Summary
Modelos animais de aterosclerose são essenciais para entender o mecanismo e a investigar novos enfoques para evitar o desenvolvimento de placa ou ruptura, das principais causas de morte no mundo industrializado. Este protocolo utiliza uma combinação de lesão de balão e colesterol dieta rica para induzir ateroma na artéria ilíaca coelho.
Abstract
Síndrome Coronariana Aguda resultante da oclusão coronária após ruptura e desenvolvimento da placa aterosclerótica é a principal causa de morte no mundo industrializado. Coelhos Nova Zelândia branco (NZW) são amplamente utilizados como modelo animal para o estudo da aterosclerose. Eles desenvolvem lesões espontâneas quando alimentados com dieta aterogênico; no entanto, isso requer tempo de 4 a 8 meses. Para mais, melhorar e acelerar o atherogenesis, uma combinação de dieta aterogênico e lesão endotelial mecânica é frequentemente empregada. O procedimento apresentado para indução de ateroma em coelhos usa um cateter balão para perturbar o endotélio na artéria ilíaca esquerda de coelhos NZW alimentados com dieta aterogênico. Tais danos mecânicos causados por cateter balão induz uma cadeia de reações inflamatórias, iniciando o acúmulo de lipídios neointimal em uma forma dependente do tempo. Placa aterosclerótica seguindo balão lesão mostrar neointimal aumento do volume com lipídios extensa infiltração, conteúdo de célula de alta de músculo liso e presença de macrófagos derivados de células de espuma. Esta técnica é simples, Reproduzível e produz placa de comprimento controlada dentro da artéria ilíaca. Todo o processo é concluído no prazo de 20-30 min. O procedimento é seguro, com baixa mortalidade e também oferece elevado sucesso na obtenção de lesões da íntima substanciais. O procedimento do cateter balão induzida resulta de lesão arterial em aterosclerose dentro de duas semanas. Este modelo pode ser usado para investigar a patologia da doença, diagnóstico por imagem e avaliar novas estratégias terapêuticas.
Introduction
Ruptura das placas ateroscleróticas vulneráveis é uma das principais causas de morte no nações industrializadas1. Embora pesquisas nas últimas décadas se desenrolou vários mecanismos moleculares e celulares envolvidos na progressão da placa, continuou ainda são necessários esforços não só para desvendar o complexo mecanismo de progressão da doença, mas também para testar novas terapêuticas aproxima-se. Vários modelos animais têm sido propostos para estudar a aterosclerose. Manipulação genética, ferimentos de endotélio de alimentação ou mecânica de colesterol são as estratégias padrão compartilhadas por modelos mais animais da aterosclerose, incluindo ratos, coelhos ou miniporcos. Entre estes, coelhos NZW são sensíveis à dieta rica em colesterol, enquanto ratos e ratos normais não absorvem significativamente colesterol dietético2,3,4. Coelhos, espontaneamente, desenvolver lesões da aorta ricas em macrófagos com algum componente fibroso quando alimentados com colesterol dieta rica5,6. No entanto, o tempo tempo preparatório de 4-8 meses para induzir aterosclerótica plaquesby alimentação colesterol dieta sozinho6,7 é uma grande desvantagem para a maioria das configurações de experimentais. Na busca para induzir lesões em tempo relativamente curto, uma combinação de colesterol alto dieta e balão prejuízo foi desenvolvida pela Baumgarter e Studer8. O objetivo geral desta técnica é induzir o ateroma composta de células de espuma (semelhantes a raia gorda em seres humanos) em coelhos hipercolesterolêmicos dentro de 2 semanas. A presente técnica descreve o procedimento de ferimento de parede arterial com base no método do Baumgarter utilizando um cateter balão avançado nas artérias ilíacas de coelhos hipercolesterolêmicos NZW.
