Summary
Des modèles animaux de l’athérosclérose sont essentielles pour comprendre le mécanisme et d’enquêter sur nouvelles approches pour empêcher le développement de la plaque ou la rupture, des principales causes de décès dans le monde industrialisé. Ce protocole utilise une combinaison de blessure de ballon et régime riche en cholestérol pour induire les plaques d’athérosclérose dans l’artère iliaque lapin.
Abstract
Syndrome coronarien aigu résultant de l’occlusion coronaire après rupture et le développement de la plaque d’athérosclérose est la principale cause de décès dans le monde industrialisé. Les lapins blancs de Nouvelle-Zélande (NZW) sont largement utilisés comme modèle animal pour l’étude de l’athérosclérose. Ils développent des lésions spontanées lorsque nourris avec un régime athérogène ; Cependant, cette technique nécessite beaucoup de temps de 4 à 8 mois. Afin d’améliorer et accélérer l’athérogenèse, une combinaison de régime athérogène et lésion endothéliale mécanique est souvent utilisée. La procédure présentée pour induire les plaques d’athérosclérose chez les lapins utilise un cathéter à ballonnet pour perturber l’endothélium dans l’artère iliaque gauche de NZW lapins nourri avec la diète athérogène. Tels dommages mécaniques causés par le cathéter à ballonnet induit une chaîne de réactions inflammatoires initiant néointimale accumulation de lipides de manière dépendante de temps. Plaque d’athérosclérose après épaississement de néointimale Voir la bulle blessure avec infiltration lipidique vaste, la teneur en cellules des muscles lisses haute et présence de macrophages dérivés des cellules spumeuses. Cette technique est simple, reproductible et produit plaque de longueur contrôlé au sein de l’artère iliaque. L’ensemble de la procédure se termine dans 20-30 min. La procédure est sécuritaire à faible mortalité et propose également de réussite élevé à obtenir d’importantes lésions intimale. La procédure du cathéter à ballonnet induit des résultats de lésions artérielles dans l’athérosclérose dans les deux semaines. Ce modèle peut être utilisé pour l’étude de la pathologie de la maladie, imagerie diagnostique et d’évaluer de nouvelles stratégies thérapeutiques.
Introduction
Rupture des plaques athéroscléreuses vulnérables est l’une des principales causes de décès dans les pays industrialisés1. Bien que les études effectuées au cours des dernières décennies s’est déroulée à plusieurs mécanismes moléculaires et cellulaires impliqués dans la progression de la plaque, a poursuivi des efforts sont encore nécessaires non seulement à élucider le mécanisme complex de la progression de la maladie, mais aussi pour tester de nouvelles thérapeutiques approches. Plusieurs modèles animaux ont été proposées pour l’étude de l’athérosclérose. La manipulation génétique, blessure de cholestérol alimentaire ou mécanique de l’endothélium sont les stratégies standards partagés par des modèles plus animales de l’athérosclérose, y compris des souris, des lapins et des porcs miniatures. Parmi ceux-ci, les lapins NZW sont sensibles aux régime cholestérol tandis que les souris et les rats normaux n’absorbent pas significativement le cholestérol alimentaire2,3,4. Lapins développent spontanément des lésions aortiques riches en macrophages avec certains composant fibreux lorsqu’il est nourri avec cholestérol diète riche5,6. Cependant, le temps préparatoire long de 4 à 8 mois pour induire l’athérosclérose plaquesby alimentation cholestérol diète seule6,7 est un inconvénient majeur pour la plupart des paramètres expérimentaux. Dans la quête pour induire des lésions en relativement peu de temps, une combinaison de taux élevé de cholestérol diète et ballon de préjudice a été développée par Baumgarter et Studer8. L’objectif global de cette technique consiste à induire les plaques d’athérome composés de cellules spumeuses (semblables à la strie gras chez l’homme) chez des lapins hypercholestérolémiques dans les 2 semaines. La technique actuelle décrit la procédure de lésion de la paroi artérielle basée sur la méthode de Baumgarter à l’aide d’un cathéter à ballonnet avancé dans l’artère iliaque des lapins hypercholestérolémiques NZW.
