Summary
El presente artículo presenta un método para alimentar pesticida alimentos contaminados tanto a una abeja de la miel individual y una colonia de colmena. El procedimiento se evalúa el efecto de pesticidas en las abejas individuales por la alimentación in vivo de la dieta básica de larvas y también en la condición natural de la colonia de colmena.
Introduction
La presencia de pesticidas en el medio ambiente es uno de los problemas más graves que afecta a la vida de una abeja de la miel 1, 2, 3. Varios estudios han demostrado la presencia común de residuos de plaguicidas en las colonias de abejas de miel y productos de abeja. En Taiwán, el medio de aplicación de pesticidas era 11-12 kg / ha cada año (de 2005 a 2013). La cantidad de plaguicidas utilizados en Taiwán es superior a la de los países de la UE, y los países de América Latina 4, 5. En otras palabras, el medio ambiente apícola sufre estrés pesticidas grave, especialmente en Taiwán y posiblemente en otros países.
La abeja de la miel Apis mellifera es uno de los principales polinizadores en los sistemas agrícolas 6 y que también produce productos valiosos tales como la miel. Sin embargo, las abejas de miel son exposicionesed a diversos pesticidas y estos pesticidas puede ser llevado de vuelta a colmenas después de forrajeo en las flores que han sido rociados con pesticidas cuando la recolección de néctar y el polen 7, 8. También pueden estar expuestos a los pesticidas por los propios apicultores con el objetivo de controlar los problemas de plagas dentro de las colmenas 9, 10, 11. Debido a que las larvas de abejas se alimentan por las abejas nodrizas para su desarrollo, las larvas de zánganos, e incluso la reina puede estar expuesto a estos néctares y polen 12 contaminadas con pesticidas. La toxicidad de diversos plaguicidas para las abejas de miel debe abordarse 13.
Se han hecho muchos esfuerzos para evaluar los problemas de residuos de plaguicidas ambientales. Yang et al. puesto a prueba la influencia del insecticida imidacloprid neurotóxico en el desarrollo de las larvas de abeja de la miel en elcolmena y informó que una dosis sub-letal de imidacloprid resultó en el comportamiento asociativo olfativo de las abejas adultas 14. También, Urlacher et al. examinado los efectos subletales de un pesticida organofosforado clorpirifos, el rendimiento de aprendizaje de un trabajador abeja de la miel en condiciones de laboratorio 15. En nuestro estudio anterior, se evaluó el impacto de un regulador del crecimiento de insectos (IGR), piriproxifeno (PPN), sobre larvas de las abejas de miel 16.
En este trabajo, presentamos los métodos para evaluar los impactos químicos en el desarrollo de las abejas de miel. Miel métodos de alimentación de abejas se describieron y aplicarse a las abejas de la miel individuales o a una colonia. En un primer momento, hemos probado diferentes concentraciones de la dieta básica de larvas contaminado con pesticidas (DAC) sobre las larvas en las colonias para evaluar el impacto de los pesticidas en las abejas individuales en vivo. a continuación, se procedió a simular el Condit naturalesiones del pesticida mediante el uso de jarabe contaminado con pesticidas dentro de colmenas. En este método, PPN, que se utiliza ampliamente contra plagas de insectos 17 y es perjudicial para el desarrollo de las larvas de abeja de la miel y pupas 16, 18, 19, será un indicador para representar el efecto negativo del pesticida en el campo.
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Protocol
1. Preparativos
- Hacer 1 litro de jarabe de azúcar al 50%. Disolver 1 kg de sacarosa en 1 L ddH 2 O.
- Preparar la solución de piriproxifeno (PPN) en BLD. Hacer 1,1 L de 10000 ppm solución PPN de stock y diluir 100 ml de solución de PPN en 1 L esterilizado ddH 2 O. Almacenar a 4 ° C.
- Diluir la solución madre PPN a concentraciones finales de 0,1, 1, 10 y 100 mg / kg (ppm) en el BLD para el siguiente experimento.
- Hacer PPN-jarabe (para el nivel de colonia). Diluir el Stock PPN a concentraciones finales de 10 y 100 ppm en jarabe de azúcar 50% para el siguiente experimento.
- La miel de abeja crianza.