Em conjunto com uma dieta rica de colesterol, danos que resultem de endotelização balão induzida vão levar a aterosclerose. Lesão de balão acelera a formação de lesões ateroscleróticas e produz placa de tamanho uniforme e distribuição. Espessamento da íntima aumenta ao longo de um período de tempo e célula da íntima infiltração começa dentro de alguns dias após lesão. Listras gordas com macrófagos substanciais começam a aparecer após 7-10 dias de lesão de balão e são representadas como lesão tipo II, de acordo com a classificação pela American Heart Association. Lesão de balão em coelho é frequentemente realizado na aorta para estudar a composição da placa bacteriana. O endotélio neointimal expressa altos níveis da molécula de adesão intercelular. As placas estão associadas com dissecção medial e alterações adventícia. Lesões ateroscleróticas são compostas de lipídios, proliferação células musculares lisas (SMCs), fibras colágenas e células inflamatórias que se acumulam sob o endotélio regenerado e são principalmente tipo II na natureza. A distribuição topológica de placas coelho foi semelhante à relatada na aorta humana 9,10 , em princípio, a aorta é maior no tamanho em comparação com as artérias ilíacas e produziria placa de maior comprimento. No entanto, a grande vantagem de usar a artéria ilíaca como o site da aterosclerose em coelhos é sua acessibilidade, sua similaridade no conteúdo muscular de coronária humana11, lesão uniforme desenvolvimento12, fator tecidual elevada atividade13 e consistente navio dimensão comparável ao humana artéria coronária, permitindo a avaliação dos dispositivos fabricados comercialmente morfométricos e angiográficos pontos de extremidade. Métodos invasivos e não-invasivos têm sido investigados para analisar as placas nas artérias ilíacas de coelho no animal vivo. Relatórios anteriores descrevem o uso de ressonância magnética (MRI) com a ajuda de um senhor de 2,35-tesla sistema 14 além disso, o ultra-som intravascular (USIV) ou cateteres de coerência óptica (OCT) a tomografia podem ser devidamente aplicado à imagem ateroma nas artérias ilíacas coelho. A artéria ilíaca é acessível por ultra-sonografia quando usando uma ecografia de alta resolução e a aorta também pode ser explorada com esta técnica.
Na última década, este modelo de coelho de lesão de balão tem ajudado a entender melhor os mecanismos de progressão de placa15e regressão de placa16. Além disso, o modelo tem sido usado para estudar a influência de novos agentes terapêuticos como estatinas, agentes antiplaquetários padrão, antioxidante agentes17,18 e stents farmacológicos tais como everolimus ou eluidor de Zotarolimus stent19,20 em espessamento neointimal. Este modelo também serviu para investigar a imagem intravascular de fluorescência de infravermelho próximo da imagem latente do cateter21.
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Protocol
este protocolo experimental foi aprovado pelo veterinário Cantonal, Friburgo e o suíço Federal veterinária Office, Switzerland (FR-2015/58).
Nota: foram utilizados coelhos NZW masculino com peso entre 2,8 a 3,2 kg. Os animais estavam alojados em condições convencionais (12 h luz e ciclo escuro, fornecida comida e água ad libitum). Antes de desnudamento do balão, os animais foram aclimatados para 1 semana, durante o qual eles foram alimentados com dieta de comida normal. Após 1 semana de aclimatação, coelhos foram trocados para aterogênico dieta consistindo de alto teor de gordura (8,6%) e ácidos graxos saturados com dieta rica em colesterol (1%) 205 mg/kg para a duração inteira de estudo. Lesão de balão na artéria ilíaca esquerda foi realizada 1 semana após o início da dieta e os animais foram sacrificados após 2 semanas ou 4 semanas de lesão balão.
1. procedimentos pré-operatórios
- esterilizar todos os instrumentos cirúrgicos antes do uso com um esterilizador de grânulo de vidro ou outro instrumento apropriado.
- Preparar e verificar o conjunto de cateter de balão.
- Anexar um conector luer-lock 1 mL seringa preenchida com solução salina normal para a parte do conector luer-lock do cateter balão. Monitorize cuidadosamente a ausência de ar. Verifique os vazamentos e garantir a inflação do balão apropriado pressionando o êmbolo da seringa.
- Pesar o coelho e ligar o thermopad a 37 ° C.