Avec un régime riche en cholestérol, blessure résultant de ballon induite par dé-endothélialisation conduira à l’athérosclérose. Blessure de ballon accélère la formation des lésions athéroscléreuses et produit plaque de taille unique et de la distribution. Épaississement de l’intima augmente sur une période de temps et de la cellule intima infiltration commence dans quelques jours après une blessure. Stries gras avec des macrophages substantiels commencent à apparaître après 7-10 jours de blessure de ballon et sont représentés comme des lésions de Type II selon la classification de l’American Heart Association. Blessure de ballon chez le lapin est souvent réalisée dans l’aorte pour étudier la composition de la plaque. L’endothélium néointimale exprime des niveaux élevés de la molécule d’adhésion intercellulaire. Les plaques sont associées à la dissection médiale et changements adventitiels. Les lésions athéroscléreuses sont composées de lipides, prolifération cellules musculaires lisses (CML), fibres de collagène et des cellules inflammatoires qui s’accumulent sous l’endothélium régénérée et sont principalement de type II dans la nature. La distribution topologique des plaques de lapin était semblable à celle rapportée dans les aortes humaine 9,10 , en principe, l’aorte est la plus grande taille par rapport aux artères iliaques et produirait une plaque plus grande longueur. Toutefois, l’avantage majeur de l’utilisation de l’artère iliaque comme le site de l’athérosclérose chez les lapins est son accessibilité, sa ressemblance avec contenu musculaire de l’artère coronaire humaine11, lésion uniforme développement12, facteur tissulaire élevée activité13 et dimension compatible navire comparable à l’artère coronaire humaine permettant l’évaluation des dispositifs fabriqués commercialement morphométriques et points de terminaison angiographiques. Méthodes invasives et non invasives ont été étudiés pour analyser les plaques dans les artères iliaques lapin dans l’animal vivant. Les rapports précédents décrivent l’utilisation de l’imagerie (IRM) à l’aide d’un système de MR tesla 2,35 14 en outre par résonance magnétique, échographie intravasculaire (IVUS) ou cathéters tomographie par cohérence optique peuvent être convenablement appliquée à l’image plaques d’athérome dans les artères iliaques de lapin. L’artère iliaque est accessible pour l’échographie lorsque vous utilisez une échographie à haute résolution et l’aorte peut également être exploré avec cette technique.
Au cours de la dernière décennie, ce modèle de lapin de blessure de ballon a aidé à mieux comprendre les mécanismes de progression de plaque15et plaque régression16. En outre, le modèle a été utilisé pour étudier l’influence de nouveaux agents thérapeutiques tels que les statines, standards antiagrégants plaquettaires, antioxydant agents17,18 et endoprothèses à élution de médicaments tels que l’évérolimus ou à élution de zotarolimus stent19,20 sur néointimale épaississement. Ce modèle a également été utilisé pour enquêter sur l’imagerie intravasculaire de proche infrarouge fluorescence imaging cathéter21.
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Protocol
ce protocole expérimental a été approuvé par l’Office vétérinaire Cantonal, de Fribourg et de la Suisse vétérinaire Office fédéral, la Suisse (2015 FR/58).
Remarque : on a utilisé les lapins NZW mâle pesant entre 2,8 à 3,2 kg. Les animaux étaient logés dans des conditions classiques (12 h de lumière et sombre cycle, fourni des vivres et eau ad libitum). Avant la dénudation de ballon, les animaux ont été acclimatés pendant une semaine au cours de laquelle ils ont été nourris avec le régime normal. Après 1 semaine d’acclimatation, lapins sont passés à la diète athérogène consistant à haute teneur en graisses (8,6 %) et en acides gras saturés avec 205 mg/kg d’aliment cholestérol (1 %) pendant la durée de l’étude de l’ensemble. Blessures du ballonnet dans l’artère iliaque gauche s’est déroulée une semaine après le début du régime et animaux ont été sacrifiés après 2 semaines ou 4 semaines de blessures ballon.
1. procédures préopératoires
- stériliser tous les instruments chirurgicaux avant de l’utiliser avec un stérilisateur de perle de verre ou un autre instrument approprié.
- Préparer et vérifier le cathéter à ballon.