Nota: En este caso, la ubicación del apiario experimental es la Universidad Nacional Ilan (NIU), Yi-Lan Ciudad, Taiwán; (Coordenadas GPS: N24.747278, E121.746200).- Compruebe la miel de abejas (Apis mellifera L.) colonias semanal para la cantidad de alimentos y piensos con 1 litro de jarabe de azúcar al 50% si es necesario (el área de almacenamiento de la miel está vacía). Definir una sanacolonia 9 cuadros de panales de abejas en cada colonia con una reina pone los huevos normalmente.
- Preparar 100 ml de dieta larval básico (BLD). Disolver 6% D-glucosa, 6% de fructosa y 1% de extracto de levadura en agua desionizada destilada esterilizada (ddH 2 O) y suplementar con jalea real 50%. Almacenar a 4 ° C, pero no durante más de 3 días.
Nota: Pre-caliente a 35 ° C antes del experimento y el uso dentro de los 3 días.
2. En Vivo método de alimentación
Nota: In vivo método de alimentación ha sido modificado a partir de Hanley et al. 20
- La miel de abejas selección larvas y etiquetado.
- Insertar un excluidor de reinas para dividir 9 fotogramas de una colonia sana en 4 y 5 marcos de cuadros al tiempo que limita la reina a la sección 4 del marco. Dejar al menos un marco vacío en la sección 4 del marco de la puesta de huevos.
- Después de la reina pone los huevos por 1 días, Comprobar los marcos para la aparición de los huevos y mantener los huevos en el interior de las colmenas durante 72 h (el 4º día) hasta el 1 día de edad eclosión de las larvas. Tome uno de los marcos que contienen larvas trabajador de 1 día de edad (sombreada dentro de las 24 h) salir de la colmena de prueba a mano y quitar los trabajadores de abejas desde el marco con un cepillo de abeja.
- Cubrir el marco con un portaobjetos transparente (Tamaño = Longitud x Ancho x grosor = 29,7 mm x 21 mm x 0,1 mm) y clavar la corredera transparente en el borde de marcos con chinchetas (Figura 1A).
- Para cada tratamiento, seleccionar al azar 50 uno larvas-días de edad (el 4º día) y marcar cada celda de cría mediante el uso de rotuladores permanentes en la diapositiva transparente (Figuras 1A y 1B).
Nota: escribir la información de cada tratamiento en el marco y de diapositivas transparentes, así mediante el uso de rotuladores permanentes para evitar la confusión entre diferentes tratamientos. Retire las diapositivas marcadas y guardar para la in vivo </ Em> la alimentación y la observación.
- En la alimentación vivo.
- Añadir diferentes concentraciones de PPN-BLD (0,1, 1, 10 y 100 ppm) a cada celda de cría etiquetado por pipeteo en el día 1, 2 y 3 con 10! L, 10 l y 20 l, respectivamente, de acuerdo a la cantidad de admisión de la edad larvas. Añadir la misma cantidad de DAC (sin PPN) a un grupo de control. De este modo, la dosis total de PPN-BLD en cada celda de cría marcado se acumula a 4, 40, 400 y 4.000 pg.
NOTA: Reconocer las celdas de cría etiquetados por las diapositivas transparentes marcados y retire las diapositivas transparentes marcados después de la alimentación. Utilice fresca DAC para la alimentación para evitar la limpieza de las celdas de cría de las abejas obreras. - Devolver los marcos tratados con PPN a las colonias originales para nuevas observaciones.
NOTA: Cada tratamiento tiene cuatro repeticiones biológicos en cuatro colonias.
- Añadir diferentes concentraciones de PPN-BLD (0,1, 1, 10 y 100 ppm) a cada celda de cría etiquetado por pipeteo en el día 1, 2 y 3 con 10! L, 10 l y 20 l, respectivamente, de acuerdo a la cantidad de admisión de la edad larvas. Añadir la misma cantidad de DAC (sin PPN) a un grupo de control. De este modo, la dosis total de PPN-BLD en cada celda de cría marcado se acumula a 4, 40, 400 y 4.000 pg.
- La observación de las larvas tratadas en el día 7.
- Para observar ºlarvas e PPN-tratada, devolver las diapositivas transparentes etiquetados a los marcos para registrar la mortalidad y tasas máximas en las celdas de cría etiquetados.
- Observación de las tasas de eclosión de pupas y tratados en el día 13.
- Eliminar la cera de abeja de celdas de cría tapados.
- Poner las pinzas de punta blanda en la celda de cría y sujetar el pupas muy ligeramente luego tomar pupas a cabo suavemente.