- Usar uma solução de buprenorfina em uma concentração de 0,3 mg / ml. injetar uma dose de 0,01 mg/kg por via subcutânea.
- ANESTHETIZE o coelho com 5% de isoflurano e 5 L/min O 2 em uma câmara de indução de 10-15 min.
- Coloque o coelho anestesiado sobre a almofada de aquecimento, mantida na plataforma cirúrgica. Coloque o patch e clipes para monitorar a temperatura, respiração e eletrocardiograma.
- Anexar o focinho do coelho para uma máscara facial conectada a uma máquina de anestesia adequada. Manter a anestesia com isoflurano (4,0% com 2,5 L/min O 2). Confirmar anesthetization adequada (indicado por falta de tônus muscular e perda de reflexos de mordaça e transformam).
- Aplicar a pomada oftálmica de ambos os olhos para impedir que as córneas de secagem. Cubra o coelho com uma folha cirúrgica estéril com apenas o membro inferior exposto.
2. Protocolo cirúrgico
- remover o cabelo da zona ventral logo abaixo as articulações de joelho, usando a máquina de cortar cabelo animal.
- Limpe a área com desinfetante apropriado para limpar a pele e remover pelos soltos.
- Localizar a artéria safena e faça uma incisão de pele pequena de cerca de 1,5 cm de comprimento com um bisturi.
- Expor uma pequena porção da artéria safena com pequenas pinças curvas sem danificar a veia femoral e o nervo femoral.
- Coloque dois loops de ligadura solto (seda 5-0) sob a artéria safena e amarre um laço de ligadura em direção a extremidade distal da artéria. Coloque uma pinça microvascular acima a ligadura para parar o fluxo de sangue da artéria ilíaca.
- Aplicar topicamente uma gota de papaverina para dilatar a artéria e prevenir vasoespasmo.
- Levante a artéria safena com a ajuda da ligadura amarrada e fazem uma incisão pequena arteriotomia usando um 24 agulha de calibre.
- Elevar as abas da incisão com pinça fina e inserir lentamente uma veia picareta ou uma guia de agulha no lúmen da artéria.
- Inserir um cateter de embolectomia arterial 2 francês Fogarty a artéria safena. Remover os grampos microvasculares e escolher veia.
- Avançar o cateter até a marca de sexto (20-25 cm) corresponde a uma posição de aproximadamente 2 a 5 cm acima da bifurcação ilíaca.
- Insuflar o balão com soro fisiológico normal de 0,1 mL utilizando uma seringa de 1 mL ou a uma pressão nominal de 6 atm usando um compressor de ar manual regulamentado conforme descrito em 16 , 22.
- Mantenha o cateter de balão com fórceps e arraste volta por 6cm através da ilíaca arterytoward o ponto de inserção, enquanto girar o cateter.
- Desinsuflar o balão puxando o êmbolo da seringa.
- Repita os passos 2.10 a 2.13 três vezes para garantir o completo desnudamento endotelial.
- Remover o cateter e imediatamente amarrar o laço de ligadura logo acima o site arteriotomia para parar o sangramento.
- Aplicar todo anti-séptico adequado em torno da periferia da ferida e limpar afastado os coágulos de sangue. Fechar a incisão na pele com uma sutura de 5-0 e desinfectar o local da cirurgia com solução de iodo-povidona.
- Repetir passos 2.1 a 2.16 sobre o contralateral ilíaca utilizando um cateter novo.
- a pomada oftálmica de olhos um esfregaço.
3. Cuidados pós-operatórios
- administrar sulfadoxine 40 mg/kg e trimetoprim 8 mg/kg ou a qualquer outro antibiótico adequado imediatamente após o procedimento cirúrgico.
- Durante o período de recuperação de anestesia, manter o coelho sobre uma almofada de calor colocada em uma gaiola limpa autoclavada.
- Remover o patch monitoramento e clipes.
- Após a recuperação, retornar os coelhos para jaulas em casa. Injectar por via subcutânea buprenorfina 0,05 - 0,1 mg/kg pós - operatório cada 6-12 h por 48 h. continuar aterogênico dieta por mais duas semanas ou quatro semanas.