- Fixez un raccord luer lock de 1 mL seringue remplie de soluté physiologique à la partie luer-lock du cathéter à ballonnet. Surveiller attentivement pour absence de l’air emprisonné. Vérifiez les fuites et ballonnet approprié en appuyant sur le piston de la seringue.
- Peser le lapin et allumez le thermopad à 37 ° C.
- Utiliser une solution de buprénorphine à une concentration de 0,3 mg / ml. injecter une dose de 0,01 mg/kg par voie sous-cutanée.
- Anesthésier le lapin avec 5 % isoflurane et 5 L/min O 2 dans une chambre à induction pendant 10-15 min.
- Placer le lapin anesthésié sur le coussin chauffant conservé sur la plate-forme chirurgicale. Placez le patch et clips pour surveiller la température, la respiration et électrocardiogramme.
- Fixer le museau du lapin à un masque relié à une machine d’anesthésie adapté. Maintenir l’anesthésie à l’isoflurane (4,0 % avec 2.5 L/min O 2). Confirmer le bonne anesthetization (indiquée par manque de tonus musculaire et la perte des réflexes nauséeux et pennes).
- Pommade ophtalmique à deux yeux pour éviter les cornées de l’évaporation. Drapez le lapin avec un drap stérile chirurgicale avec uniquement les membres inférieurs exposés.
2. Protocole chirurgical
- enlever les poils de la zone ventrale juste en dessous de l’articulation du genou à l’aide de tondeuses à cheveux animaux.
- Tamponner la zone avec un désinfectant approprié pour nettoyer la peau et enlever les cheveux dénoués.
- Localiser l’artère saphène et pratiquer une incision de la peau petit d’environ 1,5 cm de longueur à l’aide d’un scalpel.
- Exposer une petite portion de l’artère saphène externe avec une petite pince courbe sans endommager la veine fémorale et le nerf fémoral.
- Placer deux boucles lâches ligature (soie de 5-0) sous l’artère saphène et attacher une boucle de ligature vers l’extrémité distale de l’artère. Placer une pince microvasculaire au-dessus du lien pour arrêter le flux sanguin de l’artère iliaque.
- Par voie topique appliquer une goutte de papavérine pour dilater l’artère et empêcher vasospasme.
- Soulever l’artère saphène à l’aide de la ligature liée et faire une petite artériotomie incision à l’aide d’un 24 aiguille de calibre.
- Élever les volets de l’incision avec une pince fine et introduire doucement un pic de veine ou une guidage de l’aiguille dans la lumière de l’artère.
- Insérer un cathéter d’embolectomie artérielle Français Fogarty 2 dans l’artère saphène. Retirer la veine pick et pinces microvasculaires.
- Avancer le cathéter jusqu'à la sixième marque (20-25 cm), correspondant à une position plus ou moins 2 à 5 cm au-dessus de la bifurcation iliaque.
- Gonfler le ballonnet avec physiologique de 0,1 mL à l’aide d’une seringue de 1 mL ou à une pression nominale de 6 atm en utilisant un gonfleur manuel réglementé tel que décrit dans 16 , 22.
- Tenez le cathéter à ballonnet avec une pince et faites glisser retour de 6 cm par l’intermédiaire de l’iliaque arterytoward le point d’insertion, tout en tournant le cathéter.
- Dégonfler le ballonnet en tirant le piston de la seringue.
- Répéter les étapes 2.10 à 2.13 trois fois pour assurer la complète dénudation endothéliale.
- Retirer le cathéter et attacher immédiatement la boucle de ligature juste au-dessus du site de l’artériotomie pour arrêter le saignement.
- Appliquer adapté tout antiseptique sur le pourtour de la plaie et essuyer de suite la formation de caillots sanguins. Refermer l’incision de la peau avec une suture de 5-0 et désinfecter le site de la chirurgie avec solution de povidone-iode.
- Répéter les étapes 2.1 à 2.16 sur la controlatérale iliaque en utilisant un nouveau cathéter.
- Effectuer un écouvillonnage de la pommade ophtalmique d’yeux.
3. Soins postopératoires
- administrer sulfadoxine 40 mg/kg et le triméthoprime 8 mg/kg ou tout autre antibiotique approprié immédiatement après l’intervention chirurgicale.
- Pendant la période de récupération anesthésie, garder le lapin sur un coussin chauffant placé dans une cage propre autoclavée.