- Transferir el pupas en placas de cultivo tisular de 24 pocillos con una doble capa de los tejidos de laboratorio debajo de cada pocillo. Grabar el daño y la mortalidad durante la transferencia de pupa.
- Mantener las placas de cultivo de tejidos de 24 pocillos en un incubador a 34 ° C y 70% de humedad relativa hasta que emerja la (ca. 8 días).
- Observar y registrar las pupas y abejas surgido.
- Estadística
- Calcular los datos registrados y presente como una media ± SD
- Analizar los datos mediante análisis de varianza (ANOVA) por SAS y el uso de la prueba de diferencia mínima significativa (LSD) para analizar las diferencias entre dos medios de diferentes tratamientos. Definir estadísticamente significativa como valor P <0,05. Letras diferentes en la misma columna de la tabla mostraron un efecto significativo en el análisis estadístico.
3. Toxicidad de PPN en la colonia de nivel en la colmena
- Establecimiento de los grupos de abejas.
- Insertar un excluidor de reinas verticalmente para dividir 9 fotogramas de una colonia sana en 4 tramas (parte A) y 5 cuadros (Parte B), mientras que limitan la reina a la sección 4 del marco. Dejar al menos un marco vacío en la sección 4-marco para la puesta de huevos.
Nota: Dicho de otra reina excluidores de la en la parte superior de la pieza reina para evitar que la reina se mueva entre las partes. - Después de la reina pone los huevos durante 1 día, comprobar los marcos para la aparición de huevos. Tome los marcos adecuados que contienen los huevos fuera de la parte A con la mano y retire los trabajadores de abejasdesde el marco con un cepillo de abeja.
- Cubrir el marco con la diapositiva transparente y clavar el portaobjetos transparente para el borde del marco con chinchetas.
- Seleccionar aleatoriamente 100 celdas de cría que contienen huevos y marcar cada celda de cría mediante el uso de marcador permanente en la diapositiva transparente. Asignar estos 100 celdas de cría como el Grupo 1. escribir la información de cada tratamiento en el marco y de deslizamiento transparente usando marcador permanente para evitar la confusión entre los diferentes tratamientos.
- Devolver el fotograma con la etiqueta a la parte A durante 3 días y luego transferir la reina a la parte B para poner sus huevos.
- Después de 1 día, comprobar las tramas de la parte B, elegir un marco apropiado y etiqueta 100 celdas de cría que contengan huevos como se describe en el paso 3.1.4. Asignar estos 100 celdas de cría como Grupo 2.
- Devolver el fotograma con la etiqueta a la parte B durante 3 días y luego transferir la reina a la parte A para poner sus huevos.
- Repetir el intercambio reina entre la Parte A y la Parte B 6 veces más y asignar grupos numéricamente,respectivamente (Figura 2). No debe haber total de 9 grupos.
- Insertar un excluidor de reinas verticalmente para dividir 9 fotogramas de una colonia sana en 4 tramas (parte A) y 5 cuadros (Parte B), mientras que limitan la reina a la sección 4 del marco. Dejar al menos un marco vacío en la sección 4-marco para la puesta de huevos.
- T miel reat colonia de abejas con jarabe de azúcar PPN en el día 13 (Figura 2).
- Añadir 1 L 50% de jarabe de azúcar PPN que contiene 10 o 100 ppm en una caja de alimentación de abeja de plástico (W x L x H = 20 cm x 30 cm x 3,5 cm) y poner la caja en la parte superior de los marcos de las colonias experimentales.
Nota: El grupo 1 no recibe la PPN a los 13 días ya se han sellado las celdas de cría. - Alimentar el grupo de control con 1 L de 50% de azúcar jarabe (sin PPN) como se describe en el paso 2.2.
- Añadir 1 L 50% de jarabe de azúcar PPN que contiene 10 o 100 ppm en una caja de alimentación de abeja de plástico (W x L x H = 20 cm x 30 cm x 3,5 cm) y poner la caja en la parte superior de los marcos de las colonias experimentales.
- Contar las larvas de 1 día de edad, y el registro como la tasa de eclosión de huevos de 100 celdas de cría etiquetados para cada grupo en el día 5 (Figura 2). Miel de abejas huevos suelen tardar 3 días en eclosionar en 0 días larvas; por lo tanto, comprobar y etiquetar 100 huevos que contienen celdas de cría en el día 1 y contar el número de larvas de 1 día de edad para cada grupo en el día 5 para obtener el porcentaje de tasa de eclosión.