4. Colheita de tecido e análise da composição da placa
- depois de duas semanas (para cedo placa fina) ou três semanas de lesão de balão, anestesiar o coelho utilizando isoflurano em uma maneira similar como descrito acima.
- Abrir a cavidade torácica e eutanásia os coelhos por exsanguinação intracardíaca.
- Isolar as artérias ilíacas, conforme descrito em 23.
- Brevemente, abrir o abdômen e expor o retroperitônio. Trace a aorta em direção a bifurcação ilíaca e amarrá-la acima da bifurcação. Retire com cuidado os tecidos circunvizinhos para expor e isolar ambas as artérias ilíacas.
- Dissecar fora de ambas as artérias ilíacas e mergulhe-os em solução salina gelada tamponada de fosfato. Remova os coágulos com a ajuda de pinças. Divida cada artéria ilíaca em 4-6 segmentos para caracterizar a espessura da placa ao longo da artéria.
- Imediatamente incorporar os segmentos arteriais em um molde contendo a temperatura ideal de corte composta, snap-congelamento com nitrogênio líquido e mantê-lo em-70 ° C. preparar 5 µm espessura seções usando um criostato, conforme descrito em 24.
- Executar histologia, imunofluorescência ou imuno-histoquímica mancha para morfometria, placa lipido e conteúdo celular conforme descrito em 10 , 25.
Nota: Brevemente, enxágue as seções arteriais com solução salina tamponada fosfato (PBS) e permeabilize usando 0,2% Triton. Enxagúe as seções com PBS e bloquear sites não específicas com albumina de soro bovino 2% por 30 min. Incubar as secções para 1 h a 37 ° C com anti actina α-SM (1: 200) ou anticorpo RAM11 (1: 200). Enxagúe as seções com PBS e incube-os com anticorpo secundário apropriado para 30 min a 37 ° C. Lave novamente com PBS e adicionar Hoechst (5 µ g/mL) por 10 min detectar núcleos.
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Representative Results
Lesão de balão da artéria ilíaca foi realizada com sucesso sem complicação (Figura 1). O tempo operacional total variou de 20 a 30 min para lesões executada apenas uma artéria ilíaca e 35 a 45 min para lesões em ambas as artérias. O coelho recuperado dentro de 1h após a lesão de balão. Todos os animais apareceram saudáveis sem perda significativa de peso. Sem infecção, edema ou trombose arterial foi encontrada. A área da ferida foi normal, além de alguns fibrose leve no local da sutura. Após 4 semanas de alimentação dieta aterogênico, coelhos exibiram hipercolesterolémia de 44 ± 18 mM/l.
Figuras 2A, Figura 2Ee Figura 2I mostrar certa ileso artéria ilíaca (não submetida a lesão de balão) com uma aparência normal. Uma combinação de balão dietresulted de lesão e colesterol em mudanças estruturais da parede do vaso, levando ao desenvolvimento da placa de ateroma em duas semanas (Figura 2 e Figura 3). As artérias ilíacas feridas ilesos e balão para foram isoladas a partir do mesmo animal. A resposta vascular proliferativa para lesão de balão como um evento desencadeante resultou em lipídios extensa infiltração (8.7 ± 1,7% lipídios área) (Figura 2 e Figura 3), músculo liso migração celular e proliferação (Figura 4), bem como recrutamento de macrófagos (Figura 4), levando a um aumento na proporção de espessura-intimal (1,5 ± 0,2) e área de placa (0,8 ± 0,2 mm2), com concomitante diminuição da área de lúmen (1,4 ± 0,2 mm2) (Figura 3) observar a 2 semanas após a lesão de balão. RAM-11 é um anticorpo monoclonal que se destina especificamente contra o citoplasma de macrófagos de coelho. Actina α-SM identifica actina de músculo e reage com células de músculo liso vascular em vasos sanguíneos. Estes anticorpos têm sido anteriormente utilizados para o estudo de macrófagos e células de músculo liso nas lesões da íntima do coelho. Estas mudanças continuaram a evoluir com o tempo e um aumento na proporção de espessura intimal / (2,6 ± 0,2) e luminal explicitas (0,7 ± 0,1 mm2) (Figura 2 e Figura 3) observou-se 4 semanas após a lesão de balão. Esta técnica leva ao desenvolvimento robusto de ateroma que se desenvolve ao longo do tempo e estudou-se após 2 a 4 semanas.