- Supprimer le correctif de la surveillance et des clips.
- Après récupération, retourner les lapins de leur cage maison. Injecter par voie sous-cutanée buprénorphine 0,05 - 0,1 mg/kg post - opératoirement toutes les 6 à 12 h pendant 48 h. diète athérogène continuer pour un autre deux semaines ou 4 semaines.
4. La récolte de tissus et analyse de la Composition de la Plaque
- après deux semaines (pour la plaque mince au début) ou trois semaines de blessures de ballon, anesthésier le lapin l’isoflurane de façon similaire, tel que décrit ci-dessus.
- Ouvrir la cavité thoracique et euthanasier les lapins par exsanguination intracardial.
- Isoler les artères iliaques décrits dans 23.
- Brièvement, ouvrir l’abdomen et exposer le rétropéritoine. Tracer l’aorte vers la bifurcation iliaque et attachez-le au-dessus de la bifurcation. Retirez soigneusement les tissus environnants pour exposer et isoler les deux artères iliaques.
- Dissect sortir les deux artères iliaques et les plonger dans une solution saline tamponnée au phosphate glacée. Retirer les caillots avec l’aide de pinces. Diviser chaque artère iliaque en 4 à 6 segments pour caractériser l’épaisseur de la plaque tout au long de l’artère.
- Immédiatement incorporer les segments artériels dans un moule contenant la température de coupe optimale composée, clin d’oeil-gel à l’aide d’azote liquide et gardez-le à-70 ° C. préparer 5 µm coupes d’épaisseur à l’aide d’un cryostat comme décrit dans 24. L’histologie
- Perform, immunofluorescence ou immunohistochemical souillant pour morphométrie, lipides de la plaque et le contenu cellulaire tel que décrit dans 10 , 25.
Remarque : En bref, rincer les sections artérielles avec du sérum physiologique tamponné au phosphate (PBS) et permeabilize à l’aide de 0,2 % Triton. Rincez les sections avec du PBS et bloquer les sites non spécifiques avec 2 % d’albumine sérique bovine pendant 30 min. laisser incuber les sections pendant 1 h à 37 ° C avec anti actine α-SM (1 : 200) ou d’anticorps RAM11 (1 : 200). Rincer les sections avec du PBS et leur incubation avec l’anticorps secondaire approprié pendant 30 min à 37 ° C. Lavez à nouveau avec du PBS et ajouter Hoechst (5 µg/mL) pendant 10 min détecter les noyaux.
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Representative Results
Blessure de ballonnet de l’artère iliaque a été réalisée avec succès, sans complication (Figure 1). Le temps opératoire total varie de 20 à 30 min pour les blessures ne jouée qu’une seule artère iliaque et 35 à 45 min pour des blessures sur les deux artères. Le lapin récupéré moins de 1 h après la blessure de ballon. Tous les animaux est apparu en bonne santé, sans perte de poids significative. Aucune infection, œdème ou thrombose artérielle a été rencontrée. La région de la plaie était normale en dehors de certaines fibrose légère sur le site de suture. Après 4 semaines de diète athérogène alimentation, lapins exposé hypercholestérolémie de ± 44 18 mM/l.
Figures 2 a, 2E de la Figureet voir la Figure 2I la droite blessé artère iliaque (ne pas soumis à des blessures de ballon) avec une apparence normale. Une combinaison de ballon blessures et cholestérol dietresulted changements structurels dans la paroi des vaisseaux conduisant au développement de la plaque athérosclérotique dans deux semaines (Figure 2 et Figure 3). Les artères iliaques blessés blessés et ballon pour ont été isolées de l’animal même. La réponse proliférative vasculaire à l’injure de ballon comme un événement déclencheur a donné lieu à des lipides infiltration (8,7 ± 1,7 % d’espace-lipides) (Figure 2 et Figure 3), muscle lisse migration cellulaire et la prolifération (Figure 4), ainsi recrutement de macrophages (Figure 4) conduisant à une augmentation en rapport d’épaisseur intima-média (1,5 ± 0,2) et zone de plaque (0,8 ± 0,2 mm2) avec un accompagnement baisse dans la zone de lumen (1,4 ± 0,2 mm2) (Figure 3) relevé 2 semaines après le ballon des blessures. RAM-11 est un anticorps monoclonal qui est spécifiquement dirigé contre le cytoplasme des macrophages de lapin. Actine α-SM identifie l’actine musculaire et réagit avec les cellules musculaires lisses vasculaires dans les vaisseaux sanguins. Ces anticorps ont été précédemment utilisés pour étudier les macrophages et les cellules musculaires lisses dans les lésions intimale du lapin. Ces changements ont continué d’évoluer avec le temps et une nouvelle augmentation de rapport d’épaisseur intima/media (2,6 ± 0,2) et luminal restrictives (0,7 ± 0,1 mm2) (Figure 2 et Figure 3) a été noté 4 semaines après la blessure de ballon. Cette technique aboutit au développement robuste des plaques d’athérosclérose qui se développe au fil du temps et a été étudié après 2 à 4 semaines.