- doONTAJE las celdas de cría tapó y se registro como la tasa límite larval de 100 celdas de cría etiquetados para cada grupo en el día 11 (Figura 2). 6 a 7 celdas de cría de larvas de un día tendrán un tope con cera de abeja por los trabajadores de abejas melíferas para convertirse en pupas larvas.
- Observe maduración pupas y registrar la tasa de eclosión de 100 celdas de cría etiquetados para cada grupo en el día 17 (Figura 2).
- Eliminar la cera de abeja de celdas de cría tapados y tomar pupas con unas pinzas de punta blanda suavemente. Transferir el pupas en unas placas de cultivo tisular de 24 pocillos con una doble capa de los tejidos de laboratorio debajo de cada pocillo.
- Mantener las placas de cultivo de tejidos de 24 pocillos en un incubador a 34 ° C y 70% de humedad relativa hasta que emerja.
- Observar y registrar las pupas y surgió abejas de la miel para cada grupo hasta el Grupo 9 (49 días experimentales).
Nota: Cada tratamiento tiene cuatro repeticiones biológicos.
- Estadística
- Calcula los datos registrados y presente como la mediaSD ±.
- Analizar las diferencias significativas entre pares de tratamientos (por ejemplo, 0 ppm / 10 ppm, 10 ppm / 100 ppm y 0 ppm / 100 ppm) en cada grupo mediante el uso de la prueba t de dos colas de Student. Definir como estadísticamente significativo si valor P <0,05.
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Representative Results
Para la prueba de campo de abeja de la miel, una reina se limitó a la sección 4-marco para la puesta de huevos. Este paso podría aumentar la densidad de cría en un marco y facilitar observaciones subsiguientes. Cada tratamiento fue etiquetado, y el desarrollo de las abejas de la miel se observa claramente a través de una diapositiva transparente. En la alimentación in vivo de PPN-BLD para las larvas de abeja de la miel en la colmena se realizó para evaluar con precisión la influencia de PPN en el desarrollo de las abejas en la colonia. Usando el método de alimentación in vivo facilitó la observación de los efectos de los tratamientos químicos en la colmena.
Para cada dosis de PPN-BLD, un total de cincuenta celdas de cría fueron marcados y tratada. Después de añadir PPN-BLD, los marcos tratados fueron devueltos a las colonias originales para la observación en condiciones naturales. Los efectos negativos de PPN-BLD en las abejas de miel de larvas de etapa eran fácilmente OBSErved. Se observó un efecto dependiente de la dosis. Tabla 1 presenta el número de abejas de la miel que murieron en la fase larval a las dos dosis más altas de 10 y 100 ppm. Como se muestra en la Tabla 1, a las dos dosis (0,1 y 1 ppm), las tasas de tapado, día a tasas de emergencia y la eclosión no fueron significativamente diferentes de 0 (la comida BLD añadido) o el control sin alimentar, con sólo un porcentaje significativamente mayor de abejas con alas deformadas en 1 ppm. Se observó melanización de pupas a bajas concentraciones de PPN. Además, la proporción de las abejas melíferas adultas apareció con alas deformadas aumentó con dosis más altas de PPN (Tabla 1).
Para simular las colonias de abejas de miel que sufre de residuo PPN ambiental, la alimentación de jarabe de PPN a toda la colonia de abejas se realizó. Antes del tratamiento, cada colonia se dividió en 9 grupos temporales diferentes a intervalos de 3 días por dos excluidor de reina (Figura 2). Por lo tanto, se observaron los efectos de PPN sobre las tasas de eclosión, taponado y eclosión simultáneamente bajo condiciones similares a aquellas en el medio ambiente natural.
Las colonias fueron alimentados jarabe con 10 o 100 ppm PPN en el día 13 (indicado por la red puntos en la Figura 2). Teóricamente, el grupo 1 fue un control PPN-libre porque el PPN-jarabe se alimentó a día 13 y las abejas de la miel en el grupo 1 estaban en la fase de pupa y se tapó; las abejas en la etapa larval comenzaron a ser afectados en los grupos 2 y 3, y los huevos se verán afectados en los grupos 4-9, debido al tiempo de exposición más largo en las colmenas contaminadas-PPN (Figura 2).