Figura 1: representação esquemática, ilustrando o cronograma de placa progressão após lesão de balão. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 2: lesão de balão induzido aterosclerose na artéria ilíaca coelho. Imagens representativas de Movat pentachrome (A-D), hematoxilina-eosina (E-H) e O óleo vermelho (-L) manchadas de seções de un-feridos (A, E, eu), 2 semanas pós lesão do balão (B, F, J) (n = 5) e 4 semanas pós lesão de balão (C, G, K) (n = 3) segmentos de artéria ilíaca da dieta aterogênico alimentados NZW coelhos. Barra de escala de D, H e L é de 100 µm. escala bar para as outras imagens = 500 µm. Labelled na imagem B é o lúmen, íntima, IEL (lâmina elástica interna) e enguia (lâmina elástica externa). Mídia é a área entre o IEL e a enguia. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 3: Análise morfométrica da placa. A dispersão enredo mostra intimal/relação de espessura, placa, área do lúmen e % O óleo vermelho positivo área nas seções de artéria ilíaca de controle não-lesionado, balão ferido artéria em 2 (n = 5) e 4 semanas (n = 3). Dados são mostrados como média ± DP. * p < 0,05 vs artéria un-lesionado, #p < 0.05 vs 4 semanas pós balão lesão. N.D. denota não detectado. Área da placa é calculada subtraindo-se a área do lúmen da área IEL enquanto óleo vermelho área positiva representa % da área de parede vaso de seção transversal total. Clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
Figura 4: análise imuno-histoquímica da composição placa. Imagens representativas mostrando actina de músculo liso-α (vermelho) (A-D) e macrófagos, células positivas (RAM 11) (vermelho) (E-F). Painéis de certo mostram as respectivas imagens mescladas com Hoechst (azul) e elastina (verde). Barra de escala = 100 µm. clique aqui para ver uma versão maior desta figura.
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Discussion
O modelo de aterosclerose de artéria ilíaca coelho é amplamente utilizado na investigação de aterosclerose. Com este protocolo os coelhos rapidamente desenvolveram placas mais avançadas e graves em comparação com lesões espontâneas desenvolvidas com apenas dieta rica em colesterol. Importante, os animais se recuperar rapidamente da cirurgia.
O principal estímulo para atherogenesis é os danos mecânicos causados pelo cateter de balão que fere o endotélio e distende o vaso parede26. Este procedimento induz uma resposta de remodela caracteriza-se por uma inflamação com recrutamento de macrófagos e acúmulo de lipídios quando associado com dieta hypercholestorolemic, migração de células de músculo liso vascular e proliferação, matriz reforçada síntese e estabelecimento de um neointima invasiva em um tempo dependente da forma15,16. Inserir o cateter de balão é a parte mais crítica do processo. Cuidado deve ser exercitado para evitar inserir vigorosamente o balão. O uso de periférico artéria safena para acessar a artéria ilíaca comum simplifica a técnica. Artéria ilíaca também pode ser acessada através do corte para baixo conforme descrito anteriormente,27,28da artéria carótida. No entanto, avaliar através da artéria carótida, a artéria ilíaca requer um alto grau de perícia cirúrgica e equipamentos adicionais tais como uma unidade de angiografia. Também está associada com complicações relacionadas ao procedimento como lesão de veia jugular, levando a hemorragia fatal29. Uso de vasodilatador tópica como papaverina ajuda a dilatar os vasos e reduzir a resistência da parede arterial contra o cateter de balão30. O tamanho de pressão e balão de inflação deve ser cuidadosamente considerado como estes têm uma associação direta na formação de neointimal31. Distensão excessiva do balão para um grau mais elevado do que os níveis desejados pode levar a ruptura da parede do vaso. Isso pode resultar em vazamento de sangue e formação de trombos robusto no lúmen e sobre a superfície exterior26.