Figure 1 : représentation schématique illustrant la chronologie de la Progression de la Plaque suite blessure de ballon. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 2 : ballon blessure provoquée par l’athérosclérose dans l’artère iliaque lapin. Des images représentatives de Movat pentachrome (A-D), l’hématoxyline-éosine (E-H) et l’huile rouge O (I-L) coupes de blessés non colorées (A, E, I), 2 semaines après l’accident de ballon (B, F, J) (n = 5) et 4 semaines après blessure de ballon (C, G, K) (n = 3) segments de l’artère iliaque de diète athérogène nourris NZW lapins. Echelle pour D, H et L est de 100 µm. Echelle pour les autres images = 500 µm. étiquette dans l’image B est le lumen, intima, IEL (limitante élastique interne) et l’anguille (limitante élastique externe). Media est la zone située entre IEL et anguille. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 3 : analyse morphométrique de la Plaque. Le scatter plot montre intima/media rapport épaisseur, zone de la plaque, lumen et % huile rouge O positif dans les sections de l’artère iliaque de contrôle non blessé, ballon blessé artère à 2 (n = 5) et 4 semaines (n = 3). Les données apparaissent comme moyenne ± SD. * p < 0,05 vs artère non blessé, #p < 0,05 vs 4 semaines post ballon lésion. N.D. dénote non détecté. Zone de plaque est calculée en soustrayant de la région de lumen de la région IEL tandis que de l’huile rouge zone positive O représente le % de la surface de mur de navire transversale totale. S’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
Figure 4 : analyse immunohistochimique de la Composition de la Plaque. Images représentatives montrant actine muscle lisse-α (rouge) (A-D) et les macrophages, les cellules positives (RAM 11) (rouge) (E-F). Panneaux de droite montre les images fusionnées respectifs avec Hoechst (bleu) et de l’élastine (vert). Echelle = 100 µm. s’il vous plaît cliquez ici pour visionner une version agrandie de cette figure.
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Discussion
Le modèle de l’athérosclérose de l’artère iliaque lapin est largement utilisé dans la recherche de l’athérosclérose. Avec ce protocole, les lapins a rapidement développement des plaques plus sévères et avancés par rapport aux lésions spontanées développées avec seulement le régime cholestérol. Ce qui est important, les animaux récupérer rapidement de la chirurgie.
L’impulsion principale pour l’athérogenèse est les dommages mécaniques causés par le cathéter à ballonnet qui blesse l’endothélium et distend le mur de navire26. Cette procédure entraîne une réponse remodelage caractérisée par une inflammation avec le recrutement de macrophages et d’accumulation de lipides lorsqu’ils sont associés à la diète hypercholestorolemic, migration des cellules musculaires lisses vasculaires et la prolifération, matrice améliorée synthèse et mise en place d’une néointima envahissante dans un temps dépendant fashion15,16. Insérer le cathéter à ballonnet est la partie la plus critique de la procédure. Il doit être prudent pour éviter d’introduire avec force le ballon. L’utilisation de périphérique artère saphène à accéder à l’artère iliaque commune simplifie la technique. Artère iliaque est également accessibles par l’intermédiaire de l’artère carotide allégée comme décrit plus haut27,28. Toutefois, évaluer l’artère iliaque, par l’intermédiaire de l’artère carotide exige un haut degré d’expertise chirurgicale et des équipements supplémentaires, par exemple une unité de l’angiographie. Il est également associé à des complications liées à la procédure comme un dommage à la veine jugulaire, conduisant à une hémorragie fatale29. Utilisation de vasodilatateur topique tels que papavérine contribue à dilater le vaisseau et réduire la résistance de la paroi artérielle contre le ballon sonde30. La taille de la pression et le ballon de l’inflation il faut examiner attentivement, car ceux-ci ont une association directe sur néointimale formation31. Une distension excessive de l’info-bulle à un degré plus élevé que les niveaux désirés pourrait conduire à la rupture de la paroi des vaisseaux. Cela pourrait entraîner une fuite de sang et de la formation du thrombus robuste dans la lumière et sur la surface extérieure26.