En este ensayo, nos alimentamos colonias de abejas con jarabe de PPN y observamos el desarrollo cuando las abejas adultas consumen el jarabe y, presumiblemente, alimentados con la reina y las larvas. Esta hipótesis fue confirmada por el HATCHing, tapado y se observaron tasas de eclosión, y las abejas con alas deformadas después de los tratamientos PPN, como se muestra en las Figuras 3A - 3D. Todos los parámetros diferían significativamente en la dosis más alta (100 ppm), comenzando con el grupo 3, excepto la tasa de eclosión (Figura 3A - 3D). Por otra parte, después de los tratamientos PPN-jarabe, muchas pupas murió con las cutículas de color negro o al no surgir. En el tratamiento PPN 100 ppm, se destruyeron las células tapados, y las pupas heridos fueron retirados de la colonia (Figura 3E).
Figura 1: Esquema de etiquetado de la celdas de cría. (A) 1 larvas del trabajador de días de edad cubiertas por los documentos de diapositivas transparentes y se marcaron por marcador permanente. (B) marcadas 1 celdas de cría de larvas trabajador de un día; la flecha blanca indica un 1 días de edad larva trabajadores en el interior. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2: línea de tiempo para cuando PPN se inicia con relación a los 9 grupos experimentales. Diferentes concentraciones de PPN se alimentaron en el día 13 (línea roja punteada). La colonia tratada se divide en la Parte A y la Parte B. Los intercambios de la reina de la parte A a la parte B y viceversa para la puesta de huevos se muestran. Esto ha sido reproducido con permiso de Elsevier 16. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Figura 3: Desarrollo de las larvas de abeja de la miel antes y después de la alimentación 1 kg de jarabe de PPN en colonias de abejas ensayadas. Un total de nueve grupos fueron encuestados en este experimento: (A) tasa de eclosión; (B) tasa límite; (C) la eclosión tasa; y (D) Velocidad de ala con formato incorrecto. La media ± SD se presentan; Las flechas rojas indican el tiempo durante el cual PPN puede empezar a actuar sobre las abejas. asteriscos negros muestran significación estadística en comparación con el control (0 ppm). asteriscos rojos muestran significación estadística entre 10 y 100 ppm; (E) 100 ppm jarabe PPN colonia de abejas tratado mostró células no niveladas, pupas presumiblemente deformado y pupas negro y deformado. Esto ha sido reproducido con permiso de Elsevier 16. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
| PPN-BLD (ppm) | Nº larvas | El desarrollo larvario | ||
| tasa tope (%) | tasa de eclosión (%) | alas malformadas (%) | ||
| 100 | 140 | 0b | 0b | - |
| 10 | 139 | 22,2 ± 33.2b | 0b | - |
| 1 | 140 | 72,3 ± 17.9a | 67,7 ± 17.6a | 7.7 ± 5.7a |
| 0,1 | 136 | 78.3 ± 17.5 | 75,4 ± 22.8a | 1,4 ± 2.8b |
| 0 | 138 | 78,9 ± 5.4a | 78,9 ± 5.4a | 0b |
| No se alimentan | 122 | 87,8 ± 9.1a | 86,1 ± 7.2a | 0,8 ± 1.5b |
Tabla 1: Efectos de la continuación de 3 días de alimentación del PPN en larvas de 1 día de edad. Para cada celda de las larvas, se añadieron 10, 10 y 20 l de BLD de días 1 a 3, respectivamente. Cada ensayo contenía 25-38 larvas en una colonia y se ensayaron 4 colonias. Se presentan media ± desviación estándar. Letras diferentes en la misma columna son significativamente diferentes por la prueba de diferencia de mínimos cuadrados (P <0,05) después de ANOVA mostró un efecto significativo. Esto ha sido reproducido con permiso de Elsevier 16.