Os animais devem ser alimentados uma lipídica rica dieta por 1 ou 2 semanas antes da lesão de balão para garantir que uma lesão endotelial ocorre num cenário hipercolesterolêmicos. Ele também ajuda os animais a se adaptar à nova dieta. Embora esta técnica induz placas avançadas em coelhos, a morfologia das placas difere do que os observados em humanos. As lesões humanas espontâneas são restritas à região subendoteliais com uma camada elástica interna intacta32. Aqui, os estudos realizados até 4 semanas mostrou sem núcleos fibróticos. A lesão aterosclerótica permanece semelhante a raia gorda com infiltração de macrófagos substancial.
Muitos modelos de pequenos e grandes animais têm sido utilizados para a compreensão atherogenesis6. O modelo de artéria ilíaca coelho balão-lesão tem sido usado para estudar o efeito de novos agentes terapêuticos, sistemas de entrega de droga de novela, evolução da placa e da imagem latente de32,10,33. Único ou múltiplos injurieshave de balão foi realizada na artéria ilíaca34,35, artéria carótida36,37e aorta10,38. As vantagens do método apresentado são o desenvolvimento da placa de grande volume e espessura, em comparação ao uso de artéria carótida. Além disso, a lata ilíaca contralateral ser usado como um controle e, portanto, reduz a variabilidade de animal para animal,29. A lesão de balão em artérias ilíacas coelho pode ser realizada com segurança e facilmente usando o método descrito aqui. Placa se desenvolve de uma forma dependente do tempo e é homogênea em toda a extensão da artéria. Outros modelos de coelho aterosclerótica também foram desenvolvidos como o Watanabe hereditários hiperlipidêmico (WHHL) modelo, um modelo animal geneticamente modificado com deficiência de receptores de lipoproteínas de baixa densidade. O modelo de lesão de balão também pode ser aplicado a coelho WHLL para produzir lesões em um local definido.
Existem diferenças entre a artéria ilíaca coelho e placas coronárias humanas. Com efeito, estabeleceram-se vários procedimentos alternativos na tentativa de desenvolver lesões ateroscleróticas avançadas e para criar um modelo de ruptura de placa, como observado em seres humanos39. Por exemplo, a formação da placa instável foi induzida, eliminando a colesterol dieta após 8 semanas em coelhos submetidos a lesão de balão16. Outros procedimentos modificados usam disparadores farmacológicos como veneno de víbora de Russell de10 e subsequente balão repetidas lesões40para avaliar o mecanismo de ruptura de placa, hipertensos e trombo o crescimento aterosclerótica navios. Veneno de víbora de Russell s contém proteases que ativam a cascata de coagulação levando à trombose. Resultados de lesões repetidas balão na geração de trombina por placa tecido fator40. Note-se que os resultados de modelos animais, incluindo o modelo de coelho não podem perfeitamente extrapolar para os seres humanos. No entanto, estes modelos podem ser uma ferramenta útil para avaliar e comparar a eficácia de novas intervenções farmacológicas. Cuidado, extrapolações devem ser feitas em relação ao grau de composição hipercolesterolémia e placa para ampliar o conhecimento sobre a etiologia, fisiopatologia e tratamento da aterosclerose humana. O modelo apresentado aqui ajuda a estudar os mecanismos envolvidos na evolução da placa bacteriana e investigar o efeito de novas terapias antiateroscleróticas dirigido para a estabilização da placa/regressão.
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Disclosures
Os autores declaram não concorrentes interesses financeiros.