Les animaux doivent être nourris un lipide régime riche pour 1 ou 2 semaines avant la blessure de ballon pour s’assurer que le préjudice endothélial se produit dans un cadre hypercholestérolémique. Il aide également les animaux à s’adapter à la nouvelle diète. Bien que cette technique induit des plaques avancés chez le lapin, la morphologie des plaques diffère que chez l’homme. Les lésions humaines spontanées sont limitées à la région sub-endothéliales avec une couche élastique interne intact32. Ici, les études réalisées jusqu'à 4 semaines a montré sans noyaux fibreux. La lésion athéroscléreuse reste semblable à gras strie avec infiltration de macrophages substantielle.
Nombreux modèles animaux petits et grands ont été utilisées pour la compréhension de l’athérogenèse6. Le modèle d’artère iliaque ballon-blessure lapin a été utilisé pour étudier l’effet de nouveaux agents thérapeutiques, vecteurs de nouveaux médicaments, évolution de la plaque et imagerie10,32,33. Unique ou multiples ballon injurieshave été réalisées dans l’artère iliaque34,35, artère carotide36,37et aorte10,38. Les avantages de la méthode présentée sont le développement du volume de la grande plaque et épaisseur par rapport à l’utilisation de l’artère carotide. En outre, le can iliaque controlatérale comme un contrôle et par conséquent réduit les animaux29. La blessure de ballon dans les artères iliaques de lapin peut être effectuée facilement et en toute sécurité en utilisant la méthode décrite ici. Plaque se développe d’une manière dépendante de temps et est homogène sur toute la longueur de l’artère. Autres modèles athérosclérotiques lapin ont également été développés comme le Watanabe héréditaires hyperlipidémiques (WHHL) modèle, un modèle animal transgénique présentant un déficit en récepteurs de lipoprotéines basse densité. Le modèle de blessure de ballon peut également être appliqué à lapin WHLL pour produire des lésions à un site défini.
Il y a des différences entre l’artère iliaque de lapin et des plaques coronaires humaines. En effet, plusieurs procédures alternatives ont été créées dans le but de développer des lésions athéroscléreuses avancées et pour créer un modèle de rupture de la plaque, comme observé chez les humains,39. Par exemple, la formation de plaques instables a été induite en éliminant le régime de cholestérol après 8 semaines chez le lapin qui a subi une blessure de ballon16. Autres procédures modifiées utilisent triggers pharmacologiques de venin de vipère Russell10 et ultérieures ballon répétées des blessures40pour évaluer le mécanisme de rupture de la plaque, croissance thrombogénèse et thrombus dans l’athérosclérose disposition des vaisseaux. Venin de vipère Russell contient des protéases qui activent la cascade de coagulation menant à la thrombose. Résultats de blessures répétées de ballon dans la génération de thrombine par plaque de facteur tissulaire40. Il est à noter que les résultats de modèles animaux, y compris le modèle de lapin ne peuvent pas parfaitement extrapoler à l’homme. Cependant, ces modèles peuvent être un outil utile pour évaluer et comparer l’efficacité de nouvelles interventions pharmacologiques. Attention les extrapolations s’impose en ce qui concerne le degré de composition de l’HYPERCHOLESTEROLEMIE et plaque d’élargir les connaissances sur l’étiologie, physiopathologie et traitement de l’athérosclérose humaine. Le modèle présenté ici permet d’étudier les mécanismes impliqués dans l’évolution de la plaque et étudier l’effet des nouvelles thérapies anti-athéromateuses, orientée vers la plaque de stabilisation/régression.