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Discussion
El método de puesta de huevos de la reina-limitado y el método de intercambio de reina son pasos críticos para la creación de grupos de abejas para las pruebas de campo dentro de este protocolo. El método de puesta de huevos doble limitado permite la sincronización del ciclo de vida de las abejas de miel. En consecuencia, los investigadores pueden seleccionar las larvas de 1 día de edad de la misma edad para el tratamiento con diferentes dosis de pesticidas. Para el método de intercambio de reina, la reina se intercambia entre la parte A (4 tramas) y B (5 fotogramas) para obtener diferentes etapas de desarrollo de abeja de la miel para pruebas de campo para evaluar los impactos de los residuos de pesticidas y plaguicidas. Además, se registraron un gran número de celdas de cría seleccionados en la prueba de campo utilizando diapositivas transparentes para el etiquetado. Sin embargo, huevo sobre de colocación de vez en cuando resulta en celdas de cría insuficientes para la reina poner huevos. Por lo tanto, se requiere la preparación de los marcos vacíos para el método de intercambio de reina. Alternativamente, el método de puesta de huevos reina limitada podría ser también utilizado parapreparar diferentes grupos de abeja de la miel para la prueba en la colmena. La separación de los marcos en 2 marcos en la parte A y 7 marcos en la parte B y la colocación de la reina en la Parte A (2 cuadros) pueden limitar los huevos puestos por la reina dentro de los 2 cuadros.
Para el método de alimentación in vivo, PPN-BLD se añadió a cada celda de cría. Las abejas de miel exhibieron una mayor aceptación de la DAC que el jarabe 16, 20. Larvas de las abejas de la miel puede sobrevivir y crecer en una dieta artificial compuesta de jalea real, azúcares, extracto de levadura, y agua destilada 22, 23. La composición de glucosa y fructosa de la BLD no afectó a las tasas de supervivencia de las larvas in vitro 21, y por lo tanto, BLD sería más estable para el crecimiento abeja de la miel en la colmena. Cabe destacar que el uso de BLD fresco para la alimentación también podría prevenir la exclusión de las larvas las abejas obreras duranteel experimento de alimentación de las larvas. Por otra parte, durante el proceso de alimentación, alimentación suave se requiere inicialmente para evitar la muerte de las larvas de 1 día de edad.
Durante las pruebas de campo, contaminada químicamente BLD en la colmena la exclusión de las larvas en ocasiones causado debido a la alta sensibilidad olfativa de abejas de enfermería. La composición del azúcar afecta significativamente la supervivencia media de las larvas, los pesos de larvas pre-pupal, los pesos de adultos, y los números de ovariole 21. Cuando se utilizó el jarabe para entregar polen transgénico o una positiva diazinon control de plaguicidas para las larvas de abeja de la miel, los trabajadores retiran pocas larvas de las celdas de cría que contienen alimentos añadido o contaminado 21. Por lo tanto, la composición de azúcar Debe tenerse en cuenta. El aumento del número de larvas de 1 día de edad o dispersión de los sitios de cría de células individuales probados también puede mejorar los problemas. De hecho, en base a la observación de los procesos de tratamiento de PPN-BLD y los impactos dependientes de la dosis dramáticos dePPN-BLD en el desarrollo de las abejas, que supone que las enfermeras no se quitaron la DAC añadido artificialmente a las celdas de cría. Las bajas concentraciones de PPN causa melanización de pupas, posiblemente debido a la mayor actividad de fenoloxidasa, que regula la melanización y pupación 24, 25, 26. Basado en el uso de un método de alimentación artificial para cada celda de cría, los efectos dramáticos de PPN-DAC sobre el desarrollo de las abejas podrían deberse al contacto directo con PPN desde el primer día de la eclosión.
Las dosificaciones químicas utilizadas en los experimentos de alimentación pueden ser diseñados sobre la base de datos de la encuesta de residuos de plaguicidas en muestras de polen fresco recogidos de colmenas de abejas de miel. Hay una variedad de vías de contaminación de pesticidas de colonias en el medio ambiente natural. Los contaminantes químicos se podrían volver a las colonias de abejas de miel y ingeridos por las larvas debido a la alimentación motiones de abejas obreras, con el tiempo que influye en el desarrollo de las larvas. Para evaluar el impacto de PPN en el nivel de colonia en la colmena, jarabe se utiliza en lugar de polen para alimentar en este estudio como la forma más rápida y directa para asegurar que las abejas consumen la sustancia química. Por otra parte, la condición del jarabe se puede definir, mientras que el contenido de polen es difícil de controlar (por ejemplo, agentes patógenos o contaminación de pesticidas).