Acknowledgments
Este trabalho foi apoiado pela Suíça nacional Science Foundation Grant 150271.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| New Zealand White rabbits | Charles River laboratories,France | Cre:KBL(NZW) | |
| Cholesterol rich diet | Ssniff spezialdiäten | Ssniff EF K High Fat and Cholesterol | |
| Glass bead sterilizer-Germinator 500 | VWR, Leicestershire, UK | 101326-488 | |
| Fogarty balloon embolectomy catheters, 2 French | Edwards Lifesciences, Switzerland | 120602F | For single use only |
| Luer Lock Syringe | Becton, Dickinson and Company, USA | 309628 | |
| Thermopad Type 226 | Solis, Switzerland AG | 397387 | |
| Buprenorphine- Temgesic | Reckitt Benckiser AG, Switzerland | 7.68042E+12 | |
| Isoflurane | Piramal Critical Care, Inc, Bethlehem, PA 18017 | 2667-46-7 | |
| Anaesthesia machine-combi-vet Base Anesthesia System | Rothacher Medical GmbH, Switzerland | CV 30-301-A | |
| Cardell touch veterinary vital signs monitor | Midmark, Ohio, USA | 8013-001 | |
| Ophthalmic ointment-Humigel | Virbac, France | ||
| Animal hair clippers | Aesculap AG, Germany | GT420 | |
| Disinfectant-Betadine solution | MundipharmaMedicalCompany, Switzerland | 14671-1203 | |
| Dumont #7 Forceps | FST Germany | 11274-20 | |
| Medium and small microscissors | Medline International Switzerland Sàrl | UC4337 | |
| Microvascular clamps | FST, Germany | 18051-28 | |
| Papaverine | ESCA chemicals, Switzerland | RE 356 803 | |
| Vein Pick | Harvard Apparatus, Cambridge, UK | 72-4169 | For single use only |
| Saline | Laboratorium Dr. G. Bichsel AG, , Switzerland | 1330055 | |
| Polysorb 5-0 suture | Covidien AG, Switzerland | UL 202 | Monofilament |
| Sulfadoxine and Trimethoprim-Trimethazol | Werner Stricker AG, Switzerland | Swissmedic Nr. 50'361 | |
| Antiseptic- Octenisept | Schülke & Mayr AG, Switzerland | GTIN: 4032651214068 | |
| Phosphate Buffered Saline | Roth | 1058.1 | |
| Isobutanol-2-Methylbutane | Sigma-Aldrich, Switzerland | M32631-1L | |
| Optimum Cutting Temperature compound-Tissue-Tek | VWR Chemicals, Belgium | 25608-930 | |
| Cryostat | Leica, Glattbrugg, Switzerland | Leica CM1860 UV | |
| Glass slide- Superfrost Plus | Thermo Scientific | 4951PLUS4 | |
| Mayer's Haematoxylin | Sigma-Aldrich, Switzerland | MHS32-1L | |
| Eosin 0.5% aq. | Sigma-Aldrich, Switzerland | HT110232-1L | |
| Oil Red O | Sigma-Aldrich, Switzerland | O0625-25G | |
| α-smooth muscle actin antibody | Abcam, UK. | ab7817 | |
| Macrophage Clone RAM11 antibody | DAKO, Switzerland | M063301 | |
| Hoechst | Abcam, UK. | ab145596 | |
| Goat polyclonal Secondary Antibody (Chromeo 546) | Abcam, UK. | ab60316 | |
| Alexa Fluor 488/547 | Abcam, UK. | ||
| Glycergel Mounting Medium, Aqueous | DAKO, Switzerland | C056330 | |
| Hematoxylin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | H3136-25G | |
| Ferric chloride for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 157740-100G | |
| Iodine for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 207772-100G | |
| Potassium iodide for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 60400-100G-F | |
| Alcian blue for Movat staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | A5268-10G | |
| Strong Ammonia for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 320145-500ML | |
| Brilliant crocein MOO for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 210757-50G | |
| Acid Fuchsin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | F8129-50G | |
| Sodium Thiosulfate for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 72049-250G | |
| Phosphotungstic acid for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 79690-100G | |
| Crocin for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 17304-5G | |
| EUKITT for Movat pentachrome staining | Sigma-Aldrich, Switzerland | 03989-100ML |
References
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