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Disclosures
Les auteurs déclarent sans intérêts financiers concurrents.
Acknowledgments
Ce travail a été soutenu par la Swiss National Science Foundation Grant 150271.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| New Zealand White rabbits | Charles River laboratories,France | Cre:KBL(NZW) | |
| Cholesterol rich diet | Ssniff spezialdiäten | Ssniff EF K High Fat and Cholesterol | |
| Glass bead sterilizer-Germinator 500 | VWR, Leicestershire, UK | 101326-488 | |
| Fogarty balloon embolectomy catheters, 2 French | Edwards Lifesciences, Switzerland | 120602F | For single use only |
| Luer Lock Syringe | Becton, Dickinson and Company, USA | 309628 | |
| Thermopad Type 226 | Solis, Switzerland AG | 397387 | |
| Buprenorphine- Temgesic | Reckitt Benckiser AG, Switzerland | 7.68042E+12 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017 | 2667-46-7 | |
| Anaesthesia machine-combi-vet Base Anesthesia System | Rothacher Medical GmbH, Switzerland | CV 30-301-A | |
| Cardell touch veterinary vital signs monitor | Midmark, Ohio, USA | 8013-001 | |
| Ophthalmic ointment-Humigel | Virbac, France | ||
| Animal hair clippers | Aesculap AG, Germany | GT420 | |
| Disinfectant-Betadine solution | MundipharmaMedicalCompany, Switzerland | 14671-1203 | |
| Dumont #7 Forceps | FST Germany | 11274-20 | |
| Medium and small microscissors | Medline International Switzerland Sàrl | UC4337 | |
| Microvascular clamps | FST, Germany | 18051-28 | |
| Papaverine | ESCA chemicals, Switzerland | RE 356 803 | |
| Vein Pick | Harvard Apparatus, Cambridge, UK | 72-4169 | For single use only |
| Saline | Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Switzerland | 1330055 | |
| Polysorb 5-0 suture | Covidien AG, Switzerland | UL 202 | Monofilament |
| Sulfadoxine and Trimethoprim-Trimethazol | Werner Stricker AG, Switzerland | Swissmedic Nr. 50'361 | |
| Antiseptic- Octenisept | Schülke & Mayr AG, Switzerland | GTIN: 4032651214068 | |
| Phosphate Buffered Saline | Roth | 1058.1 | |
| Isobutanol-2-Methylbutane | Sigma-Aldrich, Switzerland | M32631-1L | |
| Optimum Cutting Temperature compound-Tissue-Tek | VWR Chemicals, Belgium | 25608-930 | |
| Cryostat | Leica, Glattbrugg, Switzerland | Leica CM1860 UV | |
| Glass slide- Superfrost Plus | Thermo Scientific | 4951PLUS4 | |
| Mayer's Haematoxylin | Sigma-Aldrich, Switzerland | MHS32-1L | |
| Eosin 0.5% aq. | Sigma-Aldrich, Switzerland | HT110232-1L | |
| Oil Red O | Sigma-Aldrich, Switzerland | O0625-25G | |
| α-smooth muscle actin antibody | Abcam, UK. | ab7817 | |
| Macrophage Clone RAM11 antibody | DAKO, Switzerland | M063301 | |
| Hoechst | Abcam, UK. | ab145596 | |
| Goat polyclonal Secondary Antibody (Chromeo 546) | Abcam, UK. | ab60316 | |
| Alexa Fluor 488/547 | Abcam, UK. | ||
| Glycergel Mounting Medium, Aqueous | DAKO, Switzerland | C056330 | |
| Hematoxylin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | H3136-25G | |
| Ferric chloride for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 157740-100G | |
| Iodine for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 207772-100G | |
| Potassium iodide for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 60400-100G-F | |
| Alcian blue for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | A5268-10G | |
| Strong Ammonia for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 320145-500ML | |
| Brilliant crocein MOO for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 210757-50G | |
| Acid Fuchsin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | F8129-50G | |
| Sodium Thiosulfate for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 72049-250G | |
| Phosphotungstic acid for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 79690-100G | |
| Crocin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 17304-5G | |
| EUKITT for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 03989-100ML |
References
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