En condiciones de campo, diferentes etapas de desarrollo (huevos, larvas, pupas y adultos abejas) de abejas en una colonia de abejas de miel sufrir el mismo factor de medio ambiente. En nuestra configuración experimental, las condiciones naturales fueron simulados para evaluar los impactos de la química en las etapas de desarrollo de las abejas de miel en un entorno dinámico. Por lo tanto, después del tratamiento PPN (13 días), pudimos observar la tasa límite uninfluenced en el grupo 1, la tasa límite influido en las otras ocho grupos, y la etapa larval influidos en los grupos 2 y 3, etc. Bajo estas condiciones, los verdaderos efectos dentro de la colonia y la ruta de la dispersión de la sustancia química a toda la colonia son claras.
Las colonias de abejas de miel tratados con jarabe de PPN exhibieron distorsión de las células tapó y la eliminación de las pupas de la colonia. Además, se observó extensa melanización de pupas en el tratamiento PPN 100 ppm. Por lo tanto, el método de alimentación PPN-jarabe permitió que el impacto dinámico de productos químicos en el ciclo de vida de las abejas en la colmena debe ser respetado. En este ensayo, el jarabe recogido por las abejas obreras y de enfermería fue presumiblemente alimenta a la reina y las larvas. Para la confirmación, nuestros estudios futuros usarán marcadores químicos (tales como un colorante comestible) en el jarabe que contiene productos químicos para facilitar aún más el estudio de la dinámica de colmenas contaminados químicamente.
La fuente de alimento de abejas de la enfermera debe provenir de forraje o en mandibular y hypopharyng colmena y las larvas son alimentadassecreciones de las glándulas eal producidas por abejas de la enfermera 21, 25, 26, 27, 28. Cuando las larvas se alimentan de abejas de la enfermera, las secreciones producidas por la glándula hipofaringe en las mandíbulas pueden diluir el PPN-jarabe. Este efecto de dilución biológica se asemeja más a las condiciones naturales pero explica los diferentes resultados al método de alimentación in vivo. Varios materiales incluyendo otros pesticidas, metales pesados y patógenos de las abejas de la miel se podrían aplicar a este método de alimentación para evaluar y abordar los papeles en las poblaciones de abejas de miel.
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Disclosures
Los autores declaran que no tienen intereses financieros en competencia.
Acknowledgments
Esta investigación fue apoyada por Grant 105AS-13.2.3-BQ-B1 de la Oficina de Salud de Animales y Plantas de Inspección y Cuarentena, el Consejo de Agricultura, Yuan Ejecutivo y Grant 103 a 2313-B-197-002-MY3 del Ministerio de Ciencia y Tecnología (MOST).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Honey bee box | SAN-YI Honey Factory | W1266 | Honeybees rearing |
| Queen excluder (between frames) | SAN-YI Honey Factory | I1575 | Queen limitation |
| Queen excluder (on top) | SAN-YI Honey Factory | I1566 | Queen limitation on top |
| Bee brush | SAN-YI Honey Factory, Taiwan | W1414 | clean the bees on frame gently |
| Bee feeder | SAN-YI Honey Factory, Taiwan | P0219 | feed sugar syrup to colony |
| Transparent slide | Wan-Shih-Chei, Taiwan (http://www.mbsc.com.tw/a01goods.asp?s_id=40) | 1139 | Mark the larval area on the frames (Material: Polyethylene Terephthalate, PET) (Size = Length*Width*thick = 29.7 mm * 21 mm * 0.1 mm) |
| 24 well tissu culture plate | Guangzhou Jet Bio-Filtration Co., Ltd | TCP011024 | Rearing pupae from extraction |
| Autoclave | Tomin medical equipmenco., LTD. | TM-321 | Make sterilized distilled deionized water (ddH2O) |
| P20 pipetman | Gilson | F123600 | Add PPN into bee larval food pool |
| Incubator | Yihder Co., Ltd. | LE-550RD | Rearing pupae from extraction |
| Kimwipes | COW LUNG INSTRUMENT CO., LTD | KCS34155 | Rearing pupae from extraction |
| Royal jelly | National Ilan University (NIU) | NIU | Make basic larval diet (BLD) |
| D-(+)-Glucose | Sigma | G8270 | Make basic larval diet (BLD) |
| D-(-)-Fructose | Sigma | F0127 | Make basic larval diet (BLD) |
| Yeast extract | CONDA, pronadisa | 1702 | Make basic larval diet (BLD) |
| Sucrose | Taiwan sugar coporation | E01071010 | Make sugar syrup for bee food |
| Pyriproxyfen (11%) | LIH-NUNG CHEMICAL CO.. LTD. | Registration No. 1937 | Insect growth regulator (IGR) used in the experiment |
References
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