasti venoplasti neointimal hiperplazi hayvan modeli sıçan
Sıçan Aort veya İnferior Vena Cava de Anjiyoplasti Patch
Play Video
PDF DOI DOWNLOAD MATERIALS LIST

Cite this Article

Bai, H., Li, X., Hashimoto, T., Hu,More

Bai, H., Li, X., Hashimoto, T., Hu, H., Foster, T. R., Hanisch, J. J., Santana, J. M., Dardik, A. Patch Angioplasty in the Rat Aorta or Inferior Vena Cava. J. Vis. Exp. (120), e55253, doi:10.3791/55253 (2017).

Less
Copy Citation Download Citation Reprints and Permissions
View Video

Get cutting-edge science videos from JoVE sent straight to your inbox every month.

Waiting X
Simple Hit Counter